LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận này, em nhận giúp đỡ tận tình thầy, cơ, anh chị kĩ thuật viên môn Y sinh học - Di truyền bệnh nhân đến khám Bộ mơn Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Lương Thị Lan Anh, Phó chủ nhiệm môn Y sinh học - Di truyền, trường Đại học Y Hà Nội Cô giao đề tài, tận tình giúp đỡ, hướng dẫn, động viên, tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình em thực hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn thầy, cô, anh, chị môn Y sinh học - Di truyền, trường Đại học Y Hà Nội giúp đỡ, quan tâm, đóng góp ý kiến, chia sẻ kinh nghiệm, tạo điều kiện giúp em hồn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu, Phòng đào tạo Đại học trường Đại học Y Hà Nội quan tâm, giúp đỡ em suốt q trình học tập hồn thành khóa luận Mặc dù, em cố gắng để hồn thiện đề tài cách hoàn chỉnh nhất, song buổi đầu làm quen với công tác nghiên cứu khoa học với nhiều hạn chế kiến thức kinh nghiệm nên tránh khỏi thiếu sót định mà thân chưa nhìn thấy Vì vậy, em mong nhận góp ý q thầy, để khóa luận hồn chỉnh Sau cùng, em muốn cảm ơn gia đình, anh chị em, bạn bè giúp đỡ, động viên em suốt q trình học tập hồn thành khóa luận Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Trần Thị Thanh Thanh LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết khóa luận trung thực chưa công bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng năm 2015 Sinh viên Trần Thị Thanh Thanh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm chung HPV 1.2 Cơ chế gây bệnh 1.3 Tình hình nhiễm HPV Việt Nam giới 1.4 Các phương pháp chẩn đoán xác định genotype HPV 10 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 16 Chương KẾT QUẢ 27 3.1 Thông tin chung đối tượng nghiên cứu 27 3.2 Phân tích kết xác định genotpye HPV 28 3.3 Kết xác định genotype HPV dịch cổ tử cung 31 Chương BÀN LUẬN 40 4.1 Về kết xác định genotype HPV kĩ thuật RDB 40 4.2 Về kết xác định genotype HPV 43 KẾT LUẬN 50 KIẾN NGHỊ 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ASCUS Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance (Tổn thương tế bào nội biểu mơ vảy khơng điển hình ý nghĩa chưa xác định) DNA Deoxyribo Nucleic Acid HPV Human Papilloma Virus HSIL High - grade Squamous Intraepithelial Lesion (Tổn thương tế bào nội biểu mô vảy độ cao) IARC International Agency for Research on Cancer (Tổ chức nghiên cứu ung thư quốc tế) LSIL Low - grade Squamous Intraepithelial Lesion (Tổn thương tế bào nội biểu mô vảy độ thấp) Nu Nucleotid PAP test/PAP smear Papanicolaou Test/Papanicolaou smear (Xét nghiệm tế bào học cổ tử cung) PCR Polymerase Chain Reaction PV Papilloma Virus RDB Reverse Dot Blot (Kĩ thuật lai phân tử ngược) UTCTC Ung thư cổ tử cung DANH MỤC BẢNG Bảng 2.1 Trình tự primer MY09 - MY11 PCR phát DNA HPV 19 Bảng 2.2 Trình tự Nu 24 probe HPV màng lai 24 Bảng 3.1 Phân bố nhóm tuổi 27 Bảng 3.2 Phân bố kết PAP test 27 Bảng 3.3 Kết định tính HPV kĩ thuật