Đang tải... (xem toàn văn)
NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA CÁC MẪU PHÂN LẬP NẤM Beauveria VÀ Metarhizium KÝ SINH TRÊN CÔN TRÙNG GÂY HẠI
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM ********************************* VÕ THỊ THU OANH NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA CÁC MẪU PHÂN LẬP NẤM Beauveria VÀ Metarhizium KÝ SINH TRÊN CÔN TRÙNG GÂY HẠI Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mã số: 62 62 10 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NƠNG NGHIỆP TP Hồ Chí Minh, năm 2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HCM ********************************* VÕ THỊ THU OANH NGHIÊN CỨU ĐẶC TÍNH SINH HỌC VÀ ĐÁNH GIÁ ĐỘC TÍNH CỦA CÁC MẪU PHÂN LẬP NẤM Beauveria VÀ Metarhizium KÝ SINH TRÊN CÔN TRÙNG GÂY HẠI Chuyên ngành: Bảo vệ thực vật Mã số : 62 62 10 01 LUẬN ÁN TIẾN SĨ NÔNG NGHIỆP Người hướng dẫn khoa học PGS TS Bùi Cách Tuyến TS Lê Đình Đơn TP Hồ Chí Minh, năm 2010 i LỜI CÁM ƠN Để hồn thành luận án này, tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến: PGS.TS Bùi Cách Tuyến tận tình hướng dẫn xây dựng nội dung nghiên cứu phương pháp lý luận khoa học TS Lê Đình Đơn ln quan tâm hướng dẫn phương pháp thực hiện, gợi ý cho thảo luận đúc kết kết luận án Tôi xin chân thành cám ơn Ban Giám Hiệu Trường Đại Học Nông Lâm TP HCM tạo điều kiện thuận lợi nguồn kinh phí q trình thực đề tài PGS.TS Nguyễn Ngọc Tuân, PGS.TS Phạm Văn Hiền tập thể cán phòng Sau Đại Học Trường Đại Học Nơng Lâm TP.HCM nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện để hồn thành luận án Phòng Sinh học phân tử Thực vật Bảo vệ Thực vật - Viện Nghiên Cứu CNSH Môi Trường, Trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM tạo điều kiện giúp đỡ thực thí nghiệm liên quan đến luận án Xin trân trọng cám ơn Ban chủ nhiệm Khoa Nông Học, Bộ môn Bảo vệ Thực vật - Trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM tạo điều kiện thuận lợi cho nghiên cứu thực luận án Các em sinh viên Khoa Nông Học, Bộ môn Công nghệ Sinh học - Trường Đại Học Nông Lâm TP.HCM cộng tác triển khai thu thập kết thí nghiệm Cuối cùng, vô biết ơn bạn bè đồng nghiệp gần xa gia đình động viên khuyến khích, giúp đỡ tơi suốt q trình thực luận án Tác giả luận án Võ Thị Thu Oanh ii LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu tơi thực hướng dẫn PGS.TS Bùi Cách Tuyến TS Lê Đình Đơn Trường Đại Học Nơng Lâm TP.HCM Số liệu, kết nêu luận án trung thực cơng bố tạp chí, hội nghị khoa học tác giả, nhóm tác giả, cộng tác viên chưa công bố Tác giả luận án Võ Thị Thu Oanh iii TÓM TẮT VÕ THỊ THU OANH – “Nghiên cứu đặc tính sinh học đánh giá độc tính mẫu phân lập nấm Beauveria Metarhizium ký sinh côn trùng gây hại” Chuyên ngành: Bảo vệ Thực vật Mã số: 62.62.10.01 Trường Đại Học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh, 2003 – 2007 Luận án nghiên cứu xác định tên loài từ chi nấm Beauveria Metarhizium ký sinh côn trùng phương pháp truyền thống dựa đặc điểm hình thái học, kỹ thuật sinh học dựa trình tự DNA vùng ITS-rDNA Nghiên cứu số đặc điểm sinh học, khả gây bệnh mẫu Beauveria Metarhizium đến số côn trùng gây hại qua thí nghiệm in vitro, nhà lưới đồng ruộng nhằm thiết lập sở liệu cho mẫu nấm địa, cung cấp đặc điểm để chọn mẫu nấm có độc tính cao sử dụng phòng trừ dịch hại trồng Mười ba mẫu nấm Beauveria phân lập sử dụng nghiên cứu loài bassiana 16 mẫu Metarhizium thuộc lồi anisopliae Trình tự vùng ITS-rDNA tất mẫu phân lập đăng ký so sánh với liệu sở GenBank cho thấy có nhóm di truyền B bassiana nhóm M anisopliae diện quần thể loài, tách biệt với mẫu nấm quốc gia khác Sử dụng nested-PCR với primer chuyên biệt vùng gen Pr1, gen liên quan đến tính độc nấm Metarhizium phương pháp tuyển chọn nhanh mẫu nấm Metarhizium gây bệnh cho côn trùng với độ tin cậy cao Kết nghiên cứu đặc điểm sinh học cho thấy nhiệt độ 25 - 280C thích hợp cho phát triển B bassiana, M anisopliae 28 - 300C Trên môi trường dinh dưỡng, hai nấm có số lượng bào tử hình thành đạt tối đa vào 14 ngày sau ni cấy Tuy nhiên, điều kiện thí nghiệm, nấm M anisopliae hình thành nhiều bào tử, bào tử nảy mầm sớm kháng nhiệt B bassiana Môi trường SDAY+K thích hợp cho nghiên cứu sinh học nấm ký sinh côn trùng tương tự môi trường SB+KC, ghi nhận mẫu B bassiana mẫu M anisopliae phát triển 350C sau 24 ni cấy iv Hiệu phòng trừ côn trùng gây hại mẫu B bassiana M anisopliae bị ảnh hưởng dùng chung với loại thuốc trừ nấm gốc mancozeb, zineb, carbendazim, benomyl không bị ảnh hưởng dùng với thuốc trừ sâu thiamethoxam, triazophos, deltamethrin azadirachtins nồng độ khuyến cáo Thuốc trừ nấm thí nghiệm hạn chế nảy mầm bào tử ngăn cản phát triển sợi nấm in vitro, thuốc sử dụng nồng độ thấp Cả hai nấm B bassiana M anisopliae có hiệu lực diệt trừ rầy nâu sâu xanh da láng in vitro, nhà lưới đồng ruộng sử dụng nồng độ 107 108 bào tử/ml Đối với nấm B bassiana, mẫu Bb(RN-LA), Bb(RN-BTh) Bb(BXĐ-Q9) mẫu Ma(RN-LA), Ma(BXĐ-Q9), Ma(BXĐ-BT) M anisopliae có khả ký sinh cao cho ấu trùng (85,5% - 91,8%) thành trùng (80,3% - 86,7%) rầy nâu Các mẫu nấm Bb(SXĐP-TN) Bb(SXN-PT) ký sinh từ 74,7% - 78,0% sâu xanh da láng hành lá, Ma(SXH-BD) Ma(SXĐPTN) có khả ký sinh tới 90,4% - 94,1% 10 ngày sau phun xử lý Riêng mẫu B.b(RN-LA), B.b(RSM-Q2), B.b(RSM-BC) Ma(RN-LA), Ma(RS-Q9) phân lập từ nhiều vật chủ khác ký sinh cao sâu xanh da láng cho thấy có diện cá thể nấm tự nhiên với độc tính khơng chọn lọc loại ký chủ phát triển tính thích nghi theo hướng phổ ký chủ rộng Sử dụng nấm B bassiana Bb(RN-LA) M anisopliae Ma(RN-LA), Ma(SXHBD) khống chế mật số rầy nâu mức thấp 945-1011 con/m2 75 ngày sau sạ (đối chứng 2140con/m2) 35-36 con/20 bụi hành sâu xanh da láng (đối chứng 204con/m2), suất thu ruộng phun nấm tương đương cao ruộng phun thuốc trừ sâu nông dân Đặc biệt mẫu nấm B bassiana M anisopliae thử nghiệm không tác động bất lợi cho nhện bắt mồi ăn thịt (Lycosa sp.) bọ xít mù xanh (Cyrtorhinus lividipennis) hệ sinh thái ruộng lúa, so sánh với thuốc hóa học Actara 25WG (thiamethoxam) Do vậy, bảo tồn khai thác quần thể nấm ký sinh côn trùng địa đồng ruộng nên xem ưu tiên hàng đầu cho chương trình phòng trừ sinh học v SUMMARY VO THI THU OANH - “Studies on biological characteristics and virulence of Beauveria and Metarhizium isolates parasite on harmful insects” Major: Plant Protection Code: 62 62 10 01 Nong Lam University Hochiminh City, 2003 - 2007 The thesis objectives were species identification of Beauveria and Metarhizium isolates, the entomopathogenic fungi, by using a traditional method based on morphological characteristics and a molecular method based on ITS-rDNA sequences; biological characteristics and pathogenicity ability of isolates to harmful based on tests in vitro, net house, and field condition Results of the research were to establish biological database of indigenous Beauveria and Metarhizium isolates and to provide basic characters in order to select high virulent isolates using in plant pest control All of thirteen isolates of Beauveria and 16 isolates of Metarhizium were identified as bassiana and anisopliae species, respectively ITS-rDNA sequences of all isolates were submitted into and comparion with ITS-rDNA database in GenBank Results indicated that there were three genetic groups of B bassiana and six of M anisopliae presenting in population of each species, and distiguishing with isolates from other countries Using nested-PCR with specific primers on Pr1 gene, a gene relating to pathogenesis, could be a good selective method of M anisopliae isolates parasiting on harmful insects with high confidence Results obtained from biological experiments showed that the optimum temperature for development of B bassiana isolates was 25 - 280C and 28 - 300C for M anisopliae Beside that, the SDAY+K was a good medium for entomopathogenic fungal researches, it is similar with SB+KC medium In this condition, the spore number was produced in maximun at 14 days after incubation Interestingly, M anisopliae produced more spores, spore germinated quickly, and temperature tolerance better than B bassiana There were eight isolates of B bassiana and nine of M anisopliae to be able to grow in high temperature 35ºC after 24 hours on SDAY+K cultures vi Based on in vitro and field experiments, the insecticides as thiamethoxam, triazophos, deltamethrin and azadirachtin used at recommendated doses were not effective on survive and parasitism of M anisopliae or B bassiana isolates, while the fungicides, mancozeb, zineb, carbendazim and benomyl were strong effective even at low dose used The fungicides effected negatively on spore germination and mycelium growing Pathogenicity tests conducted in labs, a net house and a field condition on two harmful insects, beet armyworm (Spodoptera exigua) and brown planthopper (Nilaparvata lugens) resulted that isolates of B bassiana and M anisopliae were high efficacy when used at 107 and 108 spores/ml Isolates Bb(RN-BTh), Bb(RN-LA), Bb(BXĐ-Q9), and Ma(RN-LA), Ma(BXĐ-Q9), Ma(BXĐ-BT) were high effective on larva and adult of brown planthopper, with 85,5 - 91,8% larva killed and 80,3 - 86,7% adult colonized The control efficacy of Bb(SXĐP-TN), Bb(SXN-PT) isolates on beet armyworm was from 74,7% to 78,0%, and that of Ma(SXH-BD) and Ma(SXĐP-TN) was from 90,4% to 94,1%, after ten days sprayed However, a few isolates as B.b(RNLA), B.b(RSM-Q2), B.b(RSM-BC) and Ma(RN-LA), Ma(RS-Q9) collected from other host insects were also high virulence on beet armyworm, suggesting that there were particular isolates with non-host specific virulence and towards to wide host spectrum Based on results, the using of B bassiana Bb(RN-LA) and M anisopliae Ma(RN-LA) for controlling of beet armyworm and brown planthopper was high efficacy to keep the pest density at low number as 945 – 1.011 brown planthoppers/m2 at 75 days after sowing, while control treatment (no insecticide used) was 2140 individuals and as 35 – 36 beet armyworms per 20 onion bushes while control treatment was 284 individuals The productivity on the fields treated with the isolates was higher or similar with that on the fields treated with pesticides from farmers Results indicated that many isolates of M anisopliae and B bassiana were not attacked on useful insects such as wolf spider (Lycosa sp.) and plant bug (Cyrtorhinus lividipennis) in rice fields, while the pesticide Actara 25WG (thiamethoxam) did Therefore, preservation and exploitation of the native entomopathogenic fungi in the field should be a priority way for biological control program recently vii MỤC LỤC Trang Lời cám ơn i Lời cam đoan ii Tóm tắt iii Summary v Mục lục vii Danh mục chữ viết tắt xi Danh mục bảng xii Danh mục hình xiv MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 3 Mục tiêu nghiên cứu đề tài 4 Thời gian, đối tượng phạm vi nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Lịch sử nghiên cứu nấm gây bệnh côn trùng 1.2 Triệu chứng côn trùng bị bệnh vi nấm 1.3 Đặc điểm nhận biết nấm B bassiana M anisopliae 1.4 Độc tố chế tác động nấm B bassiana M anisopliae 12 1.4.1 Độc tố chế tác động nấm B bassiana 12 1.4.2 Độc tố chế tác động nấm M anisopliae 14 1.5 Sự phát triển nấm thể côn trùng 17 1.6 Đặc điểm di truyền nấm B bassiana M anisopliae 18 1.6.1 Vai trò vùng rDNA-ITS 19 1.6.2 Sự khác biệt di truyền nấm Beauveria 19 1.6.3.Một số kết nghiên cứu giới di truyền B bassiana 23 1.6.4 Một số kết nghiên cứu giới di truyền M anisopliae 25 1.7 Đặc điểm sinh học nấm B bassiana M anisopliae 30 1.7.1 Điều kiện để nấm gây bệnh côn trùng phát triển 30 1.7.2.Một số kết nghiên cứu đặc điểm sinh học B bassiana M anisopliae 31 1.7.2.1 Một số kết nghiên cứu nước 32 1.7.2.2 Một số kết nghiên cứu giới 34 viii 1.8 Một số kết nghiên cứu nước khả gây bệnh B bassiana M anisopliae sâu hại trồng 40 1.8.1 Kết nghiên cứu nước 40 1.8.2 Kết nghiên cứu giới 43 1.9 Chế phẩm sinh học từ nấm B bassiana M anisopliae 47 1.9.1 Các chế phẩm sinh học từ B bassiana M anisopliae giới 47 1.9.2 Các chế phẩm sinh học từ B bassiana M anisopliae Việt Nam 48 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 49 2.1 Nội dung nghiên cứu 49 2.2 Thời gian địa điểm nghiên cứu 49 2.3 Vật liệu nghiên cứu 49 2.4 Phương pháp nghiên cứu 51 2.4.1 Phân lập xác định loài nấm Beauveria Metarhizium theo phương pháp phân loại truyền thống 51 2.4.2 Phân loại xác định lồi, phân tích khác biệt di truyền nấm Beauveria Metarhizium dựa vào trình tự vùng ITS-rDNA 52 2.4.3 Nghiên cứu số đặc điểm sinh học nấm B bassiana M anisopliae ký sinh sâu hại trồng 56 2.4.3.1 Xác định thời gian bào tử nảy mầm 56 2.4.3.2 Khả hình thành bào tử nấm B bassiana M anisopliae 57 2.4.3.3 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến hình thành bào tử nấm B bassiana M anisopliae 58 2.4.3.4 Ảnh hưởng nguồn dinh dưỡng đến phát triển nấm B bassiana M anisopliae 58 2.4.3.5 Ảnh hưởng nhiệt độ đến phát triển hình thành bào tử nấm B bassiana M anisopliae 59 2.4.3.6 Ảnh hưởng ẩm độ đến hình thành nảy mầm bào tử nấm B bassiana M anisopliae 59 2.4.3.7 Ảnh hưởng số hoạt chất trừ sâu, trừ nấm đến phát triển nảy mầm B bassiana M anisopliae 60 2.4.4 Đánh giá độc tính nấm B bassiana M anisopliae số sâu hại hại trồng 60 2.4.4.1 Xác định nồng độ trừ sâu xanh da láng (S exigua) nấm B bassiana M anisopliae điều kiện in vitro 61 Bb_SXN-PT Bb_RN-LA Bb_SK-CC Bb_BXĐ-Q9 Bb_Cca-BRVT Bb_SXĐP-TN Bb_SCG-KG Bb_RN-BTh Bb_BXĐ-BC Bb_BH-BVTV Bb_ST-CC Bb_RSM-BC Bb_RSM-Q2 CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG CTGAAATGGAGTGGCGGCCCGTCCGCGGCGACCTCTGCGCAGTAATACAGCTCGCACCGG ************************************************************ Bb_SXN-PT GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_RN-LA GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_SK-CC GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_BXĐ-Q9 GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_Cca-BRVT GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_SXĐP-TN GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_SCG-KG GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_RN-BTh GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_BXĐ-BC GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_BH-BVTV GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_ST-CC GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACA -CCCAACTTCTGAACG 162 Bb_RSM-BC GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACAAT-CCTTACTTCTGAACG 165 Bb_RSM-Q2 GACCCCGACGCGGCCACGCCGTAAAACAATTCCTTACTTCT-AACG 165 ************************ ********* **** Hình So sánh trình tự vùng ITS2-rDNA 13 MPL B bassiana nghiên cứu, sử dụng CLUSTAL X version 1.8 Dấu (*) vị trí giống tất các MPL 119 119 119 119 119 119 119 119 119 119 119 120 120 Phụ lục Bảng Tỷ lệ tương đồng (%) trình tự DNA vùng ITS - rDNA 16 MPL Metarhizium nghiên cứu mẫu M.anisopliae nước giới STT Mẫu phân lập AB AF DQ AF DQ EF AF AY AY 071712 137059 177434 137063 177433 113338 138267 375449 624204 Ma(CC-BTh) 100 99 99 93 92 93 78 80 74 Ma(SK-BTh) 100 99 99 93 92 93 78 80 74 Ma(SCL-LA) 100 99 99 93 93 93 79 79 74 Ma(BXĐ-Q9) 100 99 99 93 93 93 79 79 74 Ma(RN-BC) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 Ma(RN-LA) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 Ma(SXĐP-TN) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 M.a(BD-TN) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 Ma(BXĐ-TG) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 10 Ma(BXĐ-TV) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 11 Ma(RS-Q9) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 12 Ma(RN-BT) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 13 Ma(SXC-CC) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 14 Ma(ST-ĐL) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 15 Ma(SXH-BD) 100 99 99 93 93 93 79 80 74 16 Ma(GNN-CT) 100 99 99 93 92 93 78 80 74 Tỷ lệ tương đồng (%) tính vị trí nucleotide thay đổi (khơng bao gồm thêm nucleotide) chương trình DNADIST phần mềm PHYLIP version 3.66 Ma_BXĐ-TG Ma_BXĐ-TV Ma_SCL-LA Ma_BXD-Q9 Ma_RN-BC Ma_RN-LA Ma_SXĐP-TN Ma_BD-TN Ma_GNN-CT Ma_CC-BTh Ma_SK-BTh Ma_RN-BT Ma_SXC-CC Ma_ST-ĐL Ma_SXH-BD Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_BXĐ-TV Ma_SCL-LA Ma_BXD-Q9 Ma_RN-BC Ma_RN-LA Ma_SXĐP-TN Ma_BD-TN Ma_GNN-CT Ma_CC-BTh Ma_SK-BTh Ma_RN-BT Ma_SXC-CC Ma_ST-ĐL Ma_SXH-BD Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_BXĐ-TV Ma_SCL-LA Ma_BXD-Q9 Ma_RN-BC Ma_RN-LA Ma_SXĐP-TN Ma_BD-TN Ma_GNN-CT Ma_CC-BTh Ma_SK-BTh Ma_RN-BT Ma_SXC-CC Ma_ST-ĐL Ma_SXH-BD Ma_RS-Q9 CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTTTATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTTTATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA CCGAGTT-ATCCAACTCCCAACCCCTGTGAATTATACCTTTAATTGTTGCTTCGGCGGGA ******* **************************************************** CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTTTAATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTTTAATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTT-AATAAGTATCTTCTGAGTGG CTTCGCGCCCGCCGGGGACCCAAACCTTCTGAATTTTTTTAATAAGTATCTTCTGAGTGG *************************************** ******************** TTTAAAAAAAAATGAATCA 138 TTTAAAAAAAAATGAATCA 138 TT AAAAAAAATGAATCA 136 TT AAAAAAAATGAATCA 136 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TT AAAAAAAATGAATCA 135 TTTAAAAAAAAATGAATCA 138 ** *************** 59 59 60 60 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59 59 119 119 119 119 118 118 118 118 118 118 118 118 118 118 118 119 Hình So sánh trình tự vùng ITS1-rDNA 16 MPL M anisopliae, sử dụng CLUSTALX version 1.8 Dấu (*) vị trí giống tất MPL Ma_BXĐ-TG Ma_BXĐ-TV Ma_SCL-LA Ma_BXD-Q9 Ma_RN-BC Ma_RN-LA Ma_SXĐP-TN Ma_BD-TN Ma_GNN-CT Ma_CC-BTh Ma_SK-BTh Ma_RN-BT Ma_SXC-CC Ma_ST-ĐL Ma_SXH-BD Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_BXĐ-TV CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC CGCCCCTCAAGTCCCCTGTGGACTTGGTGTTGGGGATCGGCGAGGCTGGTTTTCCAGCAC ************************************************************ AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 120 120 Ma_SCL-LA Ma_BXD-Q9 Ma_RN-BC Ma_RN-LA Ma_SXĐP-TN Ma_BD-TN Ma_GNN-CT Ma_CC-BTh Ma_SK-BTh Ma_RN-BT Ma_SXC-CC Ma_ST-ĐL Ma_SXH-BD Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_BXĐ-TV Ma_SCL-LA Ma_BXĐ-Q9 Ma_RN-BC Ma_RN-LA Ma_SXĐP-TN Ma_BD-TN Ma_GNN-CT Ma_CC-BTh Ma_SK-BTh Ma_RN-BT Ma_SXC-CC Ma_ST-ĐL Ma_SXH-BD Ma_RS-Q9 AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC AGCCGTCCCTTAAATTAATTGGCGGTCTCGCCGTGGCCCTCCTCTGCGCAGTAGTAAAGC ************************************************************ ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ACTCGCAACAGGAGCCCGGCGCGGTCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTATAG 177 ********************************************************* 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 Hình So sánh trình tự vùng ITS2 - rDNA 16 MPL M anisopliae, sử dụng CLUSTAL X version 1.8 Dấu (*) vị trí giống tất các MPL Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT GGCTGAGAGCATCATTGCCGACAAGTATATTGTCAAGTTCAAGGATGATATTGCCCGTAT ************************************************************ CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGATACGGTGAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC CGCTACCGATGACAAGGTCAGCGCTCTTACCTCCAAAGCCGACTTCGTTTACGAGCACGC ************************************************************ CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCGGTGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCGGTGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC CTTCCATGGGTTTGCAGGCTCCCTCACCAAGGAGGAGCTGAAGATGCTTCG-TGAGCACC *************************************************** ******** CCGGCTGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 120 120 120 120 120 120 120 120 120 120 180 179 180 179 179 179 179 179 179 179 240 238 238 238 238 Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_BXD-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_BXD-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGGACCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAAACATGTATTGTTTGT CCGG-TGTAAGTTCCCCCTCCCACTTACCTAGGTAGTCAAAGGAGACATGTATTGTTTGT **** ****** *********************************************** TCCTGACACGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC TCCTGACCCGCTGCGCCATAGGTCGATTTCATTGAGAAGGACGCTGTGATGCGTATCAGC ************************************************************ GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG GGCCTCACTGAGCAGAGCGGTGCTCCCTGGGGTCTTGGGCGCATCTCTCACCGCAATAGG ************************************************************ GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT GGAAGCACCACCTATCGCTACGATGATAGTGCTGGTGAGGGTACTTGCGTATATATCATT ************************************************************ GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCAGTCAAAATTCCATAGTGAGGA GACACTGGTATTGAGGCCTCCCACCCCGTAAGTTGTGCCGCCAAAACTCCATAGTGAGGA ************************************************************ GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT GTAGGAAATTTAACAATATCATCCAGGAGTTTGAGGGTCGCGCCACTTTTCTTAAGAGCT ************************************************************ TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAACCACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG TCATCAGCGGTCAAGAAACTGATGGCCACGGCCATGGGACTCACTGCGCTGGTACCATTG ************************************************************ GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 238 238 238 238 238 300 298 298 298 298 298 298 298 298 298 360 358 358 358 358 358 358 358 358 358 420 418 418 418 418 418 418 418 418 418 480 478 478 478 478 478 478 478 478 478 540 538 538 538 538 538 538 538 538 538 600 598 598 598 598 598 598 598 598 598 660 658 Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 GTAGCAAGTCCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 GTAGCAAAAGCTACGGTGTTGCCAAAAAGGCTAAGCTCTATGGTGTCAAGGTTCTTGACA 658 ************************************************************ ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 720 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCACAGGACT 718 ACCAGGGCAGTGGTTCCTACTCCGGTATCATCAGTGGCATGGACTACGTTGCCAGTGACT 718 **************************************************** **** CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 779 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTTTCCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 779 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 CCAAGAGCCGCGGCTGCCCCAAAGGCGCCATTGCTT-CCATGAGCCTGGGAGGTGGCTAC 778 ************************************ *********************** TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 799 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 799 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 TCGGCGTCCGTCAACCAAGG 798 ******************** Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Ma_BXĐ-TG Ma_SXĐP-TN Ma_RN-BT Ma_RN-BC Ma_BXD-TV Ma_RN-LA Ma_BXD-Q9 Ma_SXH-BD Ma_CC-BTh Ma_RS-Q9 Hình So sánh trình tự gen Pr1 10 MPL M anisopliae, sử dụng CLUSTAL X version 1.8 Dấu (*) vị trí giống tất các MPL Độ ẩm (%) Phụ lục 3: Khí hậu thời tiết TP.HCM, Đồng Nai Long An từ năm 2004 – 2007 90 80 70 60 50 40 30 20 10 2004 2005 2006 2007 10 11 12 Tháng Hình Diễn biến ẩm độ (%) TP.HCM từ năm 2004 – 2007 31 Nhiệt độ (0C) 30 29 2004 28 2005 27 2006 26 2007 25 24 10 11 12 Tháng Hình Diễn biến nhiệt độ (0C) TP.HCM từ năm 2004 - 2007 600 Lượng mưa (mm) 500 400 2004 2005 300 2006 2007 200 100 10 11 12 Tháng Hình Diễn biến lượng mưa (mm) TP.HCM từ năm 2004 - 2007 100 90 80 Ẩm độ (%) 70 60 2005 50 2006 40 2007 30 20 10 10 11 12 Tháng Hình Diễn biến ẩm độ (%) Đồng Nai từ năm 2005 – 2007 29 Nhiệt độ trung bình (oC) 28 27 26 2005 25 2006 24 2007 23 22 21 10 11 12 Tháng Lượng mưa (mm) Hình Diễn biến nhiệt độ (0C) Đồng Nai từ năm 2005 - 2007 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 2005 2006 2007 10 11 12 Tháng Ẳm độ (%) Hình Diễn biến lượng mưa (mm) Đồng Nai từ năm 2005 - 2007 94 92 90 88 86 84 82 80 78 76 74 2005 2006 2007 10 11 12 Tháng Hình Diễn biến ẩm độ (%) Long An từ năm 2005 - 2007 30 Nhiệt độ (oC) 29 28 27 2005 26 2006 25 2007 24 23 22 10 11 12 Tháng Lượng mưa (mm) Hình Diễn biến nhiệt độ (00C) Long An từ năm 2005 - 2007 1000 900 800 700 600 500 400 300 200 100 2005 2006 2007 10 11 12 Tháng Hình Diễn biến lượng mưa (mm) Long An từ năm 2005 - 2007 Phụ lục Sự phát triển tạo bào tử MPL B bassiana M.anisopliae môi trường dinh dưỡng khác Bảng Sự phát triển MPL B bassiana môi trường nuôi cấy khác Mẫu phân lập B.b(BXĐ-Q9) B.b(RN-LA) B.b(BXĐ-BC) B.b(ST-CCh) B.b(BH-BVTV) B.b(RN-BTh) B.b(SCG-KG) B.b(SXN-PT) B.b(SK-CCh) Môi trường SB+KC Môi trường SDAY+K Môi trường Dulmage ĐKTN (cm) MSBT/cm2 (x107bt) ĐKTN (cm) MSBT/cm2 (x107bt) ĐKTN (cm) MSBT/cm2 (x107bt) 7,4 7,9 6,3 6,1 5,9 7,2 6,6 7,8 6,8 1,8 ± 0,3 1,6 ± 0,2 1,4 ± 0,2 1,3 ± 0,2 1,4 ± 0,1 1,6 ± 0,2 1,1 ± 0,0 1,5 ± 0,2 1,7 ± 0,2 5,6 5,7 5,3 5,1 4,5 6,2 6,2 6,8 6,5 2,5 ± 0,1 2,8 ± 0,2 1,8 ± 0,1 1,7 ± 0,1 1,1 ± 0,0 1,8 ± 0,1 1,7 ± 0,1 1,9 ± 0,3 2,4 ± 0,1 4,8 4,5 4,5 4,8 4,7 5,5 5,9 6,8 4,6 0,5 ± 0,0 0,4 ± 0,0 0.3 ± 0,0 0,1 ± 0,0 0,3 ± 0,0 1,1 ± 0,0 0,6 ± 0,0 0,6 ± 0,0 0,5 ± 0,0 B.b(SXĐP-TN) B.b(Cca-BRVT) B.b(RSM-Q2) B.b(RSM-BC) 7,5 7,5 8,6 8,2 1,7 ± 0,1 1,4 ± 0,1 2,3 ± 0,1 2,1 ± 0,2 7,2 6,3 7,9 7,4 2,8 ± 0,2 2,3 ± 0,1 3,4 ± 0,2 2,8 ± 0,4 6,2 5,2 6,5 6,2 0,8 ± 0,0 0,4 ± 0,0 1,1 ± 0,0 1,4 ± 0,1 Bảng Sự phát triển MPL M.anisopliae môi trường nuôi cấy khác Mẫu phân lập M.a(RN-BC) M.a(BXĐ-Q9) M.a(RN-BT) M.a(SCL-LA) M.a(RN-LA) M.a(SXĐP-TN) M.a(SXC-CCh) M.a(SK-BTh) M.a(SXH-BD) M.a(CC-BTh) M.a(BXĐ-TG) M.a(BXĐ-TV) M.a(RS-Q9) Môi trường SB+KC Môi trường SDAY+K Môi trường Dulmage ĐKTN (cm) MSBT/cm2 (x107bt) ĐKTN (cm) MSBT/cm2 (x107bt) ĐKTN (cm) MSBT/cm2 (x107bt) 8,7 9,0 8,1 9,0 9,0 8,7 8,5 8,4 8,6 8,4 8,3 8,6 9,0 3,4 ± 0,2 4,4 ± 0,1 0,5 ± 0,0 1,4 ± 0,1 1,8 ± 0,1 2,9 ± 0,4 1.1 ± 0,0 1,1 ± 0,0 2,3 ± 0,1 4,4 ± 0,3 9,8 ± 0,4 4,2 ± 0,6 7,8 ± 0,1 7,9 6,9 7,5 7,2 8,3 7,9 7,9 7,8 7,6 8,0 7,4 7,6 8,7 5,3 ± 0,4 5,5 ± 0,3 3,4 ± 0,2 2,5 ± 0,2 2,3 ± 0,1 5,2 ± 0,3 1,9 ± 0,1 1,9 ± 0,1 2,9 ± 0,1 4,6 ± 0,3 15,3 ± 0,5 4,6 ± 0,3 21,8 ± 1,1 7,2 6,6 6,9 6,7 7,7 7,4 6,4 7,3 7,7 7,8 7,3 7,2 7,9 2,8 ± 0,2 0,5 ± 0,0 0,2 ± 0,0 1,6 ± 0,2 1,7 ± 0,1 1,1 ± 0,0 0,9 ± 0,0 0,9 ± 0,0 1,6 ± 0,2 1,4 ± 0,1 2,5 ± 0,1 2,3 ± 0,1 3,4 ± 0,2 Phụ lục Ảnh hưởng thuốc trừ sâu, trừ nấm đến phát triển B.bassiana M.anisopliae Bảng Ảnh hưởng nồng độ (ppm) thuốc trừ sâu đến sinh trưởng phát triển nấm B bassiana Tên thuốc (hoạt chất) Thiamethoxam Triazophos Deltamethrin Fipronil Fenitrothion Chlorpyrifos Carbaryl Azadiractin Đối chứng 125ppm 250ppm 500ppm ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC 8,0 8,2 8,1 8,2 6,6 6,3 2,9 8,4 8,5 0,06 0,04 0,05 0,04 22 26 66 0,01 - 7,5 7,4 7,1 7,9 3,4 2,9 0,4 8,1 8,3 10 11 14 0,05 59 65 100 0,02 - 7,3 7,4 5,6 6,8 1,7 0,4 0,4 7,9 8,4 13 12 33 19 80 100 100 0,06 - Bảng Ảnh hưởng nồng độ (ppm) thuốc trừ sâu đến phát triển nấm M anisopliae Tên thuốc (hoạt chất) Thiamethoxam Triazophos Deltamethrin Fipronil Fenitrothion Chlorpyrifos Carbaryl Azadiractin Đối chứng 125ppm 250ppm 500ppm ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC 8,9 8,9 8,3 8,7 7,6 7,4 2,3 8,9 8,9 0,07 0,02 15 17 74 - 8,5 8,8 8,1 8,4 5,9 4,9 1,3 8,5 8,8 0,03 0,08 0,05 33 44 85 0,03 - 8,2 8,6 7,6 8,2 2,7 2,5 0,4 8,4 8,9 0,08 0,03 15 0,08 70 72 100 0,06 - Bảng Ảnh hưởng nồng độ (ppm) thuốc trừ nấm đến phát triển nấm B bassiana Tên thuốc (hoạt chất) Chlorothalonil Validamycin Mancozeb Zineb Carbendazim Benomyl Đối chứng 50ppm 125ppm 250ppm ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC 6,5 6,3 1,2 2,3 0,4 0,4 8,9 27 29 87 74 100 100 - 6,3 2,3 0,4 0,4 0,4 0,4 8,5 26 73 100 100 100 100 - 6,2 1,2 0,4 0,4 0,4 0,4 8,4 26 86 100 100 100 100 - Bảng Ảnh hưởng nồng độ (ppm) thuốc trừ bệnh đến phát triển nấm M anisopliae Tên thuốc (hoạt chất) Chlorothalonil Validamycin Mancozeb Zineb Carbendazim Benomyl Đối chứng 50ppm 125ppm 250ppm ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC ĐKTN (cm) % ức chế so với ĐC 7,9 7,6 2,2 0,7 0,4 0,4 8,9 11 15 75 92 100 100 - 6,9 4,6 1,8 0,4 0,4 0,4 8,8 22 48 80 100 100 100 - 4,8 1,7 0,4 0,4 0,4 0,4 8,7 45 80 100 100 100 100 - Phụ lục 6: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành bào tử B.bassiana Variable 2:250C (BT) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 5.835 0.486 363.256 0.0000 Within 39 0.052 0.001 Total 51 5.887 Coefficient of Variation = 3.36% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 4.00 4.781 1.195 0.03 0.02 4.00 5.839 1.460 0.02 0.02 4.00 3.104 0.776 0.02 0.02 4.00 3.195 0.799 0.03 0.02 4.00 3.535 0.884 0.04 0.02 4.00 3.201 0.800 0.03 0.02 4.00 5.430 1.358 0.02 0.02 4.00 2.211 0.553 0.06 0.02 4.00 2.664 0.666 0.07 0.02 10 4.00 5.886 1.471 0.03 0.02 11 4.00 5.070 1.268 0.03 0.02 12 4.00 5.899 1.475 0.03 0.02 13 4.00 5.835 1.459 0.03 0.02 -Total 52.00 56.650 1.089 0.34 0.05 Within 0.04 Variable 2:280C (BT) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 12939.513 1078.293 616.981 0.0000 Within 39 68.160 1.748 Total 51 13007.673 Coefficient of Variation = 4.38% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 4.00 98.600 24.650 0.58 0.66 4.00 125.300 31.325 1.71 0.66 4.00 35.400 8.850 0.25 0.66 4.00 38.100 9.525 0.40 0.66 4.00 50.300 12.575 0.75 0.66 4.00 51.800 12.950 1.23 0.66 4.00 108.500 27.125 1.23 0.66 4.00 133.000 33.250 1.33 0.66 4.00 188.300 47.075 1.34 0.66 10 4.00 204.800 51.200 1.84 0.66 11 4.00 118.700 29.675 1.75 0.66 12 4.00 214.900 53.725 1.56 0.66 13 4.00 202.100 50.525 1.79 0.66 -Total 52.00 1569.800 30.188 15.97 2.21 Within 1.32 Phụ lục 7: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hình thành bào tử M anisopliae Title: Ảnh hưởng nhiệt độ đến nảy mầm bào tử M anisopliae 300C A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 4.656 0.388 91.550 0.0000 Within 39 0.165 0.004 Total 51 4.821 Coefficient of Variation = 0.68% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 4.00 34.566 8.641 0.03 0.03 4.00 39.125 9.781 0.05 0.03 4.00 39.084 9.771 0.04 0.03 4.00 37.963 9.491 0.02 0.03 4.00 38.879 9.720 0.06 0.03 4.00 39.094 9.773 0.07 0.03 4.00 38.016 9.504 0.02 0.03 4.00 38.205 9.551 0.03 0.03 4.00 38.692 9.673 0.09 0.03 10 4.00 38.914 9.729 0.09 0.03 11 4.00 39.033 9.758 0.07 0.03 12 4.00 38.934 9.734 0.11 0.03 13 4.00 39.313 9.828 0.09 0.03 -Total 52.00 499.817 9.612 0.31 0.04 Within 0.07 Ảnh hưởng nhiệt độ đến nảy mầm bào tử M anisopliae 300C A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 12 14165.279 1180.440 535.408 0.0000 Within 39 85.985 2.205 Total 51 14251.264 Coefficient of Variation = 2.28% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 4.00 123.670 30.918 0.28 0.74 4.00 292.000 73.000 1.69 0.74 4.00 294.900 73.725 1.94 0.74 4.00 119.760 29.940 1.11 0.74 4.00 301.190 75.297 1.75 0.74 4.00 296.550 74.138 0.37 0.74 4.00 189.370 47.343 2.14 0.74 4.00 267.890 66.972 0.39 0.74 4.00 290.930 72.733 1.47 0.74 10 4.00 296.870 74.218 0.20 0.74 11 4.00 308.610 77.152 1.25 0.74 12 4.00 293.940 73.485 2.20 0.74 13 4.00 307.460 76.865 2.06 0.74 -Total 52.00 3383.140 65.060 16.72 2.32 Within 1.48 Phụ lục 8: Phương pháp nhân nuôi sâu xanh phòng thí nghiệm Nhân ni sâu tiến hành Trung tâm Công Nghệ Sinh Học Trường Đại Học Nông Lâm Tp.HCM theo công thức Trung Tâm Bông Nha Hố gồm: Đậu xanh 150gr; men 10gr; sữa bột 3gr; benzoic acid 1,5gr; sorbic acid 3gr; agar 12gr; formaline 2ml; nước cất 750ml vitamin stock 10ml Ngài sâu xanh ghép lồng, lồng chứa 20 -25 cặp Lồng ni ngài có đường kính chiều cao 20cm, xung quanh mặt đáy phủ lưới, miệng lồng đậy vải Hàng ngày cho 15ml mật 15% (15ml mật 85ml nước) vào nắp nhựa 10ml Cho 5ml nước cất vào nắp nhựa thứ để làm nguồn thức ăn nước uống Thay thức ăn hàng ngày thu trứng vải Những trứng thụ tinh có màu vàng, tiến hành ghép trứng phiến kính Cắt vải thành mảnh nhỏ, đặt thành cụm kính 30 x 40cm, cho miếng thức ăn nhân tạo 1,5x1x1cm dùng đĩa petri đậy lại Ghép 70 miếng/đĩa, dùng kính đè lên để tránh tình trạng sâu non bò ngồi qua khe hở Sau sâu nở ngày, dùng cọ mềm để nghiêng 450 đặt vào sâu xoay nhẹ để sâu bò lên cọ, đặt sâu vào hộp có chứa thức ăn hành tươi để tiến hành thí nghiệm Phụ lục 9: Sử dụng nấm M anisopliae phòng trừ sâu xanh da láng (Spodoptera exigua) Phân tích thống kê T-Test suất hành vụ nghiệm thức thí nghiệm SAMPLE ONE: SAMPLE TWO: Variable : tnns Variable : ndns Cases through Cases through Mean: 19.583 Mean: Variance: 28.030 Variance: Standard Deviation: 5.294 Standard Deviation: F-TEST FOR THE HYPOTHESIS "VARIANCE = VARIANCE 2" F Value: 1.5266 Numerator degrees of freedom: Denominator degrees of freedom: Probability: 0.6538 Result: Non-Significant F - Accept the Hypothesis 20.717 42.790 6.541 T-TEST FOR THE HYPOTHESIS "MEAN = MEAN 2" Variance of the difference between the means: 1.2378 Standard Deviation of the difference: 1.1126 t Value: -1.0187 Effective degrees of freedom: Probability of t: 0.3551 Result: Non-Significant t - Accept the Hypothesis Confidence limits for the difference of the means (for alpha=0.05): 1.133 plus or minus 2.860 (-1.727 through 3.993) Phân tích thống kê T-Test suất hành vụ nghiệm thức thí nghiệm SAMPLE ONE: SAMPLE TWO: Variable 11: tnns-m Variable 12: nsns-m Cases through Cases through Mean: 22.083 Mean: 23.817 Variance: 41.822 Variance: 23.766 Standard Deviation: 6.467 Standard Deviation: 4.875 F-TEST FOR THE HYPOTHESIS "VARIANCE = VARIANCE 2" F Value: 1.7598 Numerator degrees of freedom: Denominator degrees of freedom: Probability: 0.5501 Result: Non-Significant F - Accept the Hypothesis T-TEST FOR THE HYPOTHESIS "MEAN = MEAN 2" Variance of the difference between the means: 1.8391 Standard Deviation of the difference: 1.3561 t Value: -1.2781 Effective degrees of freedom: Probability of t: 0.2573 Result: Non-Significant t - Accept the Hypothesis Confidence limits for the difference of the means (for alpha=0.05): 1.733 plus or minus 3.486 (-1.753 through 5.219) Phân tích thống kê T-Test suất hành vụ nghiệm thức thí nghiệm SAMPLE ONE: SAMPLE TWO: Variable 15: vu tnns Variable 18: vu ndns Cases through Cases through Mean: 21.467 Mean: 20.700 Variance: 37.535 Variance: 13.924 Standard Deviation: 6.127 Standard Deviation: 3.731 F-TEST FOR THE HYPOTHESIS "VARIANCE = VARIANCE 2" F Value: 2.6957 Numerator degrees of freedom: Denominator degrees of freedom: Probability: 0.3004 Result: Non-Significant F - Accept the Hypothesis T-TEST FOR THE HYPOTHESIS "MEAN = MEAN 2" Variance of the difference between the means: 5.5031 Standard Deviation of the difference: 2.3459 t Value: 0.3268 Effective degrees of freedom: Probability of t: 0.7570 Result: Non-Significant t - Accept the Hypothesis Confidence limits for the difference of the means (for alpha=0.05): 0.767 plus or minus 6.030 (-5.264 through 6.797) ... acridum Bên cạnh M album, M flavoviride var flavoviride M flavoviride var minus, nhánh lại đại diện cho chi dựa trình tự ITS M flavoviride var novazealandicum M flavoviride var pemphigum 12 Gần... chung với loại thu c trừ nấm gốc mancozeb, zineb, carbendazim, benomyl không bị ảnh hưởng dùng với thu c trừ sâu thiamethoxam, triazophos, deltamethrin azadirachtins nồng độ khuyến cáo Thu c trừ nấm... với thu c hóa học Actara 25WG (thiamethoxam) Do vậy, bảo tồn khai thác quần thể nấm ký sinh côn trùng địa đồng ruộng nên xem ưu tiên hàng đầu cho chương trình phòng trừ sinh học v SUMMARY VO THI