BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP HCM KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Đề tài: TẠO MÔ SẸO VÀ KHẢO SÁT ẢNH HƢỞNG CỦA DỊCH CHIẾT THÔ MÔ SẸO TỪ LÁ CÂY HOA LÀI (JASMINUM SAMBAC L.) ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA MẦM CỎ LỒNG VỰC NƢỚC (ECHINOCHLOA CRUS-GALLI L.) KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH: NÔNG NGHIỆP CBHD: TS Nguyễn Ngọc Bảo Châu SVTH: Nguyễn Thị Thanh Thảo MSSV: 1153010759 Khóa: 2011 – 2015 GVHD ký xác nhận: Tp Hồ Chí Minh, tháng 05 năm 2015 LỜI CẢM ƠN Để đến đƣợc chặng đƣờng ngày hôm nay, xin cám ơn Bố, Mẹ anh gia đình bên con, ủng hộ dƣỡng dục thời gian qua Con xin cảm ơn hi sinh Bố, Mẹ anh dành cho để có đƣợc ngày hôm Em xin cảm ơn TS Nguyễn Ngọc Bảo Châu ngƣời tạo điều kiện để em thực đề tài cách tốt Cám ơn cô kiến thức cô truyền đạt, quan tâm suốt trình học nhƣ trình thực đề tài Cám ơn cô kiến thức, kinh nghiệm mà cô truyền đạt cho chúng em suốt trình thực thực tập tốt nghiệp Em xin cảm ơn ThS Nguyễn Thị Phi Khanh hỗ trợ cô giai đoạn đầu việc thực đề tài Em xin cảm ơn ThS Nguyễn Trần Đông Phƣơng Cô tạo điều kiện, đóng góp ý kiến giúp chúng em thực đề tài cách thuận lợi Cháu xin cảm ơn Nguyễn Văn Ron tận tình giúp đỡ cháu việc thu nhận mẫu hoa lài phục vụ cho đề tài Em xin cảm ơn chị Nguyễn Thị Bích Liên hƣớng dẫn, góp ý, động viên quan tâm đến chúng em suốt thời gian qua Xin gửi lời cảm ơn đến bạn phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học Động vật bạn phòng thí nghiệm Công nghệ tế bào nhiệt tình giúp đỡ thời gian làm đề tài Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Trƣơng Nguyên Thƣ Trịnh Đức Thịnh, hai ngƣời bạn thân hỗ trợ nhiều mặt tinh thần , bên cạnh lúc khó khăn suốt trình học Đại học MỤC LỤC Phần I TỔNG QUAN TÀI LIỆU .1 Tổng quan cỏ dại 1.1 Khái niệm cỏ dại 1.2 Tác hại cỏ dại 1.2.1 Làm giảm suất trồng, gia tăng chi phí sản xuất 1.2.2 Ức chế phát triển loài thực vật khác 1.2.3 Là kí chủ sâu bệnh, chuột 1.2.4 Ảnh hưởng đến chất lượng nông sản 1.2.5 Giảm hiệu trình thu hoạch 1.2.6 Ảnh hưởng đến sức khỏe gia súc 1.2.7 Ảnh hưởng đến người 1.2.8 Gây ô nhiễm cản trở nguồn nước 1.3 Lợi ích cỏ dại 1.4 Phƣơng pháp quản lý cỏ dại 1.4.1 Phòng ngừa cỏ dại 1.4.2 Quản lý cỏ dại phương pháp vật lý 1.4.3 Quản lý cỏ dại biện pháp sinh học 1.5 Thuốc diệt cỏ 1.5.1 Thuốc diệt cỏ hóa học 1.5.2 Thuốc diệt cỏ sinh học Phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.1 Sơ lƣợc lịch sử nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.2 Khái niệm nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3 Cơ sở khoa học kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật 10 2.4 Vai trò chất điều hòa sinh trƣởng thực vật 11 2.4.1 Nhóm auxin 11 2.4.2 Nhóm cytokinin 12 2.5 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình nuôi cấy mô tế bào thực vật 12 2.5.1 Ánh sáng 12 2.5.2 Nhiệt độ 13 2.5.3 pH 13 2.5.4 Muối khoáng 13 2.5.5 Nguồn Carbon 13 2.5.6 Vitamin 13 2.5.7 