BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI Đặng Thị Ngọc Lan NGHIÊN CỨU XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH PHÁT HIỆN THUỐC GIẢ BẰNG PHỔ RAMAN CHUYÊN NGÀNH: KIỂM NGHIỆM THUỐC VÀ ĐỘC CHẤT MÃ SỐ: 62720410 TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI, NĂM 2017 Công trình hoàn thành : Trường Đại học Dược Hà Nội Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương Người hướng dẫn khoa học GS TS Thái Nguyễn Hùng Thu PGS.TS Đoàn Cao Sơn Phản biện : ………………………………… .… Phản biện : …………………………… .……… Phản biện : …………………………… .……… Luận án bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Trường tổ chức Trường Đại học Dược Hà Nội Vào hồi ngày Có thể tìm hiểu luận án tại: Thư viện Quốc gia VN Thư viện trường ĐH Dược HN tháng năm A GIỚI THIỆU LUẬN ÁN Tính cấp thiết luận án Thuốc giả làm thấ t ba ̣i trình điều trị, gây biến chứng tử vong Thuốc giả đa dạng chủng loại, nguồn gốc xuất xứ và ngày sản xuất tinh vi Nhiều trường hợp, thuốc giả đến tay bệnh nhân chí bán hết có định thu hồi, đình Tình hình thuốc giả ngày diễn biến phức tạp, số lượng thuốc thị trường ngày lớn, phương pháp phân tích thường quy cho kết xác tốn nhiều thời gian Vì việc ngăn ngừa trừ thuốc giả, thuốc chất lượng thách thức lớn quan chức Trước thực trạng ấy, việc tìm tòi, khai thác phương pháp giúp phân tích nhanh, phân tích số lượng thuốc lớn để ứng dụng vào quản lý chất lượng thuốc Việt Nam vô cần thiết Luâ ̣t Dươ ̣c 2016 đã nêu trường hơ ̣p thuố c giả, nhiên để phát hiê ̣n đươ ̣c thuố c giả ở cả trường hơ ̣p của Luâ ̣t Dươ ̣c 2016 cầ n phải kế t hơ ̣p rấ t nhiề u phương pháp phân tić h khác Vì vâ ̣y nô ̣i dung của đề tài này chỉ tâ ̣p trung phát hiê ̣n thuố c giả thuô ̣c hai trường hơ ̣p sau: (1) Không có dược chất, (2) Có dược chất không với dược chất ghi nhãn theo tiêu chuẩn đăng ký lưu hành ghi giấy phép nhập Qua trình tìm hiểu, nhận thấy phổ tán xa ̣ Raman (go ̣i tắ t là phổ Raman) có nhiều tiềm để giải yêu cầu khó khăn Do vậy, luận án “Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích phát thuốc giả phổ Raman” thực Mục tiêu luận án 1) Triển khai xây dựng phổ Raman chuẩn cho 10 dược chất xác định tiêu chí định tính 2) Thử nghiê ̣m phương pháp để kiểm tra nhằm phát thuốc giả dạng dược chất sử du ̣ng sai dươ ̣c chấ t so với công thức thị trường Việt Nam Những đóng góp luận án  Ứng dụng quang phổ Raman lĩnh vực kiểm nghiệm dược phẩm  Đề tài nghiên cứu đưa quang phổ Raman vào ứng dụng kiểm tra chất lượng thuốc thị trường Việt Nam xây dựng quy trình phân tích thiết bị đo quang phổ Raman để bàn cầm tay  Đã xây dựng quy trình định tính cho dược chất tá dược bản, sử dụng hệ số HQI để đánh giá kết theo hướng dẫn nhà sản xuất thiết bị Quy trình ứng dụng để kiểm tra thuốc dạng viên nang cứng, viên nén có chứa 10 dược chất nghiên cứu thị trường  Xác định dịch chuyển Raman cho dược chất  Lần dịch chuyển Raman (BDCRCB) xác định nhằm tăng khả nhận diện dược chất mẫu Bộ dịch chuyển gồm vị trí tỷ lệ cường độ số đỉnh có cường độ lớn đặc trưng cho dược chất nghiên cứu  Đã triển khai xác định BDCRCB cho dược chất isoniazid, ethambutol HCl, sildenafil citrat, ibuprofen, lamivudin  Ứng dụng công nghệ thông tin để xác định dịch chuyển Raman dược chất  Đã ứng du ̣ng công nghê ̣ thông tin để xây dựng chương triǹ h phần mềm xác định BDCRCB tăng tin ́ h khách quan và giảm thời gian xử lý dữ liê ̣u phổ thu đươ ̣c Phần mềm gọn, dễ dàng cài đặt máy tính xách tay, kết hợp với liệu phổ thu thiết bị cầm tay để xử lý cho kết sau đo phổ trường  Quy trình phân tích định tính để phát thuốc giả  Đã xây dựng quy trình sử dụng quang phổ Raman để kiểm tra phát thuốc giả (dạng dược chất hay sử du ̣ng sai dươ ̣c chấ t so với công thức đã đăng ký) thị trường phối hợp sử dụng hệ số HQI BDCRCB Ý nghĩa luận án Đề tài xây dựng quy trình để kiểm tra thuốc giả thị trường qua bước sau: Xây dựng phổ chuẩn Raman cho dược chất cần phân tích Xác định BDCRCB cho dược chất xây dựng phổ Raman chuẩn Có cách xác định BDCRCB: xử lý liệu phổ trực tiếp xử lý qua phần mềm Cách xử lý liệu qua phần mềm cho BDCRCB đầy đủ xếp theo thứ tự đặc trưng ưu tiên giảm dần từ xuống Cách xử lý liệu trực tiếp cho BDCRCB ngắn với đỉnh ưu tiên cao danh sách Sử dụng thiết bị Raman cầm tay để sàng lọc nhanh tất mẫu thuốc cần phân tích Đánh giá kết theo hệ số HQI cài đặt máy Xác định hệ số HQI theo phần mềm cài đặt thiết bị liệu phổ Raman chuẩn xác định Xử lý kết tùy theo hệ số HQI xác định sau:  HQI ≥ 90%: mẫu thử dương tính với dược chất đạt yêu cầu  HQI < 80%: mẫu thử âm tính với dược chất nên tiếp tục làm thêm biện pháp khẳng định trước kết luận xử lý hành  80%  HQI < 90%: mẫu thuốc thuộc trường hợp nghi ngờ tiếp tục kiểm tra thêm BDCRCB trước kết luận Cách xử lý cụ thể sau: - Nếu tất đỉnh BDCRCB mẫu phân tích có vị trí tỷ lệ cường độ nằm khoảng xác định kết luận mẫu dương tính với dược chất - Nếu có từ đỉnh hoă ̣c tỷ lê ̣ nằm BDCRCB lấy mẫu phân tích thêm phương pháp khác để kết luận Bố cục luận án Luận án gồm chương, 61 bảng, 78 hình, 122 tài liệu tham khảo với 10 tài liệu tiếng Việt 112 tài liệu tiếng Anh, phụ lục Luận án có 142 trang gồm phần chính: Đặt vấn đề (2 trang); Chương Tổng quan (40 trang); Chương Nguyên liệu, trang thiết bị phương pháp nghiên cứu (10 trang); Chương Kết nghiên cứu (72 trang); Chương Bàn luận (16 trang); Kết luận kiến nghị (2 trang) B NỘI DUNG CỦA LUẬN ÁN Chương TỔNG QUAN Đã tập hợp trình bày có hệ thống nội dung liên quan đến luận án bao gồm: - Tình hình thuốc giả giới Việt Nam: tỷ lệ thuốc giả nói chung toàn giới vào khoảng 10% tổng số thuốc lưu hành Tỷ lệ thuốc giả Việt Nam xấp xỉ 0,1% tổng số lượng mẫu lấy kiểm tra - Các phương pháp phát thuốc giả: nêu nguyên tắc ứng dụng quang phổ cận hồng ngoại nhiễu xạ tia X phát hiê ̣n thuố c giả - Tổng quan phương pháp quang phổ Raman: Phổ Raman phát cách lâu khoa học công nghệ chưa phát triển nên khó khăn thiết bị ứng dụng Nhờ phát triển khoa học công nghệ mà quang phổ Raman gần tái triển khai để ứng dụng nhiều lĩnh vực, có ngành Dược Phổ Raman đă ̣c biê ̣t có ưu thế viê ̣c phát hiê ̣n thuố c giả ma ̣o danh các nhà sản xuấ t - Một số nhóm thuốc hay bị làm giả: giới thiệu tiń h chấ t và tiǹ h hiǹ h phát hiê ̣n thuố c giả thế giới của 10 dược chất nghiên cứu (thuộc nhóm tác dụng) Thuốc giả vấn đề không gây khó khăn cho quan chức mà mối hiểm họa với nhiều người bệnh Theo WHO và FDA, thuốc giả, thuốc bấ t hơ ̣p pháp chiếm khoảng 10% thị trường dược phẩm giới Đố i với nước công nghiệp phát triển với hệ thống quản lý hiệu (ví dụ Mỹ, EU, Australia, Canada, Nhật Bản, New Zealand) có tỷ lệ thuốc giả, thuốc chất lượng thấp khoảng 1% Trong đó, số 30% nước Mỹ Latinh, châu Á, châu Phi… Châu Á xem khu vực bị ảnh hưởng nhiều nạn thuốc giả, đặc biệt vùng Đông Nam Á Các loại thuốc giả, thuốc chất lượng phần nhiều thuốc tân dược như: thuốc điều trị sốt rét, thuốc chống lao, thuốc tránh thai hỗn hợp, thuốc chống cúm H5N1, thuốc kháng virus viêm gan thuốc AIDS, số thuốc thông thường tiêu thụ nhiều (như hạ nhiệt giảm đau, kháng sinh) Ở Việt Nam, những năm đầ u thâ ̣p kỷ 90 của thế kỷ trước, tỷ lê ̣ thuố c giả thi ̣trường theo báo cáo của WHO là khoảng 7% Đế n năm 1995, tỷ lê ̣ này giảm xuố ng 6%, đó tỷ lê ̣ thuố c giả không có dươ ̣c chấ t hoă ̣c sai dươ ̣c chấ t là khoảng 0,6% Hiê ̣n nay, với ̣ thố ng quản lý chă ̣t che,̃ tỷ lê ̣ thuố c giả ở Viê ̣t Nam đã giảm đáng kể , dao động mức 0,1% Tuy tỷ lê ̣ thuố c giả giảm rõ rê ̣t công tác quản lý dươ ̣c phẩ m đươ ̣c tăng cường không vì thế mà viê ̣c phát hiê ̣n và ngăn chă ̣n thuố c giả không còn ý nghiã Vì vẫn có mô ̣t tỷ lê ̣ thuố c giả vô vàn thuố c đảm bảo chấ t lươ ̣ng lưu hành thi ̣ trường Do vâ ̣y, viê ̣c kiể m tra phát hiê ̣n thuố c giả càng phải đơn giản, go ̣n nhe ̣, it́ ảnh hưởng đế n viê ̣c kinh doanh và lưu thông dươ ̣c phẩ m thi ̣trường Để phân tích phát thuốc giả, người ta thường sử dụng cách sau: - Phân tích phòng thí nghiệm: lấy mẫu mang phòng thí nghiệm, phân tích phương pháp hóa học (làm phản ứng ống nghiệm) hay phương pháp hóa lý (sắc ký, phổ…) - Phân tích trường: trước thường sử dụng kít mini-lab trang bị sẵn số ống nghiệm, thuốc thử sắc ký lớp mỏng thực phân tích mẫu trường Với phát triển tiến vượt bậc công nghệ, số thiết bị phân tích phổ (Raman, NIR, nhiễu xạ tia X) thiết kế chế tạo dạng thiết bị cầm tay Đây coi công cụ mạnh phát nhanh thuốc giả trường Quang phổ Raman phát lần năm 1928 nhà khoa học Chandrasekhra Venkata Raman Theo thời gian, có bước cải tiến phận thiết bị đo đạc tán xạ Raman Nhờ phát triển loạt phận thiết bị nguồn laser, detector, lọc quang, cải tiến đáng kể công nghệ phần mềm ứng dụng