VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE TỪ GIÁ THỂ TRỒNG NẤM CORDYCEPS MILITARIS Giáo viên hướng dẫn : THS VŨ DUY NHÀN Sinh viên thực tập : TRƯƠNG THUỲ TRANG Lớp : 13.01 – K20 HÀ NỘI - 2017 VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE TỪ GIÁ THỂ TRỒNG NẤM CORDYCEPS MILITARIS Giáo viên hướng dẫn : THS VŨ DUY NHÀN Sinh viên thực tập : TRƯƠNG THUỲ TRANG Lớp : 13.01 – K20 HÀ NỘI - 2017 Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 LỜI CẢM ƠN Lời tơi xin bày tỏ lòng kính trọng biết ơn sâu sắc tới ThS Vũ Duy Nhàn, người trực tiếp hướng dẫn, động viên giúp đỡ tơi suốt q trình thực tập nghiên cứu Tôi xincảm ơn ban lãnh đạo Viện Hố học – Vật liệu/ Viện Khoa học Cơng nghệ qn anh chị Phòng Hố sinh, tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian thực tập làm đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Phòng Đào tạo Viện Đại học Mở Hà Nội, thầy cô tạo điều kiện suốt trình học tập trường thực luận văn Cuối muốn gửi lời thân thương đến gia đình, bạn bè, tập thể lớp 13-01 Khoa Công Nghệ Sinh Học bên động viên, giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 15 tháng năm 2017 Sinh viên Trương Thuỳ Trang Trương Thuỳ Trang – 1301 – CNSH i Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC BẢNG vi DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT vii MỞ ĐẦU PHẦN 1: TỔNG QUAN VỀ TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu nấm Cordyceps militaris .3 1.1.1 Đặc điểm nấm Cordyceps militaris 1.1.2 Thành phần hố học nấm Cordyceps militaris 1.1.2.1 Cordycepin 1.1.2.2 Adenosine 1.1.2.3 Polysaccharide 1.1.2.4 Acid cordycepic 1.1.2.5 Nucleotides 1.1.2.6 Sterol 1.1.2.7 Protein axit amin 1.1.2.8 Axit béo nguyên tố kim loại 10 1.1.3 Các ứng dụng từ sinh khối nấm Cordyceps militaris 11 1.1.3.1 Cải thiện chức gan 11 1.1.3.2 Giải độc thận 11 1.1.3.3 Giảm đường huyết 12 1.1.3.4 Chống rối loạn tình dục 12 1.1.3.5 Tăng sức bền, chống mệt mỏi 12 1.1.3.6 Chống lão hoá 12 1.2 Giới thiệu Polysaccharide từ giá thể nấm Cordyceps militaris 13 1.2.1 Đặc điểm Polysaccharide giá thể nấm Cordyceps militaris 13 Trương Thuỳ Trang – 1301 – CNSH ii Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 1.2.2 Vai trò Polysaccharide nấm Cordyceps militaris 14 1.2.3 Tình hình nghiên cứu tách chiết Polysaccharide từ Cordyceps militaris 16 1.2.3.1 Tình hình nghiên cứu Polysaccharide từ Cordyceps militaris giới 16 1.2.3.2 Tình hình nghiên cứu ni trồng Cordyceps militaris Việt Nam 20 PHẦN 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Nguyên liệu thiết bị nghiên cứu 22 2.1.1 Nguyên liệu 22 2.1.2 Thiết bị hoá chất 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu .24 2.2.1 Phương pháp tách chiết Polysaccharide từ giá thể trồng nấm Cordyceps militaris 24 2.2.1.1 Khảo sát phương pháp chiết 24 2.2.1.2 Khảo sát điều kiện chiết 25 2.2.2 Xác định hàm lượng Polysaccharide theo phương pháp phenolsulfuric Michel Dubois, K A Gilles cs, 1956 25 2.2.3 Thu nhận polysaccharide phương pháp