Header Page of 126 I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN - Nguyn Minh Hng NGHIấN CU KH NNG NG DNG KIT REALTIME PCR A MI SEPTIFAST TRONG CHN ON NHIM TRNG HUYT TR EM TI BNH VIN NHI TRUNG NG LUN VN THC S KHOA HC H Ni - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN - Nguyn Minh Hng NGHIấN CU KH NNG NG DNG KIT REALTIME PCR A MI SEPTIFAST TRONG CHN ON NHIM TRNG HUYT TR EM TI BNH VIN NHI TRUNG NG Chuyờn ngnh: Vi sinh vt hc Mó s: 60420107 LUN VN THC S KHOA HC NGI HNG DN KHOA HC: TS PHNG TH BCH THY PGS.TS BI TH VIT H H Ni - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng LI CM N Trc ht, vi lũng kớnh trng v bit n sõu sc, tụi xin gi li cm n ti: TS Phựng Th Bớch Thy Trng khoa Nghiờn cu Sinh hc phõn t cỏc bnh Truyn nhim Bnh vin Nhi Trung ng PGS.TS Bựi Th Vit H Ch nhim b mụn Vi sinh vt hc Trng i hc Khoa hc t nhiờn i hc Quc Gia H Ni L nhng ngi thy ó trc tip hng dn, tn tỡnh ch bo, giỳp v ng viờn tụi sut quỏ trỡnh tụi hc tp, nghiờn cu v hon thnh khúa lun Tụi xin gi li cm n chõn thnh ti Ban giỏm c Bnh vin Nhi Trung ng, phũng T chc cỏn b, th khoa Vi sinh, cỏc anh ch v cỏc bn ng nghip Khoa Nghiờn cu Sinh hc phõn t cỏc bnh Truyn nhim - nhng ngi ó giỳp v to iu kin cho tụi rt nhiu tụi cú th hon thnh lun ny Tụi cng xin by t lũng bit n ti Ban giỏm hiu, phũng o to Sau i hc, cỏc thy, cụ giỏo khoa Sinh hc, Trng i hc Khoa hc T nhiờn i hc Quc Gia H Ni, c bit l cỏc thy, cụ giỏo B mụn Vi sinh vt hc ó truyn t cho tụi nhng kin thc quý bỏu sut quỏ trỡnh hc ng thi tụi cng xin chõn thnh cm n cỏc thy cụ hi ng chm lun tt nghip ó cho tụi nhng ý kin quý bỏu, giỳp tụi cú th bo v thnh cụng ti ny Cui cựng, tụi xin gi li cm n n gia ỡnh, bn bố, nhng ngi ó to cho tụi iu kin tt nht hon thnh lun H Ni, ngy 01 thỏng11 nm 2016 Hc viờn Nguyn Minh Hng Khúa 2014 - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng MC LC LI CM N MC LC DANH MC CC BNG DANH MC CC HèNH DANH MC CC Kí HIU, CH VIT TT CHNG TNG QUAN TI LIU 1.1 Tng quan v nhim trựng huyt 1.2 Dch t hc bnh nhim trựng huyt 1.2.1 Trờn th gii 1.2.2 Tỡnh hỡnh nhim trựng huyt ti Vit Nam 1.3 Nguyờn nhõn gõy nhim trựng huyt tr em 1.4 C ch gõy bnh nhim trựng huyt 1.5 Cỏc tỏc nhõn gõy bnh nhim trựng huyt 10 1.5.1 Vi khun Gram õm gõy nhim trựng huyt 11 1.5.2 Vi khun Gram dng gõy nhim trựng huyt 19 1.5.3 Nm gõy nhim trựng huyt 29 1.6 Phng phỏp sinh hc phõn t realtime PCR a mi Septifast chn oỏn nhim trựng huyt tr em .34 CHNG I TNG V PHNG PHP NGHIấN CUError! Bookmark n 2.1 a im nghiờn cu Error! Bookmark not defined 2.2 Thi gian nghiờn cu Error! Bookmark not defined 2.3 i tng nghiờn cu Error! Bookmark not defined 2.3.1 Tiờu chun la chn Error! Bookmark not defined 2.3.2 Tiờu chun loi tr Error! Bookmark not defined 2.4 Phng phỏp nghiờn cu Error! Bookmark not defined 2.4.1 Thit k nghiờn cu Error! Bookmark not defined Khúa 2014 - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng 2.4.2 Phng phỏp ly mu Error! Bookmark not defined 2.4.3 S nghiờn cu Error! Bookmark not defined 2.5 Phng phỏp cy mỏu truyn thng Error! Bookmark not defined 2.6 Phng phỏp realtime PCR a mi Septifast chn oỏn nhim trựng huyt tr em Error! Bookmark not defined 2.6.1 Thit b, sinh phm v húa cht Error! Bookmark not defined 2.6.2 Bo qun v lu tr Error! Bookmark not defined 2.6.3 Bnh phm thu nhn Error! Bookmark not defined 2.6.4 Quy trỡnh thc hin Error! Bookmark not defined CHNG KT QU V BN LUN Error! Bookmark not defined 3.1 T l dng tớnh vi nhim trựng huyt bng k thut realtime PCR a mi Septifast Error! Bookmark not defined 3.2 T l cỏc tỏc nhõn gõy nhim trựng huyt bng k thut realtime PCR a mi Septifast Error! Bookmark not defined 3.3 So sỏnh t l phỏt hin cỏc tỏc nhõn nhim trựng huytbng phng phỏp cy mỏu truyn thng v realtime PCR a mi Septifast Error! Bookmark not defined 3.4 T l tr nhim trựng huyt theo gii tớnh Error! Bookmark not defined 3.5 c im nhim trựng huyt theo Error! Bookmark not defined 3.6 Phõn b nhim trựng huyt theo nhúm tui Error! Bookmark not defined 3.7 Mi liờn quan gia nhim trựng huyt vi cỏc ch s huyt hc Error! Bookmark not defined KT LUN Error! Bookmark not defined KIN NGH Error! Bookmark not defined TI LIU THAM KHO 42 Khúa 2014 - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng DANH MC CC BNG Bng1.1 Cỏc vi sinh vt c nờu danh sỏch xột nghim SeptiFast 38 Bng 1.2 Cỏc loi i din cho Nhúm CoNS v Streptococcusspp 38 Bng 2.1 Giỏ tr baseline ca mi bc súng Error! Bookmark not defined Bng 2.2 Giỏ tr Tm bar ca mi bc súng Error! Bookmark not defined Bng 3.1 Cỏc tỏc nhõn nhim trựng huyt c phỏt hin bng k thut cy mỏu Error! Bookmark not defined Bng 3.2 So sỏnh cỏc tỏc nhõn nhim trựng huyt phỏt hin bng phng phỏp Error! Bookmark not defined Bng 3.3 Tỏc nhõn nhim trựng huyt cú kt qu õm tớnh vi cy mỏu c phỏt hin bng k thut realtime PCR a mi SeptifastError! Bookmark not defined Bng 3.4 Phõn b nhim trựng huyt theo nhúm tui vi bnh nhi c phỏt hin dng tớnh Error! Bookmark not defined Bng 3.5Liờn quan gia nhim trựng huyt v cỏc ch s huyt hcError! Bookmark not Khúa 2014 - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng DANH MC CC HèNH Hỡnh 1.1 Mi quan h gia SIRS, Nhim trựng huyt v ngun gc ca nhim trựng huyt vt ch (Bone et al.1992) Hỡnh 1.2 Real-time PCR vi cỏc u dũ lai ghộp gen A: Bc bin tớnh, B: Bc (o lng hunh quang), C: Bc kộo di, D: Kt thỳc 35 Hỡnh 1.3 Kờnh bc súng ca vi khun Gram dng 36 Hỡnh 1.4 Kờnh bc súng ca vi khun Gram õm 36 Hỡnh 1.5 Kờnh bc súng ca Nm 37 Hỡnh 1.6 Chu trỡnh nhit phn ng realtime PCR a mi Septifast 39 Hỡnh 2.1 SeptiFastLys kit Mgrade Error! Bookmark not defined Hỡnh 2.2 H thng ng nht mu MagNa LyserError! Bookmark not defined Hỡnh 2.3 SeptiFastPrep kit Mgrade Error! Bookmark not defined Hỡnh 2.4 Septifast Cooling block Error! Bookmark not defined Hỡnh 2.5 H thng LightCycler 2.0 Error! Bookmark not defined Hỡnh 2.6 Tm bar t ỳng nh c xỏc nh Error! Bookmark not defined Hỡnh 2.7 D liu kt qu ca realtime PCR a mi SeptifastError! Bookmark not defined Hỡnh 3.1 T l dng tớnh nhim trựng huyt bng k thut SeptifastError! Bookmark no Hỡnh 3.2 T l cỏc tỏc nhõn gõy nhim trựng huyt bng k thut SeptifastError! Bookm Hỡnh 3.3 T l phỏt hin cỏc tỏc nhõn nhim trựng huyt bng hai phng phỏp cy mỏu truyn thng v Septifast Error! Bookmark not defined Hỡnh 3.4 T l tr nhim trựng huyt theo gii tớnhError! Bookmark not defined Hỡnh 3.5 c im nhim trựng huyt theo Error! Bookmark not defined Hỡnh 3.6 Liờn quan gia nhim trựng huyt v cỏc ch s huyt hcError! Bookmark not Khúa 2014 - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng DANH MC CC Kí HIU, CH VIT TT NTH: Nhim trựng huyt ADN: Axit Deoxyribonucleic ARN: Axit ribonucleic PCR: Polymerase chain reaction (Phn ng chui trựng hp) ACCP: American College of Chest Physicians SCCM: Society of Critical Care Medicine SIRS: Systemic Inflammatory Response Syndrome (Hi chng ỏp ng viờm h thng) LPS: Lypopolysaccarit ITS: Internal transcribed spacer (Vựng khụng gian phiờn mó) IC: Internal control (Ni kim chng) dsADN: double-strand ADN (ADN si kộp) CFU/ml: Colony Forming Units/ml (S n v khun lc trờn 1ml mu) EDTA: Ethylen Diamin Tetra Acetat (Cht chng ụng) TM: Thch mỏu CHO: Thch chocolate KS: Khỏng sinh BET: Blood Extraction Tubes A.baumannii: Acinetobacter baumannii E.coli: Escherichia coli K.pneumoniae: Klebsiella pneumoniae CoNS: Coagulase negative Staphylococci Khúa 2014 - 2016 Footer Page of 126 Header Page of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng M U Nhim trựng huyt, sc nhim trựng huyt v hi chng ri lon chc nng a c quan l nhng hp bnh lý rt thng gp lõm sng v c bit nht l cỏc n v hi sc Nhim trựng huyt l nguyờn nhõn gõy t vong cao bnh nhõn, theo s liu cụng b t l t vong nhim trựng huyt l 5,9 tng s 100.000 tr, s ú t l t vong tr t 1-4 tui l 0,6/100.000 v 0,2/100.000 tr t 5-14 tui [43] Ch riờng Hoa K thỡ mi nm cú khong 750.000 ca bnh s ú 215.000 trng hp t vong, chim 9,3% tng s ca t vong ti t nc ny [15] Nh vy, ng v s lng thỡ t vong nhim trựng huyt tng ng vi t vong nhi mỏu c tim v cao hn nhiu so vi AIDS v ung th vỳ Thi gian nm vin trung bỡnh l 19,6 ngy v chi phớ iu tr cho mi trng hp l 22.100 USD tc l khong 16,7 t USD nu tớnh trờn ton Hoa K [15,42] Mc dự cú nhiu tin b vt bc hiu bit c ch sinh lý bnh ca nhim trựng huyt cng nh s phỏt trin ca cỏc phng phỏp chn oỏn iu tr song t l bnh nhõn mc v t vong vỡ nhim trựng huyt trờn th gii khụng ngng gia tng v chim t l khụng nh Ti Vit Nam, nhim trựng huyt l tỡnh trng nhim khun nng v gõy t vong rt cao c bit l tr s sinh Nhim trựng huyt cng l nguyờn nhõn gõy bnh cnh lõm sng nng n cho bnh nhõn, lm tng chi phớ iu tr, kộo di thi gian nm vin ng thi lm xut hin nhng chng vi khun khỏng khỏng sinh bnh vin Nhim trựng huyt tr em giai on sm cú triu chng khụng rừ rng nhng bnh tin trin rt nhanh v cú nhiu bin chng nguy him nh sc nhim trựng, ri lon chc nng a c quan li di chng nng n v dn ti gõy t vong cho bnh nhõn [38] tr em, c bit l tr s sinh v tr nh sc khỏng yu, tr khụng th ung thuc theo ng ming, iu tr tr phi chu nhiu cỏc th thut xõm ln nh tiờm, truyn Vỡ vy vic xỏc nh nhim trựng huyt sm s lm gim t l t vong cho cỏc bnh nhõn Hin ti phng phỏp chn oỏn nhim trựng huyt ti hu ht cỏc bnh vin nc k c ti bnh vin Nhi trung ng ch yu da vo cy mỏu truyn thng Khúa 2014 - 2016 Footer Page of 126 Header Page 10 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng Cy mỏu l phng phỏp ph bin v c coi l tiờu chun vng gold standard chn oỏn v xỏc nh cỏc cn nguyờn gõy bnh nhim trựng huyt Thụng thng cy mỏu c thc hin trc bt u iu tr khỏng sinh Tuy nhiờn phng phỏp cy mỏu thng cú nhy thp i vi cỏc bnh nhõn trc ú ó s dng thuc khỏng sinh hoc i vi nhng loi vi khun phỏt trin chm hoc cú s nhim Vic iu tr khỏng sinh sm cho thy hiu qu ln ti kt qu iu tr u ca bnh nhõn Ngi ta tớnh rng vi mi gi chm iu tr khỏng sinh thỡ trung bỡnh gim 8% kh nng sng sút ca cỏc bnh nhõn [23] Khi m cỏc vi sinh vt sinh trng chm c nghi ng, quỏ trỡnh iu tr c tin hnh trc cú kt qu cy mỏu, vỡ vy vic phỏt hin nhanh cỏc tỏc nhõn gõy nhim trựng huyt s cho phộp iu tr khỏng sinh ỳng, nhanh dn ti lm gim t l t vong cho bnh nhõn [23] Hin nay, bờn cnh phng phỏp cy mỏu truyn thng, mt k thut mi ang c cỏc nc trờn th gii ng dng sng lc cỏc cn nguyờn sm bt u c trin khai rng rói k thut realtime PCR a mi (Septifast) chn oỏn cỏc tỏc nhõn gõy nhim trựng huyt õy l xột nghim sinh hc phõn t da trờn vic phỏt hin ADN ca vi sinh vt mỏu bnh nhõn K thut realtime PCR a mi cú nhy, c hiu cao hn v thi gian cho kt qu ngn hn (ch 5h), ng thi cú kh nng phỏt hin cựng lỳc 25 loi cn nguyờn gõy bnh ph bin nhim trựng huyt bao gm vi khun Gram (-): Escherichia coli, Klebsiella (pneumonia/oxytoca), Serratia marcescens, Enterobacter (cloacae/aerogenes), Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii, Stenotrophomonas maltophilia; vi khun Gram (+): Staphylococcus aureus, CoNS (Coagulase negative Staphylococci(-S.epidermiils, S.haemolyticus), Streptococcus pneumonia, Streptococcus spp (S.pyogenes, S.agalactiae, S.mitis), Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis) v cỏc chng nm: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida krusei, Candida glabrata, Aspergillus fumigates S dng k thut realtime PCR a mi c xem l phng phỏp u vit Khúa 2014 - 2016 Footer Page 10 of 126 Header Page 42 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng 1.6 Phng phỏp sinh hc phõn t realtime PCR a mi Septifast chn oỏn nhim trựng huyt tr em Realtime PCR a mi chn oỏn nhim trựng huyt (Septifast) l xột nghim sinh hc phõn t da trờn vic phỏt hin ADN ca vi sinh vt Phn ng realtime PCR a mi s dng cỏc u dũ nm vựng ITS (internal transcribed spacer)16S-23S v 18S-5.8S tng ng vi cỏc gen rARN ca vi khun v ADN ca nm Xột nghim Septifast cho phộp phỏt hin 25 tỏc nhõn vi khun v nm thụng qua vic phõn tớch cỏc ng cong núng chy v cỏc profile c hiu cho mi sn phm khuch i bng phn mm phõn tớch SF Identification System software Nguyờn lý hot ng: Xột nghim realtime PCR a mi Septifast c thc hin da trờn quỏ trỡnh chớnh: Chun b cỏc mu th bng cỏch ly gii c hc v tinh sch ADN: Quỏ trỡnh ly gii c hc cỏc mu bnh phm c thc hin bng cỏch s dng SeptiFastLys kit Mgrade v h thng MagNA Lyser Vi SeptiFastPrep kit Mgrade mu bnh phm cn ly gii c nhit cao vi protease v m dung dch ly gii gii phúng axit nucleic v bo v ADN sinh t ADNase mỏu Ni kim chng - IC (Internal control) c a vo cựng cỏc mu vi dung dch ly gii Ni chng bao gm cỏc phõn t ADN chui kộp c tng hp vi cỏc v trớ bỏm mi ging ht vi cỏc trỡnh t mc tiờu Cỏc IC ny cha vựng gn u dũ Hybprobe nht cho phộp s khỏc bit ca khuch i IC t mc tiờu c th Sau thờm dung dch m bỏm, hn hp ny c chuyn sang ct lc vi b lc cú chốn cỏc si thy tinh H gen ngi v ADN mc tiờu ca nm/ vi khun s bỏm vo b mt ca si thy tinh ú Nhng cht khụng bỏm nh mui, protein v cỏc mnh v t bo khỏc c loi b sau ú bi bc Sau hon thnh cỏc bc ra, axit nucleic hp ph c y bng dung dch ó nhit cao Dung dch thu c cui cựng l sn phm chun b cho bc tip theo Khúa 2014 - 2016 Footer Page 42 of 126 34 Header Page 43 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng Realtime PCR khuch i ADN mc tiờu phn ng song song (vi khun Gram dng, vi khun Gram õm, nm) v phỏt hin bng u dũ lai c hiu: Mi on dũ lai ghộp gen cú mt loi cht nhum n gn vo hai u dũ lin k Cht cho chuyn nng lng c gn vo mt u dũ, v cht nhn bc súng di c t trờn u dũ khỏc Trong thc hin PCR, cỏc u dũ bờn cnh on mi chu k (Hỡnh 1.2) Cht cho chuyn nng lng hp th cho cht nhn v cht nhn phỏt mt bc súng khỏc S phỏt x tng ca cht nhn c giỏm sỏt theo dừi s xut hin ca mc tiờu Xỏc nh cỏc tỏc nhõn gõy bnh hoc cỏc gen khỏng c a bi vic thc hin phõn tớch ng cong núng chy sau hon thnh quỏ trỡnh chy realtime PCR Cỏc xột nghim LightCyclerđ SeptiFast s dng cỏc on dũ lai ghộp gen vi nhit núng chy khỏc (Tm) vi bn loi cht nhum khỏc cho phộp xỏc nh 25 mm bnh khỏc cựng mt lỳc Hỡnh 1.2 Real-time PCR vi cỏc u dũ lai ghộp gen A: Bc bin tớnh, B: Bc (o lng hunh quang), C: Bc kộo di, D: Kt thỳc Khúa 2014 - 2016 Footer Page 43 of 126 35 Header Page 44 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng Hỡnh 1.3Kờnh bc súng ca vi khun Gram dng Hỡnh 1.4 Kờnh bc súng ca vi khun Gram õm Khúa 2014 - 2016 Footer Page 44 of 126 36 Header Page 45 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng Hỡnh 1.5 Kờnh bc súng ca Nm Realtime PCR a mi Septifast l xột nghim khuch i axit nucleic ng nghim phỏt hin v nhn dng ADN ca vi khun v nm t cỏc vi sinh vt c nờu Danh sỏch xột nghim Septifast s dng cụng c LightCycler 2.0 (Bng 1.1, bng 1.2) LightCyclerđ SeptiFast Test MGRADE s dng cỏc on dũ lai ghộp gen vi bn loi cht nhum khỏc Xột nghim ny bao gm tt c cỏc hoỏ cht cn thit chun b ba hn hp PCR cho vi khun Gram dng, vi khun Gram õm, v nm cng nh chng õm, chng dng v ni chng nhy phõn tớch ca xột nghim LightCycler SeptiFast c phõn tớch bi nh sn xut vi phõn tớch t sut ng ca mi cht phõn tớch vi mt lot nng pha loóng l 100, 30, v CFU/ml mỏu EDTA t cỏc mu ca ngi khe mnh nhy ti thiu l 30 CFU/ml thu c cho tt c cỏc loi, tr Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, v Streptococcus mitis (100 CFU/ml) Khúa 2014 - 2016 Footer Page 45 of 126 37 Header Page 46 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng Bng1.1 Cỏc vi sinh vt c nờu danh sỏch xột nghim SeptiFast Gram (-) Escherichia coli Gram (+) Nm Staphylococcus aureus Candida albicans Klebsiella CoNS1 Candida tropicalis (pneumoniae/oxytoca) Serratia marcescens Enterobacter Streptococcus Streptococcus pneumoniae spp.2 Candida Candida glabrata parapsilosis (cloacae/aerogenes) Proteus mirabilis Enterococcus faecium Candida kruesi Pseudomonas aeruginosa Enterococcus faecalis Aspergillus Acinetobacter baumanii fumigatus Stenotrophomonas maltophilia Coagulase negative Staphylococci (loi i din cho CoNS nhúm c lit kờ Bng 1.2.); 2Loi i din cho cỏc nhúm Streptococcus spp (Bng 1.2) Bng 1.2 Cỏc loi i din cho Nhúm CoNS v Streptococcusspp Coagulase negative Staphylococci Streptococcus spp (CoNS) S hominis subsp novobiosepticus S pasteuri S warneri S cohnii subsp Urealyticum S hominis subsp hominis S lugdunensis S cohnii subsp Cohnii S captitis subsp ureolyticus S captitis subsp captisi S caprae S saprophyticus S saprophyticus subsp sapropyticus S xylosus S epidermidis S haemolyticus Khúa 2014 - 2016 Footer Page 46 of 126 38 S agalactiae S anginosus S bovis S constellatus S cristatus S gordonii S intermdius S milleri S mitis S oralis S parasanguinis S pneumoniae S pyogenes S salivarisus S sanguinis S thermophiles S vestibularis S viridans Header Page 47 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng Hỡnh 1.6 Chu trỡnh nhit phn ng realtime PCR a mi Septifast Xut kt qu t ng sau phõn tớch im nhit bin tớnh Realtime PCR a mi Septifast l k thut c thit k phỏt hin 25 loi vi sinh vt c coi l chim n 90% cỏc tỏc nhõn gõy nhim trựng huyt [47] thi gian ch gi Cỏc mụ t kt qu thc hin k thut ban u ca Lehmann cựng cng s [29], sau ú cỏc th nghim c ỏnh giỏ ch yu nhng bnh nhõn hi sc cp cu Trong nhng nghiờn cu trờn bnh nhõn nghi ng nhim trựng huyt, nhim trựng huyt nng v sc nhim khun, t l phỏt hin dng tớnh vi k thut Septifast cao hn ỏng k so vi k thut cy mỏu T l dng tớnh vi Septifast dao ng t 25 n 35%, cy mỏu t 13 n 21% [17,33] õy cng l k thut c ng dng rng rói trờn th gii vic chn oỏn nhanh, sng lc sm hay thm c vi nhng bnh nhõn ó s dng khỏng sinh Khúa 2014 - 2016 Footer Page 47 of 126 39 Header Page 48 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng hoc trờn nhiu i tng qun th bnh nhõn khỏc cú nghi ng nhim trựng huyt ó cú rt nhiu cụng trỡnh nghiờn cu ca cỏc tỏc gi trờn th gii v k thut ny Nm 2007 tỏc gi Mussap M cựng cng s tin hnh nghiờn cu v ng dng cụng c chn oỏn mi nhim trựng huyt tr s sinh, v ỏnh giỏ vai trũ ca PCR a mi vic phỏt hin sm cng nh xỏc nh vi khun v nm mỏu bnh nhi ó kt lun realtime PCR a mi Septifast hon ton c ỏp dng bnh vin ỏnh giỏ nhim trựng huyt tr em [39] Tỏc gi Vince A nm 2008 vi nghiờn cu trờn 39 mu mỏu ca 36 bnh nhõn vi chn oỏn lõm sng nhim trựng huyt, c bit tt c 36 bnh nhõn u ó c iu tr khỏng sinh ti bnh vin i hc cỏc bnh truyn nhim Croatia, nghiờn cu phỏt hin 13/39 mu dng tớnh (chim 33%), 11/13 mu dng tớnh vi vi khun Gram õm, mu dng tớnh vi Gram dng, ADN ca nm Aspergillus fumigatus cng c phỏt hin mu mỏu ca bnh nhõn st v thõm nhim phi [49] Cng theo mt nghiờn cu nm 2009 ca tỏc gi Varani S cựng cng s ng dng k thut Septifast trờn 100 bnh nhõn suy gim dch cú chn oỏn nghi ng nhim trựng huyt, ú cú 98 bnh nhõn mc ung th, kt qu cho thy k thut Septifast cú th xỏc nh s cú mt hay vng mt ca cỏc vi khun nhanh hn so vi cy mỏu, h tr tớch cc cho k thut cy mỏu c bit l bnh nhõn suy gim dch [48] V nhy v c hiu ca phng phỏp, nm 2010 tỏc gi Lehmann LE ỏnh giỏ tớnh kh thi v k thut cng nh kh nng xỏc nh cỏc tỏc nhõn nhim trựng huyt ca phng phỏp Septifast trờn 453 mu mỏu ca 108 bnh nhõn nhim trựng huyt nng cng thu cho thy 114 mu c phỏt hin dng tớnh so vi ch 58 mu dng tớnh bng phng phỏp cy mỏu So vi cy mỏu thụng thng, nhy v c hiu ca PCR l 0,69 v 0,81 [30] Tỏc gi Torres-Martos E cựng cng s vi nghiờn cu nm 2013 ỏnh giỏ th nghim k thut realtime PCR a mi Septifast trờn i tng tr s sinh v tr nh cú lõm sng chn oỏn nghi Khúa 2014 - 2016 Footer Page 48 of 126 40 Header Page 49 of 126 Lun Thc s Khoa hc Nguyn Minh Hng ng nhim trựng huyt cng cho thy nhy v c hiu cho ca phng phỏp l 79% v 87% [45] Hn na, nghiờn cu nm 2011 ca Lucignano B ch rng PCR a mi Septifast cho phộp chn oỏn nhanh v chớnh xỏc cỏc tỏc nhõn gõy bnh i tng tr s sinh v tr nh cú nghi ng nhim trựng huyt 1673 mu mỏu ca 803 tr cú nghi nhim trựng huyt c ỏp dng k thut Septifast cú nhy, c hiu tng ng l 85% v 93,5% Ngoi k thut Septifast cho t l phỏt hin cỏc tỏc nhõn dng tớnh cao hn ỏng k so vi phng phỏp cy mỏu: 14,6% so vi 10,3% c bit, s cỏc mu mỏu thu thp t bnh nhi ó iu tr khỏng sinh, kt qu cng cho thy t l phỏt hin dng tớnh bng k thut Septifast cao hn hn so vi cy mỏu: 14,1% so vi 6,5% [34] Nm 2012, mt nghiờn cu hi cu ca tỏc gi Tschiedel E cựng cng s trờn 110 mu mỏu ca 75 tr cú nghi ng nhim trựng huyt cng cho t l phỏt hin bng k thut Septifast l 24%, vi nhng bnh nhi cú iu tr khỏng sinh Septifast phỏt hin c 24 mu dng tớnh (chim 25%) Ngoi ra, 14 bnh nhi (13%) cú tin trin bnh kh quan c iu tr khỏng sinh phự hp da trờn kt qu ca k thut Septifast [47] Mi õy, Gies F nghiờn cu c cụng b nm 2016 ỏnh giỏ tim nng ca k thut realtime PCR a mi Septifast 39 tr cú ỏp ng viờm h thng ó qua iu tr khỏng sinh cng cho kt qu rt kh quan 14/39 mu phỏt hin dng tớnh bng Septifast, cy mỏu ch phỏt hin trng hp (p