Đang tải... (xem toàn văn)
1. Cách xác định giới hạn tạp chấtNguyên tắc: dùng phương pháp so sánh độ đục, cường độ màu trực tiếp hoặc sau một phản ứng hóa học đặc hiệu của dung dịch thử và dung dịch mẫu (là dung dịch chứa một lượng tạp chất bằng giới hạn cho phép) với cùng một chất phản ứng.Cách đánh giá: chế phẩm thuốc được coi là đạt về độ tinh khiết khi: Độ đục của dung dịch thử không được đục hơn dung dịch mẫu Màu của dung dịch thử không được đậm hơn màu dung dịch mẫu
THỰC HÀNH HÓA DƯỢC BÀI 1: THỬ GIỚI HẠN TẠP CHẤT KIỂM NGHIỆM NATRI CLORID I THỬ GIỚI HẠN TẠP CHẤT Cách xác định giới hạn tạp chất Nguyên tắc: dùng phương pháp so sánh độ đục, cường độ màu trực tiếp sau phản ứng hóa học đặc hiệu dung dịch thử dung dịch mẫu (là dung dịch chứa lượng tạp chất giới hạn cho phép) với chất phản ứng Cách đánh giá: chế phẩm thuốc coi đạt độ tinh khiết khi: - Độ đục dung dịch thử không đục dung dịch mẫu - Màu dung dịch thử không đậm màu dung dịch mẫu Dung dịch mẫu dung dịch thử Dung dịch mẫu: dung dịch chứa lượng tạp định Ví dụ: Dung dịch mẫu thử giới hạn tạp sulfat có nồng độ SO 42- 10 phần triệu (tức 0,001% 0,01mg/ml), nồng độ phản ứng với thuốc thử bari clorid cho độ đục mờ quan sát Dung dịch thử: tính tốn pha dựa vào nồng độ dung dịch mẫu giới hạn tạp cho phép theo tiêu chuẩn qui định Ví dụ: giới hạn tạp sulfat natri clorid 200 phần triệu theo tiêu chuẩn dược điển, dung dịch sulfat chuẩn 0,001%, tính hệ số pha loãng chế phẩm 0,001/0,02 = 1/20 Cân 1g chế phẩm pha 20 ml nước cất dung dịch thử Tiến hành thử giới hạn tạp chất Chọn hai ống nghiệm: không màu, đường kính, độ dày thành ống nghiệm, giống nhau, ký hiệu ống thử ống mẫu Ống thử: - V1ml dung dịch thử - V2 (x g) chất phản ứng - V3ml dung môi Ống mẫu: - V1ml dung dịch mẫu - V2 (x g) chất phản ứng - V3ml dung mơi + So sánh độ đục nhìn từ xuống đen + So sánh màu nhìn ngang trắng (so sánh màu nâu thử giới hạn tạp chì nhìn từ xuống trắng) II KIỂM NGHIỆM NATRI CLORID Natri clorid bột kết tinh trắng tinh thể không màu, dễ tan nước, không tan ethanol, không mùi, vị mặn 2.1 Định tính 2.1.1 Định tính ion Na+ - Đốt trên lửa không màu, lửa nhuộm thành màu vàng - Phản ứng với thuốc thử Streng tạo tủa vàng: + 50 mg natri clorid + ml nước cất hòa tan + Acid hóa dung dịch acid acetic loãng + Thêm 1ml dung dịch thuốc thử Streng (dung dịch magnesi uranyl acetat), cọ thành ống nghiệm đũa thủy tinh, xuất tinh thể màu vàng Na+ + (UO2)(CH3COO)2.2H2O + Mg(CH3COO)2 → NaMg(UO2)3(CH3COO)9.6H2O 2.1.2 Định tính ion Cl- Ống nghiệm: + 50mg natri clorid + 2ml nước cất hòa tan + Acid hóa dung dịch acid nitric loãng + giọt bạc nitrat 5%, lắc xuất tủa trắng (tủa tan ammoniac dư) NaCl + AgNO3 = AgCl (tủa trắng) + NaNO3 AgCl + 2NH3 → [Ag(NH3)2]Cl (tan) + H+ → AgCl (tủa trắng) 2.2 Thử tinh khiết 2.2.1 Thử giới hạn tạp sulfat (không 0,02%) Nguyên tắc: ion SO42- phản ứng với ion Ba2+ tạo BaSO4 tủa trắng So sánh độ đục ống thử ống mẫu Tiến hành: + Ống thử: 15ml dung dịch thử 5% 0,5ml dung dịch acid acetic 5M 1ml dung dịch BaCl2 + Ống mẫu: 15ml dung dịch sulfat mẫu 10/tr 0,5ml dung dịch acid acetic 5M 1ml dung dịch BaCl2 2.2.2 Thử giới hạn kim loại nặng (không phần triệu) Nguyên tắc: ion Pb2+ phản ứng với thioacetamid tạo phức màu nâu So sánh màu nâu ống thử ống mẫu H3C C NH2 S Pb2+ + → PbS (tủa xám) Tiến hành: + Ống thử: 10ml dung dịch thử 20% 2ml dung dịch đệm acetat 1,2ml dung dịch thioacetamid + Ống mẫu: 10ml dung dịch chì mẫu 1/tr 2ml dung dịch đệm acetat 1,2ml dung dịch thioacetamid 2.2.3 Thử giới hạn asen (không phần triệu) Nguyên tắc: cho ion asen tác dụng với khí hydro sinh tạo khí AsH Khí bay lên gặp mảnh giấy tẩm HgBr cho hỗn hợp màu vàng So sánh màu vàng mảnh giấy từ bình thử bình mẫu As3+ + H+ → AsH3 ↑ + HgBr2 → As2Hg3 (vàng nâu) Tiến hành: + Bình thử: 1g natri clorid 25ml nước cất 15ml acid HCl đặc 5ml dung dịch KI 20% 0,1ml dung dịch thiếc II clorid, ngâm để yên nước lạnh 15 phút, thêm 5g kẽm hạt, đậy nắp dụng cụ có ống dẫn khí đặt bơng tẩm chì acetat giấy tẩm thủy ngân bromid, để phản ứng xảy + Bình mẫu: 1ml dung dịch asen mẫu 1/triệu 25ml nước cất 15ml acid HCl đặc 5ml dung dịch KI 20% 0,1ml dung dịch thiếc II clorid, ngâm để yên nước lạnh 15 phút, thêm 5g kẽm hạt, đậy nắp dụng cụ có ống dẫn khí đặt bơng tẩm chì acetat giấy tẩm thủy ngân bromid, để phản ứng xảy 2.3 Định lượng Nguyên tắc: phương pháp đo bạc, định lượng natri clorid bạc nitrat 0,1N, thị kali cromat đến màu đỏ cam (bạc cromat) NaCl + AgNO3 = AgCl + NaNO3 2AgCl + K2CrO4 = 2KNO3 + Ag2CrO4 (đỏ cam) Tiến hành: + Cân xác khoảng 125mg natri clorid vào bình nón 250ml, thêm 50ml nước cất, 8-10 giọt kali cromat, lắc đều, định lượng bạc nitrat đến màu đỏ cam + Ghi thể tích bạc nitrat phản ứng (1ml bạc nitrat 0,1N phản ứng với 5,844mg natri clorid) Yêu cầu hàm lượng NaCl phải từ 99,0 đến 100,5% BÀI 2: KIỂM NGHIỆM PROCAIN HYDROCLORID Công thức cấu tạo procain hydroclorid: H2N C O H H C C CH3 N HCl Tinh thể không màu hay bột màu trắng, không mùi Rất dễ tan nước, tan ethanol 96o, không tan ether I ĐỊNH TÍNH 1.1 Tính khử procain - Ống nghiệm: 2ml dung dịch procain 5% 2ml nước hòa tan 0,5ml acid sulfuric loãng, lắc Thêm 1ml dung dịch KMnO4, quan sát màu KMnO4 1.2 Phản ứng tạo phẩm màu nitơ Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl → [Ar-N+≡N]Cl- + NaCl + 2H2O O H H CH3 N=N Ar NaO [Ar-N+≡N]Cl- + - Ống nghiệm 1: 50mg procain.HCl 3ml dung dịch HCl 10% NaO → giọt NaNO2 0,1M - Ống nghiệm 2: 50mg β-naphtol 2ml dung dịch NaOH 10% Đổ dịch ống nghiệm vào ống nghiệm 2, xuất màu đỏ tủa đỏ 1.3 Phản ứng ion Cl- Ống nghiệm: 2ml dung dịch procain HCl 0,5% Acid hóa giọt HNO3 10% 0,5ml dung dịch AgNO3 5%, xuất tủa trắng xám AgCl (tủa tan dung dịch