BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM o0o HOÀNG THỊ ÁNH NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN QUY TRÌNH TIỀN XỬ LÝ VÀ CHIẾT LUTEIN ESTER TỪ HOA CÚC VẠN THỌ (TAGETES ERECTA L.) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ KỸ THUẬT HÓA HỌC Nha Trang, tháng 07 năm 2017 BỘ GIÁO DỤC & ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM o0o HOÀNG THỊ ÁNH NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN QUY TRÌNH TIỀN XỬ LÝ VÀ CHIẾT LUTEIN ESTER TỪ HOA CÚC VẠN THỌ (TAGETES ERECTA L.) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH : CÔNG NGHỆ KỸ THUẬT HÓA HỌC GVHD: TS HOÀNG THỊ HUỆ AN Nha Trang, tháng 07 năm 2017 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các kết quả, số liệu nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Người cam đoan HOÀNG THỊ ÁNH ii LỜI CẢM ƠN Sau ba tháng làm đề tài tốt nghiệp “Nghiên cứu hoàn thiện quy trình tiền xử lý chiết lutein ester từ hoa cúc vạn thọ Tagetes erecta L.” đến đề tài hoàn thành Để đề tài đạt kết tốt đẹp, nhận hỗ trợ, giúp đỡ nhiều quý thầy cô, bạn bè gia đình Với tình cảm sâu sắc, chân thành, cho phép bày tỏ lòng biết ơn đến thầy cô, bạn bè gia đình tạo điều kiện giúp đỡ trình học tập nghiên cứu đề tài Trước hết, xin gửi lời cảm ơn đến Ban Giám hiệu, Ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Thực phẩm, quý thầy cô giảng viên Bộ môn Công nghệ Kỹ thuật Hóa học - Trường Đại học Nha Trang tạo điều kiện sở vật chất, cung cấp cho kiến thức kĩ cần thiết suốt thời gian học tập trường, giúp đỡ hoàn thành chương trình đào tạo cử nhân ngành Công nghệ Kĩ thuật Hóa Học in chân thành cảm ơn cán ph trách Phòng Th nghiệm Hoá Trung tâm Th nghiệm – Thực hành tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi sở vật chất, trang thiết bị, giúp hoàn thành tốt đ án chuyên ngành Đặc biệt, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc đến TS HOÀNG THỊ HUỆ AN tài trợ toàn nguyên vật liệu th nghiệm, tận tình trực tiếp hướng dẫn, động viên suốt trình thực đề tài nghiên cứu, giúp nâng cao kiến thức chuyên môn hoàn thành tốt đ án tốt nghiệp Cuối chân thành tri ân gia đình, bạn bè luôn bên cạnh quan tâm, hỗ trợ suốt thời gian học tập hoàn thành đ án Nha Trang, ngày 04 tháng năm 2017 Sinh viên thực HOÀNG THỊ ÁNH iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG vii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ viii MỞ ĐẦU Chƣơng 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan hoa cúc vạn thọ 1.1.1 Ngu n gốc 1.1.2 Đặc điểm hình thái 1.1.3 Phân loại CVT 1.1.4 Hoạt t nh sinh học ứng d ng CVT 1.1.4.1 Hoạt t nh sinh học 1.1.4.2 Ứng d ng 1.2 Tổng quan lutein lutein ester 1.2.1 Tổng quan lutein 1.2.1.1 Cấu trúc phân tử 1.2.1.2 Tính chất vật lí tính chất hóa học 1.2.1.3 Hoạt t nh sinh học 1.2.1.4 Ứng d ng lutein 1.2.2 Tổng quan lutein ester 11 1.2.2.1 Cấu trúc phân tử 11 1.2.2.2 T nh chất vật l t nh chất hóa học 12 1.2.2.3 Hoạt t nh sinh học ứng d ng 13 1.2.3 Các ngu n lutein lutein ester có tự nhiên 14 iv 1.