Nghiên cứu tăng cường biểu hiện gen mã hóa enzyme DAT tham gia tổng hợp alkaloid ở cây dừa cạn (catharanthus roseus (l ) g don)

137 543 0
Nghiên cứu tăng cường biểu hiện gen mã hóa enzyme DAT tham gia tổng hợp alkaloid ở cây dừa cạn (catharanthus roseus (l ) g  don)

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

... HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM BÙI THỊ HÀ NGHIÊN CỨU TĂNG CƢỜNG BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA ENZYME DAT THAM GIA TỔNG HỢP ALKALOID Ở CÂY DỪA CẠN (Catharanthus roseus (L. ) G Don ) Chuyên ngành: Di... cứu tăng cường biểu gen mã hóa enzyme DAT tham gia tổng hợp alkaloid dừa cạn (Catharanthus roseus (L. ) G Don) Mục tiêu nghiên cứu Xác định đặc điểm biểu gen mã hóa C roseus deacetylvindoline-4-O-acetyltransferase... HOẠT ĐỘNG CỦA ENZYME DAT Ở CÂY DỪA CẠN 1.2.1 Quá trình sinh tổng hợp alkaloid dừa cạn Trong năm g n đây, đường chuyển hóa tổng hợp alkaloid dừa cạn nghiên cứu chi tiết Ở mức độ phân tử, đường chuyển

Ngày đăng: 12/04/2018, 00:46

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM

  • Thái Nguyên - 2018

  • Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 9 42 01 21

  • 2. GS.TS. Chu Hoàng Mậu

    • Bùi Thị Hà

  • LỜI CẢM ƠN

    • Bùi Thị Hà

  • MỤC LỤC

  • DANH MỤC CÁC BẢNG

  • DANH MỤC CÁC HÌNH

    • 1. Đặt vấn đề

    • 2. Mục tiêu nghiên cứu

    • 3. Nội dung nghiên cứu

    • 4. Những đóng góp mới của luận án

    • 5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài luận án

      • Về mặt khoa học

      • Về mặt thực tiễn

    • 1.1.1. Vai trò của alkaloid thực vật

    • 1.1.2. Alkaloid ở cây dừa cạn

      • 1.1.2.1. Cây dừa cạn

      • 1.1.2.2. Các loại alkaloid và tác dụng của alkaloid

      • Tác dụng dược lý của cây dừa cạn

    • 1.2.1. Quá trình sinh tổng hợp alkaloid ở cây dừa cạn

    • 1.2.2. Hoạt động của enzyme DAT và gen DAT

    • 1.3.1. Nâng cao hàm lƣợng alkaloid ở cây dừa cạn bằng phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật

    • 1.3.2. Nâng cao hàm lƣợng alkaloid bằng kỹ thuật chuyển gen

      • 1.3.2.1. Nghiên cứu xây dựng quy trình chuyển gen ở thực vật thông qua chuyển gen gus nhờ A.tumefaciens

      • 1.3.2.2. Thành tựu nghiên cứu chuyển gen ở cây dừa cạn

    • 2.1.1. Vật liệu thực vật

    • 2.1.2. Chủng vi khuẩn và các loại vector

    • 2.2.1. Hóa chất, thiết bị nghiên cứu

      • Hóa chất

      • Thiết bị

    • 2.2.2. Địa điểm nghiên cứu và hoàn thành luận án

    • 2.3.1. Các phƣơng pháp sinh học phân tử

      • 2.3.1.1. Nghiên cứu thông tin về gen và thiết kế cặp mồi nhân gen

      • 2.3.1.2. Phân lập gen

    • Kỹ thuật PCR khuếch đại gen CrDAT

      • 2.3.1.3. Tách dòng gen

    • Tinh sạch gen

    • Gắn đoạn CrDAT vào vector tách dòng pBT

    • Biến nạp vector tách dòng vào tế bào khả biến E.coli DH5α

    • Chọn dòng vi khuẩn mang vector tái tổ hợp bằng kỹ thuật colony - PCR

    • Cắt kiểm tra gen CrDAT trên plasmid tái tổ hợp

    • 2.3.2. Phƣơng pháp thiết kế vector chuyển gen mang cấu trúc chứa gen

      • CrDAT

      • 2.3.2.1. Thiết kế cấu trúc độc lập mang gen chuyển CrDAT

      • 2.3.2.3. iến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào A. tumefaciens