ammoniac dư) II ĐỊNH LƯỢNG (Phương pháp đo nitrit) Nguyên tắc: định lượng procain dung dịch natri nitrit 0,1N với xúc tác KBr, thị treopeolin OO đến màu đỏ Nhiệt độ tiến hành định lượng 5-20oC Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl KBr → 10-15OC [Ar-N+≡N]Cl- + NaCl + 2H2O Tiến hành: Cân xác khoảng 0,3g chế phẩm cho vào bình nón 100ml Thêm 10ml HCl 1N để hòa tan 10ml H2O 1g KBr 4-5 giọt thị treopeolin OO Chuẩn độ dung dịch NaNO2 0,1N đến màu đỏ (1ml dung dịch NaNO2 0,1N phản ứng hết với 27,28mg procain hydroclorid) Yêu cầu hàm lượng procain hydroclorid phải từ 99,0 đến 101,0% BÀI 3: KIỂM NGHIỆM ASPIRIN Công thức cấu tạo aspirin: COOH O C OH O I ĐỊNH TÍNH 1.1 Tính acid aspirin Đặt vài tinh thể chế phẩm lên giấy quì xanh, thêm vào giọt nước, phần giấy q có aspirin nước chuyển sang màu đỏ 1.2 Xác định nhóm chức ester Ngun tắc: aspirin mơi trường kiềm thủy phân tạo muối salicylate acetat, acid hóa tạo acid salicylic acid acetic COONa COOH O ONa C OH O + 3NaOH → + CH3COONa + 2H2O COOH COONa OH ONa + CH3COONa + H+ → + CH3COOH + 2H2O Tiến hành: đun 0,2g chế phẩm với 4ml NaOH 10% phút Để nguội, thêm 5ml H2SO4 10% Lọc lấy tủa phần dịch lọc: - Phần tủa (acid salicylic): + Cho giọt FeCl3 5%, xuất màu tím + Lấy khoảng 10mg tủa vào ống nghiệm, thêm 5ml nước, giọt acid acetic đặc, giọt NaNO2 10%, giọt CuSO4 10%, lắc đều, để 10 phút, xuất màu đỏ - Phần dịch lọc (acid acetic): cho lượng dư CaCO lắc kỹ cho hết sủi bọt, lọc Thêm vào phần dịch lọc giọt FeCl3 5%, xuất màu đỏ tím 1.3 Acid salicylic tạo phức màu với dung dịch CuSO4 COOH COOH OH HNO2 O HO O O N O N COOH HO COOH OH C O O O CuSO4 HO N C N O Cu O N OH Tiến hành: Ống nghiệm: 10mg acid salicylic 5ml H2O giọt acid acetic đặc giọt NaNO2 10% giọt CuSO4 10%, lắc để 10 phút xuất màu đỏ II THỬ GIỚI HẠN TẠP ACID SALICYLIC TỰ DO (không 0,05%) Nguyên tắc: acid salicylic tự tác dụng với FeCl tạo màu tím So sánh màu tím ống thử ống mẫu Tiến hành: - Ống thử: 0,1g aspirin 5ml ethanol 96o 15ml nước lạnh giọt FeCl3 0,5% - Ống mẫu: 1ml dung dịch acid salicylic mẫu 0,01% 4ml ethanol 96o 15ml nước lạnh giọt FeCl3 0,5% Lắc đều, so sánh màu ống thử ống mẫu III ĐỊNH LƯỢNG Nguyên tắc: định lượng NaOH 0,1N, thị phenolphthalein đến màu hồng COONa COOH OCOCH3 OCOCH3 + NaOH → + H2O Tiến hành: Cân xác khoảng 0,3g aspirin vào bình nón 100ml Thêm 10ml ethanol trung tính 2-3 giọt thị phenolphthalein Định lượng NaOH 0,1N đến xuất màu hồng (1ml dung dịch NaOH 0,1N phản ứng hết với 18,02mg aspirin) Yêu cầu hàm lượng aspirin phải từ 99,5 đến 101,0% BÀI 4: KIỂM NGHIỆM PARACETAMOL, ĐỊNH TÍNH DICLOFENAC I KIỂM NGHIỆM PARACETAMOL Công thức cấu tạo paracetamol NHCOCH3 OH Bột kết tinh trắng, không mùi, tan nước, khó tan chloroform ether, tan ethanol dung dịch hydroxyd kim loại kiềm 1.1 Định tính 1.1.1 Phản ứng màu nhóm OH phenol: Hòa tan 10mg chế phẩm 3ml nước, thêm vài giọt FeCl 5%, xuất màu xanh tím 1.1.2 Phản ứng tạo phẩm màu nitơ phản ứng oxy hóa sản phẩm thủy phân HO HO N C CH3 H O NH2 H+ to HO K2Cr2O7 NH2 O + H3C COOH NH NH2 O NH HO O NH2 N HO HO NH2 NaNO2/H+ NaO HO N+ N N+ N HO NaO Cl- N N ClNaO Đun sôi 0,2g chế phẩm với 3ml HCl 10% phút, để nguội, thêm 10ml nước, làm lạnh khơng có tủa tạo thành Chia đơi dịch: - Phản ứng oxy hóa: Ống nghiệm 1: 1/2 dịch thủy phân Thêm giọt kalibicromat (K2Cr2O7) xuất màu tím - Phản ứng tạo phẩm màu nitơ: Ống nghiệm 2: 1/2 dịch thủy phân Thêm giọt NaNO2 0,1M Ống nghiệm 3: 50mg β-naphtol 5ml NaOH 10% Đổ ống nghiệm vào ống nghiệm 3, xuất dung dịch màu đỏ tủa đỏ 1.2 Định lượng Mẫu thử: Bình định mức 250ml (dung dịch A): Chính xác khoảng 40mg paracetamol 50ml NaOH 0,4% Thêm nước vừa đủ 250ml Bình định mức 100ml: Chính xác 5ml dung dịch A 10ml NaOH 0,4% Thêm nước vừa đủ 100ml Đo độ hấp thụ bước sóng 257nm Mẫu trắng: Bình định mức 100ml: 11ml NaOH 0,4% Thêm nước vừa đủ 100ml (Độ hấp thụ riêng paracetamol 715, hàm lượng paracetamol từ 99,0 đến 101,0% tính theo chế phẩm khơ) II ĐỊNH TÍNH DICLOFENAC NATRI Cl H N Cl C OH O FeCl3 K3[Fe(CN)6 + HCl H4[Fe(CN)6] Fe4[Fe(CN)6]3 + HCl Kali ferricyanid Diclofenac Acid ferrocyanic Ferrocyanid ferric Ống nghiệm: 5mg diclofenac natri 5ml ethanol giọt kalifericyanid giọt FeCl3 5% 3ml dd HCl 1% lắc để phút xuất tủa xanh BÀI 5: KIỂM NGHIỆM CÁC XANTHIN Định tính cafein - Phản ứng murexid: R N N O OH O R N R2 O N N O OH N R N OO N R1 N R1 R O O OH N R N NH4OH O NH4OH O R1 O N R N R1 O O N OO N R1 O O O O N R1 O-O N N R O R1NH4+ Lấy khoảng 50mg cafein cho vào chén sứ Thêm 1ml HCl 10% giọt oxi già đặc Đun cách thủy đến cạn Thêm 1-2 giọt NH4OH 10% xuất màu đỏ tía Định tính theophylline, theobromin (tính acid) O O H3C N N O H N N H3C N NaOH CH3 O N CH3 N Na N H3C N AgNO3 O N NaOH O N N CH3 Ag N CH3 N O Na N CH3 N N CH3 O H N N N CH3 O O O N CH3 Ag N AgNO3 O N N CH3 Ống nghiệm 1: 0,2 gam chế phẩm theophylline (theobromin) 5ml dung dịch NaOH 0,4% lắc kỹ Lọc qua giấy lọc, chia đôi dịch lọc vào ống nghiệm 2, Ống nghiệm 2: ½ dịch lọc giọt AgNO3 Xuất tủa trắng keo (theobromin xuất tủa trắng vón) Ống nghiệm 3: ½ dịch lọc giọt CoCl2 Xuất tủa trắng ánh hồng (theobromin xuất tủa xanh tím) Định lượng cafein 2I2 + HI + C8H10N4O2 = C8H10N4O2.HI.I4 Mẫu thử: + Bình định mức 100ml: Chính xác lượng chế phẩm tương ứng với 70mg cafein 20ml nước 10ml H2SO4 10% Chính xác 20ml dung dịch iod 0,1N Thêm nước vừa đủ đến vạch, lắc Lọc qua giấy lọc khô, bỏ 15ml dịch lọc đầu + Bình nón 100ml: Chính xác 25ml dịch lọc Định lượng iod dư natri thiosulfate 0,05N đến màu vàng rơm Thêm 4-5 giọt hồ tinh bột Định lượng đến màu xanh, ghi thể tích natri thiosulfate dùng V1ml Mẫu trắng: Tiến hành tương tự (khơng có chất thử) Ghi thể tích natri thiosulfat 0,05N dùng V2ml (1ml dung dịch iod 0,1N phản ứng với 5,305mg cafein) BÀI 6: KIỂM NGHIỆM BARBITAL Định tính barbital - Phản ứng tạo muối bạc kết tủa trắng: O HN C2H5 O O O C2H5 HN O N C2H5 N C2H5 NaO 2NaOH Na O N C2H5 N C2H5 AgO AgNO3 O Ag Ống nghiệm 1: Lượng dư barbital 4ml NaOH 0,1M, lắc kỹ, lọc lấy dịch Ống nghiệm 2: Dịch lọc 2,3 giọt AgNO3 xuất tủa trắng - Phản ứng tạo phức cobalt màu tím: O HN N C2H5 O C2H5 O Ống nghiệm 3: 2NaOH C2H5 N Na N C2H5 NaO HN O O O Co(NO3)2 CaCl2 C2H5 O Co C2H5 N O 5mg barbital 2ml methanol giọt Co(NO3)2 giọt CaCl2 10% giọt NaOH 2M, xuất tủa xanh tím Định lượng barbital O O HN N C2H5 O C2H5 HN O C2H5 NaO C2H5 N 2NaOH Na O - Chuẩn bị ethanol trung tính: Bình nón 100ml: 25ml ethanol giọt thị thymolphtalein Thêm giọt NaOH 0,1N đến màu xanh lơ rõ - Bình định lượng: Bình nón 100ml: Chính xác khoảng 0,3 gam barbital 10ml ethanol trung tính Định lượng NaOH 0,1N đến màu xanh lơ bình so sánh - Bình so sánh: Bình nón 100ml: 10ml ethanol trung tính Thêm P/0,01842ml nước (1ml dung dịch NaOH 0,1N phản ứng với khoảng 0,01842 gam barbital) BÀI 7: KIỂM NGHIỆM VITAMIN C Định tính vitamin C - Tính acid: H H H H C OH H C OH H C OH H C OH O H C OH O H C OH O OH OH NaHCO3 Ống nghiệm: 50mg vitamin C ONa OH Fe O O O FeSO4 O- OH 2ml nước 10mg NaHCO3 1-2 giọt FeCl3, dung dịch xuất màu tím - Tính khử: H H H C OH H C OH O H C OH H C OH O O O AgNO3 OH OH O + O Ag Ống nghiệm: 10mg vitamin C 2ml nước giọt AgNO3 5% xuất tủa xám Thử tinh khiết vitamin C Nguyên tắc: vitamin C có bon bất đối nên đo mơi trường điều kiện định có góc quay cực riêng phải từ + 20,5 đến + 21,5 (hữu tuyền) Tiến hành: Bình định mức 25ml: 2,5 g vitamin C Nước vừa đủ Tiến hành đo góc quay cực Định lượng vitamin C H H H C OH H C OH O H C OH H C OH O O OH OH O + I2 H2SO4 O O + 2HI Mẫu thử: Bình nón 250ml: Chính xác khoảng 150mg vitamin C 10ml H2SO4 10% 80ml nước 10 giọt hồ tinh bột Định lượng dung dịch iod 0,1N đến xuất màu xanh (1ml dung dịch iod 0,1N phản ứng với 8,81 mg vitamin C) BÀI 8: KIỂM NGHIỆM GLUCOSE Định tính glucose - Phản ứng với CuSO4 kiềm: CH2OH CH2OH O OH OH OH OH OH + 2CuSO4 2NaOH OH O C OH OH OH + Cu2O Ống nghiệm: 0,2 gam glucose 2ml nước 10 giọt CuSO4 10% 1ml NaOH 10%, đun nóng xuất tủa đỏ gạch - Phản ứng với phenylhydrazin: H H HO H H O C C OH C H C OH C OH CH2OH + H CH COOH H HO H H C N NHC6H5 C N NHC6H5 C H C OH C OH CH2OH + 3C6H5NHNH2 NH3 + C6H5NH2 + 2H2O Ống nghiệm: 0,2 gam glucose 2ml nước giọt acid acetic đặc giọt phenylhydrazin đặc Đun sôi cách thủy 10 phút, xuất tủa màu vàng Thử tinh khiết Giới hạn tạp asen: không 1/triệu Nguyên tắc: cho ion asen tác dụng với khí hydro sinh tạo khí AsH Khí bay lên gặp mảnh giấy tẩm HgBr cho hỗn hợp màu vàng So sánh màu vàng mảnh giấy từ bình thử bình mẫu As3+ + H+ → AsH3 ↑ + HgBr2 → As2Hg3 (vàng nâu) Tiến hành: + Bình thử: 1g glucose 25ml nước cất 15ml