kết tủa 28 2.2.4 Phân tích nhóm chức Polysaccharide IR: 29 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 30 3.1 Nghiên cứu lựa chọn điều kiện tách chiết Polysaccharide 30 3.1.1.Nguyên cứu lựa chọn phương pháp tách chiết 30 3.1.2.Nghiên cứu lựa chọn tỷ lệ mẫu/dung môi 32 3.1.3 Nghiên cứu xác định nhiệt độ chiết 33 3.1.4 Nghiên cứu xác định thời gian chiết 34 3.2 Bước đầu xây dựng quy trình tách chiết .35 Trương Thuỳ Trang – 1301 – CNSH iii Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 3.3 Bước đầu xác định nhóm chức polysaccharide tách chiết 41 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 44 Kết luận 44 Kiến nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 Trương Thuỳ Trang – 1301 – CNSH iv Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1: Đơng trùng hạ thảo Cordyceps militaris tự nhiên Hình 1.2: Cấu trúc hố học Cordycepin Hình 1.3: Cấu trúc hoá học adenosine Hình 1.4: Cấu tạo hố học số Nucleotides Hình 1.5: Công thức cấu tạo Polysaccharide 13 Hình 2.1: Cordyceps militaris ni cấy Viện Hoá học-Vật liệu KH&CN quân 22 Hình 2.2: Giá thể bột để tách chiết 22 Hình 2.3: Máy siêu âm 23 Hình 2.4: Sơ đồ quy trình tách chiết Cordyceps polysaccharide 24 Hình 2.5: Mẫu đo đường chuẩn 27 Hình 2.6: Đồ thị đường chuẩn glucose (ߤ݃/݈݉) 27 Hình 2.7: Máy ép thuỷ lực 29 Hình 2.8: Máy đo phổ hồng ngoại IR 29 Hình 3.1: Kết khảo sát dung mơi chiết mẫu Cordyceps militaris 31 Hình 3.2: Kết khảo sát thay đổi tỷ lệ mẫu/dung môi 32 Hình 3.3: Kết khảo sát nhiệt độ 33 Hình 3.4: Kết khảo sát thời gian 34 Hình 3.5: Sơ đồ tách chiết polysaccharide 36 Hình 3.6: Phổ hồng ngoại IR mẫu CM-hs-CPS2 chuẩn theo kết nghiên cứu Fengyao Wu 41 Hình 3.7: Phổ hồng ngoại IR mẫu P1 42 Hình 3.8: Phổ hồng ngoại IR mẫu P2 42 Hình 3.9: Phổ hồng ngoại IR mẫu P3 43 Trương Thuỳ Trang – 1301 – CNSH v Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Phân loại khoa học Bảng 1.2: Hàm lượng axit béo Cordyceps militaris 10 Bảng 1.3: Khả kháng khối u số polysaccharide thu nhận từ số loại nấm 15 Bảng 1.4: Hiện trạng kỹ thuật tách chiết Polysaccharides 19 Bảng 2.1: Thiết bị dùng thí nghiệm 23 Bảng 3.1: Hàm lượng polysaccharide từ Cordyceps militaris 40 Bảng 3.2: So sánh phổ IR mẫu 43 Trương Thuỳ Trang – 1301 – CNSH vi Khoá luận Tốt Nghiệp 2017 DANH MỤC CÁC CHỮ CÁI VIẾT TẮT Chữ viết tắt Nội dung C Cordyceps Sp Species- loài Spp Species flural – nhiều loài EtOH Ethanol EPS Exopolysaccharide – polysaccharide ngoại bào SOD Chất chống oxy hoá P1 Polysaccharide thu sau chiết với nước nóng P2 Polysaccharide thu sau bổ sung NaOH 4% P3 Polysaccharide thu sau bổ sung cồn Trương Thuỳ Trang – 1301 – CNSH vii MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, nhiều loài nấm quan tâm đến nguồn nguyên liệu để sản xuất thực phẩm chức phục vụ chăm sóc sức khoẻ người ngày tăng lên Ngoài chúng nhà nghiên cứu y dược học ý đa dạng hợp chất sinh học có loại Đơng trùng hạ thảo dạng sản phẩm cộng sinh loài nấm Cordyceps sisnensis (Berk.) Cordyceps