    • 2.3.3. Chuyển cấu trúc mang gen CrDAT vào cây thuốc lá

    • 2.3.4. Tái sinh và chuyển gen gus ở cây dừa cạn

      • 2.3.4.1. Tái sinh cây dừa cạn in vitro

      • 2.3.4.2. Xây dựng quy trình chuyển gen thông qua chuyển gen gus

    • 2.3.5. Chuyển cấu trúc mang gen CrDAT vào cây dừa cạn thông qua

      • A.tumefaciens

    • Biến nạp cấu trúc mang gen chuyển qua nách lá mầm

    • 2.3.6. Phƣơng pháp phân tích cây chuyển gen

      • 2.3.6.1. Tách chiết DNA tổng số và kiểm tra sự có mặt của gen chuyển trong cây chuyển gen

      • 2.3.6.2. Xác định sự hợp nhất của gen chuyển CrDAT vào hệ gen của cây chuyển gen

      • 2.3.6.3. Phân tích sự biểu hiện của protein tái tổ hợp CrDAT trong cây chuyển gen

      • 2.3.6.4. Phân tích định lượng protein tái tổ hợp rCrDAT trong cây chuyển gen bằng ELISA

      • 2.3.6.5. Xác định hàm lượng alkaloid tổng số trong cây dừa cạn bằng phương pháp phân tích khối lượng

    • 2.3.8. Các phƣơng pháp phân tích, xử lý số liệu

    • 3.1.1. Kết quả tách dòng và xác định trình tự nucleotide của gen CrDAT

      • 3.1.1.1. ết qu khuếch đại và tách d ng cDNA

      • 3.1.1.2. Xác định trình tự gen CrDAT

      • 3.1.2. So sánh trình tự nucleotite của gen CrDAT

    • 3.2.1. Thiết kế vector chuyển gen mang cấu trúc chứa gen CrDAT

      • 3.2.1.1. Tạo vector mang cấu trúc chứa gen đích CrDAT

      • 3.2.1.2. Tạo vector chuyển gen và chọn d ng A.tumefaciens tái tổ hợp chứa vector chuyển gen pBI121-CrDAT

    • 3.2.2. Phân tích biểu hiện gen CrDAT trên cây thuốc lá chuyển gen

      • 3.2.2.1. iến nạp cấu trúc chứa gen CrDAT và tạo cây thuốc lá chuyển gen nhờ A.tumefacinens

      • 3.2.2.2. Phân tích sự có mặt và sự hợp nhất của gen chuyển CrDAT trong hệ gen cây thuốc lá

      • 3.2.2.3. Phân tích sự biểu hiện protein CrDAT tái tổ hợp trên cây thuốc lá chuyển gen

    • 3.2.3. Thảo luận kết quả thiết kế và đánh giá hoạt động của vector chuyển gen pBI121-CrDAT

      • Tạo vật liệu sạch

      • nh hưởng của AP và sự kết hợp gi a AP v i I A đến sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên

      • nh hưởng của AP và sự kết hợp gi a AP v i I A đến sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi từ nách lá mầm

  • A B C D

    • 3.3.2. Xây dựng quy trình chuyển gen thông qua gen gus

      • Xác định mật độ tế bào A. tumefaciens phù hợp cho chuyển gen ở cây dừa cạn

      • Xác định nồng độ acetosyringone phù hợp cho chuyển gen ở cây dừa cạn

      • Xác định thời gian nhiễm khuẩn A. tumefaciens phù hợp cho cây dừa cạn

      • Xác định nồng độ kanamycin m thích hợp để chọn lọc chồi và tái sinh in vitro cây chuyển gen

    • Bảng 3.11. Ản ởng n ng n n u u n gen

    • 3.3.3. Kết quả chuyển gen gus vào cây dừa cạn

    • 3.4.1. Chuyển cấu trúc mang gen CrDAT và tái sinh cây dừa cạn chuyển gen

    • 3.4.2. Xác định sự có mặt và sự hợp nhất của gen chuyển CrDAT trong hệ gen của các cây dừa cạn chuyển gen ở thế hệ T0

    • 3.4.3. Phân tích biểu hiện protein DAT tái tổ hợp ở thế hệ T1

    • Kết quả phân tích hàm lƣợng alkaloid tổng số của các dòng dừa cạn chuyển gen

    • 1. Kết luận

    • 2. Đề nghị

  • CÁC CÔNG TRÌNH CÔNG BỐ LIÊN QUAN Đ N LU N ÁN

    • Các bài báo

    • Các trình tự gen đã đăng ký trên Ngân hàng Gen quốc tế

    • Tài liệu Tiếng Việt

    • Tài liệu Tiếng Anh

    • Trang web

  • PHỤ LỤC

    • Phụ lục 1. Sơ đồ cấu trúc vector sử dụng trong nghiên cứu

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan