Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân giống cây Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) bằng phương pháp in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân giống cây Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) bằng phương pháp in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân giống cây Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) bằng phương pháp in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân giống cây Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) bằng phương pháp in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân giống cây Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) bằng phương pháp in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu ảnh hưởng của chất kích thích sinh trưởng đến khả năng nhân giống cây Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) bằng phương pháp in vitro (Khóa luận tốt nghiệp)
I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM HOÀNG TH NG tài: U NG C A CH T KÍCH THÍCH N KH NG CÂY SÂM CAU (Curculigo orchioides Gaertn) B IN VITRO KHÓA LU N T T NGHI H o: IH C Chính quy Chun ngành: Cơng ngh Sinh h c Khoa: CNSH - CNTP Khóa h c: 2011 2015 Thái Nguyên - 2015 I H C THÁI NGUN I H C NƠNG LÂM HỒNG TH NG tài: U NG C A CH T KÍCH THÍCH N KH NG CÂY SÂM CAU (Curculigo orchioides Gaertn) B IN VITRO KHÓA LU N T T NGHI H o: Chuyên ngành: Khoa: Khóa h c: Gi ng d n: Khoa CNSH - CNTP - IH C Chính quy Cơng ngh Sinh h c CNSH - CNTP 2011 2015 1.PGS.TS Ngô Xuân Bình B Khoa h c Cơng ngh ThS Nguy n Th Tình Nơng lâm Thái Ngun Thái Ngun - 2015 i L IC Sau tháng th c t p t i phòng thí nghi m ni c y mô Khoa Công ngh Sinh h c Công ngh Th c ph tài c c k t qu Ban giám hi u nhà ng, Ban ch nhi m khoa th y cô giáo b u ki n em su t th i gian qua Em xin bày t lòng bi Nguy n Th c th y giáo PGS.TS Ngơ Xn Bình ThS n tình ch b ng d n em su t th i gian th c hi n tài Em xin bày t lòng bi báu c i v i nh ng d n quý n trình th c hi n hồn thành khóa lu n Cu i cùng, em xin chân thành c t n t i b n bè i thân ng viên, u ki n v v t ch t tinh th n cho em trình h c t p nghiên c u Do th i gian th c hi nh ng sai sót Em r t mong nh tài c tài có gi i h n nê cs tài khơng th tránh kh i n c a th y cô b n c hoàn thi Em xin chân thành c Thái Nguyên, ngày 03 tháng Sinh viên th c hi n Hoàng Th ng ii DANH M C CÁC B NG BI U B ng 3.1: B ng tên hóa ch t dùng thí nghi m .22 B ng 3.2: B ng tên thi t b dùng thí nghi m 22 B ng 4.1: K t qu ng c a BA n kh i Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) 29 B ng 4.2: K t qu ng c n kh i Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) 31 B ng 4.3: K t qu ng c n kh i Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) 33 B ng 4.4: K t qu ng c a hàm l ng BA k t h n kh nhân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) 35 B ng 4.5: K t qu ng c ng BA k t h p n kh nhanh ch i Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) .37 B ng 4.6: K t qu ng c n kh c a Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) 39 B ng 4.7: K t qu ng c n kh c a Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) 40 iii DANH M C CÁC B NG BI U Hình 2.1 Cây Sâm cau Hình 2.2 Lá Sâm cau Hình 2.3 Hoa Sâm cau .5 Hình 2.4 Qu h t Sâm cau Hình 2.5: M t s h p ch Hình 4.1: c li u Sâm cau [37] nh ch ng n n b sung BA cá ng khác (sau 30 ngày nuôi c y) 30 Hình 4.2: nh ch ng n n b sung Kinetin hàm ng khác (sau 30 ngày nuôi c y) 32 Hình 4.3: nh ch ng n n b sung BA ng khác (sau 30 ngày nuôi c y) 34 Hình 4.4: Hình 4.5: nh ch i Sâm cau môi t Kinetin ng khác (sau 30 ngày nuôi c y) 36 nh ch ng n n b sung BA 1,0 mg/l k t h p NAA Hình 4.6: ng n n b sung BA 1,0 mg/l k t h p nh r ng khác (sau 30 ngày nuôi c y) 38 ng n n b sung IBA ng khác nhau(sau 30 ngày nuôi c y) 40 Hình 4.7: nh r ng n n b sung NAA ng khác (sau 30 ngày nuôi c y) 41 iv DANH M C CÁC T , C M T VI T T T B1 : Thiamin HCl B2 : Nicotinic acid B5 : B6 : Pyridocine BA : 6- Benzyladenine Cs : C ng s CT : Công th c CV : Coeficient of Variation (H s bi DNA : ng) Deoxyribonucleic Acid i ch ng GA3 : IBA : LSD : Gibberellic Acid Indol Butyric Acid Least Singnificant Diference Test (Sai khác a công th c m tin c y 95%) KIN : Kinetin MS : Murashige & Skoog (1962) NAA : TN : -Napthalene Acetic Acid Thí nghi m v M CL C PH N M U tv 1.2 M u 1.3 Yêu c u c tài c th c ti n c oa h c c tài .2 tài c ti n .3 PH N T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Gi i thi u chung v Sâm cau .4 2.1.1 Ngu n g c 2.1.2 Phân lo i m hình thái h c c a Sâm cau 2.1.4 Giá tr c li u c a Sâm cau ruy n th ng nhân gi ng Sâm cau 10 2.2 Khái ni m c khoa h c c a nuôi c y mô t bào th c v t 10 2.2.1 Khái ni m v nuôi c y mô t bào th c v t 10 khoa h c c a nuôi c y mô t bào th c v t 11 2.3 Các y u t n q trình ni c y mô t bào 12 2.3.1 V t li u nuôi c y .12 2.3.2 u ki n nuôi c y 12 2.3.3 ng 13 n ni c y mơ t bào th c v t .16 2.5 Tình hình nghiên c u nhân gi ng Sâm cau b y mô th gi i Vi t Nam 17 2.5.1 Tình hình nghiên c u th gi i 17 2.5.2 Tình hình nghiên c u Vi t Nam 19 vi PH NG, N U 22 ng, v t li u ph m vi nghiên c u 22 ng, v t li u nghiên c u 22 3.1.2 Ph m vi nghiên c u .22 3.1.3 Hóa ch t d ng c thí nghi m .22 m th i gian ti n hành nghiên c u 23 a m nghiên c u .23 3.2.2 Th i gian nghiên c u 23 3.3 N i dung nghiên c u 23 3.3.1 N i dung 1: Nghiên c u ng c a m t s n kh sinh ch i Sâm cau .23 3.3.2 N i dung 2: Nghiên c u n kh ng c ng ch t kích thích sinh i Sâm cau 23 3.3.3 N i dung 3: Nghiên c u ng c ng m t s n kh Sâm cau 23 u 24 u n i dung 1: Nghiên c u n kh ng c a m t s i Sâm cau 24 3.4.2 u n i dung 2: Nghiên c u ch n kh 3.4.3 u n i dung 3: Nghiên c u n kh ng c ng i Sâm cau .25 