Realtime PCR 31 Bảng 3.4 Phân bố nhiễm đơn type HPV 34 Bảng 3.5 Tỉ lệ đồng nhiễm type HPV 35 Bảng 3.7 Kết PAP test đồng nhiễm HPV 38 DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh mơ HPV Hình 1.2 Hệ gen HPV Hình 2.1 Sơ đồ bước tiến hành nghiên cứu 17 Hình 2.2 Kết Realtime PCR 20 Hình 2.3 Mẫu dương tính với genotype 11 23 Hình 3.1 Kết phân tích Realtime PCR định tính genotype HPV 29 Hình 3.2 Hình ảnh màng lai dương tính với type 11 30 Hình 3.3 Hình ảnh màng lai dương tính với type 11, 16 18 30 Hình 3.4 Hình ảnh màng lai dương tính với type HPV ngồi 24 type 31 Hình 3.5 Biểu đồ tỉ lệ nhiễm HPV 32 Hình 3.6 Biểu đồ tỉ lệ nhiễm HPV theo tuổi 33 Hình 3.7 Biểu đồ tỉ lệ nhiễm HPV đơn type đa type 33 Hình 3.8 Biểu đồ đồng nhiễm HPV 34 Hình 3.9 Biểu đồ phân bố type HPV 36 Hình 3.10 Kết PAP test tỉ lệ nhiễm HPV 37 Hình 4.1 Hình ảnh màng lai dương tính với type HPV 71, 81, 18, 56 42 Hình 4.2 Hình ảnh màng lai dương tính với type HPV 11 42 ĐẶT VẤN ĐỀ Human papilloma virus (HPV) loại virus sinh u nhú người, tác nhân lây nhiễm qua đường sinh dục phổ biến Nhiễm HPV người thường gây trạng thái tăng sinh nội biểu mô nhiều dạng khác Dựa vào khả tiềm tàng gây ung thư, HPV chia thành nhóm: nhóm nguy cao nhóm nguy thấp, đặc biệt nhóm nguy cao biểu thành khối u điển ung thư cổ tử cung (UTCTC), u biểu mô vùng hậu môn - sinh dục (âm hộ - âm đạo, vùng trực tràng, hậu môn, dương vật) khối u vòm họng, hầu họng [1] Trong đó, UTCTC loại ung thư phổ biến phụ nữ giới nguyên nhân gây tử vong hàng đầu phụ nữ nước phát triển Do đó, việc phòng bệnh điều trị UTCTC ngày quan tâm [2], [3] HPV phát 95% số trường hợp mắc UTCTC [4] Khả diễn tiến đến UTCTC trường hợp nhiễm HPV kéo dài gấp 250 lần so với người không bị nhiễm [5] Trên tồn giới, có khoảng 50 ÷ 80% phụ nữ có quan hệ tình dục bị nhiễm HPV lần đời, bệnh biết đến nhiễm bệnh khơng gây triệu chứng lâm sàng đáng phải quan tâm [6], [7] Quá trình nhiễm virus lâu dài, trung bình từ giai đoạn loạn sản (giai đoạn tổn thương hồi phục) đến giai đoạn ung thư xâm nhập (việc điều trị đem lại hiệu quả) từ ÷ 10 năm [8] Vì vậy, sàng lọc nhóm nguy cao để phát điều trị giai đoạn sớm tổn thương tiền ung thư cần thiết Việc xác định genotype HPV (type HPV) có vai trò vơ quan trọng việc đánh giá nguy UTCTC điều trị sớm Có nhiều phương pháp phát sớm có mặt HPV Phương pháp PAP smear (xét nghiệm tế bào học cổ tử cung) cho biết thay đổi hình thái tế bào bị nhiễm HPV, có tỉ lệ âm tính giả dao động từ 1,1 ÷ 29,7% [8], nhiên không xác định type HPV [9] Phương pháp Ts - PCR (Type specific - PCR) phải qua bước phát sản phẩm PCR, điện di agarose sử dụng Ethidium bromide Phương pháp sequencing (giải trình tự gen - so sánh, đối chiếu với trình tự gen type HPV) coi tiêu chuẩn vàng giá thành cao, tốn nhiều thời gian không xác định đồng nhiễm Kĩ thuật lai phân tử Reverse Dot Blot (RDB) sử dụng mẫu dò đặc hiệu để phân biệt khác alen vị trí nucleotide (Nu) So với kĩ thuật trên, kĩ thuật