Agar 14 Giới thiệu hoa lài 14 3.1 Phân loại 14 3.2 Đặc điểm chung chi Lài (Jasminum) 15 3.3 Nguồn gốc phân bố 15 3.4 Đặc điểm hình thái 16 3.5 Đặc điểm sinh thái 16 3.6 Công dụng 17 3.7 Nhân giống phƣơng pháp giâm cành 17 Tổng quan cỏ lồng vực nƣớc 18 4.1 Phân loại 18 4.2 Đặc điểm 18 Tổng quan lúa (Oryza sativa L.) 19 5.1 Phân loại 19 5.2 Đặc điểm 20 5.2.1 Đặc điểm hình thái 20 5.2.2 Đặc điểm sinh thái 21 5.3 Giá trị kinh tế 21 5.3.1 Giá trị dinh dưỡng 21 5.3.2 Giá trị sử dụng 21 Alkaloid 22 6.1 Giới thiệu chung 22 6.2 Tính chất lý hóa alkaloid 22 6.3 Hoạt tính sinh học alkaloid 22 Phần II VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .25 Thời gian địa điểm nghiên cứu 25 Vật liệu 25 2.1 Vật liệu điều kiện thí nghiệm 25 2.2 Hóa chất 26 2.2.1 Thành phần môi trường MS (Murashige Skoog, 1972) 26 2.2.2 Các chất điều hòa sinh trưởng thực vật 27 2.2.3 Thuốc thử 27 2.2.4 Các hóa chất khác 27 2.3 Phƣơng pháp xử lý số liệu 27 Nội dung nghiên cứu 28 3.1 Nội dung 1: Tạo mô sẹo nhân sinh khối mô sẹo từ hoa lài (Jasminum sambac L.) 28 3.1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ Javel thời gian khử trùng mẫu đến khả sống sinh trưởng mẫu hoa lài 28 3.1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát tác động chất kích thích sinh trưởng 2,4-D NAA nồng độ khác lên tạo mô sẹo từ mẫu hoa lài 30 3.1.3 Thí nghiệm 3: Nhân sinh khối mô sẹo 31 3.1.4 Định tính alkaloid 32 3.2 Nội dung 2: Chiết thô mô sẹo ethanol khảo sát hoạt tính dịch chiết mầm cỏ lồng nƣớc (Echinochloa crus-galli L.) 33 3.2.1 Thí nghiệm 4: Chiết thô mô sẹo ethanol 33 3.2.2 Thí nghiệm 5: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nước (Echinochloa crus-galli L.) 34 3.2.3 Thí nghiệm 6: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm lúa (Oryza sativa L.) 35 Phần III KẾT QUẢ 37 Nội dung 1: Tạo mô sẹo nhân sinh khối mô sẹo từ hoa lài (Jasminum sambac L.) 37 1.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ Javel thời gian khử trùng mẫu đến khả sống sinh trƣởng mẫu hoa lài 37 1.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát tác động chất kích thích sinh trƣởng 2,4-D NAA nồng độ khác lên tạo mô sẹo từ mẫu hoa lài 38 1.2.1 Khảo sát tác động chất kích thích sinh trưởng 2,4-D nồng độ khác lên tạo mô sẹo từ mẫu hoa lài 38 1.2.2 Khảo sát tác động chất kích thích sinh trưởng NAA nồng độ khác lên tạo mô sẹo từ mẫu hoa lài 40 1.3 Thí nghiệm 3: Nhân sinh khối mô sẹo 42 1.3.1 Nhân sinh khối mô sẹo 2,4-D, kinetin, BA tỉ lệ khác 42 1.3.2 Nhân sinh khối mô sẹo NAA, kinetin, BA tỉ lệ khác 44 1.4 Định tính alkaloid 46 Nội dung 2: Chiết thô mô sẹo ethanol khảo sát hoạt tính dịch chiết mầm cỏ lồng nƣớc (Echinochloa crus-galli L.) 48 2.1 2.2 Thí nghiệm 4: Chiết thô mô sẹo ethanol 48 Thí nghiệm 5: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nƣớc (Echinochloa crus-galli L.) 49 2.2.1 Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nước ngày tuổi 49 2.2.2 Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nước