acid HCl đặc 5ml dung dịch KI 20% 0,1ml dung dịch thiếc II clorid, ngâm để yên nước lạnh 15 phút, thêm 5g kẽm hạt, đậy nắp dụng cụ có ống dẫn khí đặt bơng tẩm chì acetat giấy tẩm thủy ngân bromid, để phản ứng xảy + Bình mẫu: 1ml dung dịch asen mẫu 1/triệu 25ml nước cất 15ml acid HCl đặc 5ml dung dịch KI 20% 0,1ml dung dịch thiếc II clorid, ngâm để yên nước lạnh 15 phút, thêm 5g kẽm hạt, đậy nắp dụng cụ có ống dẫn khí đặt bơng tẩm chì acetat giấy tẩm thủy ngân bromid, để phản ứng xảy Định lượng glucose Nguyên tắc: glucose bị oxy hóa chậm iod môi trường kiềm thành muối acid gluconic, phản ứng ổn định môi trường kiềm nhẹ Na2CO3: I2 + 2Na2CO3 + 2H2O = NaIO + NaI + 2NaHCO3 R-CHO + NaIO = R-COONa + NaI Mẫu thử: Bình nón 100ml: Chính xác khoảng 100mg glucose Chính xác 20ml dung dịch iod 0,1N 10ml Na2CO3 5% Đậy nút để tối 15 phút Acid hóa 15ml H2SO4 10% Định lượng natri thiosulfate 0,1N đến màu vàng rơm Thêm giọt hồ tinh bột, định lượng đến màu xanh, ghi thể tích natri thiosulfate V1ml Mẫu trắng: Làm tương tự mẫu thử (khơng có chất thử) Ghi thể tích natri thiosulfate V2ml HL% = [[(V2 – V1) x (9,008 x 198,2/180,2)]/P]x100 (Glucose ngậm phân tử nước, 1ml natri thiosulfate 0,1N phản ứng với 1ml iod 0,1N; 1ml iod 0,1N phản ứng với 9,008mg glucose khan) THỰC HÀNH HÓA DƯỢC BÀI 9: KIỂM NGHIỆM CLORAMPHENICOL Định tính chloramphenicol O O2N C CHCl2 H H N C C CH2OH OH H Zn/H2SO4 H2N R + Cl Ống nghiệm 1: 0,2 gam chloramphenicol 5ml H2SO4 15% viên kẽm hạt Đợi 10 phút, chia đôi dịch vào ống nghiệm Ống nghiệm 2: ½ dịch giọt AgNO3 10%, xuất tủa trắng Ống nghiệm 3: ½ dịch giọt NaNO2 0,1M Ống nghiệm 3’: 50mg beta naphtol 5ml NaOH 10%, đổ ống nghiệm vào ống nghiệm 3’, xuất dung dịch màu đỏ, tủa đỏ Định lượng chloramphenicol Bình định mức 250ml (dung dịch A): Chính xác khoảng 0,1 gam chloramphenicol 100ml nước nóng hòa tan hết Thêm nước vừa đủ đến vạch Bình định mức 100ml: Chính xác 10ml dung dịch A Thêm nước vừa đủ đến vạch Đo quang bước sóng 278nm (Biết độ hấp thụ riêng chloramphenicol 297) BÀI 10: KIỂM NGHIỆM ISONIAZID Định tính O HO NHNH2 C AgNO3 N N O AgO N NH2 C O NHNH2 C N NH2 C N + HNO3 OH C H2O N + 4AgNO3 + 4Ag + 4HNO3 + N2 - Phản ứng với AgNO3: Ống nghiệm: 10mg isoniazid 2ml nước giọt AgNO3 xuất tủa trắng, đun nóng xuất tủa xám - Phản ứng với CuSO4: N N N O NH2 C O Cu O H2N N C N + to = Cu2O + N2 + OH C N Ống nghiệm: 0,1 gam isoniazid 5ml nước giọt CuSO4, lắc xuất màu xanh ngọc bích, đun nóng nhẹ xuất màu xanh ngọc thạch - Phản ứng với thuốc thử fehling: Ống nghiệm: 10mg isoniazid 2ml nước giọt thuốc thử fehling A giọt thuốc thử fehling B, đun nhẹ xuất tủa đỏ gạch - Phản ứng với vanillin tạo hydrazon: O O NHNH2 C O H C NH N C H C OCH3 N + OH H2O OCH3 N OH Ống nghiệm: 0,1 gam isoniazid 2ml nước 10ml vanillin 1%, lắc xuất tủa vàng Định lượng: Nguyên tắc: BrO3- + 5Br- + 6H+ = 3Br2 + 3H2O Ph-CO-NHNH2 + H2O + 2Br2 = PhCOOH + 4HBr + N2 Bình nón 250ml: Chính xác khoảng 50 mg isoniazid 40ml nước 60ml HCl 10% 0,2 gam KBr giọt methyl đỏ Định lượng KBrO3 0,1N đến màu đỏ (đỏ chuyển sang vàng) (1ml dung dịch KBrO3 phản ứng với khoảng 3,42mg isoniazid, yêu câù hàm lượng isoniazid phải từ 99,0 đến 101,0% hàm lượng ghi nhãn BÀI 11: KIỂM NGHIỆM CÁC SULFAMID Định tính sulfamid Đa số sulfamid lưỡng tính Tính acid phản ứng tạo muối natri với dung dịch NaOH lỗng, sau tạo phức màu đặc trưng với dung dịch CuSO Mỗi sulfamid cho màu khác R2 N H O S N R1 O H Ống nghiệm 1: 0,2 gam sulfamid 3ml NaOH 0,1M, lắc kỹ, lọc lấy dịch cho vào ống nghiệm Ống nghiệm 2: Dịch lọc giọt CuSO4 5%, xuất màu đặc trưng: (Sulfacetamid: màu xanh ngọc bích Sulfanilamid: màu xanh Sulfadimerazin: màu xanh rêu, chuyển nhanh sang màu đỏ Sulfamethoxazol: màu cốm Sulfathiazol: màu tím tro) Định lượng sulfaguanidin Hòa tan 0,2g chế phẩm 15ml dung dịch acid hydroclorid 25% 50ml nước lắc kỹ, cho thêm 2g kali bromid, 4-5 giọt thị treopeolin oo, làm lạnh nước đá chuẩn độ natri nitrit 0,1M đến màu đỏ BÀI 12: KIỂM NGHIỆM CLOPHENIRAMIN MALEAT Công thức cấu tạo clopheniramin maleat: Cl H C CH2 CH2 N CH3 CH3 HC COOH HC COOH N 1.Định tính 1.1 Phổ tử ngoại Hòa tan 30 mg chế phẩm HCl 0,1M để 100ml Lấy 10ml dung dịch pha lỗng bình định mức HCl 0,1M đến 100ml Đo độ hấp thụ dung dịch vùng 230-350nm, vẽ phổ hấp thụ, cực đại hấp thụ 265nm E11 200-220 1.2 Định tính phần maleat Lấy khoảng 0,2g chế phẩm, thêm 3ml nước 1ml NaOH 10M lắc Chiết lần với lần 5ml ether Lấy 0,1ml lớp nước, thêm dung dịch gồm 0,01g reorcin 3ml acid sulfuric đặc, đun cách thủy 15 phút dung dịch khơng màu Phần lại lớp nước thêm 2ml nước brom, đun cách thủy 15 phút, để nguội, lấy 2ml dung dịch thêm gồm 0,01g resorcin 3ml acid sulfuric đặc, đun cách thủy 15 phút, xuất màu xanh lam Định lượng Lấy xác khoảng 0,150g chế phẩm hòa tan 10ml acid acetic băng, thêm 1ml dung dịch tím tinh thể, chuẩn độ acid percloric 0,1N dung dịch chuyển màu xanh Song song tiến hành mẫu trắng 1ml dung dịch acid percloric 0,1N tương đương 19,54mg clopheniramin maleat BÀI 13: KIỂM NGHIỆM DEXAMETHASON Công thức cấu tạo dexamethasone: O CH3 HO OH CH3 CH3 F O CH2OH Bột kết tinh trắng gần trắng, không tan nước, tan ethanol, khó tan methylene clorid Định tính - Lấy khoảng 2mg chế phẩm cho vào ống nghiệm chứa 2ml acid sulfuric, lắc để hòa tan Trong vòng phút màu nâu đỏ nhạt xuất Cho dung dịch vào 10ml nước trộn đều, màu - Đo góc quay cực riêng: hòa tan 0,25 g chế phẩm dioxan pha lỗng thành 25,0ml với dung mơi để đo Góc quay cực riêng từ +70o đến +80o Định lượng Lấy xác khoảng 0,1 g chế phẩm hòa tan ethanol 96% bình định mức 100ml, bổ sung dung môi đến vạch Lấy 2ml dung dịch vào bình định mức 100ml bổ sung ethanol 96% đến vạch Đo độ hấp thụ bước sóng 238,5nm, biết E1%1cm 394 BÀI 14: KIỂM NGHIỆM AMPICILLIN Công thức cấu tạo ampicillin: NH2 H N O S CH3 N CH3 OH O O Bột kết tinh trắng, tan nước, không tan ethanol, aceton, chloroform Tan dung dịch acid loãng dung dịch kiềm loãng Định tính - Lấy khoảng 2mg chế phẩm cho vào ống nghiệm, thêm giọt nước cất làm ẩm, thêm 2ml thuốc thử formaldehyde acid sulfuric đặc, trộn đều, dung dịch không màu, đun cách thủy phút xuất màu vàng thẫm - Nhỏ giọt dung dịch ninhydrin 0,1% mảnh giấy lọc, sấy khô 100105oC, nhỏ lên vết khô giọt dung dịch ampicillin 0,1% sấy khô 100105oC phút, để nguội xuất màu tím - Lấy khoảng 10mg chế phẩm cho vào ống nghiệm, thêm 1ml nước lắc đều, thêm 2ml dung dịch thuốc thử Fehling, xuất màu đỏ tím - Sắc ký lớp mỏng Pha dung dịch thử: hòa tan 25mg chế phẩm 10ml dung dịch NaHCO 4,2% Pha dung dịch đối chiếu: hòa tan 25mg ampicillin khan chuẩn 10ml dung dịch NaHCO3 4,2% Hệ dung mơi gồm: 10 thể tích aceton 90 thể tích amoniacetat (154g/l) điều chỉnh pH đến acid acetic khan (98%) Tiến hành: chấm riêng 2µl dung dịch thử dung dịch đối chiếu lên mỏng sắc ký Triển khai sắc ký hệ dung mơi, để khơ mỏng ngồi khơng khí, đặt mỏng vào bình có iod xuất vết Định lượng - Pha dung dịch thử: cân xác khoảng 0,125g ampicillin cho vào bình định mức 100ml, bổ sung nước vừa đủ lắc hòa tan, lọc bỏ khoảng 20ml dịch lọc đầu - Pha dung dịch chuẩn: cân xác khoảng 0,125g ampicillin chuẩn, hòa tan nước vừa đủ 100ml - Định lượng mẫu thử: lấy xác 2ml dịch lọc cho vào bình nón có nút mài dung tích 100ml, thêm 2ml dung dịch NaOH 1N, lắc đều, để yên 15 phút, thêm 2,4ml dung dịch HCl 1N, 10ml dung dịch iod 0,01N, đậy kín bình, để n 15 phút Chuẩn độ iod dư Na2S2O3 0,01N, thị hồ tinh bột, ghi thể tích dùng Vt ml - Định lượng mẫu trắng dung dịch thử: lấy xác 2ml dịch lọc cho vào bình nón có nút mài dung tích 100ml, thêm 0,12ml dung dịch HCl 1N, 10ml dung dịch iod 0,01N, chuẩn độ Na2S2O3 0,01N, thị hồ tinh bột, ghi thể tích dùng Vot ml - Định lượng dung dịch chuẩn: tiến hành tương tự mẫu thử, ghi thể tích Na 2S2O3 Vc ml - Định lượng mẫu trắng dung dịch chuẩn: tương tự mẫu trắng dung dịch thử, ghi thể tích Na2S2O3 Voc ml Xây dựng cơng thức tính hàm lượng ampicillin BÀI 15: TỔNG HỢP METHYL SALICYLAT ... thiosulfate 0,1N phản ứng với 1ml iod 0,1N; 1ml iod 0,1N phản ứng với 9,008mg glucose khan) THỰC HÀNH HÓA DƯỢC BÀI 9: KIỂM NGHIỆM CLORAMPHENICOL Định tính chloramphenicol O O2N C CHCl2 H H N C C... tác KBr, thị treopeolin OO đến màu đỏ Nhiệt độ tiến hành định lượng 5-20oC Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl KBr → 10-15OC [Ar-N+≡N]Cl- + NaCl + 2H2O Tiến hành: Cân xác khoảng 0,3g chế phẩm cho vào bình nón... salicylate acetat, acid hóa tạo acid salicylic acid acetic COONa COOH O ONa C OH O + 3NaOH → + CH3COONa + 2H2O COOH COONa OH ONa + CH3COONa + H+ → + CH3COOH + 2H2O Tiến hành: đun 0,2g chế phẩm