Reverse Dot Blot khắc phục số nhược điểm, đồng thời xác định nhiễm đồng nhiễm type HPV mẫu bệnh phẩm Song Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu kĩ thuật thực Xuất phát từ thực tế trên, thực đề tài “Ứng dụng kĩ thuật Reverse Dot Blot để xác định genotype HPV dịch cổ tử cung” với mục tiêu: Phân tích kết xác định genotype HPV kĩ thuật Reverse Dot Blot Mô tả genotype HPV dịch cổ tử cung xác định kĩ thuật Reverse Dot Blot Chương TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm chung HPV 1.1.1 Cấu trúc phân tử HPV có kích thước nhỏ, đường kính 55 nm, khơng có vỏ bọc ngồi Dưới kính hiển vi điện tử, HPV giống bóng golf Cấu trúc đối xứng hình khối gồm 72 capsomer, protein cấu trúc capsid gồm lớp: lớp (kí hiệu L1 - protein bề mặt) lớp vỏ lớn, cấu trúc hình khối từ đơn vị góc cạnh; lớp (kí hiệu L2 - protein cấu trúc) lớp vỏ bé gồm nhiều đơn vị xếp lớp (12 đơn vị/virus) - hình 1.1 Hình 1.1 Hình ảnh mơ HPV Nguồn: http://www.kantahlili.net/hpv-dna-testi/ Hệ gen HPV phân tử DNA sợi kép (dsDNA) khép kín thành vòng tròn, dài khoảng 7.900 cặp Nu, bao nhiều phân tử histon Về chức năng: hệ gen chia thành phân vùng quan trọng - Hình 1.2 Hình 1.2 Hệ gen HPV Nguồn: http://en.wikipedia.org/wiki/Human-papilloma-virus Chú thích: Long control region: vùng điều hòa lớn E1, E2, E4, E5, E6, E7: gen vùng chép sớm L1, L2: gen vùng chép muộn Phân vùng thứ 1: vùng điều hòa lớn (long control region - LCR) vùng chứa DNA khơng mã hóa, dài 400 ÷ 1.000 bp, có chức điều hòa chép, gồm chuỗi p97 tiểu phần khởi động (p97 core promoter), tiểu phần kích hoạt số chuỗi gen “câm” [10] Phân vùng thứ 2: vùng chép sớm (early region - E) gồm gen: E1, E2, E4, E5, E6, E7 Sản phẩm protein chúng trợ giúp cho nhân lên DNA virus, tham gia chế hình thành khối u cổ tử cung Phân vùng thứ 3: vùng chép muộn (late region - L), gồm gen tổng hợp protein L1, L2 - protein cấu trúc capsid virus, sản xuất muộn 46 (84,61%), hay gặp đồng nhiễm type 11, 18 (38,46%), type 11, 18 kèm với type khác Có kiểu đồng nhiễm nguy cao - cao đồng nhiễm type 18, 58 (11,54%) đồng nhiễm type 56, 58 (3,85%) Khơng có trường hợp đồng nhiễm type nguy thấp - thấp Qua đó, ta thấy tỉ lệ đồng nhiễm HPV cao nhiều so với nhiễm đơn type HPV, đặc biệt đồng nhiễm kiểu nguy thấp - cao, hay gặp đồng nhiễm type 11, 18 HPV type 11 thuộc nhóm nguy thấp HPV type 18 thuộc nhóm nguy cao, vaccine Gardasil phòng type [30], điều khẳng định ý nghĩa việc tiêm vaccine việc phòng ngừa nhiễm type HPV thường gặp 4.2.4 Về phân bố genotype HPV Ở nhóm nguy cao, tỉ lệ nhiễm HPV type 18 cao (52%), đứng thứ hai type 56 (8%), thứ ba type 16, 51, 58 (4%), type khác chiếm tỉ lệ thấp Ở nhóm nguy thấp xác định type, type 11 có tỉ lệ cao 10%, type 71, 81 gặp với tỉ lệ 6% Ở nghiên cứu tác giả Nguyễn Thị Nhung, Lê Trung Thọ Trần Văn Hợp type 18 type hay gặp nhất, đứng thứ hai type 58, thứ ba type 56 [36], [37] Các type 6, 11, 16, 18 type có vaccine phòng bệnh (Gardasil) [30] có tỉ lệ nhiễm cụ thể sau: type 11 chiếm 10%, type 16 chiếm 4%, type 18 chiếm 52% khơng có trường hợp nhiễm type Như vậy, type 18 (nguy cao) type 11 (nguy thấp) type gặp nhiều nghiên cứu chúng tơi, type đưa vào chương trình phòng bệnh vaccine 4.2.5 Tương quan kết PAP test kết định genotype HPV Các mẫu bệnh phẩm có kết PAP test HSIL (tổn thương nội biểu mô vảy độ cao) có tỉ lệ dương tính với HPV cao (78%) Kết phù 47 hợp với mức độ tổn thương PAP test mô tả phân loại Bethesda 2001 Ở nhóm nhiễm đơn type, với tổn thương PAP test ASCUS, gặp nhiễm đơn type 18, type 58 type nguy cao Với tổn thương LSIL, gặp nhiễm đơn type 16, 18 58 type nguy cao, type 16 gặp nhiều type lại Với tổn thương HSIL, có loại nhiễm đơn type type 11 (nguy thấp) type 16 (nguy cao) với tỉ lệ ngang Ở nhóm nhiễm đa type HPV (đồng nhiễm HPV) gồm mẫu đồng nhiễm type đồng nhiễm > type Trong đó, mẫu có tổn thương ASCUS, chủ yếu đồng nhiễm type 11, 18 chiếm tỉ lệ 23,06% Đồng nhiễm > type nghiên cứu gặp: - type (11,16,18); (11, 16, 53) (11, 16, 56) - type (11, 16, 18, 71) (11, 16, 18, 81) - type: 11, 18, 51, 58, 71 - type: 11, 18, 33, 35, 51, 58 Những mẫu LSIL: gặp trường hợp đồng nhiễm type (11, 16, 18), lại đồng nhiễm type (11, 18), (18, 58), (56, 58), đồng nhiễm type 11, 18 chiếm tỉ lệ cao (11,53%) Những mẫu HSIL: đồng nhiễm type (11, 16), (11, 18), (18, 58), đồng nhiễm type (11, 16, 18, 71), (11, 16, 18, 81), kiểu đồng nhiễm gặp trường hợp Như vậy, theo mức độ tổn thương tăng dần từ ASCUS đến HSIL, số lượng type đồng nhiễm thu hẹp dần (từ đồng nhiễm type, type, type, type, type ASCUS, đến LSIL đồng nhiễm type, type HSIL hai kiểu đồng nhiễm type type) Dù tổn thương loại ta gặp đồng nhiễm type 11, 18 chiếm đa số Có thể nói type 11, 18 tồn dai dẳng với phát triển tăng dần mức độ tổn thương Tuy 48 nhiên, chúng tơi chưa có điều kiện tiến hành nghiên cứu sâu mối liên quan type 11 18 với loại tổn thương PAP test, đặc biệt tổn thương HSIL, hướng nghiên cứu hứa hẹn nhiều đóng cho cơng tác phòng bệnh UTCTC Nhìn chung, type HPV nguy cao 16, 18, 58 type 11 thuộc nhóm nguy thấp gặp loại tổn thương PAP test Hiện nay, có 100 type HPV tìm [13], nhiên kit RDB tập trung xác định 24 type (16 type nguy cao: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 82 type nguy thấp: 6, 11, 42, 43, 61, 70, 71, 81) Qua kết nghiên cứu chúng tơi, thấy 24 type mà kit xác định bao phủ type hay gặp Nghiên cứu Hoàng Thị Thanh Huyền “Xác định tỉ lệ nhiễm genotype Human Papilloma Virus gái mại dâm Hải Phòng” thực năm 2014, nhóm có xét nghiệm PAP test bất thường (ASCUS, LSIL, HSIL) có tỉ lệ nhiễm HPV chiếm đa số, biến đổi tế bào học cổ tử cung có liên quan chặt chẽ với tình trạng nhiễm type HPV “nguy cao” [38] Các type 16 18 gặp tổn thương PAP test mức độ cao nhiều tổn thương mức độ thấp Ở nghiên cứu Wentzensen N.và cộng năm 2009, HPV type 16 gặp 29,8% phụ nữ có tổn thương LSIL gặp 57,8% phụ nữ có tổn thương HSIL PAP test [47] Trong nghiên cứu