ngày tuổi 52 2.3 Thí nghiệm 6: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm lúa (Oryza sativa L.) 55 2.3.1 Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm lúa ngày tuổi 55 2.3.2 Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm lúa ngày tuổi 59 Phần IV KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 64 Kết luận 64 Kiến nghị 64 Phần V TÀI LIỆU THAM KHẢO 66 Phần VI PHỤ LỤC 70 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT MS : môi trƣờng Murashige Skoog, 1962 2,4-D : 2,4–dichlorophenoxy acetic acid BAP (BA) : 6–benzylaminopurine IAA : indole–3–acetic acid IBA : indole–3–butyric acid Kinetin : 6–(2–furfuryl–7–amino purine) NAA : 1–naphthaleneacetic acid TDZ : 1–phenyl–3–(1,2,3–thiadiazol–5–yl) Zeatin : 6–(4–hydroxy–3–metyl–but–2–enylamino) purine DANH MỤC CÁC HÌNH Hình Cây hoa lài Nhị Bình, Hóc Môn, thành phố Hồ Chí Minh .14 Hình Cỏ lồng vực nƣớc Hóc Môn, thành phố Hồ Chí Minh 18 Hình Cây lúa .19 Hình Mô sẹo môi trƣờng MS có bổ sung 2,4–D nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 39 Hình Mô sẹo môi trƣờng MS có bổ sung NAA nồng độ khác sau tuần nuôi cấy 41 Hình Nhân sinh khối mô sẹo 2,4–D, kinetin BA sau tuần nuôi cấy 43 Hình Nhân sinh khối mô sẹo NAA, kinetin BA sau tuần nuôi cấy 45 Hình Dịch chiết mô sẹo sau thêm giọt thuốc thử Mayer 46 Hình Dịch chiết mô sẹo sau thêm giọt thuốc thử Dragendorff 47 Hình 10 Dịch chiết mô sẹo sau thêm giọt thuốc thử Wagner .47 Hình 11 Nghiệm thức đối chứng ethanol (G2) so với đối chứng nƣớc (G1) 50 Hình 12 Nghiệm thức phun 25% dịch chiết (G3) so với đối chứng nƣớc (G1) 50 Hình 13 Nghiệm thức phun 50% dịch chiết (G4) so với đối chứng nƣớc (G1) 51 Hình 14 Nghiệm thức phun 75% dịch chiết (G4) so với đối chứng nƣớc (G1) 51 Hình 15 Nghiệm thức phun 25% dịch chiết (H3) so với đối chứng 53 Hình 16 Nghiệm thức phun 50% dịch chiết (H4) so với đối chứng 53 Hình 17 Nghiệm thức phun 75% dịch chiết (H5) so với đối chứng 54 Hình 18 Nghiệm thức đối chứng ethanol (I1) đối chứng nƣớc (I3) giống lúa OM4900 sau ngày 56 Hình 19 Nghiệm thức đối chứng ethanol (I2) đối chứng nƣớc (I4) giống lúa OM576 sau ngày .56 Hình 20 Nghiệm thức phun dịch chiết (I5) đối chứng nƣớc giống lúa OM4900 sau ngày 57 Hình 21 Nghiệm thức phun dịch chiết (I6) đối chứng nƣớc giống lúa OM576 sau ngày 57 Hình 22 Nghiệm thức đối chứng ethanol (K1) đối chứng nƣớc (K3) giống lúa OM4900 sau ngày theo dõi 60 Hình 23 Nghiệm thức đối chứng ethanol (K2) đối chứng nƣớc (K4) giống lúa OM576 sau ngày theo dõi 60 Hình 24 Nghiệm thức phun dịch chiết (K5) đối chứng nƣớc giống lúa OM4900 sau ngày 61 Hình 25 Nghiệm thức phun dịch chiết (K6) đối chứng nƣớc giống lúa OM576 sau ngày 61 Tài liệu internet [20] http://www.botanical.com/botanical/mgmh/j/jasmin06.html#des [21]http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir&v=Jasminum%20sambac&li st=species [22]http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir&v=Echinochloa%20crusgalli&list=species [23]http://www.bvtvhcm.gov.vn/technology.php?id=46 [24] http://www.ethnoleaflets.com/leaflets/jasmin.htm [25]http://gso.gov.vn/SLTK/ [26]http://iasvn.org/chuyen-muc/Co-dai-pho-bien-tai-Viet-Nam%28-Commonweeds-in-Vietnam%29-937.html [27] http://vi.wikipedia.org/wiki/Chi_Nh%C3%A0i [28]http://nongthonmoi.longan.gov.vn/Portals/0/Giao%20trinh%20DT%20nghe/ Trong%20lua/GT%20modun%2001.pdf Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 68 Phần VI PHỤ LỤC Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 69 Phần VI PHỤ LỤC Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độ Javel thời gian khử trùng mẫu đến khả sống sinh trưởng mẫu hoa lài Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 70 Thí nghiệm 2.1: Khảo sát tác động chất kích thích sinh trưởng 2,4 – D nồng độ khác môi trường MS lên tạo mô sẹo từ mẫu hoa lài Đƣờng kính mô sẹo Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 71 Thí nghiệm 2.2: Khảo sát tác động chất kích thích sinh trưởng NAA nồng độ khác môi trường MS lên tạo mô sẹo từ mẫu hoa lài Tỉ lệ tạo mô sẹo Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 72 Thí nghiệm 2.2: Khảo sát tác động chất kích thích sinh trưởng NAA nồng độ khác môi trường MS lên tạo mô sẹo từ mẫu hoa lài Đƣờng kính mô sẹo Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 73 Thí nghiệm 3.1 Nhân sinh khối mô sẹo 2,4-D kết hợp kinetin, BA tỉ lệ khác Đƣờng kính mô sẹo Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 74 Thí nghiệm 3.2: Nhân sinh khối mô sẹo NAA kết hợp kinetin, BA tỉ lệ khác Đƣờng kính mô sẹo Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 75 Thí nghiệm 4: Chiết thô mô sẹo từ hoa lài (Jasminum sambac L.) ethanol Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 76 Thí nghiệm 5: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nước (Echinochloa crus-galli L.) ngày tuổi Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 77 Thí nghiệm 5: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nước (Echinochloa crus-galli L.) ngày tuổi Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 78 Thí nghiệm 6: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm lúa ngày tuổi Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 79 Thí nghiệm 6: Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm lúa ngày tuổi Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 80 Nguyễn Thị Thanh Thảo Trang 81 ... cấp thông qua trình tạo mô sẹo, bƣớc đầu thực đề tài Tạo mô sẹo khảo sát ảnh hƣởng dịch chiết thô mô sẹo từ hoa lài (Jasminum sambac L.) đến phát triển mầm cỏ lồng vực nƣớc (Echinochloa crus -galli. .. nƣớc (Echinochloa crus -galli L.) 49 2.2.1 Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nước ngày tuổi 49 2.2.2 Khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng. .. 2.6 Bảng mô tả thí nghiệm khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nƣớc 34 Bảng 2.7 Bảng mô tả thí nghiệm khảo sát hoạt tính dịch chiết thô mô sẹo mầm cỏ lồng vực nƣớc