Header Page of 126 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG MAI XUÂN VIÊN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC DỊCH CHIẾT TRONG DUNG MÔI CLOROFOM, METHANOL VÀ ETE DẦU HỎA CỦA THÂN RỄ CÂY GỪNG GIÓ ĐÀ NẴNG Chuyên ngành: Hóa Hữu Cơ Mã số: 60 44 27 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2011 Footer Page of 126 Header Page of 126 Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học : TS TRỊNH ĐÌNH CHÍNH Phản biện : PGS.TS LÊ TỰ HẢI Phản biện : GS.TSKH TRẦN VĂN HOÀNG Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng chấm Luận văn tốt nghiệp thạc sĩ khoa học họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 29 tháng 10 năm 2011 * Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Trung tâm Học Liệu, Đại học Đà Nẵng Footer Page of 126 Header Page of 126 MỞ ĐẦU Lí chọn ñề tài Trong sống ñại nay, dược phẩm công nghiệp chứng tỏ nhiều hiệu tính phong phú, ña dạng, tác dụng nhanh, thời gian ñiều trị thường ngắn … có nhược ñiểm hay gặp giá thành cao, gây nhiều tác dụng phụ ảnh hưởng ñến sức khỏe sau người bệnh Do ñó việc tìm ñến vị thuốc thiên nhiên ngày ñược ưu chuộng cộng ñồng gây tác dụng phụ, giá thành thường rẻ có tác dụng tốt ñối với số bệnh nan y mà y học ñại chưa tìm phương pháp ñiều trị hiệu Ở xã Hòa Bắc, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng có loài gừng gió mọc hoang, người dân thường dùng non gừng gió ñể ăn rau, dùng chữa cảm Tuy nhiên ñến chưa có công trình nghiên cứu gừng gió Đà Nẵng mà người dân sử dụng chúng mang tính kinh nghiệm Vì tác giả luận văn chọn ñề tài “ Nghiên cứu thành phần hoá học dịch chiết dung môi clorofom, methanol ete dầu hỏa thân rễ gừng gió Đà Nẵng”, phần nhỏ ñể khảo sát tính chất sinh hóa chất gừng gió sở cho việc tìm hướng phát triển nguồn nguyên liệu gừng gió ñịa phương làm thuốc chế biến tinh dầu tạo ñiều kiện phát triển kinh tế cho vùng Đối tượng mục tiêu nghiên cứu 2.1 Đối tượng nghiên cứu - Tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng Footer Page of 126 Header Page of 126 - Dịch chiết từ thân rễ gừng gió phương pháp chiết tách với dung môi khác 2.2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác ñịnh thành phần hoá học tinh dầu thân rễ gừng gió - Xây dựng quy trình chiết tách thân rễ gừng gió dung môi clorofom, methanol ete dầu hỏa - Khảo sát thành phần hoá học gừng gió dung môi môi clorofom, methanol ete dầu hỏa - Xác ñịnh hoạt tính sinh học chất dung môi ete dầu hỏa - Xác ñịnh thành phần hoá học cấu trúc chất dịch chiết thân rễ gừng gió Nội dung nghiên cứu - Lý thuyết + Tổng quan phương pháp phân tích + Khái quát gừng gió - Thực nghiệm - Chưng cất tinh dầu thân rễ gừng gió xác ñịnh thành phần hoá học chúng - Xác ñịnh số số hoá học tinh dầu thân rễ gừng gió như: số axit, số este - Xác ñịnh thành phần hóa học thân rễ gừng gió dung môi clorofom, methanol ete dầu hỏa - Tách xác ñịnh cấu trúc chất (có hàm lượng lớn) từ dịch chiết thân rễ gừng gió - Xác ñịnh hoạt tính sinh học chất gừng gió Footer Page of 126 Header Page of 126 Ý nghĩa khoa học thực tiễn ñề tài Cung cấp thông tin có ý nghĩa khoa học gừng gió Đà Nẵng: số tiêu hóa lý, thành phần hóa học, cấu tạo ứng dụng số hợp chất gừng gió Bố cục luận văn Ngoài phần mở ñầu, kết luận, tài liệu tham khảo phụ lục luận văn gồm có chương sau: Chương Tổng quan Chương Những nghiên cứu thực nghiệm Chương Kết nghiên cứu thảo luận Footer Page of 126 Header Page of 126 CHƯƠNG 1- TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan phương pháp phân tích 1.1.1 Các phương pháp chiết, chưng cất 1.1.2 Các phương pháp sắc ký 1.2 Khái quát gừng gió 1.2.1 Sơ lược họ Gừng (Zingiberaceae) Họ Gừng họ thảo mộc sống lâu năm với thân rễ bò ngang hay tạo củ Chúng ñược phân bố khắp châu Á, châu Phi, Mỹ ñặc biệt khu vực Đông Nam Á [9] Theo tài liệu gần ñây giáo sư W John Kress cộng sự, họ Gừng có khoảng 53 chi 1300 loài, ñược chia làm phân họ tông [23] 1.2.2 Tình hình nghiên cứu chi Gừng nói chung gừng gió nói riêng - Chi Gừng + Gừng – Zingiber officinale Roscoe + Gừng gió – Zingiber zerumbet Smith + Gừng tía– Zingiber accuminatum Valeton + Gừng Nam Bộ - Zingiber cochinchinensis Gagnep + Gừng Eberhardt – Zingiber eberhardii Gagnep + Gừng lúa – Zingiber gramieum Bl + Gừng dại – Zingiber cassumunar (Zingiber purpureum Rosc.) + Gừng ñỏ - Zingiber rubens Roxb + Gừng – Zingiber monophylum Gagnep Footer Page of 126 Header Page of 126 + Gừng bọc da – Zingiber pellitum Gagnep + Gừng lông – Zingiber rufopilosum Gagnep - Cây gừng gió + Ở Việt Nam + Trên giới Footer Page of 126 Header Page of 126 CHƯƠNG - THỰC NGHIỆM 2.1 Xác ñịnh tên khoa học gừng gió 2.2 Tìm hiểu gừng gió Đà Nẵng 2.2.1 Hình thái thực vật gừng gió Đà Nẵng Cây thảo sống nhiều năm nhờ thân rễ dạng củ phân nhánh, vỏ trắng, thịt vàng nhạt, có mùi thơm, vị cay Thân khí sinh mọc thẳng, cao 1-1,5 m, mọc vùng ñất màu mỡ, tơi xốp tán rừng, thiếu sáng cao ñến m; gốc tròn với nhiều bẹ bao bọc nối tiếp nhau, dẹp dần, xếp sít vào Lá không cuống; có phiến thuôn hình giáo, mũi nhọn, gốc thon, rộng khoảng 5-7 cm; mép nguyên, cao 1-2 cm Phát hoa (cụm hoa) hình bầu dục, cán dài 30-60 cm, mọc ñứng riêng lẻ từ thân rễ, ñược bao bọc nhiều hoa hình tròn xếp lợp, màu xanh vàng, bìa ñỏ Hoa có ñài màu trắng, cao 1012 mm; tràng trắng, hình sóng dài cm, môi vàng tái, có thùy Quả dạng nang hình bầu dục; hạt ñen, ít, có áo hạt trắng 2.2.2 Sự phân bố gừng gió Đà Nẵng Cây mọc hoang vùng ñất trống, tán làm hàng rào, thích mọc nơi ẩm thấp huyện Hòa Vang Hòa Châu, Hòa Khương, Hòa Phú, Hòa Bắc Đặc biệt vùng núi cao Tà Lang thuộc xã Hòa Bắc, mọc ven bờ suối với kích thước thân lớn so với mọc hoang vùng ñất trống Cây hoa khoảng từ tháng 10 ñến tháng âm lịch; năm xuất lũ (tháng âm lịch) hoa sớm Footer Page of 126 Header Page of 126 2.2.3 Tính vị công dụng gừng gió Đà Nẵng Củ gừng gió có vị ñắng, mùi cay nồng, bẻ củ gừng gió làm ñôi mùi tỏa khắp phòng, củ gừng gió