HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Chủ đề: SEMINAR " Kiểm soát sinh học Phytophthora capsici gây bệnh thối rễ ớt cách sử dụng kết hợp nấm Trichoderma harzianum vi khuẩn Streptomyces rochei” Nhóm sinh viên thực hiện: Nhóm 34 12/25/17 Nội dung I Đặt Vấn Đề II Vật liệu phương pháp III Kết thảo luận IV Kết luận kiến nghị 12/25/17 ĐẶT VẤN ĐỀ Capsicum annuum Bệnh thối rễ gây nấm Phytophthora capsici Khơng có giống ớt kháng tác nhân gây bệnh Phytophthora capsici 12/25/17 ĐẶT VẤN ĐỀ Kiểm soát tác nhân gây bệnh Khử trùng đất với Methyl Bromide Kiểm soát bệnh thối rễ P capsici ớt qua phương tiện sinh học 12/25/17 Cấm vào năm 2005 ĐẶT VẤN ĐỀ Một tác nhân kiểm sốt sinh học khơng thể ức chế hồn tồn lây nhiễm 12/25/17 Sử dụng kết hợp tác nhân kiểm soát sinh học Trichoderma harzianum Streptomyces rochei VẬT LIỆU, PHƯƠNG PHÁP a Nguyên liệu thực vật mầm bệnh • Hạt giống C annuum khử trùng gieo chậu (4 x x 14 cm), chứa hỗn hợp gồm phân bón, cát than bùn hấp (1:2:6) Các chậu đặt phòng, trì 21 ± 3°C, độ ẩm tương đối 78% thời gian chiếu sáng 12 Sau tháng, chuyển sang chậu lớn / đất xử lý • Các tác nhân gây thối rễ ớt P capsici phân lập trì mơi trường PDA (Potato Dextrose Agar) 25 ± 2°C • Rễ lây nhiễm P capsici, tác nhân gây bệnh tái phân lập từ bề mặt mô rễ tiệt trùng phân lập bào tử đơn để sử dụng cho thí nghiệm 12/25/17 b Các tác nhân kiểm sốt sinh học • Nấm Trichoderma harzianum trì bóng tối dịch chiết đường khoai tây PDB (Potato Dextrose Broth) 4°C • Vi khuẩn Streptomyces rochei phân lập từ rễ ớt khỏe trồng Murcia, Tây Ban Nha, có đặc tính: đối kháng với P capsici tương hợp với T harzianum, nuôi cấy môi trường NA (Nutrient Agar) 12/25/17 c Thí nghiệm invitro P capsici PDA giàu laminarie glucose (3: 1) P capsici NA T harzianum S rochei Ủ 23, 25, 27 30°C 72 Quan sát trực tiếp đĩa Petri Xác nhận đối kháng 12/25/17 Sử dụng kính hiển vi điện tử quét (SEM - Scanning Electron Microscopy) vùng tương tác c Thí nghiệm invivo Khi ớt vườn ươm tháng tuổi, cấy vào chậu gồm phân, cát than bùn (1:2:6), thêm vào tác nhân gây bệnh phương pháp xử lý T harzianum S rochei T harzianum + S rochei Hỗn hợp cát - tác nhân đối kháng: 5, 10, 15 20 g chậu Thêm tỷ lệ khác KCl vào đất để có giá trị pH: 5.61, 5.44, 4.95, 4.58, 4.20 3.48 12/25/17 c Thí nghiệm invivo Bốn nhóm I+T • Cây bị bệnh xử lý tác nhân đối kháng NI + T • Cây không bị bệnh xử lý tác nhân đối kháng I + NT NT + NI • Cây bị bệnh không xử lý • Cây không xử lý không bị bệnh Sử dụng 10 lần xử lý lần lặp lại ba lần Tất kiểm tra hàng ngày triệu chứng thối rễ tháng, sau đào lên rửa rễ trước đánh giá hiệu phương pháp xử lý khác 12/25/17 10 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN (a) (b) (d) Hình 1: Sự tăng trưởng vi sinh vật (a-c) Sự tăng trưởng invitro thời điểm 48 mầm bệnh Phytophthora capsici môi trường PDA (a) nhân tố đối kháng, Trichoderma harzianum môi trường PDA (b) Streptomyces rochei môi trường NA (c) (d-g) Sự đối kháng kép tác nhân đối kháng chống lại mầm bệnh với môi trường PDA Trichoderma harzianum ức chế tăng trưởng P capsici cách sống ký sinh, sau 72 (d) hình thành bào tử mầm bệnh, sau ngày (e) Khả tương thích hỗ trợ đối kháng T harzianum S rochei 48 nuôi cấy (f) Các mũi tên vùng tương tác vi sinh vật (c) (e) (f) 12/25/17 Trichoderma harzianum cho thấy đối kháng rõ ràng P capsici 11 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Pc (a) Th (b) Hình 2: Kính hiển vi điện tử qt tương tác Phytophthora capsici (Pc) Trichoderma harzianum (Th) Streptomyces rochei (S) thu môi trường PDA sau 48 (a) Vi sinh vật ký sinh bao vây sợi nấm Pc (mũi tên) (b) Sự tan rã sợi nấm Pc hình thành bào tử vi khuẩn sợi nấm Vùng tương tác S rochei P capsici: ảnh hưởng ký sinh vi khuẩn dạng sợi dẫn đến cong, biến dạng sợi nấm P capsici Sợi nấm T harzianum phát triển đồng khơng có dấu hiệu biến dạng tan rã Nhiệt độ không ảnh hưởng đến hoạt động cộng sinh hai tác nhân đối kháng T harzianum, S rochei: tương thích sử dụng chống lại mầm bệnh 12 12/25/17 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Bảng 1: Bệnh thối rễ Pc (Phytophthora capsici) ớt tỷ lệ giảm bệnh đất trộn với vi sinh vật đối kháng Th (Trichoderma harzianum) Sr (Streptomyces rochei) theo phương pháp xử lý khác   ĐC: (NT + NI) Pc: (NT + I) Th: (T +NI) Sr: (T + NI) Th + Sr: (T + NI) Th (1) + Pc: (T + I) Th (2) + Pc: (T + I) Th (3) + Pc: (T + I) Th (4) + Pc: (T + I) Sr (1) + Pc: (T + I) Sr (2) + Pc: (T + I) Sr (3) + Pc: (T + I) Sr (4) + Pc: (T + I) Th (4) + Sr (4) + Pc: (T + I) Th (4) + Sr (4) + Pc: (T + I) Nơi sinh trưởng Chậu đất Chậu đất Chậu đất Chậu đất Chậu Chậu Chậu Chậu Chậu Chậu Chậu Chậu Chậu Chậu Đất Mức độ nghiêm trọng bệnh thối rễ P capsici 0.00 5.00 0.00 0.00 0.00 3.56 3.48 3.40 3.11 3.73 3.26 2.29 2.22 1.01 1.26 Tỷ lệ giảm bệnh (%)         100 28.9 30.4 32.0 37.8 25.5 34.9 40.3 55.6 79.8 74.8 NT: không xử lý; NI: không bị bệnh; I: bị bệnh; T: xử lý 12/25/17 [1] = 1.3 x , [2] = 2.0 x , [3] = 8.0 x , [4] = 35.0 x bào tử/ ml T harzianum [1] = x , [2] = 1.9 x , [3] = 2.8 x [4] = 1.0 x CFU/ml S rochei Mức độ nghiêm trọng bệnh thối rễ: = 91% thực vật chết 13 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN  Tác nhân gây bệnh nguy hiểm đủ để giết chết trồng bị nhiễm bệnh không xử lý với nhân tố kiểm soát sinh học (I + NT)  Tác nhân kiểm soát sinh học vô hại trồng  Với bị nhiễm bệnh xử lý (I + T), liều lượng vi khuẩn đối kháng ảnh hưởng đến thời gian mà triệu chứng bệnh thối rễ xuất  Việc sử dụng nồng độ khác nấm T harzianum không ảnh hưởng đáng kể xuất bệnh  Khi kết hợp tác nhân đối kháng để xử lý, mức độ nghiêm trọng bệnh giảm mạnh 12/25/17 14 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ •• Sự   ức chế tác nhân gây bệnh phát triển T harzianum phát triển nhanh chóng từ đầu, sau tỏa colony P capsici T harzianum tiết nhiều kháng sinh enzyme (-1,3glucanase, chitinase, protease cellulase) vào môi trường, nơi làm suy yếu thành tế bào • T harzianum S rochei kết hợp với để tạo ảnh hưởng lớn mầm bệnh • Các tác nhân đối kháng vơ hại trồng có hiệu kết hợp với việc làm giảm bệnh thối rễ P capsici (giảm lên đến 75%) 12/25/17 15 Cảm ơn cô giáo bạn lắng nghe ... ĐỀ Kiểm soát tác nhân gây bệnh Khử trùng đất với Methyl Bromide Kiểm soát bệnh thối rễ P capsici ớt qua phương tiện sinh học 12/25/17 Cấm vào năm 2005 ĐẶT VẤN ĐỀ Một tác nhân kiểm soát sinh học. .. tương thích sử dụng chống lại mầm bệnh 12 12/25/17 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Bảng 1: Bệnh thối rễ Pc (Phytophthora capsici) ớt tỷ lệ giảm bệnh đất trộn với vi sinh vật đối kháng Th (Trichoderma harzianum) ... nhiễm bệnh xử lý (I + T), liều lượng vi khuẩn đối kháng ảnh hưởng đến thời gian mà triệu chứng bệnh thối rễ xuất  Vi c sử dụng nồng độ khác nấm T harzianum không ảnh hưởng đáng kể xuất bệnh 