ng c ng Sâm cau .27 3.5 Các ch 28 PH N K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 29 4.1 K t qu ng c ng Cytokinin n kh i Sâm cau .29 4.1.1 K t qu ng c 4.1.2 K t qu ng c n kh n kh i Sâm cau 29 i Sâm cau 31 vii 4.2 K t qu ng c ng ch n kh nhân nhanh ch i Sâm cau 33 4.2.1 K t qu ng c n kh i Sâm cau .33 4.2.2 K t qu ng c ng BA k t h n kh nhanh ch i Sâm cau 35 4.2.3 K t qu ng c ng BA k t h n kh nhanh ch i Sâm cau 37 4.3 K t qu ng c a hàm lo i Auxin n kh Sâm cau .39 4.3.1 K t qu ng c n kh Sâm cau 39 4.3.2 K t qu ng c n kh Sâm cau 39 PH N K T LU N VÀ KI N NGH 42 5.1 K t lu n 42 5.2 Ki n ngh 42 TÀI LI U THAM KHAO Sâm cau có nhi i cau, Cô n c lan, Tiên mao, v i tên khoa h c Curculigo orchioides Gaertn thu c h thu c h th y tiên (Amaryllidaceae) [17] Sâm cau lo i thân th o m c hoang Malysia, Thái Lan, Philippine, Sâm cau phân b r i rác nh ng vùng núi r ng t i Vi t Nam, Lào, , Trung Qu c [22], [30], [31] Vi t Nam t nh vùng núi, t Lai Châu, Tuyên Quang, Cao B ng n Tây Nguyên [4] Theo y h c c truy n , Sâm cau có tính ch t nh y d u, tác d ng l i ti u, b kích d c, s d ng ch n, tiêu ch y Theo y h c c truy n Trung Qu c g i tên Sâm cau v i tên g cs d cb u tr suy gi m th l c, ch a b nh hen suy n, còi, vàng da, tiêu ch b nh l u, kháng viêm, ch ng ng ch i [21], [22], [30], [44] y có th nh n th y r ng, tác d ng c a S â m c a u t ng c s c kh e tinh th n, gi m m t m i, t ng s c l c i, c ng c h th ng mi n d d o dai, ng ng ch c Trên th c ph m có ngu n g c Sâm cau, ch ng h a hãng Alma Health Care ch ph m -NITE a Trung Qu a hãng Sharmila [22] Do giá tr c li u l n v y S c n ki t t c tìm k thu t nhân gi khai thác t i m c ng t nhiên r t quan tr ng Theo tài li u k thu t nhân gi ng m t s loài thu c quan tr i, cơng b b c t , Sâm cau có th s d ng nhân gi ng vơ tính t m m giâm hom Tuy nhiên, v i s tìm hi u c a chúng tơi v quy trình nhân gi ng vơ tính Sâm cau b ng 41 T b ng 4.7 cho th y: Khi b u có n kh c a ch i Sâm cau C th : CT2 v i NAA 0,5 mg/l s r t o thành nhi u nh t 2,23 r /cây, ch ng r y u, nh , ng n CT3 CT4 1,0 mg/l 2,0 mg/l s r ng r ng NAA l t ng gi m t 1,97 r xu ng 1,53 r ; ch t c t nh , kh e, ng n sang nh , y u, ng n thành r th p nh t 1,00 r / cây, ch ng r y u, nh , ng n Theo nghiên c u c a Thomas cs (2007) ng NAA t 1,0 64% v i 1,8 r /ch mol/l ng 1/2 MS b sung hàm ng 3,0 mol/l cho t l ch i r ng MS có b sung hàm ng c a NAA 0,25 mg/l cho t l ch i r 60%, s r 2,00 r , chi u dài c a r 9,68 cm [52] Hình 4.7: a- NAA 0,0 mg/l s r /cây 1,00 r , r y u, nh , ng n b- NAA 0,5 mg/l s r /cây 2,23 r , r y u, nh , ng n c- NAA 1,0 mg/l s r / 1,97 r , r kh e, nh , ng n d- NAA 2,0 mg/l s r /cây 1,53 r , r y u, nh , ng n NAA 42 T k t qu nghiên c - c rút k t lu n sau: ng MS b sung 4.0 mg/l BA thích h p cho tái sinh ch i Sâm cau, t l tái sinh ch - t 90% ng BA 1,0 mg/l + Kinetin 1,0 mg/l thích h p cho nhân nhanh ch i t 4,63 l n, ch ng ch i c m p, xanh - ng MS b sung IBA thích h p cho r : IBA 1,0 mg/l - ng thích h p cho nâng cao ch - ng ch i IBA 0,5 mg/l ti p t c hồn thi n quy trình nhân gi ng in vitro Sâm cau chúng tơi có m t s ki n ngh sau: + Nghiên c u ng c a ch ng khác t i kh tái sinh ch i, nhân nhanh r c a Sâm cau (GA3,TDZ) + Ti p t c nghiên c u cd Sâm cau ng c a m t s y u t khác (khoai tây, cà r t, i q trình ni c y nh m hồn thi n quy trình nhân gi ng in vitro I Tài li u Ti ng Vi t Ngô Xn Bình, Bùi B o Hồn, Nguy n Thúy Hà (2003), Giáo trình cơng ngh sinh h c, NXB Nơng Nghi p Hà N i Nguy n Ti n Bân Cs (2003), Danh l c loài th c v t Vi t Nam, NXB Nông nghi p, t p II, trang 1067 - 1093 Vi t Nam, ph n II - Th c v t, NXB Khoa Nguy n Ti n Bân cs (2007), h c k thu t, trang 82 - 84 Huy Bích cs (2003), Cây thu ng v t làm thu c Vi t Nam, quy n II, NXB Khoa h c k thu t Ph m Hoàng H (2000), Cây c Vi t Nam, quy n II, t p 2, NXB Tr , trang 488 525 Nguyen Thi Thu Huong, Tran My Tien, Tran Cong Luan, Nguyen Minh Duc (2009): Androgenic effect of AMA KONG remedy on castrated mice, Journal of Medicinal Materials, vol 14(2), trang 108-114 Nguy n Th n M Tiên, Tr n Công Lu n, Ph m Khánh Bi n (2008), Nghiên c u tác d ph c lý th c nghi m c a ch a hoàng gia v ng th tr ng ch c , T p chí Y h c TP.HCM, t p12, ph b n c a s 4, trang 152 - 158 ng, Tr n Th Triêu Hà (2008), Giáo trình Tr n Th L Công ngh sinh h c th c v t, Nxb Nông nghi p, Hà N i Nguy n T p (2001), Áp d ng khung phân h ng m i c a IUCNtình tr ng b nay, T i v i loài thu c c n b o t n Vi t Nam hi n c li u, (2+3), trang 42 - 45 thu c Vi t Nam, T c li u,11(3), 11 Nguy n Quang Th ch, Nguy n Th Lý Anh, Nguy n Th o (2005), 10 Nguy n T p (2006), Danh l trang 97 - 105 sinh h 12 Nguy , Nxb Nông nghi p, Hà N i c Thành (2000), Nuôi c y mô t bào th c v t - nghiên c u ng d ng, Nhà xu t b n Nông nghi p, Hà N i 13 Nguy n Duy Thu n, Nguy n Th sâm cau , T , u nghiên c u c Li u, 6(6), trang 163-166 14 Tr n M Tiên, H Vi t Anh, Lê Minh Tri t, Nguy n Th Công Lu n (2008), ng d ng k thu n ng testosteron nghiên c u tác d ng ki u n i ti t t sinh d c nam c a gai ch ng (Tribulus terrestris L 15 Tr n M Tiên, Nguy n Thanh H ng Vân, Tr n Công Lu n, Nguy n Th Thu , Kh o sát tác d ng sinh d c nam t d ch chi t c n c a r Bách b nh (Eurycoma longifolia Jack.) chu t nh t tr ng Y h c TP H Chí Minh, t p 16, Ph b n c a s 1, trang 186-191 16 Võ Châu Tu n, Nguy n Th Út, Tr n Quang D n (2011), Nhân gi ng in vitro sâm cau (Curculigo orchiodes Gaertn)-M t lồi thu c q , T p chí Khoa hoc Công ngh ih ng, 6(47), trang 163-169 17 Nguy n Th Út, Nguy n Th Xuân Tâm, T Th ch ng c a i in vitro Sâm cau n kh (curculigo orchioides c u Khoa h c l n th Tuy n t p Báo cáo H i ngh Sinh viên Nghiên ih ng, trang 523 - 527 nh (2007), Công ngh t bào th c v t ng d ng, NXB Nông Nghi p 18 Hà N i 19 c ng s (2008), Công ngh sinh h c t p CNSH t bào, Nhà xu t b n Giáo D c Sinh lý h c th c v t, Nhà 20 xu t b n Giáo d c II Tài li u Ti ng Anh 21 Agrawal VS (1997) Drugs plant of India, New Delhi: Kalyani publisher, 306 22 Ajit M (2012) A review on phytochemical and ethnopharmacological activities of Curculigo orchioides, Journal of Pharmaceutical Sciences, 39:(3-4):1-10 23 Anonymous (2000), In plant tissue from Research to commercialization, DBT Ministry of Sciene and Technology (Eds), India, p.33-34 Curculigo orchioides In Vitro Cellular and Development Biology Plant 33(2), p.111-113 25 Bafna AR, Mistra SH (2006), Immunostimulatory effect of methanol extract of Curculigo orchioides on immunosuppressed mice J Enthnopharmacol, 104(12), p.1-4 26 Bandyopadhyay U, Das D, Banerjee R (1999) Reactive oxygen species: oxidative damage and pathogenesis Curr Sci., 77(5), p.658-665 27 Cao DP, Zheng YN, Qin LP, Han T, Zhang H, Rahman K, Zhang QY (2008) Curculigo orchioides, a traditional Chinese medicinal plant, prevents bone loss in ovariectomized rats Maturitas, 59(4), p.373-380 the ethanolic extract of Curculigo orchioides Pharmacog Mag, 3(12), p.236-239 Curculigo orchioides Gaer International Journal of Applied Research in Natural Products, 1(2), p.26-31 30 Chauhan NS, Sharma V, Thakur M, Dixit VK (2010), Journal oF Chinese Integratve Medicine, 8(7), p.613-623 31 Dhar ML, Dhar MN, Dhawan BN, Mehrota DN, Ray C Indian Plants for Biological activity part- Indian J Expt Biol, 6, p.232-49 Curculigo orchioides In Vitro Cellular and Development Biology Plant, 43(2), p.140-143 33 Garg S.N., Misawa L.N and Reddy M.N (1989), Phytochem, 28, p.1171-72 34 Hazarika BN (2003), Acclimatization of tissue cultured plants, Curr Sci 85, p.1704-1712 35 Jaiswal S, Batra A, Mehta B J Phytopathol 109(1), p.90-93 36 Kubo M, Namba K, Nagamoto N, Nagao T, Nakanishi J, Uno H and Nishimura H (1983), Planta Med, 47, p.52-55 37 Lu HW, Zhu BH, Liang YK Determination of curculigoside in crude medicine Curculigo orchioides Zhongguo Zhong Yao Za Zhi, 27(3), p.192-4 black musli (Curculigo orchioides Gae Ancient Science of Life, 26(1), p.45-51 39 Mehta BK, and Gawarikar R (1991), Indian J Chem, 30B: 986-88 40 Misra TN, Singh RS, Tripathi DN and Sharma SC (1990), Phytochem, 29: 929-31 ion of Curculigo -247 African Journal of Microbiology Research 3(1), p.005-009 43 Nema R Cytokinin promotes high frequency bulbil formation from leaf explant of Indian journal of Biotechnology, 7, p.520-525 44 Curculigo Orchioides ( J Chem Pharm Res., 2(2), p.610-617 45 Pandit P, Singh A, Bafna AR, Kadam PV, Patil MJ (2008) 70(4), p.440-444 46 Puro Plant cell tiss Org Cult, 39, p 93-96 47 Rao PVK, Ali N and Reddy MN (1987), Indian J Pharm Sci, 40, p.104-5 48 Rao KS, M Curculigo orchioides Indian Drugs, 33(9), p.458-461 Journal of Agricultural Technology, 8(1), p.353-362 50 fractionated extracts of Kalimusli (Curculigo orchioides Int J Green Pharm, 2, p.34-36 51 Somashekhar & Manju Sharma (2002), Training manual on Propagation techniques of commercially important medicinal plants, Foundation for Revitalisation of Local Health Traditions, Bangalore, 118 pages IJPSR, Vol 52 Soni et al (2012), golden eye grass 3(8), p.2407-2420 Sex Disabil, 25(4), p.203-207 Arch on aphro Sex Behav, 38(6), p.1009-1015 55 The Wealth of India (1950) Raw Materials, C.S.I.R, New Delhi, Vol II , p.400 in vitro shoot induction from leaves in Curculigo orchioides Gaertn, an endangered Acta Physiologiae Plantarum, 29(5), p.455-461 Curculigo orchioides in carbon tetrachlorideinduced hepat Indian J Clin Biochem, 17(2), p.80-87 Plant Tissue Culture 13(1), p.13-19 59 Xu JP and Dong QY (1987), Zhongcaoyao, 18, p.194-195 60 Xu JP and Xu RS (1991), Chin Chem Lett, 2, p 227 61 Xu JP and Xu RS (1992), Phytochem, 31, p.2455-58 62 Xu JP, Xu RS and Li XY (1992a), Phytochemistry, 3, p.1233-36 PH L C NG NUÔI C Y Table 1: Preparation of modified Amount to Bottle Component Stock take Solution (g/l preparation (ml) I II III NH4NO3 V 20 concentratic (mg/l) 1.650,0 KNO3 95 MgSO4.7H2O 37 MnSO4.4H2O 2,23 ZnSO4.7H2O 1,058 CuSO4.5H2O 0,0025 0,025 CaCl2.2H2O 44 440,0 1.900,0 370,0 10 10,6 0,083 CoCl2.6H2O 0,0025 0,025 17 170,0 H3BO4 0,62 Na2MoO4.2H2O 0,025 FeSO4.7H2O 2,784 Na2EDTA.2H2O 3,724 10 22,3 KI KH2PO4 IV 82,5 Final 10 0,83 6,2 0,25 10 27,85 37,25 mg/100ml Vitamin Nicotinic acid 100 0,5 0,5 Glycine 100 2,0 2,0 Thiamine acid 100 0,1 0,1 Pyridocine HCl 100 0,5 0,5 Sucrose 20.0000,0 Agar 5.000,0 pH 5,6-5,8 PH L C 2: K T QU X LÝ S Thí nghi m 1: ng c n kh cau (sau 30 ngày nuôi c y) LI U i Sâm ng c cau (sau 30 ngày nuôi c y) n kh ng c nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) n kh Thí nghi m 4: K t qu ng c ng BA k t h p ân nhanh Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) n kh ng c ng BA k t h y) n kh Thí nghi m 6: K t qu ng c Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) n kh c a Thí nghi m 7: K t qu ng c Sâm cau (sau 30 ngày nuôi c y) n kh c a ... ch t kích thích s n ng Sâm cau (Curculigo orchioides Gaertn) b kh pháp in vitro - nh lo i Cytokinin - n kh ng ch t kích thích h i Sâm cau n kh ng nhân nhanh ch i Sâm cau - ng lo i Auxin thích. .. t ch t cao Sâm cau (Curculigo orchioides - Tuyên Quang, Hà Giang n in vitro t [13] cs in vitro Sâm cau (Curculigo Orchioides K -benzyl in vitro + Ki [17] Nhân gi ng in vitro Sâm cau (Curculigo. .. li u nhân gi ng Sâm cau h n ch v y vi c in vitro c n tìm quy trình nhân nhanh lồi q hi m b thi t Vì v y ti n hành nghiên c ch tài: n kh ng c a ng Sâm cau (Curculigo in vitro orchioides Gaertn)