có tính ấm Hoa gừng gió có mùi nồng nhẹ so với củ Theo kinh nghiệm người dân ñịa phương củ gừng gió thay gừng nhà làm thức ăn có tính ñắng, nhiên củ ñược người dân ñịa phương dùng thuốc chữa ñau bụng, ñầy hơi, khó tiêu, kích thích tiêu hóa Lá non gừng gió ñược dùng loại rau luộc ăn dùng ñể nướng cá, loại cá ñồng 2.3 Thu xử lí mẫu Cây gừng gió ñược hái vào tháng 10/2009 thôn Phà Nam, xã Hòa Bắc, huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng Thân rễ gừng gió ñược rửa sạch, thái mỏng với kích thước cỡ 1-2 mm; sau ñó chia thành phần + Phần 1: tiến hành chưng cất tinh dầu phương pháp chưng cất lôi nước + Phần 2: ñem hong khô nơi thoáng mát (tránh ánh nắng trực tiếp) sấy khô máy sấy chuyên dụng nhiệt ñộ 400C, sau ñó sau ñó xay mẫu khô thành dạng bột mịn, tiến hành ngâm chiết Methanol tuần cô ñuổi dung môi thu ñược cao tổng 2.4 Tách ñịnh lượng tinh dầu 2.4.1 Tách tinh dầu Tinh dầu ñược thu phương pháp chưng cất lôi nước Footer Page of 126 Header Page 10 of 126 10 2.4.2 Định lượng tinh dầu % tinh dầu = a.100 % b Trong ñó: a: ñó số mL tinh dầu thu ñược chưng cất b: số gam nguyên liệu tươi ñã dùng 2.4.3 Xác ñịnh số hóa học tinh dầu - Chỉ số axit - Chỉ số este 2.5 Xác ñịnh thành phần hóa học tinh dầu Thành phần hóa học tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng ñược xác ñịnh phương pháp GC/MS Viện Hóa Học – Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Thiết bị GC model HP 6890 (America), thiết bị MS model Agilent 5973 (America) Các chất tinh dầu ñược ñịnh danh nhờ vào việc so sánh theo liệu phổ khối Wiley-1998 Nist-1998 2.6 Chiết xuất xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết 2.6.1 Ngâm chiết thu cao tổng Thân rễ gừng gió Đà Nẵng ñược rửa sạch, thái mỏng ñể khô mát (tránh ánh sáng trực tiếp phân hủy chất dễ phân hủy ánh sáng), sau ñó sấy khô mẫu máy sấy chuyên dụng nhiệt ñộ 400C ñể rút nước Toàn 3,1 kg mẫu khô thu ñược ngâm chiết với methanol chậu thủy tinh có ñậy nắp Dùng giấy lọc ñể lọc lấy dịch chiết sau ñó cô ñuổi dung môi áp suất thấp thu ñược cao chiết Footer Page 10 of 126 Header Page 11 of 126 11 2.6.2 Chiết lỏng-lỏng rắn-lỏng dung môi Cao MeOH hoà với H2O cất, chiết lỏng-lỏng với lít ete dầu hoả Phần tan ete dầu hỏa ñuổi dung môi thu ñược cao ete dầu Cao ete dầu ñược chưng cất lôi nước thu ñược phần bay ñể ño GC/MS, phần lại không bay ñược chiết lại ete dầu hoả cô loại dung môi ñược cao ete dầu lần ñể ño LC/MS Phần không tan ete dầu hỏa chiết tiếp 2,5 lít CHCl3 thu ñược dịch clorofom màu vàng Cô loại dung môi thu ñược cao CHCl3 Dịch nước lại sau chiết với CHCl3 ñược cô kiệt nước chiết BuOH thu ñược dịch BuOH Phần tan BuOH ñuổi dung môi thu ñược dịch cô BuOH Phần không tan BuOH cho chiết tiếp với EtOH MeOH theo bước 2.6.3 Xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết Đối với phần tan ete dầu, thêm nước sau ñó tiến hành chưng cất lôi nước, lấy phần bay ñem ño GC-MS ; phần không bay ñem ño LG-MS Phần không tan ete