phương pháp phân tích liệu… mà quang phổ Raman ứng dụng rộng rãi Ngoài máy quang phổ Raman để bàn với hiệu lực phân tích cao, máy quang phổ Raman cầm tay đời thuận tiện cho việc phân tích nhanh, đánh giá sơ bộ, khảo sát thực địa mẫu cần phân tích Quang phổ Raman tượng tán xạ, xảy va chạm không đàn hồi có trao đổi lượng photon ánh sáng kích thích với phân tử Khi chiếu xạ điện từ vào phân tử, lượng bị hấp thu phát xạ Tán xạ Raman xuất tương tác ánh sáng tới với liên kết phân tử Phương pháp phân tích quang phổ Raman giữ vai trò to lớn công tác kiểm soát, phân tích phát thuốc giả Cụ thể sau: - Phương pháp phân tích cho kết nhanh, không cần chuẩn bị mẫu - Phổ Raman đo trực tiếp thông qua màng vỉ, màng gelatin, qua chai lọ thủy tinh suố t… - Việc đo phổ Raman dễ dàng nên trang bị máy cho nhiều quan quản lý cấp sở, không cần phải cán có trình độ cao để sử dụng - Sự đời máy quang phổ Raman cầm tay có ý nghĩa quan trọng, cho phép phân tích mẫu trường, đưa kết nhanh chóng để có biện pháp cảnh báo, tạm ngưng thu hồi thuốc có nguy làm giả, ảnh hưởng đến sức khỏe người dân - Các đầu dò quang học đo phổ Raman nhiều vị trí khác bao bì đựng lớn giúp cho kiểm soát đồng nguyên liệu, thuốc bột, dung dịch thuốc, nhũ tương, hỗn dịch… - Khi đo phổ Raman thành phẩm thuốc, người ta thường so sánh phổ Raman thuốc với thuốc đối chiếu nhà sản xuất cung cấp Vì đo thành phẩm tín hiệu Raman dược chất ra, thu tín hiệu hệ tá dược, khẳng định thuốc có thuốc nhà sản xuất đăng ký hay không Đánh giá mức độ nguy hiểm tần suất xuất thuốc giả, thuốc chất lượng thị trường dược phẩm Việt Nam, nhóm thuốc với dược chất đại diện lựa chọn để nghiên cứu Chương NGUYÊN LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU - Chất chuẩn: Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương - Các nguyên liệu có nguồn gốc Ấn Độ, Trung Quốc, Việt Nam - Các loại tá dược có nguồn gốc Việt Nam Trung Quốc - Đối tượng nghiên cứu: 10 dươ ̣c chấ t (cefixim, cefpodoxim proxetil, cefuroxim axetil, ethambutol HCl, ibuprofen, isoniazid, lamivudin, lumefantrin, sildenafil citrat zidovudin) Đố i tươ ̣ng phân tić h: các chế phẩ m (viên nang cứng, viên nén) có chứa 10 dươ ̣c chấ t 2.2 TRANG THIẾT BỊ - Máy quang phổ Raman để bàn hãng Renishaw - Máy quang phổ Raman cầm tay hãng BW-TEX Cả hai loa ̣i thiế t bi ̣đề u đươ ̣c hiê ̣u chuẩ n đinh ̣ kỳ theo đúng hướng dẫn của nhà sản xuấ t Mỗi loa ̣i thiế t bi ̣ có quy triǹ h hiê ̣u chuẩ n cu ̣ thể tùy thuô ̣c vào đă ̣c tin ́ h của thiế t bi.̣ Tuy nhiên, về bản thiế t bi ̣ sẽ đươ ̣c hiê ̣u chuẩ n về các chỉ tiêu: nguồ n laser và đô ̣ đúng thang đo - Các trang thiết bị, dụng cụ khác phòng thí nghiệm trường Đại học Dược Hà Nội Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương 2.3 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.3.1 Bào chế viên mô hình - Xây dựng công thức viên nén, viên nang dựa hàm lượng thực tế thị trường tá dược Mỗi loại viên bào chế số tá dược khác viên placebo tương ứng (không chứa dược chất) - Các viên bào chế xong kiểm tra chất lượng phương pháp phân tích thông thường Yêu cầu: trừ viên placebo, viên phải dương tính với dược chất hàm lượng dược chất định lượng phải đạt từ 90,0% đến 110,0% so với hàm lượng mong muốn bào chế 2.3.2 Nghiên cứu thiết lập phổ chuẩn 2.3.2.1 Chuẩn bị chất chuẩn Lựa chọn chất chuẩn sử dụng phổ biến thị trường Việt Nam Tiến hành thực nghiệm sau so sánh phổ chuẩn vừa thiết lập với phổ số chuẩn khác để đánh giá tương đương 2.3.2.2 Lựa chọn điều kiện đo: Các thông số cụ thể cần khảo sát + Công suất nguồn laser; + Độ phân giải; + Dải đo; + Thời gian thu phổ 2.3.2.3 Thiết lập thư viện phổ chuẩn Cài đặt thông số xác định cho thiết bị đo Tiến hành đo phổ lưu thư viện phổ chuẩn thiết bị phân tích - Xác định ảnh hưởng tá dược so phổ chất chuẩn với phổ mẫu viên placebo - Xác định khoảng dao động vị trí cường độ giá trị dịch chuyển Raman so phổ chất chuẩn với phổ viên nghiên cứu - Ảnh hưởng hàm lượng dược chất viên xác định so sánh phổ viên có hàm lượng 50% với phổ viên có đủ hàm lượng tương ứng 2.3.5 Xây dựng chương trin ̀ h phần mềm xác định BDCRCB dược chất Số lượng file liệu phổ lớn nên xử lý trực tiếp gặp nhiều khó khăn thời gian tính khách quan Do cần ứng dụng công nghệ thông tin để giải khó khăn Dữ liệu phổ Raman chất chuẩn loại viên đo máy quang phổ Raman lưu lại dạng file text (có định dạng *.txt) file Microsoft Excel (*.xls) Chuyển file liệu đo (dạng *.txt hay *.xls) thành file dạng database (*.dbf) Microsoft Visual FoxPro Xây dựng chương trình xác định BDCRCB dựa liệu phổ dược chất nghiên cứu phần mềm Microsoft Visual FoxPro theo nguyên tắc xác định BDCRCB thực trực tiếp 2.4 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU - Các kết phân tích phổ (đo phổ, HQI) xử lý theo phần mềm thiết bị phân tích: WIRE 2.0 với máy để bàn Nano Ram OS với máy cầm tay - Trình bày vẽ phổ phần mềm Origin 8.0 - Xử lý số liệu phần mềm Microsoft Excel Microsoft Visual FoxPro 11 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 THIẾT LẬP THƯ VIỆN PHỔ RAMAN CHUẨN CỦA MỘT SỐ DƯỢC CHẤT 3.1.1 Kết bào chế viên mô hình Công thức viên mô hình sử dụng nghiên cứu xây dựng Khoa Nghiên cứu & Phát triển (Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương) Công thức viên xây dựng dựa tá dược viên nén viên nang (tá dược độn, tá dược rã, tá dược dính, tá dược trơn…) dựa lượng dược chất loại viên hay sử dụng thị trường Đối với công thức, số lượng viên mô hình chế tạo khoảng 200 viên chứa dược chất 200 viên placebo Các viên mô hình bào chế xong mang kiểm tra chất lượng phương pháp HPLC Kết kiểm tra chất lượng gồm:  Định tính: tất viên mô hình chứa dược chất cho kết dương tính với dược chất tương ứng  Định lượng: Các viên mô hình chứa dược chất đạt yêu cầu định lượng (97,2% – 100,7%) 3.1.2 Lựa chọn điều kiện đo phổ - Chất chuẩn: sử dụng chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương - Điều kiện đo (máy để bàn/cầm tay): nguồn laser (633 nm/785 nm), độ phân giải (4 cm-1/9 cm-1), dải đo (120 - 1800 cm-1/176 – 2000 cm-1), công suất nguồn thời gian thu phổ: tùy dược chất - Chuẩn bị mẫu đo: phổ thu trực tiếp bột mẫu (máy để bàn), thu qua màng PE mỏng, suốt (máy cầm tay) 3.1.3 Kết phổ Raman thiết lập Việc biểu diễn phổ Raman tiến hành sau: - Lựa chọn số đỉnh có cường độ lớn phổ đồ làm đỉnh đặc trưng để nhận dạng chất 12 - Quy cường độ phổ tỉ lệ thang đo theo đỉnh có cường độ lớn (đỉnh tham chiếu) Chọn đỉnh tham chiếu coi tỷ lệ cường độ 100% Các đỉnh đặc trưng phải biểu diễn kèm thông số cường độ tương đối chúng so với đỉnh tham chiếu - Phổ đồ thông số dải phổ thể thang đo ra, phải đưa thêm thông số độ phân giải phổ 3.1.4 Thẩm định phổ Raman chuẩn 3.1.4.1 Thẩm định độ lặp lại Đo lặp lại lần ta ̣i các vi ̣ trí khác cùng mô ̣t chấ t chuẩ n mỗi dược chất, giá trị HQI lần đo chuẩn so với phổ chuẩn thiết lập đạt từ 99,0% trở lên, (RSD < 0,5%) 3.1.4.2 So sánh với số chuẩn loại So sánh phổ chuẩn vừa thiết lập với phổ số chất chuẩn khác nhằm đánh giá giá trị sử dụng phổ vừa thiết lập Tất giá trị HQI 99,0% Như khác phổ Raman chất chuẩn thiết lập 3.2 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC DƯỢC CHẤT BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ RAMAN 3.2.1 Quy trình phân tích định tính quang phổ Raman  Bước 1: Bật máy, chờ ổn định khoảng trước tiến hành phân tích;  Bước 2: Kiểm tra độ thang đo vật liệu chuẩn (thường phim polystyren);  Bước 3: Gọi phương pháp phân tích tương ứng với dược chất phân tích cài đặt thông số kỹ thuật xác định cho mẫu phân tích;  Bước 4: Chuẩn bị mẫu phân tích: - Đối với thuốc không bao, thuốc không bao đựng vỉ suốt: không cần chuẩn bị mẫu 13 - Đối với thuốc viên nén bao bọc vỉ không suốt: loại bỏ vỉ lớp bao, bộc lộ phần lõi thuốc bên - Đối với thuốc viên nang cứng: loại bỏ vỏ nang, nghiền bột thuốc cần  Bước 5: Đo trực tiếp phổ mẫu phân tích vừa chuẩn bị So sánh phổ thử phổ chuẩn để xác định số HQI  Bước 6: Đánh giá kết phân tích dựa số HQI vừa thu Nếu mẫu phân tích cho HQI ≥ 90% kết xem dương tính Nếu HQI 90%, mẫu bị coi nghi ngờ phải kiểm tra phương pháp 3.2.2 Kết thẩm định quy trình định tính quang phổ Raman 3.2.2.1 Độ đặc hiệu độ lặp lại - Độ đặc hiệu: Hệ số tương đồng phổ (HQI) phổ chuẩn phổ viên đạt từ 91,0% trở lên; phổ placebo: âm tính với dược chất - Độ lặp lại: RSD hệ số tương đồng phổ lần đo lặp lại không 3% 3.2.2.2 Giới hạn phát Tất quy trình phát dược chất viên hàm lượng dược chất viên không quá 30% so với hàm lượng dự kiế n Tại giới hạn phát hiện, hệ số tương đồng phổ (HQI) xấp xỉ 90% 3.2.3 Kết phân tích thuốc thị trường Trong trình thực đề tài, khoảng 500 mẫu số địa phương (Hà Nội, TP Hồ Chí Minh, Lào Cai Đà Nẵng) phân tích sàng lo ̣c bằ ng thiế t bi ̣ đo phổ Raman cầ m tay Sau đó 40 mẫu đã đươ ̣c lấ y về phòng thí nghiê ̣m để phân tích thiết bị để bàn cầm tay Tất mẫu cho kết dương tính với dược chất khảo sát (HQI > 90%) 3.3 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH BỘ DỊCH CHUYỂN RAMAN CƠ BẢN CỦA MỘT SỐ DƯỢC CHẤT 14 Để việc tìm BDCRCB xác nhất, thiết bị quang phổ Raman để bàn thiết bị có độ phân giải cao sử dụng để tiến hành nghiên cứu Các dược chất nghiên cứu chọn để xác định BDCRCB là: isoniazid, ethambutol HCl, sildenafil citrat, ibuprofen lamivudin Kết BDCRCB isoniazid với khoảng Raman shift (cm-1) (tỷ lệ) sau: 664 ± (0,25-0,45), 1002 ±1 (0,95-1,10), 1186 ±1 (0,500,65), 1332 ±1 (1,00), 1602 ±1 (0,85-1,20) Các dịch chuyển kiểm tra với chế phẩm thị trường Kết cho thấy mẫu kiểm tra có đỉnh đặc trưng tỉ lệ cường độ Raman nằm giới hạn cho phép 3.4 XÂY DỰNG CHƯƠNG TRÌNH PHẦN MỀM XÁC ĐỊNH BDCRCB CỦA MỘT SỐ DƯỢC CHẤT 3.4.1 Xây dư ̣ng chương trin ̣ bàn ̀ h phầ n mề m cho thiế t bi để 3.4.1.1 Chuyển đổi liệu đo thành database Các liệu phổ Raman đo từ mẫu máy để bàn xuất file dạng text, sẽ chuyển thành file database (DBF) để xử lý tiếp chương trình xây dựng với Microsoft Visual FoxPro Việc chuyển đổi thực chức Import… menu File File DBF đệm copy sang file DBF thức với trường A B lệnh COPY TO 3.4.1.2 Hoàn thiện liệu database Cha ̣y chương trin ̀ h Hoanthien (bao gồ m khoảng 70 câu lê ̣nh), khai báo tên file DBF, liệu phổ Raman file sẽ tự đô ̣ng đươ ̣c hoàn thiện bằ ng việc chuyển đổi sang trường tương ứng 3.4.1.3 Sơ chọn Raman shift Sau liệu tất file dạng DBF hoàn thiện, dịch chuyển sơ chọn tùy theo mức độ làm tròn khác giá trị Raman shift Cha ̣y chương triǹ h BOCB (bao gồ m khoảng 240 câu lê ̣nh) tạo dịch chuyển 15 3.4.1.4 Hoàn tất việc chọn Raman shift Ảnh hưởng của nề n tá dươ ̣c sẽ đươ ̣c loa ̣i bỏ sau cha ̣y chương triǹ h Nentaduoc (bao gồ m khoảng 500 câu lê ̣nh) Các đỉnh có cường độ Raman vượt 30% so với dược chất bị loại bỏ Các đỉnh lại sử dụng để xác định khoảng dao động đỉnh tỷ lệ trình hoàn thiện BDCRCB 3.4.1.5 Hoàn thiện Bộ dịch chuyển Raman Việc hoàn thiện BDCRCB tiến hành qua bước sau:  Xác định khoảng dao động vị trí tỷ lệ cường độ (so với đỉnh tham chiếu chọn) nhóm chất chuẩn (R), mẫu có hàm lượng dược chất 100% dạng viên nang (C) viên nén (T), mẫu có hàm lượng dược chất 50% dạng viên nang (BC) viên nén (BT), mẫu placebo (PC PT)  Từ nhóm kết so sánh đưa BDCRCB dược chất nghiên cứu Người phân tích thực toàn công việc hoàn thiện thực chương trình Ramancb 3.4.1.6 So sánh kết thực chương trình với xử lý trực tiếp So sánh kết thu phương pháp cho thấy kết xử lý phần mềm cho kết khách quan, bao trùm toàn đỉnh khoảng tỷ lệ có Bộ dịch chuyển Raman dược chất tương ứng xác định trước 3.4.1.7 So sánh liệu phổ mẫu thử với dịch chuyển Raman phần mềm Cha ̣y chương trin ̀ h Mauthu (gồ m 200 câu lê ̣nh) để so sánh liệu phổ Raman mẫu phân tích Chương triǹ h sẽ tự đô ̣ng thực hiê ̣n các bước sau: - So sánh giá trị đỉnh tỷ lệ cường độ so với đỉnh tham chiếu của mẫu thử với Bộ dịch chuyển Raman dược chất 16 Nếu thỏa mãn trường INDINH hoă ̣c INTL nhận giá trị “OK” không nhận giá trị “Fail” - Cuối kết kiểm tra kết xuất hình Việc kiểm tra cho file nhanh chóng hết khoảng chục giây 3.4.2 Xây dư ̣ng chương trin ̣ m tay ̀ h phầ n mề m cho thiế t bi cầ Chương triǹ h phầ n mề m để xác đinh ̣ BDCRCB cho thiế t bi ̣ cầ m tay cũng đươ ̣c xây dựng theo nguyên tắ c giố ng cho thiế t bi ̣ để bàn Tuy nhiên, điề u kiê ̣n đo của thiế t bi ̣ khác nên quy triǹ h xây dựng có mô ̣t số điể m khác sau: - Dữ liê ̣u đo phổ thiế t bi ̣ cầ m tay đươ ̣c lưu dưới da ̣ng file excel nên các file này có thể để riêng rẽ hoă ̣c gô ̣p vào thành từng sheet file excel chung - Đô ̣ phân giải của thiế t bi ̣ để bàn là cm-1 nên mức dao đô ̣ng đươ ̣c đă ̣t là Quy triǹ h xác đinh ̣ BDCRCB bằ ng thiế t bi ̣ để bàn đươ ̣c thực hiê ̣n qua các bước: - Chuyể n dữ liê ̣u đo sang file database - Hoàn thiê ̣n dữ liê ̣u, cho ̣n bô ̣ bản, xác đinh ̣ ảnh hưởng của tá dươ ̣c và hoàn thiê ̣n dữ liê ̣u để thu đươ ̣c BDCRCB Viê ̣c so sánh mẫu thử đo thiế t bi ̣ cầ m tay với BDCRCB xác đinh ̣ đươ ̣c cũng đươ ̣c thực hiê ̣n bằ ng viê ̣c cha ̣y chương triǹ h Mauthu 3.4.3 Sử du ̣ng phầ n mề m và thiế t bi ̣cầ m tay để kiể m tra các mẫu thư ̣c tế thi trươ ̣ ̀ ng Sử du ̣ng BDCRCB isoniazid để kiể m tra 40 chế phẩ m thi ̣ trường (đã đươ ̣c làm mù mẫu và mã hóa) Kế t quả có mẫu đa ̣t (đề u chứa isoniazid), 35 mẫu không đa ̣t (không có isoniazid) Như vâ ̣y chương triǹ h phầ n mề m này là khả thi và có đô ̣ tin câ ̣y Chương BÀN LUẬN 4.1 KẾT QUẢ THƯ VIỆN PHỔ RAMAN THIẾT LẬP ĐƯỢC 17 4.1.1 Về công thức bào chế viên nén, viên nang cứng cho dược chất Thuốc thị trường đa dạng, tùy vào loại dược chất mục đích sử dụng, hàm lượng dược chất viên khác Tuy nhiên, dạng bào chế, chúng hình thành dược chất số loại tá dược Chẳng hạn với viên nén thường bao gồm hai phần: phần vỏ phần lõi Phần vỏ gồm tá dược bao tá dược màu, phần lõi gồm dược chất tá dược độn, rã, dính, trơn Do việc nghiên cứu chế tạo viên mô hình việc nghiên cứu phổ độc lập, nên kết phân tích khách quan 4.1.2 Về cách chuẩn bị mẫu đo Dựa những ưu điể m của phương pháp quang phổ Raman nên đề tài đã có bước cải tiế n đo mẫu qua bao bì PE mỏng, suốt Bước cải tiến nhỏ giúp tăng tuổi thọ đầu đo, tránh bị lẫn mẫu đo với và giảm thời gian phân tích sau lần đo mẫu cần vệ sinh đầu đo 4.1.3 Về cách biểu diễn phổ Raman Các phổ đồ của các dươ ̣c chấ t đo đươ ̣c đã thể hiê ̣n đươ ̣c bản chấ t của phổ Raman, mỗi đin ̉ h phổ đề u thể hiê ̣n dao đô ̣ng của liên kế t phân tử Tuy nhiên cách dùng đỉnh đặc trưng theo nhóm chức không chọn để biểu diễn quang phổ Raman nghiên cứu này, nội dung luận án theo hướng nghiên cứu cấu trúc mà tập trung nhận dạng chất so phổ mẫu thử với phổ chuẩn Mu ̣c đić h cuố i cùng của luâ ̣n án là xây dựng phương pháp để góp thêm mô ̣t công cu ̣ cho các quan quản lý viê ̣c kiể m soát chấ t lươ ̣ng dươ ̣c phẩ m thi ̣trường 4.1.4 Khả ứng dụng phát thuốc giả Phương pháp phổ Raman giúp phân tích nhanh, sàng lọc và đánh giá sơ số lượng lớn chất lượng thuốc lưu hành thị 18 trường, giúp giảm gánh nặng cho đội ngũ cán quản lý chất lượng dược phẩm Với các chế phẩ m có hàm lươ ̣ng dươ ̣c chấ t (khố i lươ ̣ng/khố i lươ ̣ng) viên lớn nên phổ Raman thường có nhiề u đin̉ h và các đin̉ h có cường đô ̣ lớn, có thể sử du ̣ng các thiế t bi ̣cầ m tay để phân tić h ta ̣i hiê ̣n trường, cho kế t quả nhanh chóng Điề u này làm cho phổ Raman có thêm ưu thế phát hiê ̣n thuố c giả có thành phầ n không đúng công thức đã đăng ký Ngươ ̣c la ̣i, tá dược thường có đáp ứng nhỏ, phổ dược chất có cường độ lớn, lại nhiều đỉnh, phổ tá dược bị lẫn vào phổ dược chất khó tránh khỏi, trường hợp tỉ lệ tá dược bị làm giả thấp khó phát Khi phân tích thuốc giả tá dược, cần sử dụng thiết bị Raman có độ phân giải cao, máy để bàn giải vấn đề tốt máy cầm tay 4.2 VỀ KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC DƯỢC CHẤT BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ RAMAN Hệ số HQI tự động tính toán dựa so sánh toàn phổ mẫu thử mẫu chuẩn vùng dải đo lựa chọn Vì bị ảnh hưởng nhiễu tá dược mà người làm phân tích không can thiệp Nhưng bên cạnh đó, việc tính toán theo hệ số HQI có ưu điểm cho kết nhanh, thuận tiện phần mềm tính toán tích hợp thiết bị đo Do đó, thiết bị cầm tay với cách tính kết HQI thích hợp cho nghiên cứu sàng lọc số lượng mẫu lớn thị trường Trong trình thực đề tài, quy trình phân tích xây dựng áp dụng với số lượng lớn mẫu thuốc thị trường Tuy chưa phát mẫu thuốc giả (dạng dược chất thiếu thành phần), phương pháp giảm gánh nặng cho công tác kiểm tra giám sát chất lượng thuốc thực địa quan chức năng: mang hóa chất thuốc thử theo 19 phương pháp khác (mini-lab, sắc ký lớp mỏng), thời gian phân tích mẫu nhanh (15-20 giây/mẫu) giúp sàng lọc số lượng mẫu lớn thời gian ngắn, tiết kiệm thời gian, nhân lực chi phí 4.3 VỀ KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH BỘ DỊCH CHUYỂN RAMAN CƠ BẢN CỦA MỘT SỐ DƯỢC CHẤT Quy trình xây dựng để định tính chất thông qua chất phổ, tức dựa vào vị trí cường độ giá trị dịch chuyển Raman Đối với thuốc thường mẫu phức tạp có nhiều tá dược nên cần làm giảm ảnh hưởng mẫu tới phép đo Nếu chất phân tích có cường độ tán xạ Raman mạnh mẫu có cường độ Raman yếu kết phép đo xác Ngoài đỉnh liên kết đặc trưng, có xạ kích thích chiếu vào, phân tử tán xạ xạ tương tác gốc, liên kết phân tử với tạo nên đỉnh đặc trưng riêng cho phân tử Các đỉnh đặc trưng sử dụng “dấu vân tay” để so sánh xác định xem tín hiệu có phải chất khảo sát hay không BDCRCB tập hợp “dấu vân tay” để tăng khả xác định dược chất viên Các BDCRCB số dược chất vừa xác định được ứng dụng kiểm tra cho số thuốc thị trường cho kết khả quan Bô ̣ dich ̣ chuyể n này có thể áp du ̣ng cho nhiề u loa ̣i chế phẩ m có hàm lươ ̣ng dươ ̣c chấ t (khố i lươ ̣ng/khố i lươ ̣ng) khác thi ̣ trường vì về bản chấ t bô ̣ dich ̣ chuyể n lựa cho ̣n những đin̉ h đă ̣c trưng dựa chuẩ n dươ ̣c chấ t it́ bi ̣ ảnh hưởng của các tá dươ ̣c thường dùng Vì thế với các viên có khố i lươ ̣ng lớn, tỷ lê ̣ tá dươ ̣c lớn thì các đin̉ h có cường đô ̣ lớn của tá dươ ̣c đề u đã bi ̣loa ̣i bỏ khỏi BDCRCB nên viê ̣c so đin̉ h it́ bi ̣ ảnh hưởng Do đó, viên thực tế có hàm lượng không viên mô hin ̀ h thể đủ đỉnh với vi ̣ trí và tỷ lê ̣ cường đô ̣ bô ̣ dich ̣ chuyể n kết luận đươ ̣c là có dược chất 20 4.4 VỀ ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ THÔNG TIN ĐỂ XÁC ĐỊNH BỘ DỊCH CHUYỂN RAMAN CƠ BẢN CỦA MỘT SỐ DƯỢC CHẤT Phương pháp định tính theo HQI có số nhược điểm nêu (bị ảnh hưởng mẫu) Do đó, cần phải tìm liệu Raman đặc trưng để tăng khả phát dược chất viên, chương trình xử lý số liệu để mở rộng khả áp dụng liệu Để nhận diện dược chất có mẫu thử dùng HQI để sàng lọc ban đầu Những trường hợp cho HQI đủ lớn khẳng định có mặt dược chất mẫu Những trường hợp có HQI bé kết luận mặt dược chất mẫu Những trường hợp chưa kết luận cần sử dụng thêm biện pháp khác để có kết luận phù hợp Chương trình xử lý số liệu Microsoft Visual FoxPro xây dựng dựa nguyên tắc xác định BDCRCB theo cách trực tiếp nhằm tăng tính khách quan cho kết xác Phần mềm thiết kế để xác định BDCRCB cho viên mô hiǹ h với các hàm lươ ̣ng khác Do đó, phạm vi áp dụng phần mềm rộng, gặp nhiều đối tượng phân tích khác (các thuốc có hàm lượng thay đổi khác thị trường), phần mềm xử lý với số lươ ̣ng viên mô hiǹ h tùy cho ̣n Với phầ n mề m xác đinh ̣ BDCRCB cho thiế t bi ̣ cầ m tay sẽ là mô ̣t công cu ̣ hữu ić h giúp quan quản lý có thể kiể m tra chấ t lươ ̣ng thuố c ta ̣i hiê ̣n trường Với mỗi dươ ̣c chấ t có thể quét phổ của tấ t cả các chế phẩ m có số đăng ký ở Cu ̣c Quản lý Dươ ̣c làm nguồ n dữ liê ̣u đầ u vào, sử du ̣ng BDCRCB xác đinh ̣ đươ ̣c có thể kiể m tra đươ ̣c tấ t cả các mẫu thi trươ ̣ ̀ ng Microsoft Visual FoxPro là mô ̣t phầ n mề m khá phổ biế n, dễ sử du ̣ng và hoàn toàn có thể chuyể n đổ i dữ liê ̣u phổ thu đươ ̣c từ cả 21 máy Raman để bàn và cầ m tay Với các chương triǹ h đã đươ ̣c xây dựng để xử lý kế t quả phổ đo đươ ̣c sẽ là mô ̣t công cu ̣ ma ̣nh giúp phân tić h đươ ̣c số lươ ̣ng lớn thuố c và cho kế t quả ta ̣i hiê ̣n trường 4.5 VỀ THỬ NGHIỆM PHƯƠNG PHÁP TRONG KIỂM TRA PHÁT HIỆN THUỐC GIẢ TRÊN THI ̣TRƯỜNG Trong thời gian thực hiê ̣n đề tài, không có mẫu thuố c giả nào (da ̣ng không có dươ ̣c chấ t hoă ̣c sử du ̣ng sai dươ ̣c chấ t) đươ ̣c phát hiê ̣n (mẫu dương tiń h) nên tiế n hành làm mẫu giả tự ta ̣o sau: 40 chế phẩ m thi ̣ trường đươ ̣c lấ y về đã đươ ̣c làm mù mẫu, mã hóa và kiể m tra bằ ng phầ n mề m xây dựng cho thiế t bi ̣ cầ m tay Kế t quả cho thấ y mẫu dương tin ́ h đề u chứa đúng dươ ̣c chấ t đươ ̣c kiể m tra, 35 mẫu còn la ̣i đề u âm tiń h với dươ ̣c chấ t đươ ̣c kiể m tra Do vâ ̣y, quy triǹ h đã xây dựng là khả thi và có thể phát hiê ̣n đươ ̣c thuố c giả da ̣ng không có dươ ̣c chấ t hoă ̣c sử du ̣ng sai dươ ̣c chấ t so với công thức đã đăng ký Các nghiên cứu phát hiê ̣n thuố c giả thế giới chủ yế u tâ ̣p trung theo hướng phát hiê ̣n thuố c sản xuấ t ma ̣o danh các nhà sản xuấ t Những nghiên cứu này đề u đã tâ ̣n du ̣ng đươ ̣c những ưu thế nổ i bâ ̣t của phổ Raman phát hiê ̣n thuố c giả Tuy nhiên, sẽ cầ n phải có công thức chuẩ n và nguyên liê ̣u chuẩ n cho từng chế phẩ m của mỗi nhà sản xuấ t Do vâ ̣y, hướng nghiên cứu này sẽ phù hơ ̣p cho các nhà sản xuấ t là cho các quan quản lý với mu ̣c tiêu kiể m tra chấ t lươ ̣ng thuố c thi ̣ trường Đề tài không sâu vào nghiên cứu thuố c giả ma ̣o danh, thuố c nhái các nhà sản xuấ t vì mu ̣c tiêu chiń h là xây dựng phương pháp để góp thêm mô ̣t công cu ̣ hữu hiê ̣u giúp các quan quản lý kiể m tra nhanh đươ ̣c số lươ ̣ng lớn thuố c ta ̣i thực đia.̣ Đố i với thuố c giả da ̣ng không đủ hàm lươ ̣ng đã đăng ký cầ n có những nghiên cứu tiế p theo sâu để phát hiê ̣n KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN 22 Luận án hoàn thành mục tiêu đề thu kết sau: Đã triển khai xây dựng phổ Raman chuẩn cho 10 dược chất xác định tiêu chí định tính - Xây dựng thư viện phổ chuẩn: Thư viện phổ chuẩn bước đầu xây dựng cho 10 dược chất Các phổ chuẩn thiết lập được thẩm định cho kết độ lặp lại HQI cao (RSD < 0,5%) So sánh phổ chuẩn thiết lập với phổ số chất chuẩn khác (USP, Asean, Châu Âu) điều kiện khác phổ thu - Xác định tiêu chí định tính cho dược chất BDCRCB gồm vị trí tỉ lệ cường độ Raman số đỉnh có cường độ lớn, có tính đến ảnh hưởng tá dược thường dùng bào chế loại viên - Đã xác định BDCRCB cho dược chất ethambutol HCl, ibuprofen, isoniazid, sildenafil citrat, lamivudin - Đã ứng dụng công nghệ thông tin để xử lý liệu phổ Raman xây dựng phần mềm với Microsoft Visual FoxPro cho cả thiế t bi ̣ để bàn và cầ m tay để tăng tính khách quan độ xác xác định BDCRCB - Đã đề xuất quy trình phân tích định tính sử dụng quang phổ Raman để kiểm tra phát thuốc giả (dạng dược chất hoă ̣c sử du ̣ng sai dươ ̣c chấ t so với công thức đăng ký) thị trường phối hợp sử dụng hệ số HQI BDCRCB gồm bước Đã thử nghiê ̣m phương pháp để kiểm tra nhằm phát thuốc giả dạng dược chất sử dụng sai dược chấ t so với công thức thị trường Việt Nam - Quy trình phân tích định tính quang phổ Raman áp dụng để sàng lo ̣c cho khoảng 500 mẫu số địa phương (Hà Nội, 23 TP Hồ Chí Minh, Lào Cai Đà Nẵng) bằ ng thiế t bi ̣cầ m tay Kế t quả các mẫu đề u dương tiń h với dươ ̣c chấ t ghi nhañ - 40 chế phẩ m đươ ̣c lấ y mẫu về phòng thí nghiê ̣m đã đươ ̣c kiể m tra bằ ng quy triǹ h đinh ̣ tin ́ h xây dựng cả thiế t bi ̣ để bàn và cầ m tay Kế t quả, các chế phẩ m này đề u dương tin ́ h với dươ ̣c chấ t ghi nhañ với ̣ số HQI đề u lớn 95% - Đã áp dụng BDCRCB xây dựng cho 25 chế phẩm thuốc thị trường (gồm dược chất nghiên cứu) cho kết khả quan - Đã đánh giá ưu nhược điểm loại thiết bị (để bàn cầm tay) khả ứng dụng thực tiễn hai thiết bị - 40 chế phẩm cũng đã đươ ̣c làm mù mẫu và kiể m tra bằ ng phầ n mề m xây dựng với mô ̣t dươ ̣c chấ t (isoniazid) đươ ̣c lựa cho ̣n để so sánh Kế t quả cho thấ y phương pháp đã xây dựng là khả thi và có đô ̣ tin câ ̣y KIẾN NGHỊ - Với ưu điểm phân tích nhanh, lượng mẫu phân tích ít, đặc hiệu cho dược chất hữu cơ, phương pháp quang phổ Raman hứa hẹn có tiềm phân tích tìm dược chất trộn trái phép thuốc đông dược Cần tiếp tục triển khai ứng dụng quang phổ Raman để phát thuốc tân dược trộn trái phép đông dược, dược liệu - Tiếp tục sử dụng quy trình phân tích xây dựng để sàng lọc, phân tích thuốc trường Cần tiếp tục nghiên cứu dược chất khác dạng bào chế khác để tiếp tục khai thác ưu điểm phương pháp quang phổ Raman - Tiế p tu ̣c nghiên cứu ảnh hưởng của tỷ tro ̣ng viên, mâ ̣t đô ̣ dươ ̣c chấ t viên, đô ̣ cứng dâ ̣p viên và kết hợp với thuật toán để mở rộng khả ứng dụng phương pháp quang phổ Raman nhằm ứng dụng cho việc phát thuốc giả dạng không đủ hàm lượng thị trường 24 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ Đặng Thị Ngọc Lan, Nguyễn Thị Thùy Linh, Thái Nguyễn Hùng Thu (2016), "Bước đầu nghiên cứu ứng dụng phổ Raman việc phát nhanh thuốc chống lao giả", Tạp chí Dược học, 01/2016 (477), 6-11 Đặng Thị Ngọc Lan, Đoàn Cao Sơn, Thái Nguyễn Hùng Thu (2016), “Nghiên cứu xác định dịch chuyển Raman Sildenafil, Ibuprofen Lamivudin để sàng lọc nhanh thuốc giả", Tạp chí Dược học, 7/2016 (483), 16-20 Đặng Thị Ngọc Lan, Thái Nguyễn Hùng Thu, Đoàn Cao Sơn (2016), “So sánh khả ứng dụng quang phổ Raman để bàn cầm tay phân tích thuốc", Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc, Số 3, 2016, 14 (53), 22-25 Đặng Thị Ngọc Lan, Đoàn Cao Sơn, Thái Nguyễn Hùng Thu (2016), “Ứng dụng công nghệ thông tin để xác định dịch chuyển Raman số dược chất", Tạp chí Dược học, 12/2016 (488), 52-55, 70 ... phân tử Phương pháp phân tích quang phổ Raman giữ vai trò to lớn công tác kiểm soát, phân tích phát thuốc giả Cụ thể sau: - Phương pháp phân tích cho kết nhanh, không cần chuẩn bị mẫu - Phổ Raman... hiểu, nhận thấy phổ tán xa ̣ Raman (go ̣i tắ t là phổ Raman) có nhiều tiềm để giải yêu cầu khó khăn Do vậy, luận án Nghiên cứu xây dựng phương pháp phân tích phát thuốc giả phổ Raman” thực... luận án Đề tài xây dựng quy trình để kiểm tra thuốc giả thị trường qua bước sau: Xây dựng phổ chuẩn Raman cho dược chất cần phân tích Xác định BDCRCB cho dược chất xây dựng phổ Raman chuẩn Có