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình chiết 14 1.4 Phƣơng pháp xử lý hoa CVT Viscozym 17 1.4.1 Sự cần thiết phải xử lý hoa CVT trước chiết 17 1.4.2 Phương pháp chiết lutein ester từ hoa CVT xử lý enzyme 18 1.5 Tình hình nghiên cứu liên quan đến đề tài 18 1.5.1 Tình hình nghiên cứu giới 18 1.5.2 Tình hình nghiên cứu nước 21 Chƣơng 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 24 2.1.1 Nguyên liệu CVT 24 2.1.2 Hóa chất 24 2.2 Dụng cụ thiết bị 24 2.2.1 D ng c 24 2.2.2 Thiết bị 25 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 25 2.3.1 Chuẩn bị nguyên liệu CVT trước chiết 25 2.3.2 Nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện xử lý hoa cúc vạn thọ Viscozym 25 2.3.2.1 Quy trình tổng quát trình xử lý đánh giá hiệu xử lý hoa cúc vạn thọ Viscozym 25 2.3.2.2 Nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện xử lý hoa CVT Viscozym 28 2.3.3 Nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện chiết hoa cúc vạn thọ xử lý Viscozym 30 2.3.3.1 Quy trình tổng quát đánh giá hiệu chiết carotenoid từ hoa cúc vạn thọ xử lý Viscozym 30 v 2.3.3.2 Nghiên cứu tối ưu hóa điều kiện chiết carotenoid từ hoa CVT xử lý Viscozym 32 2.3.4 Thử nghiệm quy trình 33 2.4 Phƣơng pháp phân tích 34 2.4.1 Phân t ch thành phần nguyên liệu cúc vạn thọ 34 2.4.1.1 ác định độ ẩm 34 2.4.1.2 Định lượng carotenoid tổng số 34 2.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 34 Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 Một số thành phần hóa học hoa tƣơi nguyên liệu 35 3.2 Kết tối ƣu hóa điều kiện xử lí hoa cúc vạn thọ Viscozym 35 3.3 Kết tối ƣu hóa điều kiện chiết carotenoid 43 3.4 Xây dựng quy trình tối ƣu chiết lutein từ hoa cúc vạn thọ 51 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 PHỤ LỤC I vi DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Tiếng anh Tiếng Việt CVT Marigold flower Cúc vạn thọ A Absorbance Độ hấp th Age – related macular Bệnh thoái hóa điểm vàng degeneration liên quan tuổi già BHT Butylated Hydroxytoluen Butylat Hydroxytoluen CCF Central Composite Face Thiết kế cấu trúc tâm mặt D Dilution factor Hệ số pha loãng FDA Food and Drug Administration RSM Response Surface Method UV – Vis Ultraviolet – Visible AMD C c quản lý thực phẩm dược phẩm Phương pháp bề mặt đáp ứng Tử ngoại khả kiến Dung môi/nguyên liệu DM/NL v/v Volume/volume Thể t ch/thể t ch v/w Volume/weight Thể t ch/khối lượng w/w Weight/weight Khối lượng/khối lượng rpm Round per minute Vòng/phút vii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Một số tính chất vật lý lutein Bảng 1.2 Hàm lượng lutein có rau 14 Bảng 2.1 Quy hoạch thực nghiệm tối ưu hóa điều kiện xử l Viscozym theo mô hình bậc phương án CCF 29 Bảng 2.2 Quy hoạch thực nghiệm tối ưu hóa điều kiện chiết carotenoid theo mô hình bậc phương án CCF 33 Bảng 3.1 Hàm lượng carotenoid tổng số độ ẩm nguyên liệu 35 Bảng 3.2 Kết tối ưu hóa điều kiện xử lý hoa CVT Viscozym 36 Bảng 3.3 Kết phân t ch ANOVA ảnh hưởng điều kiện xử lý Viscozym đến hiệu suất xử lý 37 Bảng 3.4 Các hệ số phương trình h i quy mô tả ảnh hưởng điều kiện xử lý hoa CVT Viscozym đến hiệu suất xử lý 38 Bảng 3.5 Kết tiên đoán điều kiện tối ưu xử lý Viscozym 42 Bảng 3.6 Chi phí enzyme hexane ứng với phương án 43 Bảng 3.7 Kết tối ưu hóa điều kiện chiết carotenoid từ hoa CVT xử lý Viscozym 44 Bảng 3.8 Kết phân t ch ANOVA ảnh hưởng điều kiện chiết đến hiệu suất chiết 45 Bảng 3.9 Các hệ số phương trình h i quy mô tả ảnh hưởng điều kiện chiết đến hiệu suất chiết carotenoid 46 Bảng 3.10 Kết tiên đoán điều kiện tối ưu chiết carotenoid từ hoa CVT xử lý Viscozym 50 Bảng 3.11 Tiên đoán hiệu suất chiết 50 độ C sau 1,2,3 lần chiết chi ph dự kiến 51 Bảng 3.12 Hiệu suất chi ph tiêu tốn để chiết lutein ester mẫu lớn 54 viii DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ VÀ ĐỒ THỊ Hình 1.1 Hoa cúc vạn thọ Mỹ Hình 1.2 Cấu tạo phân tử lutein dạng đ ng phân all-trans) Hình 1.3 Cấu tạo phân tử lutein ester 12 Hình 1.4 N ng độ lutein lutein ester huyết 13 Hình 2.1 Sơ đ quy trình tổng quát xử lý đánh giá hiệu xử lý hoa cúc vạn thọ Viscozym 26 Hình 2.2 Mô hình thực nghiệm theo phương án cấu trúc tâm mặt CCF 30 Hình 2.3 Sơ đ quy trình tổng quát đánh giá hiệu chiết carotenoid từ hoa cúc vạn thọ xử lý Viscozym 31 Hình 3.1 Ảnh hưởng n ng độ Viscozym (C-Vis , tỷ lệ dịch Viscozym/nguyên liệu Vis/NL thời gian xử lý Time đến hiệu xử lý hoa CVT 39 Hình 3.2 Ảnh hưởng n ng độ Viscozym (C-Vis tỷ lệ dịch Viscozym/nguyên liệu Vis/NL đến hiệu xử lý 40 Hình 3.3 Ảnh hưởng n ng độ Viscozym C-Vis thời gian xử lý Time đến hiệu xử lý 40 Hình 3.4 Ảnh hưởng tỷ lệ dịch Viscozym/nguyên liệu Vis/NL thời gian xử lý Time đến hiệu chiết carotenoid từ hoa CVT 40 Hình 3.5 Các bề mặt đáp ứng mô tả ảnh hưởng n ng độ Viscozym (C-Vis tỷ lệ dịch Viscozym/nguyên liệu Vis/NL đến hiệu chiết carotenoid từ hoa CVT 41 Hình 3.6 Các bề mặt đáp ứng mô tả ảnh hưởng n ng độ Viscozym (C-Vis thời gian chiết Time đến hiệu chiết carotenoid từ hoa CVT 41 Hình 3.7 Các bề mặt đáp ứng mô tả ảnh hưởng tỷ lệ dịch Viscozym/nguyên liệu Vis/NL thời gian chiết Time đến hiệu chiết carotenoid từ hoa CVT 41 54  Điều kiện 2: Thêm Viscozym 1,0% v/v; 0,85 v/w, ủ 4h30 phút Sau rửa bỏ enzyme, thêm EtOH 1/1 v/w ngâm 15 phút , hút bỏ dịch EtOH Chiết 50oC; 24 h, lần  Điều kiện 3: Thêm Viscozym 1,7% v/v; 1,1 v/w, ủ h Sau rửa bỏ enzyme, thêm EtOH 1/1 v/w ngâm 15 phút , hút bỏ dịch EtOH Chiết 30oC; 18 h, lần  Mẫu đối chứng không xử lý enzyme: Thêm EtOH 1/1 v/w ngâm 15 phút , hút bỏ dịch EtOH Chiết 50oC; 24 h, lần Hiệu suất chiết lutein trung bình chi ph enzyme hexane trình bày bảng 3.12 xem thêm ph l c Bảng 3.12 Hiệu suất chi phí tiêu tốn để chiết lutein ester mẫu lớn Mẫu đối Mẫu thí nghiệm Điều kiện Điều kiện Điều kiện chứng Mẫu 90,14 86,47 90,03 6,92 Mẫu 91,17 88,48 96,42 7,14 Mẫu 86,32 87,60 100,02 6,88 89,21 87,52 95,49 6,98 3,405 9,227 15,607 24,396 Hiệu suất chiết trung bình (%) Chi ph triệu VNĐ/kg carotenoid) Như vậy, kết thử nghiệm mẫu lớn phù hợp với kết tiên đoán từ mô hình lý thuyết 55 Việc t nh toán sơ chi ph thu nhận carotenoid từ hoa CVT phương pháp xử lý enzyme khác cho thấy điều kiện xử lý Viscozym 0,89% v/v, tỷ lệ 0,2 v/w, ủ h cho hiệu kinh tế cao a) Viscozym 1,7% v/v, 1,1/1 v/w Chiết 300C (18 h/lần x lần c) Viscozym 0,89% v/v; 0,2/1 v/w Chiết 50 C 24 h/lần x lần b) Viscozym 1,0% v/v, 0,85/1 v/w Chiết 500C 24 h/lần x lần d Không xử lý Viscozym Chiết 500C 24 h/lần x lần Hình 3.16 Dịch chiết carotenoid ứng với điều kiện xử lý enzyme chiết carotenoid khác 56 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ  Kết luận Từ kết thu rút kết luận sau: Các điều kiện tối ưu xử lý hoa CVT Viscozym - N ng độ Viscozym 0,89% v/v - Tỷ lệ dd Viscozym/nguyên liệu 0,2 v/w (tức: 0,2 lít/kg) - Thời gian xử lý h Các điều kiện tối ưu chiết carotenoid từ hoa CVT: - Nhiệt độ chiết: 50oC - Thời gian chiết: 24 h - Chiết lần  Kiến nghị: Thử nghiệm quy trình xử l Viscozym chiết carotenoid quy mô pilot, nhằm kiểm chứng điều kiện tối ưu rút ứng d ng thực tiễn sản xuất hiệu 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Hoàng Thị Huệ An 2007 , Phân lập tinh chế lutein từ hoa cúc vạn thọ dùng làm chất chuẩn sắc ký lỏng hiệu cao, Tạp ch Khoa học Công nghệ, 45(1B), pp 47-52 Hoàng Thị Huệ An 2009 , Nghiên cứu tách chiết tinh chế lutein từ hoa cúc vạn thọ Tagetes erecta L tr ng tỉnh Khánh Hòa, Đề tài NCKH cấp Bộ 2007-2009) Hoàng Thị Huệ An, Nguyễn Văn Hòa 2011 , Xây dựng quy trình tách chiết tinh chế lutein từ hoa cúc vạn thọ Tagetes erecta L tr ng tỉnh Khánh Hòa, Kỷ Yếu Hội thảo Khoa học lần thứ II, Khoa Khoa học Tự nhiên, Trường Cao đẳng Sư phạm Nha Trang, pp 87–93 Hoàng Thị Huệ An 2015 , ây dựng quy trình công nghệ quy mô phòng th nghiệm thu nhận lutein từ hoa cúc vạn thọ Tagetes erecta L., ứng d ng làm chất màu thực phẩm, Báo cáo đề tài NCKH cấp tỉnh, Sở KH&CN tỉnh Khánh Hòa Tiếng Anh Alves-Rodrigues, A (2004), Absorption of Lutein vs lutein esters: we know the differences, Kemin Health, USA, pp 1–5 Bowen E., Clark P., (2001), Lutein esters having high bioavailability, U.S.Patent Document, pp 3–7 Ezhil, J, Jeyanthi, C, Narayanan, M, (2008), Marigold as a carotenoid source on pigmentation and growth of red swordtail, Xiphophorus helleri, Turkish Journal of Fisheries and Aquatic Sciences, 8: 99–102 58 He, R-R, Tsoi, B, Lan, F, Yao, N, Yao, X-S, Kurihara, H, (2011), Antioxidant properties of lutein contribute to the protection against lipopolysaccharide-incluced uveitis in mice, Chinese Medicine JECFA 2004 , “LUTEIN from TAGETES ERECTA”, Vol 4: 1–4 10 Kumar, S T K., Abdnlkadir; S.P., Sebastian, S (2004), Process for the preparation of xanthophyll crystals, US Patent: 6,743,953 B2 11 Kale, S, Gaikwad, M, Bhandare, S, (2011), Determination and comparison of in vitro SPF of topical formulation containing Lutein ester from Tagetes erecta L flowers, Moringa oleifera Lam seed oil containing Lutein ester, International Journal of Research in Pharmaceutical and Biomedical Sciences, Vol (3):1220–1223 12 Levy, L W., (2001), Trans- xanthophyll ester concentrates of enhanced purity and methods of making the same, US Patent: 6,191,293 B1 13 Philip, T (1977), Purification of lutein-fatty acid esters from plant materials, US Patent: 4,048,203 14 Peter Amala Sujith, A, Hymavathi, TV, Yasoda Devi, P, (2010), Supercritical Fluid Extraction of Lutein Esters from Marigold Flowers and their Hydrolysis by Improved Saponification and Enzyme Biocatalysis, International Journal of Biological and Life Sciences, pp 67–75 15 Serena Lim Sue Lynn, (2003), A study on the extraction of lutein from selected locally grown vegetation, Faculty of Chemical and Natural Resources, University of Engineering and Technology Malaysia, pp 1– 50 16 S Madavalapil, K P (2009), Isolation and purification of carotenoids from Marigold flowers, US Patent: 7,622,599 B2 59 17 Swaminathan, S., Madavalapil, K P (2009), Isolation and purification of carotenoids from Marigold flowers, US Patent: 7,622,599 B2 Internet 18 http://allchems.com/tin-tuc/vai-tro-cua-phu-gia-thuc-pham truy cập ngày 4/4/2017 19.http://benhthiluc.com/tin-tuc/lutein-va-zeaxanthin-bao-ve-mat-tu-bentrong (truy cập ngày 5/5/2017) 20.http://cayhoacanh.com/cay-cuc-van-tho (truy cập ngày 13/4/2017) 21.http://cinehome.vn/tin-tuc/can-trong-voi-pham-mau-thuc-pham-gayroi-loan-hanh-vi-o-tre-c42260.html (truy cập ngày 11/4/2017) 22.http://goodliving.vn/2013/03/cac-loai-chat-tao-mau-thuc-pham (truy cập ngày 2/4/2017 23.https://ungthuvietnam.com/phong-ngua-ung-thu/phong-chong-ungthu/thuc-pham-giup-ngan-ngua-ung-thu-hieu-qua-khi-troi-lanh.html (truy cập ngày 3/5/2017) 24.https://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_C%C3%BAc_v%E1%BA%A1n_th% E1%BB%8D (truy cập ngày 25/4/2017) 25 http://www.abpharma.vn/chi_tiet/50/10-hoa-chat-doc-hai-co-mattrong-thuc-pham.html (truy cập ngày 7/4/2017 26 http://www.hoasaigon.com.vn/hoa-tuoi/y-nghia-cac-loai-hoa/y-nghiava-cong-dung-dac-trung-cua-cuc-van-tho.html 21/4/2017) (truy cập ngày I PHỤ LỤC Phụ lục Phƣơng pháp xác định độ ẩm hoa CVT  Nguyên tắc: Làm bay nguyên liệu đến khối lượng không đổi tủ sấy nhiệt độ 105 ± 5oC Dựa vào khối lượng mẫu phân t ch trước sau sấy, t nh toán xác đinh độ ẩm theo công thức: % H 2O  100  A B 100% G đó: X: độ ẩm nguyên liệu, % A: tổng khối lượng mẫu cốc khô trước sấy hoa g B: tổng khối lượng mẫu cốc khô sau sấy hoa g G: khối lượng mẫu hoa tươi đem sấy  Tiến hành: - Chuẩn bị cốc sấy: Sấy cốc thủy tinh nhiệt độ 105 5oC 3h, để nguội bình hút ẩm r i đem cân Quá trình sấy cân tiến hành lặp lại kết lần cân liên tiếp có khác biệt không vượt 0,2mg - Phân t ch mẫu: Cân ch nh xác cân phân t ch mẫu hoa tươi, mẫu khoảng 1g cho vào cốc thủy tinh sấy khô Đặt cốc thủy tinh vào tủ sấy nhiệt độ 105 5oC 3h, sau lấy mẫu để nguội bình hút ẩm r i đem cân Thao tác sấy cân lặp lại kết lần cân liên tiếp chênh lệch không 0,2 mg II Phụ lục Xác định hàm lƣợng lutein tổng số phƣơng pháp đo quang UV-Vis Tiến hành: Bước 1: Chiết carotenoid từ nguyên liệu acetone Cân ch nh xác G g hoa cúc vạn thọ 0,5  g hoa tươi; hay 0,02  0,05g hoa sấy khô cho vào cốc thủy tinh 50 ml hay ống chiết mẫu Nếu nguyên liệu khô, làm ẩm vài ml nước cất, để yên 30 phút Tiến hành chiết carotenoid cách đ ng hóa mẫu phút với 20 ml acetone lạnh chứa 0,1% BHT dùng máy đ ng hóa Gạn lấy dịch chiết qua phễu lọc có nh i t vải cuống phễu Lặp lại trình chiết với bã lại cốc thêm vài lần khoảng 6-7 lần đến lúc dịch chiết màu Dùng acetone tráng phễu lọc đến lúc hết màu vàng Gộp tất lượng dịch chiết dịch tráng rửa phễu lọc acetone cho vào phễu chiết có chứa sẵn 20 ml hexane Bước 2: Chiết carotenoid từ acetone sang hexane Thêm nước cất vào phễu chiết đến thấy hỗn hợp tách thành lớp rõ rệt, đảo nhẹ Chú ý: cho nước cất chảy từ từ theo thành phễu chiết lắc nhẹ phễu để tránh tạo nhũ tương Cẩn thận tách lấy pha nước bên cho vào bình nón 250 ml Lớp lutein màu vàng pha hexane bên để yên phễu chiết Nếu thấy pha nước màu vàng lặp lại trình chiết lutein từ pha nước thêm vài lần lúc thấy lớp dịch chiết hexane thu bên gần không màu dùng phễu chiết thứ Sau lần chiết lại gộp dịch chiết lutein vào phễu chiết Bước 3: Loại bỏ tạp chất tan nước có dịch chiết hexane Thêm nước cất vào phễu chiết thể t ch tương đương thể t ch pha hexane , đảo nhẹ, để yên cho tách lớp hoàn toàn Lặp lại trình rửa nước cất thêm lần ả bỏ lớp nước bên III Lọc chiết hexane qua lớp Na2SO4 khan r i cho vào bình định mức Vml 50 ml hay 100 ml , định mức hexane Bước 4: Đo quang – Tính kết Pha loãng dịch chiết carotenoid bình định mức hexane với hệ số pha loãng D th ch hợp cần r i đo độ hấp th 445 nm quang kế UV-Vis dùng hexane làm dung dịch so sánh Hàm lượng carotenoid tổng số quy lutein tổng số xác định công thức : A.V D.10 Lu(mg / kg)  1% E1cm L.G (1.2) đó: A: độ hấp th dung dịch đo quang; L : bề dày cuvet V: thể t ch định mức ban đầu D: hệ số pha loãng 1% E1cm = 2550, hệ số hấp th dung dịch lutein 1% w/v dung môi hexane đo với cuvet cm G g : khối lượng mẫu phân t ch IV Phụ lục Hàm lƣợng lutein tổng số hàm lƣợng nƣớc hoa cúc vạn thọ tƣơi  Bảng PL3.1 Hàm lƣợng lutein tổng số có hoa cúc vạn thọ tƣơi Ký Mẫu hiệu (g) mẫu A A A (lần (lần (lần 1) 2) 3) Carotenoid Carotenoid Atb D TS (mg/kg, TS (mg/kg, wwb) dwb) CAR-1 1,0000 0,270 0,272 0,270 0,271 2000 2123 14107 CAR-2 1,0000 0,277 0,272 0,272 0,274 2000 2146 14264 CAR-3 1,0000 0,270 0,271 0,272 0,271 2000 2125 14125 TB 0,272 2132 14165 RSD 0,605 0,61 0,61  Bảng PL3.2 Hàm lƣợng nƣớc hoa cúc vạn thọ tƣơi Ký hiệu Mẫu Cốc + Mẫu sấy %H2 % (g) (g) O TLK 1,0003 29,7387 85,29 14,71 1,0000 30,0635 85,00 15,00 1,0001 28,8383 84,56 15,44 TB 84,95 15,05 RSD 0,43 2,45 mẫu Cốc (g) 29,591 29,913 28,683 V Phụ lục Kết tối ƣu hóa điều kiện xử lý nguyên liệu CVT Viscozym Bảng PL4.1 Kết tối ƣu hóa điều kiện xử lý hóa CVT Viscozym (chiết lần 1) X2 X3, KL A A A (lần (lần (lần Y1(% Car TS chiết Xử A tb (mg/kg,wwb) lý) 0,453 0,451 88 4,15 0,351 0,350 0,351 688 32,26 0,360 0,360 0,360 0,360 71 3,31 5000 0,360 0,363 0,363 0,362 710 33,30 10 500 0,460 0,460 0,460 0,460 90 4,23 10 5000 0,385 0,385 0,385 0,385 755 35,41 1,00 10 500 0,237 0,234 0,234 0,235 46 2,16 1,00 1,00 10 5000 0,666 0,666 0,666 0,666 1306 61,26 N9 0,00 0,60 10 500 0,436 0,437 0,437 0,437 86 4,02 N10 1,00 0,60 10 5000 0,560 0,561 0,561 0,561 1099 51,57 N11 0,50 0,20 10 5000 0,366 0,366 0,366 0,366 718 33,67 N12 0,50 1,00 10 5000 0,423 0,422 0,423 0,423 829 38,88 N13 0,50 0,60 10 5000 0,263 0,263 0,263 0,263 516 24,19 N14 0,50 0,60 10 5000 0,320 0,320 0,323 0,321 629 29,53 N15 0,50 0,60 10 5000 0,331 0,331 0,331 0,331 649 30,45 N16 0,50 0,60 10 5000 0,310 0,312 0,312 0,311 610 28,64 N17 0,50 0,60 10 5000 0,320 0,323 0,322 0,322 631 29,59 Exp X1(C- (Vis/NL, Time hoa Name Vis,%v/v) l/kg) (h) (g) D 1) 2) 3) N1 0,00 0,20 10 500 0,447 0,452 N2 1,00 0,20 10 5000 0,351 N3 0,00 1,00 10 500 N4 1,00 1,00 10 N5 0,00 0,20 N6 1,00 0,20 N7 0,00 N8 VI Bảng PL4.2 Kết tối ƣu hóa điều kiện xử lý hóa CVT Viscozym (chiết lần 2) X2 m A A A Exp X1(C- (Vis/NL, hoa (lần (lần (lần Name Vis,%v/v) m Time (g) D 1) 2) 3) N1 0,00 0,20 10 1000 0,144 0,145 N2 1,00 0,20 10 1000 0,828 N3 0,00 1,00 10 1000 N4 1,00 1,00 10 N5 0,00 0,20 N6 1,00 0,20 N7 0,00 N8 Car TS chiết Y1(% A tb (mg/kg,wwb) Xử lý) 0,145 0,145 57 2,66 0,827 0,829 0,828 325 15,23 0,128 0,127 0,128 0,128 50 2,35 1000 0,842 0,840 0,841 0,841 330 15,47 10 1000 0,195 0,196 0,197 0,196 77 3,61 10 10000 0,128 0,126 0,127 0,127 498 23,36 1,00 10 1000 0,104 0,105 0,106 0,105 41 1,93 1,00 1,00 10 10000 0,122 0,123 0,124 0,123 482 22,63 N9 0,00 0,60 10 1000 0,154 0,155 0,155 0,155 61 2,85 N10 1,00 0,60 10 10000 0,130 0,131 0,130 0,130 511 23,98 N11 0,50 0,20 10 10000 0,130 0,131 0,132 0,131 514 24,10 N12 0,50 1,00 10 10000 0,149 0,150 0,151 0,150 588 27,60 N13 0,50 0,60 10 1000 0,794 0,793 0,793 0,793 311 14,60 N14 0,50 0,60 10 10000 0,119 0,118 0,119 0,119 465 21,83 N15 0,50 0,60 10 10000 0,120 0,121 0,120 0,120 472 22,14 N16 0,50 0,60 10 10000 0,101 0,100 0,101 0,101 395 18,52 N17 0,50 0,60 10 10000 0,110 0,109 0,111 0,110 431 20,24 VII Phụ lục Bảng PL5.1 Tiên đoán điều kiện xử lý Viscozym ảnh hƣởng đến hiệu suất chiết carotenoid chi phí dự kiến Chi phí xử Lƣợng Chi phí Chi phí lý carotenoid Chi phí xử V- Viscozym hexane chiết TS chiết lý chiết H2O (triệu (triệu kg hoa đƣợc (kg 1kg % V-Vis (lit/kg VNĐ/kg VNĐ/kg (triệu car /kg carotenoid Time XL (ml/kg) hoa) hoa) hoa) vnd) hoa) (triệu vnd) 0,854 4,48 80,36 8,54 0,85 0,0188 0,005 0,0238 0,0017 13,882 0,200 3,87 65,50 1,78 0,20 0,0039 0,005 0,0089 0,0014 6,392 C- Vis/N Vis L 1,00 0,89 Bảng PL5.2 Tiên đoán hiệu suất chiết 500C sau 1, 2, lần chiết chi phí dự kiến Tổng chi Chi Tổng Carotenoid phí chiết V- Chi phí phí chi TS chiết 1kg Số Hiệu V-Vis Hexane Viscozym Hx phí đƣợc (kg carotenoid Nhiệt Thời lần suất (ml/kg (lit/kg (triệu (triệu (triệu car /kg (triệu độ gian chiết chết CVT) CVT) vnd) vnd) vnd) hoa) vnd) 50 24 90,18 1,78 0,15 0,0039 0,0075 0,0114 0,001923 5,938 50 24 98,91 1,78 0,30 0,0039 0,015 0,0189 0,002109 8,970 50 24 103,37 1,78 0,45 0,0039 0,0225 0,0264 0,002204 11,987 VIII Phụ lục Bảng PL6.1 Kết kiểm tra thực nghiệm (mẫu xử lý Viscozym 0,89 %) Hiệu lutein