dầu, chiết lỏng lỏng với dung môi CHCl3, BuOH, EtOH, MeOH sơ ñồ Các dịch chiết ñược cô loại dung môi áp suất giảm, thu ñược cao tương ứng Hòa tan cao vào dung môi tương ứng tiến hành ño LGMS Xác ñịnh thành phần hóa học phương pháp sắc ký khí khối phổ liên hợp GC/MS Viện Hóa học hợp chất thiên nhiênViện Khoa học Công nghệ Việt Nam Các chất tinh dầu ñược ñịnh danh nhờ vào việc so sánh theo liệu phổ khối Footer Page 11 of 126 Header Page 12 of 126 12 Wiley275.L Nist98.1 Còn xác ñịnh thành phần hóa học phương pháp sắc lỏng LC/MS ESI - MS ñược ño máy Agilent 6310 Ion Trap, tác nhân bắn phá muối natri Viện Hóa học hợp chất thiên nhiên - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam 2.7 Thử hoạt tính sinh học tinh thể kết tinh * Chuẩn bị mẫu ñể thử hoạt tính sinh học: Chất kết tinh dịch chiết ete dầu hỏa phần bay theo nước ñược tiến hành thử hoạt tính sinh học: - Hoạt tính chống oxi hóa chống oxi hóa DPPH - Hoạt tính kháng sinh với chủng vi sinh : Lactobacillus fermentum, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Salmonella enterica, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa nấm Candida albican - Hoạt tính gây ñộc ñối với dòng tế bào ung thư người: KB (ung thư mô biểu bì) 2.8 Phân lập xác ñịnh cấu trúc chất dịch chiết 2.8.1 Phân lập chất tinh khiết - Sắc ký mỏng: qua khảo sát tác giả luận văn nhận thấy hệ Hexan/Etyl axetat với tỉ lệ thích hợp 100/0 ñến 80/20 ñược áp dụng ñể phân lập số chất từ phần kết tinh dịch ete dầu hỏa phần bay theo nước - Sắc ký cột: Bảng 2.1 Các hệ dung môi dùng cho sắc ký cột STT Dung môi giải li Hexan (0,5 lít) Hexan-Etyl axetat = 99 : 1( 0,3 lít) Hexan-Etyl axetat = 98: ( 0,3 lít) Footer Page 12 of 126 Header Page 13 of 126 13 Hexan-Etyl axetat = 97 : ( 0,3 lít) Hexan-Etyl axetat = 95 : ( 0,5 lít) Hexan-Etyl axetat = 90 : 10(0,5 lít) Hexan-Etyl axetat = 88 : 12(0,5 lít) Hexan-Etyl axetat = 85 : 15(0,5 lít) Hexan-Etyl axetat = 80 : 20(0,7 lít) 10 Rửa cột 100% methanol Tổng kết trình CC : Tổng kết trình CC : thu ñược phân ñoạn (ký hiệu F1→F2), ñó có phân ñoạn F1 chủ yếu chất keo, phân ñoạn F2 ứng với rửa giải Hexan/Etyl axetat = 90/10 Phân ñoạn ứng với rửa giải Hexan/Etyl axetat = 90/10 ñược kết tinh hexan (2 lần), heptan (1 lần) Tinh thể ñược làm khô áp suất giảm khoảng 30 phút, 300C Cuối thu ñược mg tinh thể hình kim, det, không màu, ñược kí hiệu ZER 2.8.2 Xác ñịnh cấu trúc Cấu trúc chất rắn ZER ñược xác ñịnh phổ UV, H-NMR, 13C-NMR, DEPT kết hợp so sánh với số liệu tài liệu tham khảo Phổ NMR ñược ño Brucker AVANCE 500(500 MHz, CDCl3+MeOD, TMS), Viện Hóa học-Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam Footer Page 13 of 126 Header Page 14 of 126 14 CHƯƠNG - KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Kết xác ñịnh tên khoa học cho Tên khoa học: Zingiber zerumbet (L.) J.E.Sm 3.2 Tính chất cảm quan hàm lượng tinh dầu Tinh dầu có màu vàng nhạt, nhẹ nước, làm khan Na2SO4 khan % tinh dầu = 1,8.100 = 0,9% 200 Nhận xét: hàm lượng tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng cao, cao hàm lượng tinh dầu thân rễ gừng gió Tam Đảo [11] 3.3 Kết thành phần hóa học tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng số hóa học tinh dầu 3.3.1 Thành phần hóa học tinh dầu thân rễ Các chất tinh dầu ñược xác ñịnh thành phần phần trăm nhận diện phương pháp GC-MS Phổ ñược ghi máy GC-MS lắp ñặt Phòng phân tích hữu cơ- viện KH CN Việt Nam Hà Nội Bảng 3.1 Thành phần hóa học tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng STT Thời gian lưu (Phút) Hợp chất hóa học Hàm lượng (%) 5.59 Alpha-pinene 0.78 5.95 Camphene 3.31 7.54 (+)-3-carene 0.16 7.96 p-cimene 0.16 Footer Page 14 of 126 Header Page 15 of 126 15 8.07 Limonene 0.27 8.16 1,8-cineol 0.87 10.27 Alpha-terpinolene 0.26 11.71 Camphor 1.10 13.26 Alpha-terpineol 0.12 10 20.63 β-caryophyllene 0.23 11 21.70 α-humilene 5.20 12 24.26 12-Nor-caryophyll-5-en-2-on 0.16 13 25.57 1.38 14 26.34 15 27.50 (-)-caryophyllene oxide 12-Oxabicyclo[9.1.0]dodeca3,7-diene 1H-indene 0.19 16 29.93 Zerumbone 77.2 Tổng hợp chất ñã ñịnh danh 95,49 Hợp chất chưa ñịnh danh 4,51 4.10 Nhận xét: Thành phần hóa học tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng tương ñồng với hóa học thân rễ gừng gió Tam Đảo Thành phần tinh dầu gừng gió Đà Nẵng Zerumbone cao dầu gừng gió Tam Đảo-VN (so với tài liệu tham khảo tinh dầu gừng gió Tam Đảo-VN có hàm lượng Zerumbon cao so với nơi khác TG) [24] Điều có ý nghĩa lớn Zerumbon có tác dụng ức chế HIV ñộc tế bào thực nghiệm.[24] Kết thực nghiệm thu ñược phù hợp với công trình nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu, ñặc biệt hàm lượng zerumbone tinh dầu thân rễ gừng gió số ñịa phương Gia Lai (zerumbone 65,45%); Bình Định (zerumbone Footer Page 15 of 126 Header Page 16 of 126 16 50,24%) [10], Đăk Lăk (49,8%), Quảng Bình (70,2%) Thừa Thiên Huế (zerumbone 76,3%) [9] 3.3.2 Xác ñịnh số hóa học tinh dầu - Chỉ số axit: Mẫu VKOH (ml) 1,8 ml 1,9 ml 1,7 ml V KOH = 1,8ml ⇒ Chỉ số axit là: A x = 5, 61×1,8 = 13, 426 0, 7521 - Chỉ số este: Mẫu VH 2O VHCl (ml) 21,6 20,7 ml 22,1 20,8 ml 21,8 20,5 ml => Chỉ số este là: AE = 1,163 × 28, 05 = 43,37 0, 7521 Nhận xét: Do tinh dầu cất lại sau thời gian dài không xác ñịnh số axit nên tinh dầu ñã bị oxi hóa phần thành axit tự làm cho số axit cao 3.4 Kết xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi hữu Kết xác ñịnh thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi ete dầu hỏa phần bay theo nước Footer Page 16 of 126 Header Page 17 of 126 17 Dựa vào sắc kí khí ghép khối phổ GC-MS, TPHH dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi dung môi ete dầu hỏa phần bay theo nước cho thấy thành phần dịch chiết zerumbone camphen phù hợp với thành phần tinh dầu thân rễ ñã chưng cất 3.5 Kết xác ñịnh hàm lượng chất có dịch chiết Hàm lượng chất có dịch chiết ñược ñược tiến hành ño sắc ký lỏng khối phổ liên hợp (LC-MS) 3.5.1 Kết xác ñịnh hàm lượng chất có dịch chiết ete dầu hỏa phần không bay theo nước Kết phân tích LC-MS giản ñồ TIC phổ khối cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng phần không bay theo nước có chất có hàm lượng tương ñối lớn ứng với thời gian lưu 4.579; 4.872 10.478 Tuy nhiên chất chiếm tỉ lệ cao hẳn so với chất lại mà hàm lượng chất không chênh lệch lớn 3.5.2 Kết xác ñịnh hàm lượng chất dung môi clorofom Kết phân tích LC-MS giản ñồ TIC phổ khối cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi clorofom có chất ñó có chất có hàm lượng cao (52.7187%) ứng với thời gian lưu 3.735 phút Thời gian lưu gần với thời gian lưu chất thứ 3.422 phút xa thời gian lưu chất thứ 7.680 phút 3.5.3 Kết xác ñịnh hàm lượng chất dung môi buthanol Footer Page 17 of 126 Header Page 18 of 126 18 Kết phân tích LC-MS giản ñồ TIC phổ khối cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi buthanol có số lượng chất lớn, hàm lượng chất có tỉ lệ phần trăm lớn không cao Như khó tách chất dung môi buthanol, nên cần tiến hành xử lí bước 3.5.4 Kết xác ñịnh hàm lượng chất có dịch chiết ethanol Kết phân tích LC-MS giản ñồ TIC phổ khối cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi EtOH có khoảng 18 chất So sánh số lượng chất hai dung môi buthanol ethanol ta thấy chênh lệch nhiều (19 so với 18), nhiên hàm lượng phần trăm chất có biến ñổi lớn Nhìn vào hàm lượng phần trăm chất hai dung môi ta thấy dịch chiết ethanol có chất có hàm lượng cao 58.831% ứng với thời gian lưu 1.702 Điều chứng tỏ thân rễ gừng gió có chất tan tốt dung môi ethanol khả phân lập chất ñược 3.5.5 Kết xác ñịnh hàm lượng chất có dịch chiết methanol Kết phân tích LC-MS giản ñồ TIC phổ khối cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi methanol có khoảng chất, ñó chất chiếm tỉ lệ cao (57.775%) ứng với thời gian lưu 12.317 phút Ngoài có chất khác chiếm tỉ lệ cao ứng với thời gian lưu 17.695 phút với hàm lượng 13.081%; thời gian lưu 6.370 phút với hàm lượng 11.765% *Kết luận: từ kết kết phân tích LC-MS cho thấy thành phần hóa học dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng Footer Page 18 of 126 Header Page 19 of 126 19 dung môi clorofom, ethanol, methanol ñều có chứa số chất có hàm lượng cao Có có hướng xử lí ñể tách chất có hàm lượng lớn khỏi hỗn hợp, xác ñịnh cấu trúc nghiên cứu hoạt tính sinh học chất 3.6 Thử hoạt tính sinh học chất kết tinh Kết thử hoạt tính sinh học cho thấy chất kết tinh ZER tính kháng chủng vi khuẩn thuộc chủng Gram (+) (-), tính kháng nấm candida albicans, hoạt tính chống oxi hóa, hoạt tính chống oxi hóa DPPT có hoạt tính gây ñộc tế bào dòng tế bào ung thư người: KB (mô biểu bì) 3.7 Kết xác ñịnh cấu trúc hóa học chất phân lập từ dịch chiết thân rễ gừng gió Đà Nẵng dung môi ete dầu hỏa phần bay theo nước Từ phổ 13C, DEPT 90, 135 cho thấy phân tử ZER có: Bốn nhóm metyl δC = 29,4; 24,2; 15,2; 11,8 ppm tương ứng với tính hiệu singulet phổ 1H-NMR δH = 1,80; 1,54; 1,20; 1,07 ppm Một tín hiệu nhóm cacbonyl δC = 204,3 ppm Ba nhóm metilen δC = 42,4; 39,5; 24,4 ppm ứng với 6H khoảng 1,89-2,46 ppm Một cacbon bậc IV δC = 37,9 ppm Ngoài ra, phổ có diện liên kết ñôi C=C: nhóm metin δC = 160,7; 148,8; 127,2; 125,0 ppm tương ứng với proton olefin khoảng 5-6 ppm cacbon bậc IV δC = 138,0; 136,3 ppm Cấu hình nối ñôi C9=C10 ñược xác ñịnh trans dựa vào số tương tác JH9/10 = 16,5 Hz Kết hợp với tài liệu tham khảo [22], ta có bảng so sánh số liệu phổ 13 C-NMR,1H-NMR ZER zerumbone ñã xác ñịnh trước ñó sau: Footer Page 19 of 126 Header Page 20 of 126 20 Bảng 3.12 Số liệu phổ 13C-NMR ZER zerumbone Cacbon ZER δC (ppm) (125 MHz, CDCl3, TMS) (ppm) Zerumbone[22] δC (ppm) (125 MHz, CDCl3, TMS) (ppm) C-1 42.4 (t) 42.4 C-2 125.0 (d) 125.0 C-3 136.3 (s) 136.3 C-4 39.5(t) 39.5 C-5 24.4(t) 24.4 C-6 144.8(d) 148.8 C-7 138.0 (s) 137.9 C-8 204.3(s) 204.4 C-9 127.2(d) 127.2 C-10 160.7(d) 160.8 C-11 37.9 (s) 37.9 C-12 15.2(q) 15.2 C-13 11.8(q) 11.8 * C-14 24.2(t) 24.2* C-15* 29.4(q) 29.4* Footer Page 20 of 126 Header Page 21 of 126 21 Bảng 3.16 Số liệu phổ 1H-NMR, ZER zerumbone ZER δH (ppm) (500 MHz, CDCl3, TMS) (ppm) 1H, d, J = 13Hz, 1,90 Hiñro H-1 d, J = 13,2Hz, 1,90 H-1; H-4; H-5 5H, m, 2.22-2.47 H-1, d, J = 13.2Hz, 2.35 H-4, m, 2.19-2.26 H-5, m, 2.26 H-2 1H, br.d, 5,25 dd,J = 16,4Hz, 5,25 H-9* 1H, d, J = 16,5Hz, 5.86 d, J = 16.4Hz, 5.97 H-10* 1H, d, J = 16,5Hz, 5.97 d, J = 16.4Hz, 5.86 H-6 1H, br.d, 6.00 t, J = 16.4Hz, 6.02 H-12 3H, s, 1.54 s, 1.54 H-13 3H, s, 1.80 s, 1.80 * 3H, s, 1.20 s, 1.20 * 3H, s, 1.07 s, 1.07 H-14 H-15 * Zerumbone[22] δH (ppm) (500 MHz, CDCl3, TMS) (ppm) Các giá trị thay ñổi cho cột Từ nhận ñịnh ban ñầu cấu trúc chất ZER so sánh số liệu phổ 13 C-NMR; 1H-NMR với chất zerumbone ñã xác ñịnh ñược cấu trúc trước ñó, tác giả luận văn khẳng ñịnh ZER zerumbone – secquitecpen ñơn vòng ñã ñược phân lập trước ñó từ gừng gió (Zingiber zerumbet Smith) với câu trúc sau: Footer Page 21 of 126 Header Page 22 of 126 22 13 O 10 12 11 14 15 Hình 3.16 Cấu trúc chất ZER Footer Page 22 of 126 Header Page 23 of 126 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Trong trình nghiên cứu tác giả luận văn ñã ñạt ñược số kết sau: Xác ñịnh ñược tên khoa học gừng gió Đà Nẵng Zingiber zerumbet (L.) J.E.Sm Bằng phương pháp chưng cất lôi nước ñã tách ñược tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng Xác ñịnh ñược hàm lượng phần trăm tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng 0,9% sử dụng tinh dầu ñó xác ñịnh số hóa học: số axit 13.424 số este 43.37 Bằng phép phân tích GC/MS, ñã xác ñịnh ñược TPHH, hàm lượng phần trăm cấu tử tinh dầu thân rễ tươi gừng gió Đà Nẵng Kết thu ñược cho thầy thành phần tinh dầu thân rễ tươi gừng gió Đà Nẵng gồm 24 hợp chất có 16 chất ñã ñược ñịnh danh Trong tinh dầu có hàm lượng zerumbone cao 77.2%, phù hợp với công trình nghiên cứu trước ñây gừng gió ñịa phương Việt Nam giới Bằng việc phân tích kết hợp LC/MS tác giả luận văn