chúng tơi, nhóm bệnh nhân có tổn thương ASCUS PAP test chiếm đa số (48%) song tỉ lệ nhiễm HPV cao lại nhóm có tổn thương mức độ cao HSIL, đặc biệt type nguy cao 16, 18 Qua cho thấy có mối liên quan tỉ lệ nhiễm HPV tổn thương cổ tử cung PAP test Cụ thể nhóm có tổn thương mức độ cao 49 PAP test xác suất nhiễm HPV lớn, type hay gặp type 16, 18, 58 (nguy cao) type 11 (nguy thấp) Những type HPV nguy cao thường tồn dai dẳng với tiến triển tổn thương PAP test, có nguy cao tiến triển thành ung thư cổ tử cung, type nguy thấp biến dù có điều trị hay khơng Do đó, việc xác định type HPV để phân nhóm nguy có vai trò quan trọng việc phòng điều trị UTCTC Vì vậy, xác định genotype HPV cần tiến hành đồng thời với sàng lọc PAP test, đặc biệt phụ nữ có kết PAP test bất thường 50 KẾT LUẬN Ứng dụng kĩ thuật RDB để xác định genotype HPV 50 mẫu bệnh phẩm dịch cổ tử cung phụ nữ xác định có bất thường tế bào kết PAP test thu kết sau: Phân tích kết xác định genotype HPV kĩ thuật RDB Đã phân tích kết xác định genotype HPV kĩ thuật RDB: - Đánh giá mẫu nhiễm HPV - Đánh giá mẫu nhiễm đơn type, mẫu nhiễm đa type HPV - Quan sát hình ảnh màng lai để tránh bỏ sót trường hợp nhiễm HPV có mức độ nhiễm thấp Mơ tả genotype HPV dịch cổ tử cung xác định kĩ thuật RDB Các genotype xác định tỉ lệ: - Xác định 11 type HPV có type nguy thấp (11, 71, 81) type nguy cao (16, 18, 33, 35, 51, 53, 56, 58) - Tỉ lệ nhiễm HPV 70%, 97,14% type nguy cao - Tỉ lệ nhiễm đa type 76%, đơn type có 24% - Chủ yếu kiểu đồng nhiễm type nguy cao - nguy thấp, hay gặp đồng nhiễm type 18, 11 Kết PAP test kết xác định genotype HPV: - ASCUS: chủ yếu đồng nhiễm type 11, 18 chiếm tỉ lệ 23,06%, đồng nhiễm > type nghiên cứu gặp: type (11,16,18); (11, 16, 53) (11, 16, 56) type (11, 16, 18, 71) (11, 16, 18, 81) type: 11, 18, 51, 58, 71 51 type: 11, 18, 33, 35, 51, 58 - LSIL: gặp trường hợp đồng nhiễm type (11, 16, 18), lại đồng nhiễm type (11, 18), (18, 58), (56, 58), đồng nhiễm type 11, 18 chiếm tỉ lệ cao (11,53%) - HSIL: đồng nhiễm type (11, 16), (11, 18), (18, 58), đồng nhiễm type (11, 16, 18, 71), (11, 16, 18, 81), kiểu đồng nhiễm gặp trường hợp - Theo mức độ tổn thương tăng dần từ ASCUS đến HSIL, số lượng type đồng nhiễm thu hẹp dần (từ đồng nhiễm type, type, type, type, type ASCUS, đến LSIL đồng nhiễm type, type HSIL hai kiểu đồng nhiễm type type) Hai type 11, 18 xuất tất loại tổn thương 52 KIẾN NGHỊ Kĩ thuật Realtime PCR RDB cần áp dụng rộng rãi để xác định genotype HPV đôi với thực sàng lọc PAP test, góp phần tích cực cho cơng tác phòng chống UTCTC 53 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bosch F.X and Munoz N (2002) The viral etiology of cervical cancer Virus Research, 89, 183 - 190 Phạm Thị Hoàng Anh, Nguyễn Mạnh Quốc, Nguyễn Bá Đức cộng (2001) Tình hình bệnh ung thư Việt Nam năm 2000 Tạp chí thơng tin Y dược, 2, - 11 Trịnh Quang Diện (1995) Phát dị sản, loạn sản ung thư cổ tử cung phương pháp tế bào học, trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội Franco E.L., Duarte - Franco et al (2001) Epidemiology, prevention and the role of human papillomavirus infection Canadian Medical Association Journal Munoz N et al (2002) Role or parity and human papillomavirus in cervical cancer Lancet Journal, 359 (9312), 1093 - 1101 Koutsky L et al (1997) Epidemiology of genital human papillomavirus infection American Journal of Medicine, 102, - Crum C.P., Abbott D.W et al (2003) Cervical cancer screening: from the papanicolaou smear to the vaccine era Journal of Clinical Oncology, 21 (10), 224 - 230 Trịnh Quang Diện (2002) Theo dõi tế bào học mô bệnh học tế bào vảy khơng điển hình ý nghĩa chưa xác định (ASCUS) gặp phát tế bào học tổn thương nội biểu mô ung thư cổ tử cung Tạp chí Y học thực hành, 431, 266 - 269 Vương Tiến Hòa (2004) Một số vấn đề bệnh lí cổ tử cung, Nhà xuất Y học, Hà Nội 10 Lê Đức Trình (2001) Sinh học phân tử công nghệ gen, Nhà xuất Khoa học Kĩ thuật, Hà Nội 11 Chan S.Y., Delius H., Halpern A.L et al (1995) Analysis of genomic sequences of 95 papillomavirus types uniting typing, phylogeny, and taxonomy Journal of Virology, 69, 3074 - 3083 12 Chan S.Y., Bernard H.U., Ratteree M et al (1997) Genomic diversity and evolution of papillomaviruses in rhesus monkeys Journal of Virology, 71, 4938 - 4943 13 Torrisi A., Del M.A., Onnis G.L et al (2000) Colposcopy, cytology and HPV testing in HIV - positive and HIV - negative women European Journal of Gynecology Oncology, 21, 168 - 172 14 Nguyễn Thị Ánh Hồng (2005) Sử dụng kĩ thuật sinh học phân tử phát virus gây ung thư cổ tử cung (HPV) số bệnh nhân Hà Nội, trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 15 Munoz N., Bosch F.X., de Sanjose´ S et al (2003) Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer New England Journal of Medicine, 348, 518 - 527 16 Burd E.M (2003) Human papillomavirus and cervical cancer Clinical Microbiology Review, 16 (1), - 17 17 Ethel - Michele de Villers, Claude Fauquet et al (2004) Classification of papillomaviruses Virology, 324, 17 - 27 18 Thomas M., Pim D and Banks L (1999) The role of the E6 - p53 interaction in the molecular pathogenesis of HPV Oncogene, 18, 7690 7700 19 Bộ môn Phụ sản, trường Đại học Y Hà Nội (2003) Ung thư cổ tử cung phát sớm ung thư cổ tử cung phiến đồ âm đạo Nhà xuất Y học, Hà Nội 20 Boccardo E., Lepique A.P., Villa L.L (2010) The role of inflammation in HPV carcinogenesis Carcinogenesis, 31 (11), 1905 - 1912 21 Buitrago - Pérez A (2009) Molecular Signature of HPV - Induced Carcinogenesis: pRb, p53 and Gene Expression Profiling Current genomic, 10 (1), 26 - 34 22 Hebner C.M., Laimins L (2006) Human papillomaviruses: basic mechanisms of pathogenesis and oncogenicity Reviews in medical virology, 16 (2), 83 - 97 23 Lehoux M (2009) Molecular Mechanisms of HPV - induced Carcinogenesis Carcinogenesis, 90, 432- 465 24 Anco M., Berhard K., Win Q et al (2005) Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections Journal of Clinical Virology, 32, 43 51 25 Moody C., Laimins L (2010) Human papillomavirus oncoproteins: pathways to transformation Nature reviews Cancer, 10 (8), 550 - 560 26 Zur H H (1996) Papillomavirus infections - a major cause of human cancers Biochimica et Biophysica Acta, 1288, 55 - 78 27 Franceschi S et al (2011) Human papillomavirus type distribution in 30,848 invasive cervical cancers worldwide: Variation by geographical region, histological type and year of publication International journal of cancer, 128(4), 927-935 28 Bosch F.X., Lorincz A., Munoz N et al (2002) The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer Journal of Clinical Pathology, 55, 244 - 265 29 Hoàng Thị Thanh Huyền, Tạ Thành Văn (2011) Human papilloma Virus ung thư cổ tử cung gái mại dâm miền Bắc Việt Nam Tạp chí y học Việt Nam, 386, 363 - 367 30 Kohli M., Lawrence D., Haig J et al (2012) Modeling the impact of the difference in cross - protection data between a human papillomavirus (HPV) - 16/18 AS04 - adjuvanted vaccine and a human papillomavirus (HPV) - 6/11/16/18 vaccine in Canada BMC public health, 12(1), 872 31 Petrosky E et al (2015) Use of 9-Valent Human Papillomavirus (HPV) Vaccine: Updated HPV Vaccination Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices Weekly, 64 (11), 300 - 304 32 King E.M., Gilson R et al (2015) Human papillomavirus DNA in men who have sex with men: type-specific prevalence, risk factors and implications for vaccination strategies British journal of cancer, 112(9), 1585-1593 33 Ronco G et al (2010) Efficacy of Human Papilloma Virus testing for the detetection of invasive cervical cancers and cervical intraepithelial neoplasia: a randomized controlled trial Lancet Oncology, 11, 249 - 257 34 Lauren E.W., Michael P et al (2013) Natural immune responses against eight oncogenic Human Papilloma Virus in the ASCUS - LSIL triage study International Journal of Cancer, 133 (9), 2172 - 2181 35 Clifford G et al (2006) Chapter 3: HPV type - distribution in women with and without cervical neoplastic diseases Vaccine, 24 (3), 26 - 34 36 Vũ Thị Nhung (2006) Khảo sát tình hình nhiễm type HPV (Human Papilloma Virus) phụ nữ thành phố Hồ Chí Minh kĩ thuật sinh học phân tử Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí minh, phụ chuyên đề Ung bướu học, 10 (4), 402 - 407 37 Lê Trung Thọ Trần Văn Hợp (2009) Nghiên cứu tỉ lệ nhiễm HPV cộng đồng phụ nữ Hà Nội số yếu tố liên quan Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh, 13 (1), 185 - 189 38 Hoàng Thị Thanh Huyền (2014) Xác định tỉ lệ nhiễm genotype Human Papilloma Virus gái mại dâm Hải Phòng, Việt Nam, trường Đại học Y Hà Nội, Hà Nội 39 Nguyễn Trọng Hiếu (2004) Tần suất nhiễm HPV phụ nữ thành phố Hồ Chí Minh Thời Y Dược học, (9), 195 - 199 40 Solomon D., Davey D., Kurman R et al (2002) The 2001 Bethesda System: Terminology for reporting results of cervical cytology Journal of American Medicine Association, 287, 2114 - 2119 41 Bosch F.X., Manos M.M et al (1995) Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer, a worldwide perspective Journal of National Cancer Institute, 87: 796 - 802 42 Volpers C and Steek R.E (1991) Genome organization and nucleotide sequence of human papillomavirus type 39 Virology, 181: 419 - 423 43 Walboomers J.M.M., Jacobs M.V et al (1999) Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide Journal of Pathology, 189: 12 - 19 44 Trịnh Văn Bảo (2008) Giáo trình di truyền, trường Đại học Y Hà Nội, nhà xuất Y học, Hà Nội 45 Phạm Việt Thanh (2011) Nghiên cứu tỉ lệ nhiễm Human Papilloma Virus phụ nữ có phết tế bào cổ tử cung bất thường yếu tố liên quan Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh, 15 (1), 158 46 Nguyễn Sào Trung (2007) HPV tổn thương cổ tử cung Tạp chí Y học thành phố Hồ Chí Minh, 11 (3), - 47 Wentzensen N et al (2009) Grading the severity of cervical neoplasia based on combined histopathology, cytopathology, and HPV genotype distribution among 1.700 women reffered to colposcopy in Oklahoma Intenational Journal of Cancer, 124, 964 - 969 PHỤ LỤC TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI BỘ MÔN Y SINH HỌC - DI TRUYỀN ID: Ngày tháng năm 20 BỆNH ÁN HPV A Hành Họ tên bệnh nhân:…………………………………Tuổi: ….Giới:… Địa chỉ:……………………………………………………………… Nghề nghiệp:………………………………………………… ……… ĐT……………………………………………………… …………… B Bệnh sử: Có kinh năm ………tuổi Chu kì:………ngày Đều/khơng Quan hệ tình dục lần đầu năm:… tuổi Lấy chồng năm: ……tuổi PARA: ………………………………………….(con đầu … tuổi) Bệnh phụ khoa mắc:………………………………….…….……… ……………………………………………………………………… Bệnh nội ngoại khoa mắc:………………………………………… ………………………………………………………………………… Hút thuốc lá:  Khơng Tiêm phòng HPV:  Có Có Số điếu …… /ngày x …… năm  Không Chồng:(nhiễm lậu/Chlamydia/Herpes)…………………………… Lí đến khám:……………………………………………….……… Diễn biến bệnh:………………………………………………………… ………………………………………………………….…….………… ………………………………………………………….…….…….…… C Các kết xét nghiệm có: - Siêu âm: Kết soi tươi dịch cổ tử cung: …….…… D Kết PAP test: ………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………… E Kết định typ HPV phương pháp Reverse Dot Blot:(bệnh phẩm: dịch cổ tử cung) Bác sĩ (Kí, ghi rõ họ tên) Lưu ý: PARA: Số thai sinh đủ tháng ( 37 - 42 tuần) Số thai sinh thiếu tháng (28 - 37 tuần) Số thai bị sẩy Số sống ... định genotype HPV dịch cổ tử cung với mục tiêu: Phân tích kết xác định genotype HPV kĩ thuật Reverse Dot Blot Mô tả genotype HPV dịch cổ tử cung xác định kĩ thuật Reverse Dot Blot 3 Chương... kết xác định genotpye HPV 28 3.3 Kết xác định genotype HPV dịch cổ tử cung 31 Chương BÀN LUẬN 40 4.1 Về kết xác định genotype HPV kĩ thuật RDB 40 4.2 Về kết xác định genotype. .. thời xác định nhiễm đồng nhiễm type HPV mẫu bệnh phẩm Song Việt Nam chưa có nhiều nghiên cứu kĩ thuật thực Xuất phát từ thực tế trên, thực đề tài Ứng dụng kĩ thuật Reverse Dot Blot để xác định genotype