militaris (L Ex Fr).link lên ấu trùng lồi trùng thuộc chi Hepialus Thường gặp ấu trùng loài bướm thuộc chi Thitarodes Hepialus armoricanus Là loại nấm dược liệu quý từ lâu giới biết đến Sách y học cổ truyền Trung Quốc từ xa xưa coi Đông trùng hạ thảo vị thuốc để bồi bổ sức khoẻ người hỗ trợ điều trị hàng loạt bệnh cải thiện chức phổi thận, chống ung thư điều hoà miễn dịch tác dụng hạ huyết áp Mặt khác nghiên cứu y học cổ truyền đại xác định Đông trùng hạ thảo tác dụng phụ với thể người Polysaccharide thành phần có hoạt tính sinh học Đơng trùng hạ thảo, chứng minh chống ung thư, điều hoà miễn dịch tác dụng chống oxy hố đáng lưu ý Chính gần phương pháp để tách chiết, tinh sạch, phân tích đánh giá cấu trúc Cordyceps polysaccharide từ sợi nấm giá thể Cordyceps militaris quan tâm nghiên cứu rộng rãi Khi ứng dụng để sản xuất sản phẩm thực phẩm chức từ nguồn nguyên liệu polysaccharide giải phần việc chăm sóc sức khoẻ người Xuất phát từ thực tế đó, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu xây dựng quy trình tách chiết polysaccharide từ giá thể nấm Cordyceps Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 0,66358µg/ml Tuy nhiên xử lý thống kê cho thấy hai mức khối lượng mẫu 15g 20g sai khác mức ý nghĩa α=0,00168 Khối lượng Polysaccharide có xu hướng giảm dần ta tăng khối lượng giá thể dịch chất ngày đặc, khó chiết ly thu dịch Chính vậy, tơi chọn tỷ lệ 1/20 tỷ lệ tối ưu cho lần thí nghiệm sau 3.1.3 Nghiên cứu xác định nhiệt độ chiết Tiến hành khảo sát chiết mẫu với thông số chiết cố định: phương pháp chiết: siêu âm, thời gian chiết: 90 phút; dung môi chiết: H₂O, số lần chiết: Thông số khảo sát: nhiệt độ: 70°C, 80°C, 90°C, 100°C 0.667 0.6664 91.3642 0.666 0.665 73.3346 0.664 0.6653 77.32 90 76.177 80 70 0.66358 60 0.663 50 0.662 0.661 100 40 0.66086 30 0.66 20 0.659 10 0.658 60° 80° 90° Hàm lượng (µg/ml) Khối lượng (g) 100° Hình 3.3: Kết khảo sát nhiệt độ Nhận xét: Nhiệt độ dung mơi trích ly cao hàm lượng Polysaccharde thơ thu cao Khi nhiệt độ tăng phân tử dung mơi chuyển động hỗn độn giúp cho trình di chuyển phần tử dung môi xâm nhập sâu vào bên ngun liệu cần trích lý, Polysaccharide hồ tan vào dung môi tạo thành dung dịch mixen (dịch chiết) Kết nhiệt độ 60°C hàm lượng Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH Polysaccharide thu thấp 0,66086µg/ml cao 100°C 0,6664µg/ml Trong khối lượng đường có xu hướng tỉ lệ nghịch với hàm lượng lượng thể tích định q trình đun Polysaccharide hồ vào dung mơi gây khó khăn cho việc lọc Theo thí nghiệm Shu, 60°C với công suất 200W, hàm lượng Polysaccharide thu 35,42% Trong Yu cộng thu hàm lượng cao39,28% 80°C với công suất 180W 3.1.4 Nghiên cứu xác định thời gian chiết Tiến hành chiết mẫu theo quy trình: cố dịnh thơng số: phương pháp chiết: siêu âm, nhiệt độ chiết: 40°C, dung môi chiết: H₂O, thời gian chiết: 60 phút, 90 phút, 120 phút 0.674 92.96 0.6725 0.672 82.336 0.67 70 60 0.666 0.66358 0.664 0.662 90 80 73.3346 0.668 100 50 40 0.6606 0.66 30 0.658 20 0.656 