ñã sơ xác ñịnh ñược TPHH dịch chiết thân rễ ete dầu hỏa, CHCl3, BuOH, EtOH, MeOH với kết cụ thể sau: * Dịch chiết dung môi ete dầu hỏa phần bay theo nước thấy có chứa zerumbone camphene chủ yếu * Dịch chiết dung môi ete dầu hỏa phần không bay theo nước có khoảng chất ñó có chất có hàm lượng tương ñối lớn ứng với thời gian lưu 4.579; 4.872 10.478 Footer Page 23 of 126 Header Page 24 of 126 24 * Dịch chiết dung môi CHCl3 có chất ñó có chất có hàm lượng cao (52.7187%) ứng với thời gian lưu 3.735 phút * Dịch chiết dung môi BuOH có19 chất ñó hàm lượng chất có tỉ lệ phần trăm lớn không cao Chất cao có tỉ lệ phần trăm 17.378% ứng với thời gian lưu 10.549 phút * Dịch chiết dung môi EtOH có 18 chất ñó có chất có hàm lượng cao 58.831% ứng với thời gian lưu 1.702 * Dịch chiết dung môi MeOH có chất ñó có chất có hàm lượng cao 57.775% ứng với thời gian lưu 12.317 Bước ñầu thăm dò hoạt tính sinh học chất rắn kết tinh dịch chiết ete dầu hỏa phần bay theo nước Kết thu ñược cho thấy chất kết tinh có hoạt tính gây ñộc tế bào dòng tế bào ung thư người KB (mô biểu bì) tính kháng chủng vi khuẩn thuộc chủng Gram (+) (-), tính kháng nấm candida albicans, hoạt tính chống oxi hóa DPPH Đã phân lập ñược tinh thể không màu (kí hiệu ZER) từ dịch chiết ete dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng phần bay theo nước Kết hợp phương pháp phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT với tài liệu công bố trước ñây ñã xác ñịnh ñược cấu trúc chất rắn ZER zerumbone (C15H22O) Qua trình nghiên cứu ñề tài, tác giả luận văn xin ñề nghị: Tiếp tục nghiên cứu rộng tinh dầu: tinh dầu lá, tinh dầu hoa hoạt tính sinh học loại tinh dầu Trong tinh dầu thân rễ gừng gió Đà Nẵng có hàm lượng zerumbone cao, ñó cần tìm phương pháp chiết tách zerumbone từ Footer Page 24 of 126 Header Page 25 of 126 25 tinh dầu (tinh dầu kết tinh ñể tủ lạnh, có khả chất kết tinh zerumbone số tài liệu ñã nghiên cứu) Cần nghiên cứu sâu rộng hoạt tính chống ung thư kháng HIV zerumbone, thành phần thân rễ gừng gió ñể từ ñó tìm phương thuốc chữa bệnh tối ưu Trong zerumbone có nhóm C=O dễ chuyển hóa thành nhóm chức khác ñó cần nghiên cứu thêm chất chuyển hóa từ zerumbone hoạt tính sinh học chất ñó Cây gừng gió thuốc quý nên cần có biện pháp khai thác, sử dụng bảo tồn thích hợp Footer Page 25 of 126  ... gừng gió dung môi môi clorofom, methanol ete dầu hỏa - Xác ñịnh hoạt tính sinh học chất dung môi ete dầu hỏa - Xác ñịnh thành phần hoá học cấu trúc chất dịch chiết thân rễ gừng gió Nội dung nghiên. .. với dung môi khác 2.2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác ñịnh thành phần hoá học tinh dầu thân rễ gừng gió - Xây dựng quy trình chiết tách thân rễ gừng gió dung môi clorofom, methanol ete dầu hỏa - Khảo... thân rễ gừng gió xác ñịnh thành phần hoá học chúng - Xác ñịnh số số hoá học tinh dầu thân rễ gừng gió như: số axit, số este - Xác ñịnh thành phần hóa học thân rễ gừng gió dung môi clorofom, methanol