chiết suất đƣợc (mg/ kg chiết Mẫu G (g) A1 A2 A3 Atb D V(ml) hoa tƣơi) (%) 1000 0,615 0,613 0,612 0,613 1100 1000 2646 90,14 1000 0,621 0,620 0,620 0,620 1100 1000 2676 91,17 1000 0,589 0,587 0,586 0,587 1100 1000 2534 86,32 TB 2618 89,21 RSD% 2,86 2,86 V- Tổng chi phí Chi phí Carotenoid TS chiết Tổng chi phí chiết đƣợc (kg 1kg carotenoid vnd) (triệu vnd) car /kg hoa) (triệu vnd) 0,005 0,009 0,0026 3,405 V-Vis Hexane Chi phí Hx (l/kg (lit/kg Viscozym (triệu CVT) CVT) (triệu vnd) 0,0018 0,100 0,003916 Bảng PL6.2 Kết kiểm tra thực nghiệm (mẫu xử lý Viscozym 1,0%) lutein chiết đƣợc Mẫu G (g) A1 A2 A3 Atb D 1000 0,590 0,588 0,587 0,588 1100 1000 2538 86,47 1000 0,602 0,602 0,602 0,602 1100 1000 2597 88,48 1000 0,598 0,595 0,595 0,596 1100 1000 2571 87,60 TB 2569 87,52 RSD% 1,15 1,15 V(ml) Chi phí Tổng chi (mg/ kg hoa tƣơi) Hiệu suất chiết (%) Tổng chi phí chiết V-Vis V-Hexane Chi phí Hx phí (l/kg (lit/kg Viscozym (triệu (triệu Carotenoid TS chiết đƣợc 1kg carotenoid CVT) CVT) (triệu vnd) vnd) vnd) (kg car /kg hoa) (triệu vnd) 0,0085 0,100 0,0187000 0,005 0,024 0,0026 9,227 IX Bảng PL6.3 Kết kiểm tra thực nghiệm (mẫu xử lý Viscozym 1,7%) lutein chiết đƣợc (mg/ kg Hiệu suất Mẫu G (g) A1 A2 A3 Atb D V(ml) hoa tƣơi) chiết (%) 1000 0,593 0,592 0,592 0,592 1200 1000 2787,451 90,03 1000 0,635 0,634 0,634 0,634 1200 1000 2985,098 96,42 1000 0,659 0,658 0,657 0,658 1200 1000 3096,471 100,02 TB 2956 95,49 %RSD 5,29 5,29 Tổng chi phí Carotenoid TS chiết Tổng chi phí chiết đƣợc (kg 1kg carotenoid (triệu vnd) (triệu vnd) car /kg hoa) (triệu vnd) 0,005 0,046 0,0030 15,607 V-Vis V-Hexane Chi phí (l/kg (lit/kg Viscozym Chi phí Hx CVT) CVT) (triệu vnd) 0,0187 0,100 0,04114 Bảng PL6.4 Kết kiểm tra thực nghiệm (mẫu không xử lý Viscozym) M lutein chiết đƣợc Hiệu suất ẫu G (g) A1 A2 A3 Atb D V(ml) (mg/ kg hoa tƣơi) chiết (%) 1000 0,471 0,471 0,471 0,471 110 1000 203 6,92 1000 0,486 0,486 0,486 0,486 110 1000 210 7,14 1000 0,469 0,468 0,468 0,468 110 1000 202 6,88 TB 205 6,98 RSD% 2,00 2,00 Tổng chi phí Carotenoid TS chiết 1kg Tổng chi phí chiết đƣợc (kg carotenoid (triệu vnd) (triệu vnd) car /kg hoa) (triệu vnd) 0,005 0,05 0,0002 24,396 V-Vis V-Hexane Chi phí (l/kg (lit/kg Viscozym Chi phí Hx CVT) CVT) (triệu vnd) 0,100 0,00000 Bảng PL6.5 Bảng giá Viscozym hexane đƣợc sử dụng Giá lit Viscozym triệu VNĐ) 2,2 Giá lit hexane công nghiệp triệu VNĐ) 0,05 ... dung 1: Nghiên cứu hoàn thiện quy trình tiền xử l hoa cúc vạn thọ Viscozym - Nội dung 2: Nghiên cứu hoàn thiện quy trình chiết lutein ester từ hoa cúc vạn thọ - Nội dung 3: Thử nghiệm quy trình. .. nghệ xử l nguyên liệu, tách chiết carotenoid cần thiết Đó l thực đề tài Nghiên cứu hoàn thiện quy trình tiền xử l chiết lutein ester từ hoa cúc vạn thọ Tagetes erecta L Nội dung nghiên cứu. .. TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM o0o HOÀNG THỊ ÁNH NGHIÊN CỨU HOÀN THIỆN QUY TRÌNH TIỀN XỬ L VÀ CHIẾT LUTEIN ESTER TỪ HOA CÚC VẠN THỌ (TAGETES ERECTA L. ) ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI