Đang tải... (xem toàn văn)
vac xin bai liet sap duoc su dung co an toan voi tre tài liệu, giáo án, bài giảng , luận văn, luận án, đồ án, bài tập lớ...
Viện Kiểm định Quốc gia vắc-xin và sinh phẩm y tế Báo cáo tổng kết đề tài cấp bộ: Nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng về tính an toàn và đáp ứng kháng thể của vắc-xin bại liệt bất hoạt từ chủng Sabin Chủ nhiệm đề tài: Lê Văn Phủng 7959 Hà nội - 2007 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh bại liệt là một bệnh nhiễm trùng cấp tính do Polyovirus gây ra. Bệnh thường gặp ở trẻ em và có thể gây liệt cơ vận động, để lại di chứng liệt suốt đời; đặc biệt nghiêm trọng nếu như liệt các cơ hô hấp thì có thể đe dọa tới tính mạng. Để ngăn chặn bệnh bại liệt, biện pháp dự phòng đặ c hiệu là hiệu quả nhất. Để dự phòng đặc hiệu, người ta sử dụng vắc xin bại liệt. Có 2 loại vắc xin phòng bệnh bại liệt là vắc xin bất hoạt (IPV) và vắc xin sống giảm độc lực (OPV). Vắc xin sống giảm độc lực kích thích cơ thể tạo nên miễn dịch tại chỗ và miễn dịch dịch thể. Tuy nhiên, dùng vắc xin này có nhược điểm là chủ ng Sabin được tạo ra từ chủng hoang dại làm giảm độc lực, nên trong quá trình phát triển tự nhiên, virut Sabin có thể gây đột biến và có nguy cơ quay trở lại có độc lực, đặc biệt là typ 3. Vắc xin IPV chủ yếu gây miễn dịch dịch thể, ngăn ngừa virut xâm nhập vào hệ thần kinh trung ương. Trong vắc xin này, virut bại liệt đã bị bất hoạt nên không có khả năng hồi độc. Trong quá trình thanh toán bệnh bại liệt, việ c sử dụng vắc xin sống giảm độc lực là thích hợp và hiệu quả nhất. Cho đến nay, mặc dù bệnh bại liệt ở Việt Nam đã được thanh toán từ năm 2000, song vẫn cần thiết cho trẻ mới sinh uống phòng bệnh bại liệt bằng vắc xin OPV vì dự kiến của Tổ chức Y tế Thế giới là, đến năm 2005 sẽ thanh toán bệnh bại liệt trên phạm vi toàn cầu, nhưng trên thực tế đã chưa thực hiện được. Năm 2001, 3 khu vực đã được công nhận thanh toán bại liệt bao gồm: Trung Mỹ, Tây Thái Bình Dương và châu Âu, còn các vùng khác vẫn chưa thanh toán được bệnh bại liệt: Tây Á, Đông Nam Á, Trung Đông, Nam Phi. Do đó, dịch bại liệt có thể lan tràn sang các nước đã thanh toán bệnh bại liệt. Indonesia là nước đã thanh toán được bệnh bại liệt năm 2000, nhưng do virut bại liệt hoang dại t ừ Trung Phi xâm nhập vào đã gây ra những ca bại liệt mới, lan tràn thành vụ dịch nhỏ, có tới hơn 300 ca mắc bại liệt do virut hoang dại và hơn 40 trường 2 hợp có liên quan đến virut vắc xin. Như vậy để bảo vệ được thành quả thanh toán bệnh bại liệt là vô cùng khó khăn. Trước tình hình đó, Tổ chức Y tế Thế giới khuyến cáo rằng, từ nay đến 2010, tất cả các nước vẫn sử dụng OPV hoặc IPV, nhưng từ sau 2010 chỉ sử dụng vắc xin IPV để phòng bệnh bại liệt. Ở nước ta, nếu sử dụng IPV nh ập ngoại cho trẻ em dưới 1 tuổi thì rất khó khăn về kinh phí (350 tỷ đồng /năm). Về sản xuất, với điều kiện cơ sở vật chất chưa đảm bảo đủ độ an toàn như hiện nay, Việt Nam chưa thể dùng chủng virut bại liệt hoang dại, vì trong quá trình này, virut hoang dại có thể bị thải ra ngoài, là nguy cơ gây nên dịch bại liệt. Xuất phát từ tình hình đó, Trung tâm Nghiên cứu S ản xuất vắc Vắc xin bại liệt sử dụng có an tồn với trẻ? Tiêm chủng ln mối quan tâm hàng đầu bậc phụ huynh cộng đồng, kế hoạch chuyển đổi sử dụng vắc xin bại liệt tuýp Việt Nam nào, vắc xin bại liệt tuýp hiệu tính an tồn sao, VnDoc cung cấp thơng tin giải đáp thắc mắc cho bạn vấn đề liên quan đến chuyển đổi vắc xin bại liệt an toàn tiêm chủng Theo Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương, Việt Nam thay vắc xin bại liệt uống tuýp (1, 3) vắc xin bại liệt uống tuýp (1 3) bOPVtừ tháng 6/2016 Theo lộ trình tới năm 2018, Việt Nam triển khai vaccine bại liệt bất hoạt tiêm (IPV) có nghĩa trường hợp trẻ uống một, hai ba liều vaccine bOPV trước tiêm mũi vaccine IPV trẻ tháng tuổi “Việt Nam toán bệnh bại liệt từ năm 2000, nhiên giới số nước chưa toán bệnh này, nên phải thực biện pháp để trì thành tốn bệnh bại liệt Đồng thời, đề phòng trường hợp bệnh bại liệt xâm nhập từ bên vào”, Cục trưởng Cục Y tế dự VnDoc - Tải tài liệu, văn pháp luật, biểu mẫu miễn phí phòng khuyến cáo Trước thơng tin này, nhiều người lo ngại tính an tồn hiệu vắc xin Vậy, Việt Nam toán bệnh bại liệt mà phải chuyển đổi vắc xin? Bà Dương Thị Hồng, Phó Viện trưởng Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương giải đáp thắc mắc loại vắc xin thay Tại trẻ Việt Nam phải uống vắc xin bại liệt Việt Nam toán bệnh này? Tại Việt Nam, bệnh bại liệt toán từ năm 2000 Tuy nhiên, bối cảnh virus bại liệt hoang dại lưu hành giới với việc mở rộng giao lưu quốc tế nay, nguy lây truyền bệnh bại liệt Việt Nam lớn Việc trì, sử dụng vắc xin bại liệt uống cần thiết để bảo đảm phòng bệnh bại liệt cho trẻ em cộng đồng Việc sử dụng vắc xin bại liệt tiếp tục trì bệnh bại liệt tốn hồn tồn quy mơ tồn cầu Lịch tiêm chủng vắc-xin bại liệt có thay đổi so với trước kia? Lịch tiêm chủng vắc xin bại liệt tuýt tiêm chủng mở rộng tương tự VnDoc - Tải tài liệu, văn pháp luật, biểu mẫu miễn phí uống vắc xin bại liệt tuýt trước Cụ thể: Liều 1: Cho trẻ uống lúc tháng tuổi; Liều 2: Cho trẻ uống lúc tháng tuổi; Liều 3: cho trẻ uống lúc tháng tuổi Vắc xin bại liệt có phản ứng phụ nào? So với vắc xin tuýp vắc xin có tác dụng phụ khác khơng? Sử dụng vắc xin bại liệt uống 50 năm qua quy mơ tồn cầu 30 năm Việt Nam cho thấy vắc xin an toàn Rất gặp dấu hiệu bất thường đau cơ, yếu cơ, liệt sau uống vắc xin Trong 30 năm triển khai vắc xin uống bại liệt Việt Nam, không ghi nhận phản ứng trầm trọng xảy sau uống vắc xin Vậy, bệnh bại liệt lây truyền thường mắc lứa tuổi nào? Biểu bệnh nào? Đây bệnh truyền nhiễm lây truyền qua đường tiêu hóa Virus vào thể qua thức ăn nước uống mang mầm bệnh Bệnh dễ lây, người mang mầm bệnh bị nhiễm virus, người lành mang virus trở thành nguồn truyền bệnh cho trẻ em sống nhà Ai mắc bệnh bại liệt Tuy nhiên, bệnh thường gặp trẻ 15 VnDoc - Tải tài liệu, văn pháp luật, biểu mẫu miễn phí tuổi, đặc biệt trẻ tuổi Đa số trẻ bị nhiễm virus khơng có biểu triệu chứng khoảng 5% có biểu lâm sàng Bệnh mức độ nhẹ có biểu sốt, đau đầu, buồn nôn nôn Nếu bệnh tiến triển nặng, bệnh nhân thấy đau dội, cứng cổ liệt phần mềm Dấu hiệu bại liệt liệt phần mềm không đối xứng bên phải bên trái Có thể trẻ liệt bên tay chân, liệt bên mức độ liệt khác Liệt chân thường phổ biến liệt tay Một số trường hợp liệt hô hấp, nuốt nên trẻ dễ bị tử vong Nếu liệt tiến triển nhanh, 3-4 ngày trẻ bị liệt Những trường hợp qua khỏi để lại di chứng liệt suốt đời, hồi phục Số lượng vắc xin tiêm cho trẻ có bảo đảm cung ứng đủ? Liệu có xảy tình trạng khan vắc xin bại liệt vắc xin trong thời gian qua? Việc bảo quản vắc xin bại liệt uống tuýt (1 3) tương tự vắc xin bại liệt uống trước Vắc xin bảo quản nhiệt độ từ 2-8 độ C Tôi khẳng định vắc xin bại liệt sử dụng tiêm chủng mở rộng bảo đảm cung ứng đầy đủ, miễn phí cho trẻ 2,3,4 tháng tuổi trạm y tế xã, phường toàn quốc từ tháng 6/2016 Trẻ uống vắc xin bại liệt sau phòng bệnh? Vắc xin bại liệt uống tuýt (1 3) vắc xin sống giảm độc lực từ chủng virus tuýt Sau uống vắc xin bại liệt khoảng tuần, thể có kháng thể phòng bệnh Trẻ uống đủ liều vắc xin có miễn dịch bền vững suốt đời Nếu uống đủ liều vắc xin bại liệt, hầu hết trẻ bảo vệ phòng bệnh bại liệt VnDoc - Tải tài liệu, văn pháp luật, biểu mẫu miễn phí XÁC ĐỊNH CÔNG HIỆU CỦA VẮC XIN BẠI LIỆT UỐNG Xác định công hiệu (hiệu giá) của vắc xin bại liệt uống gồm 2 nội dung: - Xác định hiệu giá virus trong vắc xin bán thành phẩm (đơn týp). - Xác định hiệu giá virus trong vắc xin thành phẩm (tam liên). Xác định hiệu giá virus trong vắcxin bán thành phẩm (đơn týp) Nguyên tắc Công hiệu của vắc xin phòng bại liệt uống được xác định bởi liều gây huỷ hoại 50% tế bào cảm thụ Hep-2 Cincinnati (CCID 50 ) trong phương pháp vi lượng. Vật liệu Trypsin 0,25%. Môi trường nuôi cấy và duy trì tế bào. Vắc xin bán thành phẩm cần thử Vắc xin mẫu chuẩn đơn giá. Phiến nhựa 96 giếng đáy bằng và các loại dụng cụ vô trùng khác. Tế bào Hep-2 (Cincinnati) Pipet các loại. Tiến hành Pha loãng bậc 10 mẫu chuẩn và vắc xin cần thử từ 10 -1 đến 10 -8 bằng môi trường duy trì tế bào. Cho 0,1ml các đậm độ virus vào mỗi giếng của phiến nhựa, mỗi đậm độ dùng từ 8 đến 10 giếng. Cho 0,1 ml hỗn dịch tế bào chứa 1.10 4 tế bào Hep-2 vào mỗi giếng. Đậy nắp phiến nhựa và cho các phiến nhựa vào tủ CO 2 , nhiệt độ nuôi cấy là 36 0 C trong 7 ngày. Theo dõi Theo dõi sự huỷ hoại của tế bào từ ngày thứ 3 đến ngày thứ 7. Tính kết quả Đọc kết quả cuối cùng vào ngày thứ 7 và xử lý số liệu theo phương pháp thống kê Reed-Muench hoặc Karber Thí nghiệm có giá trị nếu hiệu giá của vắc xin mẫu chuẩn sai số trong vòng 0,5 log10 so với hiệu giá đã biết. Xác định hiệu giá của vắc xin bại liệt uống trong thành phẩm tam liên Nguyên tắc Vắc xin bại liệt uống tam liên bao gồm 3 týp virus bại liệt sống giảm độc, do đó cần xác định hiệu giá của từng týp thành phần (týp 1, týp 2, týp 3) và hiệu giá tổng cả 3 týp (týp1+ týp2 + týp3). Muốn chuẩn độ hiệu giá của từng týp phải dùng kháng huyết thanh (KHT) đặc hiệu để trung hoà 2 týp còn lại. Hiệu giá của vắc xin Sabin được tính bằng lượng virus Sabin gây huỷ hoại 50% tế bào cảm thụ trong 1 liều dùng cho người CCID 50 /0,1ml (CCID 50 Cell Culture Infective Dose). Vật lịệu Môi trường nuôi cấy và duy trì tế bào. Trypsin 0,25% Vắc xin mẫu chuẩn tam liên. Vắc xin thành phẩm tam liên cần thử. Phiến nhựa 96 giếng đáy bằng và các dụng cụ vô khuẩn khác. Tế bào Hep2 (Cincinnati). Kháng huyết thanh polio týp 1, 2, 3 pha theo hiệu giá. Pipet các loại. Các bước tiến hành Pha loãng bậc 0,5 log10 vắc xin mẫu chuẩn và vắc xin thử bằng môi trường duy trì. Pha hỗn dịch kháng huyết thanh số 1 chứa kháng huyết thanh týp 2 và týp 3. Pha hỗn dịch kháng huyết thanh số 2 chứa kháng huyết thanh týp 1 và týp 3. Pha hỗn dịch kháng huyết thanh số 3 chứa kháng huyết thanh týp 1 và týp 2. Cho 0,05 ml/ giếng hỗn dịch kháng huyết thanh số 1 vào phiến số 1 (xác định hiệu giá týp 1). Cho 0,05 ml/ giếng hỗn dịch kháng huyết thanh số 2 vào phiến số 2 (xác định hiệu giá týp 2). Cho 0,05 ml/ giếng hỗn dịch kháng huyết thanh số 3 vào phiến số 3 (xác định hiệu giá týp 3). Cho 0,05 ml/ giếng môi trường duy trì vào tất cả các giếng của phiến số 4 (xác định hiệu giá tổng). Cho 0,05 ml của từng độ pha loãng vắc xin vào các dãy tương ứng của cả 4 phiến, mỗi độ pha loãng gây nhiễm 8 giếng. Bắt đầu gây nhiễm từ độ pha loãng cao nhất. Thêm 0,05 ml môi trường duy trì vào các giếng chứng huyết thanh (SC - serum control) và chứng tế bào (CC- cell control). Đậy nắp phiến cho vào tủ ấm CO 2 . Trong trường hợp để tủ ấm thường thì gói kín trong giấy bạc hoặc trong túi nilông. Ủ ở nhiệt độ 36 0 C trong vòng 3 giờ để virus và kháng huyết thanh đặc hiệu kết hợp với nhau. Chuẩn bị hỗn dịch tế bào Hep-2 nồng độ 1-2 x10 5 / ml rồi cho 0,1 ml hỗn dịch này vào toàn bộ các giếng của cả 4 phiến. Nồng độ này thường đảm bảo tế bào sẽ mọc thành 1 lớp trên phiến trong vòng 2-3 ngày. Đậy nắp phiến rồi cho vào tủ ấm CO 2 . Trong trường hợp để ở tủ ấm thường thì dán kín bằng màng dán phiến (microtest film). Ủ ở 36 O C trong 7 ngày. Theo dõi và tính kết quả Theo dõi sự huỷ hoại của tế bào và tính kết quả như đã trình bầy ở phần trên. Tế bào ở các giếng chứng huyết thanh và chứng tế bào XÁC ĐỊNH ĐỘC TỐ THẦN KINH TỒN DƯ TRONG VẮC XIN BẠI LIỆT UỐNG Khỉ dùng để thử nghiệm có trọng lượng không dưới 1,5 kg. Dùng khỉ loài Macaca hoặc Cercopithecus. Hỗn dịch bán thành phẩm đã lọc phải thử song song với chế phẩm chuẩn bằng cách tiêm vào vùng thắt lưng của tuỷ sống khỉ. Trước khi tiêm phải lấy máu khỉ và kiểm tra để chứng tỏ huyết thanh của chúng không chứa kháng thể trung hoà đối với từng týp virus bại liệt. Những tiêu bản tổ chức học khi đã đọc xong cần phải được lưu lại trong thời gian 10 năm để làm bằng chứng. Số lượng khỉ Vắc xin thử và mẫu chuẩn đồng týp cần thử nghiệm song song với số lượng khỉ bằng nhau. Phân chia ngẫu nhiên nhóm khỉ sẽ được tiêm vắc xin thử hoặc mẫu chuẩn. Phải đạt được ít nhất 11 khỉ dương tính cho vắc xin thử và ít nhất 11 khỉ dương tính cho mẫu chuẩn đối với týp 1 và týp 2 (khỉ dương tính là khỉ có những tổn thương thần kinh đặc hiệu cho virus bại liệt ở hệ thần kinh trung ương). Đối với týp 3 phải có ít nhất 18 khỉ dương tính cho vắc xin thử và 18 khỉ dương tính cho mẫu chuẩn. Có thể tiêm một lúc nhiều loạt vắc xin bán thành phẩm mà chỉ cần 1 mẫu chuẩn đồng týp. Để có thể có được 11 và 18 khỉ dương tính thường là tiêm 12 và 20 khỉ tương ứng. Gây mê khỉ bằng ketamin hydrochlorid hoặc những thuốc gây mê phù hợp khác. Hàm lượng virus của vắc xin thử và mẫu chuẩn trong liều tiêm Hàm lượng virus của vắc xin thử và mẫu chuẩn đồng týp tiêm cho khỉ phải càng giống nhau càng tốt và nằm trong khoảng 10 5,5 - 10 6,5 CCID50/0,1ml. Chỉ tiêm một đậm độ. Theo dõi khỉ sau tiêm Theo dõi khỉ sau tiêm từ 17 đến 22 ngày để phát hiện triệu chứng nghi do virus bại liệt hoặc các virus khác. Những khỉ sống qua 24 giờ và chết trước 11 ngày sau tiêm cần phải giải phẫu để xác định xem có phải chết do virus bại liệt hay không? Tất cả những khỉ chết do những nguyên nhân không phải virus bại liệt thì không tính vào kết quả nhưng vẫn phải ghi vào phiếu theo dõi. Những khỉ liệt nặng hoặc hấp hối và tất cả những khỉ sống qua giai đoạn theo dõi đều phải giải phẫu đại thể và vi thể. Số lượng các tiêu bản phải đánh giá *Phải làm tiêu bản từng con khỉ để kiểm tra tổ chức học ít nhất các vùng sau: Tuỷ sống: Vùng phình lưng, vùng phình cổ. Phần trên và phần dưới của hành tuỷ. Não giữa (mesocephalon). Cầu não, tiểu não. Đồi thị. Vùng vận động của vỏ não. Tiêu bản cắt mỏng 8-15 µm và nhuộm gallocyanin hoặc nhuộm Nissl. *Số tiêu bản tối thiểu phải kiểm tra như sau: 12 tiêu bản đại diện cho vùng phình lưng. 10 tiêu bản đại diện cho vùng phình cổ. 2 tiêu bản vùng hành tuỷ. 1 tiêu bản vùng cầu não và tiểu não. 1 tiêu bản não giữa. Đồi thị phải và trái mỗi bên 1 tiêu bản. Vỏ não bán cầu phải và trái mỗi bên 1 tiêu bản. Cho điểm hoạt tính virus trên tiêu bản Dùng phương pháp cho điểm theo mức độ tổn thương để đánh giá hoạt tính của virus trong từng nửa tiêu bản. Kiểu tổn thương như là thâm nhiễm tế bào hoặc phá huỷ tế bào thần kinh đều quan trọng, các tổn thương được cho điểm như sau: Điểm 1 – Chỉ có thâm nhiễm tế bào (điểm này không đủ để tính là khỉ dương tính). Điểm 2 – Thâm nhiễm tế bào và có huỷ hoại nơron tối thiểu. Điểm 3 – Thâm nhiễm tế bào với huỷ hoại nhiều nơron. Điểm 4 – Hủy hoại nhiều nơron có hoặc không có thâm nhiễm tế bào. Ghi điểm và báo cáo theo biểu mẫu chuẩn. Khỉ có tổn thương nơron nhưng không có vết tiêm vẫn được coi là khỉ (+). Khỉ có vết tiêm trên tiêu bản nhưng không có tổn thương nơron là khỉ (-). Tiêu bản có tổn thương do tiêm nhưng không có tổn thương virus đặc hiệu thì không tính điểm. Đọc và cho điểm từng nửa tiêu bản (NTB) của vùng thắt lưng (L); cổ (C); não (B). Điểm tổn thương của từng con khỉ dương tính được tính như sau: Tổng số điểm L Tổng số điểm C Tổng số điểm B _____________ + ____________ + Chất điều hòa sinh trưởng thực vật là gì và được sử dụng trong nông nghiệp với các mục đích gì? Chất điều hòa sinh trưởng thực vật (còn gọi là các hocmon sinh trưởng) là những chất được sinh ra trong cây để điều khiển các quá trình sinh trưởng phát triển của cây. Trong suốt đời sống, cây phải trải qua nhiều giai đoạn phát triển như nảy mầm, lớn lên, ra hoa, kết quả. Các chất điều hòa sinh trưởng giúp cây tiến hành các giai đoạn này một cách cân đối hài hòa theo đặc tính và quy luật phát triển của cây với liều lượng rất thấp. Mỗi giai đoạn được điều khiển bởi một nhóm chất nhất định. Ở thời kỳ sinh trưởng lớn lên có nhóm chất kích thích sinh trưởng. Tới mức độ nhất định cây tạm ngừng sinh trưởng để chuyển sang thời kỳ phát triển ra hoa, kết quả thì có nhóm chất ức chế sinh trưởng được hình thành. Nhóm chất kích thích sinh trưởng có các chất Auxin, Gibberellin (GA) và Cytokinin. Nhóm chất ức chế sinh trưởng có acid Absicic, Ethylen và các hợp chất Phenol. Hiện nay người ta đã xác định được cấu tạo hóa học của các chất này và đã điều chế được. Ngoài ra còn điều chế được những chất có tác dụng tương tự như các chất điều hòa sinh trưởng sinh ra trong cây để ứng dụng trong sản xuất. Ngày nay, các chất điều hòa sinh trưởng thực vật tổng hợp được ứng dụng trong nông nghiệp ngày càng phổ biến với rất nhiều mục đích. Có thể nêu lên một số mục đích chính thường được ứng dụng như sau: - Kích thích hạt giống nẩy mầm nhanh và đều thường dùng các chất Auxin và GA. - Kích thích ra rễ cho cành chiết, cành giâm: Chất có hiệu quả cao là Auxin. - Kích thích nhanh sự sinh trưởng của cây: Với những cây trồng cần tăng chiều cao như mía, các cây lấy sợi (như đay, gai) thì sử dụng chất GA. Đối với lúa, rau, màu, hoa, cây ăn quả và cây công nghiệp lâu năm có thể dùng Auxin, GA hoặc Cytokinin. - Kích thích ra hoa: Với nhiều loại cây ăn quả như dứa, nhãn, xoài … muốn ra hoa sớm và tập trung thường dùng các chất điều hòa sinh trưởng. Tùy theo loại cây, có thể dùng nhiều chất như Auxin, GA hoặc Etylen, Paclobutrazol. Với mỗi loại cây và mỗi loại chất có cách dùng cụ thể riêng. - Hạn chế rụng hoa, rụng quả: Thường dùng các chất Auxin và GA. - Làm quả mau chín và chín đồng loạt: Chất thường dùng là Ethylen, có thể áp dụng cho các cây ăn quả như xoài, chuối, dứa, sapô, cà chua, ớt. Phun thuốc khi quả đã già hoặc có một vài quả bắt đầu chín. Ngược lại, muốn cho quả chậm chín để kéo dài thời gian thu hoạch có thể dùng chất GA. Với hoa, muốn tươi lâu có thể dùng chất Cytokinin. - Kích thích tiết nhựa của các cây có mủ: Trong ngành cao su thường dùng thuốc Ethrel bôi lên miệng cạo để kích thích ra mủ, tăng sản lượng mủ. - Điều khiển sự phát sinh rễ và chồi trong kỹ thuật nuôi cấy mô: Trong môi trường nuôi cấy thường phải cho một tỷ lệ thích hợp giữa Auxin và Cytokinin để tạo thành một cây hoàn chỉnh, cân đối đủ cả rễ, thân và lá. Trong đó, Auxin kích thích ra rễ, còn Cytokinin kích thích ra chồi. Ngoài ra, còn được ứng dụng với nhiều mục đích khác như kích thích hoặc kìm hãm nẩy mầm của củ giống (khoai, hành, tỏi), kích thích ra nhiều hoa đực hoặc hoa cái (dưa, bầu, bí), tạo quả ít hoặc không hạt (nho, cam, chanh, cà chua, dưa), làm rụng lá để dễ thu hoạch (đậu, bông), làm cây thấp lại để tăng mật độ trồng (bông vải), tạo dáng cho cây cảnh… Có thể nói các chất điều tiết sinh trưởng BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI - Trần Thị Phƣơng Thảo NGHIÊN CỨU SẢN XUẤT MẪU CHUẨN VẮC XIN BẠI LIỆT UỐNG SỬ DỤNG TRONG KIỂM ĐỊNH VẮC XIN OPV TẠI VIỆT NAM LUẬN VĂN THẠC SĨ KỸ THUẬT Chuyên ngành: Công nghệ sinh học NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: GS.TS LÊ THỊ LUÂN PGS TS TRƢƠNG QUỐC PHONG Hà Nội - Năm 2015 Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận văn “Nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn Vắc xin Bại liệt uống sử dụng kiểm định vắc xin OPV Việt Nam” công trình nghiên cứu nhóm nghiên cứu sản xuất mẫu chuẩn vắc xin OPV thuộc Trung tâm nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế thực dƣới hƣớng dẫn GS.TS Lê Thị Luân TS.Trƣơng Quốc Phong Tôi nhận đƣợc đồng ý trƣởng nhóm tất thành viên nhóm nghiên cứu việc công bố nội dung thực kết thu đƣợc Các nội dung nghiên cứu kết đƣợc trình bày luận văn trung thực rõ ràng Học viên Trần Thị Phƣơng Thảo Xác nhận quan (Trung tâm Nghiên cứu sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế) Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến GS.TS Lê Thị Luân, phó giám đốc Trung tâm nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế tận tình giúp đỡ em suốt thời gian nghiên cứu để hoàn thành khóa luận Em xin chân thành cảm ơn TS Trƣơng Quốc Phong, Trung tâm Nghiên cứu phát triển Công nghệ sinh học, Viện Công nghệ sinh học Công nghệ thực phẩm, Trƣờng Đại học Bách Khoa Hà Nội, tận tình bảo cho em suốt trình làm luận văn Em xin cảm ơn thầy cô môn Công nghệ Sinh học Công nghệ thực phẩm, trƣờng Đại học Bách Khoa Hà Nội truyền đạt kiến thức cho em trình học tập rèn luyện Trong thời gian học tập nghiên cứu nhận đƣợc dạy tận tình đầy trách nhiệm tập thể cán nghiên cứu thuộc Trung tâm nghiên cứu sản xuất vắc xin sinh phẩm y tế, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Cuối cùng, cho phép gửi lời cảm ơn chân thành tới gia đình, bạn bè quan tâm, cổ vũ cho vững bƣớc đƣờng học tập nghiên cứu Hà Nội, tháng năm 2015 Học viên Trần Thị Phƣơng Thảo Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 CÁC CHỮ VIẾT TẮT ARN Axit Ribonucleic CCID50 FBS Cell Culture Infective Dose 50 (liều gây hủy hoại 50% tế bào) Fetal Bovin serum (huyết bê bào thai) GM Growth Medium (Môi trƣờng phát triển) GMP Hep2C Good Manufacture Practice (Thực hành sản xuất tốt) Tế bào ung thƣ quàn ngƣời IgA Imuno globulin A IgG IgM LH Imuno globulin G Imuno globulin M Lactalbumin Hydrolysate LH3E LHE LM MCB MEM MS Lactabumine Hydrolysate 0,5% đệm Earle Lactabumine Hydrolysate 0,5% đệm Hanks Liquid medium Master Cell Bank (ngân hàng tế bào gốc) Minimum Essential Medium (Môi trƣờng cần thiết tối thiểu) Master Seed (chủng giống gốc) PBS Phospate Buffer Solution Center for Research and Production of Vaccines and Biologicals POLYVAC TCMR TGC TKTP SCD VLP VP (Trung tâm Nghiên cứu, sản xuất Vắc xin Sinh phẩm Y tế) Tiêm chủng mở rộng Thioglycolate Tế bào thận khỉ tiên phát Soybean Casein Digest Virus like particle Virus protein Vero WHO/ TCYTTG Tế bào thận khỉ Cercopithecus aethiops World Health Organization / Tổ chức y tế giới Luận văn thạc sĩ Trần Thị Phương Thảo – CB130717 Mục lục MỞ ĐẦU Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 Các nguyên tắc chung sản xuất vắc xin mẫu chuẩn 1.1.1 Mẫu chuẩn quốc tế 1.1.2 Mẫu chuẩn quốc gia 1.2 Vắc xin mẫu chuẩn Bại liệt 1.2.1 Vi rút Bại liệt 1.2.2 Vắc xin Bại liệt 1.2.3 Tình hình nghiên cứu sản xuất sử dụng vắc xin mẫu chuẩn Bại liệt 11 1.2.4 Tiêu chuẩn sở cho vắc xin mẫu chuẩn bại liệt 13 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Vật liệu 15 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 2.2.1 Phƣơng pháp sản xuất vắc xin 16 2.2.2 Phƣơng pháp kiểm tra chất lƣợng cho mẫu chuẩn vắc xin Bại liệt 24 2.2.2.1 Quan sát trạng thái 25 2.2.2.2 Kiểm tra vô trùng 26 2.2.2.3 Kiểm tra Mycoplasma 27 2.2.2.4 Chuẩn độ hiệu giá vắc xin thành phẩm OPV 28 2.2.2.5 Thử nghiệm nhận dạng 34 ... tuổi Vắc xin bại liệt có phản ứng phụ nào? So với vắc xin tuýp vắc xin có tác dụng phụ khác khơng? Sử dụng vắc xin bại liệt uống 50 năm qua quy mơ tồn cầu 30 năm Việt Nam cho thấy vắc xin an toàn... bại liệt vắc xin trong thời gian qua? Việc bảo quản vắc xin bại liệt uống tuýt (1 3) tương tự vắc xin bại liệt uống trước Vắc xin bảo quản nhiệt độ từ 2-8 độ C Tôi khẳng định vắc xin bại liệt... triển nhanh, 3-4 ngày trẻ bị liệt Những trường hợp qua khỏi để lại di chứng liệt su t đời, hồi phục Số lượng vắc xin tiêm cho trẻ có bảo đảm cung ứng đủ? Liệu có xảy tình trạng khan vắc xin bại