10 0.654 Hàm lượng (µg/g) Khối lượng (g) 60 phút 90 phút 120 phút Hình 3.4: Kết khảo sát thời gian Nhận xét: Thời gian chiết siêu âm có ảnh hưởng nhiều đến lượng polysaccharide hồ tan dung mơi chiết Với thời gian trích ly lâu hàm lượng Polysaccharide thu tăng lên, 0,6606µl/ml 60 phút, 0,66358µg/ml 90 phút 0,6725µl/ml 120 phút Khối lượng Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH Polysaccharide có xu hướng biến thiên nồng độ chất ngày tăng tăng thời gian thể tích dịch thu lại giảm Tuy nhiên chiết thời gian dài, dịch chiết lẫn nhiều tạp chất ảnh hưởng đến q trình phân tích làm giảm hàm lượng Polysaccharide Do vậy, lựa chọn thời gian chiết 120 phút để chiết polysaccharide khỏi mẫu 3.2 Bước đầu xây dựng quy trình tách chiết Từ nghiên cứu khảo sát lựa chọn phương pháp tách chiết điều kiện ảnh hưởng đến hiệu suất tách chiết như: phương pháp chiết, nhiệt độ, thời gian, tỷ lệ dung môi với tài liệu tham khảo tách chiết polysaccharide Quy trình tách chiết polysaccharide từ giá thể Cordyceps militaris sửa bổ sung theo sơ đồ sau: Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 35 Bột thể Dịch Bã 200ml H₂0 100°C Dịch Bã Dịch Cô cạn Ly tâm 100ml NaOH 4% Đun 55°C (90’) Dịch Cồn 1:4 Ly tâm Dịch Bã Cặn P1 Dịch 100ml NaOH4% Đun 50°C (90’) Dịch hỗn hợp Cặn P2 Dịch 100ml CH₃COOH Ly tâm Dịch Cặn P3 Cồn 96° 1:4 Dịch Cặn P4 Hình 3.5: Sơ đồ tách chiết polysaccharide Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 36 Cân 10g giá thể nấm Cordyceps militaris khô (đã xay nhuyễn với kích thước hạt 0,5µm ) Được ngâm chiết với 200ml nước nóng 80°C 90phút Lọc lấy phần dịch tan bã tiếp tục bổ sung 200ml nước cất chiết lần 90 phút Tách riêng phần bã nấm dịch tan (phần dịch hai lần chiết gộp lại) Đối với phần dịch tan: Cơ cạn thể tích cách đun 100°C đến 20ml, ly tâm thu dịch Bổ sung cồn 96° theo tỉ lệ 1:4 ủ qua đêm 4°C Ly tâm 5000vòng/phút thu cặn polysaccharide (P1) Đối với phần bã: Phần bã giá thể thu sau chiết nước nóng làm khơ Bổ sung 100ml NaOH 4%và phần bã, ủ 55°C Lọc tách phần dịch bã nấm tiếp tục bổ sung 100ml NaOH 4% ủ 55°C giờ, lọc tách tiếp lần Phần dịch lần chiết kiểm gộp lại tiến hành ly tâm 5000 vòng/phút loại bỏ cặn, trung hồ axit axetic để lắng qua đêm Lọc thu riêng phần dịch kết tủa Phần dịch lọc ly tâm 5000 vòng/phút , loại bỏ cặn Bổ sung lần thể tích cồn 96°C, để lắng qua đêm ly tâm thu kết tủa, làm khô 50°C đến trọng lượng khơng đổi Một số hình ảnh q trình tách chiết Đối với phần bã: Bổ sung NaOH 4% vào phần bã Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH Ủ phần bã có chứa NaOH 4% 55°C Chiết sau bổ sung NaOH 4% Dịch sau trung hoà CH₃COOH Dịch cặn sau ly tâm Sau bổ sung cồn tỷ lệ 1:4 Ly tâm thu dịch cặn Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH Đối với phần dịch: Dịch chiết lần Bổ sung cồn tỉ lệ 1:4 Ly tâm thu dịch cặn Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH Sau tách chiết đc phân doạn Polysaccharide: Bảng 3.1: Hàm lượng polysaccharide từ Cordyceps militaris Polycacchairide Hàm Thể Khối thơ lượng tích lượng (g) (µg/ml) (ml) (µg) 0,24 0,4181 265 30,322 0,30322 5,7 0,085 180 15,246 0,15246 0,368 0,077 430 33,11 0,3311 Quả thể % Polysaccharide Dịch chiết nước nóng (P1) Dịch chiết với NaOH (P2) Tủa (P3) Nhận xét: Theo kết bảng trên, tất phân đoạn tách chiết có chứa Polysaccharide Ở phân đoạn khác hàm lượng Polysaccharide tăng từ 0,077µg/ml đến 0,4181μg/ml Trong Polysaccharide dạng khơng tan chiếm lượng lớn dịch kiềm, tủa P2=5,7g hàm lượng polysaccharide chiếm có 0,15246% Tổng phần trăm hàm lượng Polysaccharide giá thể Cordyceps militaris 0,78% Theo kết tách chiết polysaccharide từ thể, hàm lượng thu từ thể đạt giá trị cao hơn: đạt 1,018% với hàm lượng P1, P2, P3 tương ứng là: 0,303%, 0,152%, 0,563% Nghiên cứu Guanghao (2007) thu 0,1641g Polysaccharide tách chiết từ 20g Cordyceps militaris với hiệu suất 0,82% [16] Tôi kết luận với phương pháp chiết này, đảm bảo hàm lượng polysaccharide chiết triệt để hàm lượng polysaccharide thu tương đối tốt Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 40 3.3 Bước đầu xác định nhóm chức polysaccharide tách chiết Theo nghiên cứu Fengyao Wu đặc điểm cấu trúc hoạt động chống oxy hố polysaccharide có tên CM-hs-CPS2 [17] Hình 3.6: Phổ hồng ngoại IR mẫu CM-hs-CPS2 chuẩn theo kết nghiên cứu Fengyao Wu [17] Trong phép đo phổ IR CM-hs-CPS2 dải hấp thụ lớn (tại 3.396 cm⁻¹), cho xuất nhóm hydroxyl (O-H) liên kết hydro phân tử Tại đỉnh 2.929 cm⁻¹ cho đỉnh kéo dài nhóm C-H, đỉnh nằm dải sóng từ 1.400 – 1.200 cm⁻¹thể nhóm C-H mạch nhánh Tại dải sóng 1.651 1.541 cm⁻¹ thể liên kết nhóm C = O nhóm N-H mạch nhánh, điều cho thấy có diện nhóm acetamido Hai dải hấp thụ gần 1.236 848 cm⁻¹ thể liên kết nhóm S = O C-O-S tương ứng, tồn nhóm –O-SO₃, nhóm có đỉnh hấp thụ mạnh từ 1.200 đến 950 cm⁻¹ quy cho liên kết ether (C-O-C) Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH hydroxyl có mặt vòng pyranose Đỉnh 761 cm⁻¹ vòng đối xứng kéo dài pyranose, thể monosaccharide CM-hs-CPS2 pyranose Kết phân tích phổ hồng ngoại IR mẫu P1, P2, P3 sau tách chiết sau: 100 98 96 769.54cm-1 94 92 576.09cm-1 707.7cm-1 %T 1415.77cm-1 90 2930cm-1 88 1640.04cm-1 1153cm-1 86 84 82 3392.05cm-1 1079.59cm-1 1025.06cm-1 80 79 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500450 cm-1 Hình 3.7: Phổ hồng ngoại IR mẫu P1 100 98 96 94 1027.88cm-1 624.15cm-1 1161.2cm-1 92 %T 889.11cm-1 90 1648.04cm-1 88 86 1396.78cm-1 84 82 80 79 4000 3420.97cm-1 3500 3000 2500 2000 1500 cm-1 Hình 3.8: Phổ hồng ngoại IR mẫu P2 Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 1000 500450 100 98 96 94 654.94cm-1 %T 92 761.65cm-1 574.27cm-1 90 710.6cm-1 88 1153.93cm-1 1656cm-1 2938.3cm-1 86 1414.57cm-1 84 1565.16cm-1 3417.80cm-1 1080.29cm-1 82 1025.71cm-1 80 79 4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500450 cm-1 Hình 3.9: Phổ hồng ngoại IR mẫu P3 Bảng 3.2: So sánh phổ IR mẫu Nhóm chức Mẫu P1 (cm⁻¹) Mẫu P2 (cm⁻¹) Mẫu P3 (cm⁻¹) O-H 3392 3420 3417 C-H 2930 2900 2938 C=O 1640 1648 1656 N-H 1415 1396 1565 S=O 1153 1161 1154 C-O-S 769 889 761 Kết phổ IR cho thấy P1, P2, P3 có nhóm đặc trưng pyranose liên kết liên kết α-glycosidic, loại polysaccharide có tính axit sulfate chứa nhóm acetamido Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ sinh khối giá thể nấm Cordyceps militaris bước đầu khảo sát xác lập quy trình tách chiết polysaccharide thu nhận mẫu polysaccharides kí hiệu P1, P2, P3 với tỷ lệ thu tương ứng 0,30322%, 0,15246%, 0,3311% Sử dụng phương pháp phân tích hồng ngoại IR, bước đầu xác định có mặt số nhóm chức O-H, C-H, C=O, N-H, S=O, C-O-S mẫu polysaccharides phân lập P1, P2, P3 Kiến nghị Các kết nghiên cứu bước đầu nghiên cứu sơ hiệu suất tách chiết polysaccharide từ Cordyceps militaris Tuy nhiên cần phải có nghiên cứu tiếp theo: Tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện quy trình tách chiết tinh polysaccharide để làm tăng độ tinh khiết sản phẩm đáp ứng vào sản xuất sản phẩm chức có chứa polysaccharide Tiếp tục có nghiên cứu đánh giá hoạt tính sinh học kháng khuẩn, kháng khối u ba mẫu polysaccharides P1, P2, P3 sử dụng phương pháp phân tích khác để đánh giá sâu cấu trúc phân tử P1, P2, P3 Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt: Những thuốc vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học 2006 Trần Thị Hồng Hà, Lê Hữu Cường, Trần Thị Như Hằng, Lưu Văn Chính, Lê Mai Hương Phân lập cách polysaccharide từ nấm hầu thủ lên men dịch thể đánh giá hoạt tính kháng u chúng Tạp chí khoa học cơng nghệ 50(3), 2012, 327-334 Trần Thị Hồng Hà, Lưu Văn Chính, Lê Hữu Cường, Trần Thị Như Hằng, Đỗ Hữu Nghị, Trương Ngọc Hùng, Nguyễn Thị Nga, Lê Mai Hương Đánh giá hoạt tính sinh học polysaccharide hợp chất cần tách chiết từ nấm hương (Lentinus edodes) Tạp chí sinh học, 35(4), 2013: 445-453 Tài liệu tiếng Anh Shonkor Kumar Das, Mina Masuda, Akihiko Sakurai, Mikio Sakakibara Medicinal uses of the mushroom Cordyceps militaris: Current state and prospects Fitoterapia 81(2010) 961-968 Shi Zhong, Huijuan Pan, Leifa Fan, Guoying Lv, Yongzhi Wu, Binod Parmeswaran, Ashok Pandey and Carlos Ricardo Soccol Advances in Research of Polysaccharides in Cordyceps Species.Food Technol Biotechnol 47 (3) 304–312 (2009) Huang, S.Y Tsai, Y.L Lee, J.L Mau, Nonvolatile components of fruiting bodies and mycelia of militaris, Food Sci Technol 39 (2006) 577–583 L Wen, Y.L Tang, Q.F Yin, M Xia, Y.L Yang, Assays on nutrient and effective ingredients in different parts of Cordyceps militaris, China J Chin Mater Med 30 (2006) 659–661 (in Chinese) Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 45 D Wang, M Xu, H.T Zhu, K.K Chen, Y.J Zhang, C.R Yang, Biotransformation of gentiopicroside by asexual my-celia of Cordyceps sinensis, Bioorg Med Chem Lett 17 (2007), 3195–3197 X.Z Zhang, The artificial culture and its nutritive composition for Cordyceps militaris (L Fr) Link, Edible Fungi China, 22 (2003) 19–21 (in Chinese) 10 T.T Yu, H Qian, Effect of selenium on the chemical com- ponents of Cordyceps militaris, Food Sci Technol 40 (2006) 133– 135 (in Chinese) 11 Q Lu, The selection of the optimum conditions for the pro-duction of polysaccharides by Cordyceps militaris and the bio-activity of the polysaccharides, MSc Thesis, Ocean Univer-sity of China, Qingdao, PR China (2000) (in Chinese) 12 Z.M Che, Y Wang, L.L Zhou, Studies of the optimal technical conditions of polysaccharide isolation from Cordyceps militaris, Food Res Develop 25 (2004) 78–79 (in Chinese) 13 Y Shi, W.M Wu, S.T Liao, X.M Liu, N.X.Zou, Study of the extraction of Cordyceps militaris polysaccharide with the use of microwave, Guangdong Agric Sci 11 (2006) 41–42 (in Chinese) 14 Jeong Seok Kwon, Jong Seok Lee, Won Cheol Shin, Keun Eok Lee, and Eock Kee Hong Optimization of Culture Conditions and Medium Components for the Production of Mycelial Biomass and Exopolysaccharides with Cordyceps militaris in Liquid Culture.Biotechnology and Bioprocess Engineering 2009, 14: 756-762 15 Hui Yan, Dongjie Zhu, Dabao Xu, Jie Wu and Xuyun Bian A study on Cordyceps militarispolysaccharide purification, compostion and activity analysis African Journal of Biotechnology Vol (22), pp 40044009 Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 46 16 Chen Xiao li, Wu guang hong, Gu qing xia, Huang zhuo lie Optimization of extraction process of polysaccharides from Fruiting body of Cordyceps militaris L Link by Orthogonal Test Medical Plant 2010, 1(7): 92-94 17 Fengyao Wu, Hui Yan, Xiaoning Ma, Junqing Jia, Guozheng Zhang, Xijie Guo and Zhongzheng Gui Stuctural characterization and antioxidant activity of purified polysaccharide from cultured Cordyceps militaris African Journal of Microbiology Research Vol 5(18), pp 27432751, 16 September, 2011 18 L Liu, J.Y An, F.X Jin, Method of protein removal from Cordyceps polysaccharide, J Dalian Inst Light Ind 21 (2002) 33–37 (in Chinese) 19 Shih-Jeng Huang, Shu-Yao Tsai, Yu-Ling Lee, Jeng leun Mau Nonvolatile taste components of fruit bodies mycelia of Cordyceps militaris, 39(6) 577-583 20 Ohta Y Lee, J B Hayashi, K F ujita A., Park D K.Invivo antiinfluenza vius activity of animmun omodulatory acidicpolysaccharide isolated from Cordyceps militaris grow on germinated soybeans Journal of Agricutural and Food Chemistry, 55(25), 2007, 10194-10199 Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH 47 ... trồng Nội dung nghiên cứu cần giải quy t: - Nghiên cứu xây dựng quy trình tách chiết polysaccharide từ giá thể trồng nấm Cordyceps militaris - Bước đầu xác định số nhóm chức mẫu polysaccharide phân... polysaccharide từ giá thể nấm Cordyceps Trương Thuỳ Trang – 1301 - CNSH militaris với mục tiêu sau: Xác lập quy trình tách chiết polysaccharide từ nguồn giá th Cordyceps militaris nuôi trồng Nội dung nghiên. .. Polysaccharide nấm Cordyceps militaris 14 1.2.3 Tình hình nghiên cứu tách chiết Polysaccharide từ Cordyceps militaris 16 1.2.3.1 Tình hình nghiên cứu Polysaccharide từ Cordyceps militaris