Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 1/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ u cầI YÊU CẦU VÀ PHẠM VI ÁP DỤNG : - Hướng dẫn công việc thiết lập, thực trì nhằm hướng dẫn pha chế hoá chất phòng thí nghiệm khoa Công nghệ thực phẩm- Sinh học – Môi trường II NỘI DUNG HƯỚNG DẪN CÔNG VIỆC: Cách pha chế dung dòch chuẩn: Pha từ chất gốc: cân xác lượng hoá chất, cho vào bình đònh mức, hoà tan nước cất, sau cho nước cất đến vạch, trộn lắc Pha từ hoá chất chấùt gốc: cân pha nồng độ dung dòch cao nồng độ lý thuyết sau xác đònh nồng độ dung dòch pha hiệu chuẩn nồng độ Pha từ ống chuẩn: cho hoá chất ống chuẩn vào bình đònh mức (cẩn thận không làm hoá chất rơi vãi ngoài) tráng ống chuẩn hoà tan nước cất Sau đònh mức đến vạch, trộn lắc Công thức tính pha dung dòch theo nồng độ: 2.1 Đối với chất rắn: - Pha theo nồng độ mol CM (mol/lit): mct = C M M A V Pha 100 1000 P Trong đó: mct khối lượng mẫu cần cân pha, g CM nồng độ hoá chất cần pha, mol/lít MA phân tử lượng chất cần pha, VPha thể tích mẫu cần pha, ml P độ tinh khiết hoá chất - Pha theo nồng độ đương lượng CN (N): mct = C N Đ V Pha 100 1000 P Trong đó: mct khối lượng mẫu cần cân pha, g Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 2/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ CN nồng độ đương lượng hoá chất cần pha, N Đ số đương lượng hoá chất cần pha VPha thể tích mẫu cần pha, ml P độ tinh khiết hoá chất - Pha theo nồng độ ppm: mct = C ppm *V pha M dạngcân 100 M dạngxácđònh P 10 Trong đó: Cppm số mg chất tan lít mct khối lượng mẫu cần cân pha, g VPha thể tích mẫu cần pha, lít P độ tinh khiết hoá chất.% Mdạng can: phân tử lượng dạng cân Mdạng xác đònh : phân tử lượng dạng cần xác đònh - Pha nồng độ %: mct = C %.V phad 100 P Trong đó: C% nồng độ phần trăm dung dòch cần pha d tỉ trọng dung dòch, với dung dòch loãng xem d≈ Vpha thể tích dung dòch cần pha, ml P độ tinh khiết hoá chất 2.2 Đối với chất lỏng: - Pha theo nồng độ mol CM (mol/lit) Vđđ = C M M V Pha C %.10.d Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 3/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Trong đó: Vđđ thể tích hoá chất đậm đặc cần hút để pha, ml CM nồng độ hoá chất cần pha, mol/lít VPha thể tích mẫu cần pha, ml C% độ tinh khiết hoá chất cần pha, % d khối lượng riêng dung dòch cần pha - Pha theo nồng độ đương lượng CN (N): Vđđ = C N Đ V Pha C %.10.d Trong đó: Vđđ thể tích hoá chất đậm đặc cần hút để pha, ml CN nồng độ đương lượng hoá chất cần pha, N VPha thể tích mẫu cần pha, ml C% độ tinh khiết hoá chất cần pha, % d khối lượng riêng dung dòch cần pha - Pha theo nồng độ % Vđđ = C 2d V pha C 1d Trong đó: C1 : nồng độ phần trăm dung dòch có nồng độ cao ban đầu C2 : nồng độ phần trăm dung dòch cần pha Vđđ: thể tích dung dòch có nồng độ cao ban đầu ml Vpha thể tích dung dòch cần pha, ml Với dung dòch có nồng độ xấp xỉ nhau, xem d1≈ d2 Hiệu chuẩn dung dòch: Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 4/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Hiệu chuẩn cách chuẩn độ ba lần Nếu kết không chệnh lệch 0â.05ml lấy số trung bình cộng kết thu Nếu kết lần chuẩn mẫu chênh lệch cao 0.05ml cần phải tiến hành chuẩn độ lại cho dến kết ý Muốn cho chuẩn độ không sai ± 0.1% cần phảiû lấy lần chuẩn độ 20-30ml dung dòch - Phép tính hệ số hiệu chuẩn dung dòch chuẩn: K= C tt C lt Trong đó: Ctt nồng độ chuẩn Clt nồng độ lí thuyết tính pha Cách hiệu chuẩn dung dòch: - Cách 1:Theo quy tắc đường chéo: Cđ C1 –C0 C1 C0 Cđ - C1 Trong đó: Cđ nồng độ dung dòch có nồng độ cao C0 nước =0 C1 nồng độ chất cần hiệu chuẩn Muốn hiệu chuẩn dung dòch có nồng độ 0.12N thành dung dòch 0.1N cần thêm bao nhiêu ml nước Ta có: 0.12 0.1-0 0.1 0.1 = 0.12-0.1 10 = 0.02 Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 5/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Có nghóa 100ml dung dòch có nồng độ 0.12N cần thêm 2ml nước để dung dòch có nồng độ 0.1N - Cách : Cl(Vđ + Vnước) = Cđ Vđ Ví dụ: muốn hiệu chuẩn 100ml 0.1N từ dung dòch 0.12N cần ml dung dòch có nồng độ 0.12N ml nước Ta có: 0.1(V + Vnước) = 0.12*V V= 10 = 83.3 ml 0.12 Vậy hiệu chuẩn 100ml dung dòch có nồng độ 0.1N phải cần 83ml dung dòch có nồng độ 0.12N cần phải thêm 16.7ml nước cất NHỮNG CHỈ THỊ VÀ THUỐC THỬ THÔNG DỤNG Số T T TÊN HÓA CHẤT CÔNG THỨC Hồ tinh bột 1% CÔNG DỤNG Chỉ thò xác đònh iod CÁCH PHA MÔN THỰC HÀNH GHI CHÚ Hòa tan 5g 100ml nước KNTP, cất Khuấy đều,đổ vào becker ATVSTP, có 100ml nước cất sôi HHTP Đun tiếp đến dd suốt (khoảng 2') Để nguội, nhỏ vài giọt fomandehyt Phenolphtalein 0,1% C20H14O4 Chỉ thò baz axít - Cho 0,1g PP vào cốc chứa KNTP, 100ml cồn khuấy ATVSTP, HHTP Khoảng đổi màu - 10 Bảo quản chai màu tối Metyl da cam C10H14O3 Chỉ thò axít Bảo quản Hòa tan 0,5 MO 100 ml KNTP, Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 6/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Số T T TÊN HÓA CHẤT 0,5% CÔNG THỨC N3SNa CÔNG DỤNG bazơ CÁCH PHA C15H15O2 N3 Chỉ thò axít bazơ ATVSTP, HHTP, chai màu MT tối Cho thò vào cốc cồn 60, khuấy cho tan hoàn toàn KNTP, ATVSTP, HHTP, MT Bảo quản chai màu tối KNTP, ATVSTP, HHTP, MT Bảo quản chai màu tối có nút đậy kín Khoảng đổi màu 4,2 – 6,2 Murexid 0,25% C8H8O6N6 Dùng chẩn 0,25g thò với 100g NaCl H2O độ complexom khan nghiền mòn cối sứ 1-10 Phenaltrolein 0,5% C12H8N2 H2O Alizarin đỏ S 0,1% C14H7SO7 Chỉ thò axít Na.H2O bazơ Thuốc thử tạo Cho 0,5 1-10 phenaltrolein vào KNTP, phức – xác đònh breaker chứa nước cất, đun ATVSTP sắt nóng (80 C) khuấy cho tan cho vào breaker vài giọt HCl đặc, thêm nước đủ 100ml Khoảng đổi màu Nấc 1: 3,7- 5,2 GHI CHÚ nước cất Khoảng đổi màu 3,1 – 4,4 Metyl đỏ 0,1% MÔN THỰC HÀNH Cho 0,1g thò vào cốc chứa ĐC, 100ml nước, khuấy cho tan PTCS hoàn toàn Nấc : 10 - 12 Xylenon da cam C31H28N2 0,1% Na4O13S Chỉ thò màu kim Cho 0,1g thò vào 100g loại- xác đònh nước, khuấy cho tan hoàn nhôm toàn Diphenylamin 1% Chỉ thò oxi hóa khử- xác đònh PTCS, PTCN Hòa tan 1g 100ml H2SO4 PTCS, đậm đặc H3PO4 đậm đặc PTCN Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 7/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Số T T TÊN HÓA CHẤT CÔNG THỨC CÔNG DỤNG CÁCH PHA MÔN THỰC HÀNH GHI CHÚ Fe(II) 10 Acid Fusinsulfuro 1% Thuốc thử tạo Cho 1g thò vào cốc chứa phứùc – xác đònh cồn, khuấy cho tan hoàn NO2toàn 11 Acid Sulfanilic 1% Thuốc thử tạo Hòa tan 1g Acid Sulfanilic PTCN, phứùc – xác đònh 6,5ml HCl đđ, thêm nước MT NO3cất đến 100ml 12 Acid Rubeanic 0,1% Thuốc thử đònh Hoà tan 0,1g acid Rubeanic PTCS tính cốc chứa 100ml cồn 13 Acid Piric 0,1% Chỉ thò axít bazơ Hoà tan 0,1g acid Piric trong10ml nước cất PTCN, MT PTCS Khoảng đổi màu 0,0 – 1.3 14 Hidroxylamin 10% Dùng xác Hoà tan10g 90ml nước PTCN, đònh Fe(II) cất PTCC 15 EcriomT đen Chỉ thò màu kim Nghiền 0,25g thò với PTCS, loại xác đònh độ 10gNaCl KCl sấy khô PTCN cứng khan cối sứ thành bột mòn (ETOO) 16 Ferroin Chỉ thò oxi hóa Hoà tan 1,485g1ĐC, khử- xác đònh 10,phenaltrolin 0,695g PTCN, Fe(II) FeSO4.7H2 O nước,thêm PTCS nước cất thành1 00ml 17 Metylen xanh Thuốc thử tạo Hoà tan 0,1g MB 50g PTCN phức- xác đònh NaH2PO4 với 41ml H2SO4 6N, CHĐBM thêm nước thành lít Bảo quản chai màu tối Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 8/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Số T T TÊN HÓA CHẤT CÔNG THỨC 18 Hổn hợp bảo vệ Zymmerman 27 Thuốc thử Kaufmann 28 Thuốc thử Nessler CÔNG DỤNG Dùng làm dòch bảo xác Fe(II) phương chuẩn độ hoá khử dung vệ đònh pháp oxy CÁCH PHA MÔN THỰC HÀNH Hòa tan 67g MnSO4 khan PTCS, 500ml nước cất, thêm 125ml PTCN H3PO4 đđ 125ml H2SO4 đđ vào, thêm nước thành lít Cho 0,5 lít metanol 75g HS NaBr vào beaker khuấy đến bão hòa Lọc, thêm vào 2,75ml Brôm lỏng K2HgI4 GHI CHÚ Bảo quản chai màu tối Độc Thuốc thử phứùc Dùng 50 g KI pha 50ml PTCN, chất – Xác đònh nước cất Thêm vào dd PTCS NH4+ HgCl2 bão hòa vừa dư (thấy có kết tủa màu đỏ) Thêm vào hỗn hợp 200ml NaOH 5N pha loãng thành lít Để lắng dd, lấy phần nước lọc để sử dụng Độc 29 Phenoldisunfoni c Thuốc thử tạo Ngâm lọ phenol nước PTCN, phứùc – xác đònh nóng khoảng 700 C cho chảy MT NO3lỏng Cân 12g Phenol cho vào becher Thêm vào cốc 144g H2SO4 đđ Đậy mặt kính đồng hồ đun bếp cách thủy tủ hút Độc 30 α- Naphtylamin Thuốc thử tạo Hòa tan 0,6g α- Naphtylamin PTCN, phứùc – xác đònh 100ml CH3COOH 6M để MT NO2trong chai màu mát Pha dùng giữ nhiệt độ thấp Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 9/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Số T T TÊN HÓA CHẤT CÔNG THỨC CÔNG DỤNG CÁCH PHA 31 Dung dòch Feling A Xác đònh đường - Hòa tan 34,66g CuSO4.5H2O PTCN tổng theo nước pha loãng đến phương pháp 500ml Bertrand 32 Dung dòch Feling B Xác đònh đường Xác đònh đường tổng theo phương pháp Bertrand - Hòa tan 173g natri tartrac (muối Rochelle KNaC6H4O6.4H2O) 50g NaOH nước cất pha loãng đến 500ml điều kiện lạnh MÔN THỰC HÀNH PTCN GHI CHÚ Chứa chai nhựa Cách pha hố chất mơn Kiểm nghiệm thực phẩm STT TÊN HOÁ CHẤT K (NH4)2C2O4 40% 1.10 phenanthrolin 0.1 % AgNO 0.1N THỂ TÍCH PHA THÔNG SỐ KỶ THUẬT 100ml P =99 Ba(OH) bão hòa Carrez I Cân 40.40 g (NH4)2C2O4 hồtan nước cất hồ tan 100mg 1.10 phenanthrolin 100ml nước cất Gia nhiệt đến 80 0C Khơng đun sơi 100ml 1lít CÁCH PHA 99.5 Hòa tan 17.0723 g lít nước cất 98 100ml Hòa tan 21.9 g kẽm acetat nước ml CH3COOH / thêm nước cất GHI CHÚ Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 10/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ đến vạch 100ml Carrez II 100ml Hòa 10.6 g K4Fe(CN)6 H2O định mức nước cất đến 100ml Chỉ thị màu hổn hợp 100ml 20 g metyl đỏ + 200mg bromocresol lục pha lõang thành 100ml với ethanol 950C Cồn amoniac 250ml 28.5ml cồn + 7.5 ml amoniac/ nước cất vừa đủ 250 ml 1lít Hòa tan 250g aminiacetat 150 ml nước cất thêm 700ml acid acetic Định mức nước cất đến 1lít 1lít Cho từ từ 20ml H2SO vào 50 ml nước cất Thêm 1.404 g Fe(NH4)2(SO 4)2 1lít 50 g Fe2(SO4)3 + 20 ml H2SO đậm đặc , định mức nươc cất đến lít 1lít cho 280 ml H2SO vào 600ml nước , để lạnh đến nhiệt độ phòng Cho thêm 25 g Na 2MoO định mức đến vạch 250ml Hồ tan 1.0967g KH2PO4 sấy khơ 250 ml nước cất Đệm amoni acetat 10 dung dịch dự trữ sắt 200ppm 11 Dung dịch Fe (III) 12 Dung Molypdavandate 13 14 15 16 dịch Dung dịch chuẩn PO43- EcricromT black Cân 0.25 g ETOO trộn với 100g NaCl khan 100g EDTA 0.01M 1lít Feling A 1lít 99 Hồ tan 3.7600g EDTA với nươớ cất định mức thành lít 69.28 g CuSO4 + nước cất vừa đủ lít Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 18/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Phenanthrolin 0.1% Cho 0,1 g 1-10 phenaltrolein vào breaker chứa nước cất, đun nóng (800C) khuấy cho tan cho vào breaker vài giọt HCl đặc, thêm nước đủ 100ml pp Cho 0,1g PP vào cốc chứa 100ml cồn khuấy Thuốc thử Eber 10 ml HCl + 10 ml ete + 30 ml cồn 25 26 27 Cách pha hố chất mơn Hố học thực phẩm STT TÊN HOÁ CHẤT AgNO 0.1N CH3COOH 5% THỂ TÍCH PHA THÔNG SỐ KỶ THUẬT 1lít P = 99.5 Hòa tan 17.0723 g lít nước cất 1lít P = 99.5 Hòa tan 47.8 ml lít nước cất 1lít M= 249.68 P= 99% CÁCH PHA Hòa tan 0.2 gtrong lít nước cất CuSO 0.02% Cân 0.1 g Diphenylamin hồ tan H2SO4 đậm đặc Rót dung dịch vừa hồ tan sang becher chứa sẵn nước Sau định mức đến 100ml 1lít Diphenylamin Formol 10 % H2SO 60% 1lít 40% 1lít 98 % Hòa 250 ml lít nước cất Hút 61.3ml H2SO4 cho vào becher có chứa sắn lượng nước sau định mức đến GHI CHÚ Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 19/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ 100ml nước cất Hút 5.6ml H2SO4 cho bình định mức 1lít có chứa khoảng 100ml nước cất Định mức đến vạch nước cất 1lít H2SO 0.1N M= 36.46 1lít HCl 0.5N C%= 3638 M= 36.46 1lít HCl 2% C%= 3638 Lấy 43ml HCl cho vào nước cất định mức tới lít Lấy 5.4ml HCl cho vào nước cất định mức tới lít Cân 0.1275g I2 + 0.17g KI thêm nước cất khuấy M = cho tan hết iod sau đònh 253.81 mức nước cất đến vạch % = 99.5 1lít I2 10 1lít I 0.001N 11 K2SO : CuSO 1lít 50 g K2SO + 3.5 g Cu SO KMnO4 12 1lít Cân 3.177g KMnO4 hòa tan M = nước cất có chứa vài 158.04 giọt H2SO4 đd sau đònh % = 99.5 mức đến vạch 1lít 1lít Hòa tan 8.4g NaOH nước cất đònh mức nước cất vạch 1lít 1lít Hòa tan 0.4g NaOH 100ml nước 1lít Hòa tan 50g NaOH 100ml nước 1lít Hồ tan 0.2 g Ninhydrin 100ml aceton KMnO 0.1N 13 NaOH 0.2N 14 NaOH 0.4% 15 NaOH 50% 16 Ninhydrin 0.2 % Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 20/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ 17 pp1% 18 Tashiro 19 Thuốc thử Schiff 0.1% 1lít Hồ tan g p p 100ml cồn 700 1lít 200 mg metyl đỏ 100mg metyl xanh hồ tan 200ml etanol 1lít Cách pha hố chất mơn Phụ gia thực phẩm STT TÊN HOÁ CHẤT K (NH4)2C2O4 40% Canxi clorua 20 % Dung dòch NO3- lưu trữ (1000mg NO3- / 1000ml THỂ TÍCH PHA THÔNG SỐ KỶ THUẬT 100ml P =99 100ml lít CÁCH PHA Cân 40.40 g (NH4)2C2O4 hồtan nước cất cân 20g CaCl2 hòa tan 10ml nước cất, thêm vào 5ml HCl đậm đặc khuấy đều, đònh mức 100ml để dành Cân 1,6290g Anhydrous Potassium Nitrate KNO3 cân phân tích Sau hòa tan nước cất, đònh mức lít GHI CHÚ Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 21/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Dung dòch Sulfanilic Brucine- Dung dịch lưu trữ NO21000ppm * Dung dịch EDTA chlorhydrate 10 lít Hòa tan 1,500g NaNO2 khan nước cất định mức thành 1lít 100ml Cân 500mg muối natri dẫn suất từ EDTA + nước cất Cân 0,6g acid sulfanilic + 70ml nước nóng để nguội + 20ml HCl đậm đạc pha lỗng thành 100ml với nước cất Dung dịch Sulfanilic Dung dịch naphthylamine 100ml Cân 1g Brucine Sulfate + 0,1g Sulfanilic Acid 70ml nước cất nóng, thêm ml HCl đậm đặc, làm lạnh, pha loãng thành 100ml Giữ chai đậm màu 5oC Dung dòch có màu hồng không ảnh hưởng đến kết phân tích dùng vài tháng (chú ý: độc không dùng miệng ngậm pipet để hút dung dòch) 100ml Cân 16,4g CH3COONa hay 27,2 CH3COONa.3H2O +nước cất =100ml Dung dịch độn acetate CaCl2 bão h òa Cân 0,6 naphthylamine chlorhydrate + 50ml nước cất + 1ml HCl đậm đặc + nước cất =100ml Pha dùng giữ nhiệt độ thấp lít Cân 1020 g CaCl2 hồ tan nước cất Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 22/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Cách pha môi trường thí nghiệm vi sinh Stt Tên môi trường / hoá chất pha Công thức pha Tryptone Cao nấm men Glucose Môi trường 1g Plate Count Agar (PCA) Agar Nước cất Môi trường Simmon Citrate Agar (SC): Mơi trường Lauryl Sulphate Broth (LSB Mục đích sử dụng 5g 2,5g lít Sodium citrate NaCl K2HPO4 NH4H2PO4 MgSO4 Bromothymol blue Agar Nước cất Trypticase peptone Phytone peptone NaCl Nước cất 15g lít 2g Được sử dụng khẳ ng đònh sinh hóa 5g 1g 1g 0,2g 0,08g 15g 1l 15g 5g 5g lít Tryptose 20g Lactose 5g K2HPO4 2,75g KH2PO4 2,75g NaCl đònh lượng vi sinh vật phương pháp đếm khuẩn lạc 5g Sodium lauryl sulfate 0,1g Nước cất lít Được sử dụng để tăng sinh chọn lọc Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 23/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Peptone 10g Lactose Brilliant Green Bile Lactose Broth (canh BGBL Môi trường Lauryl Sulphate Broth (LSB 5g Mật bò 20g Brilliant green 0,0133g NaCl 5g Nước cất lít Tryptose 20g Lactose 5g K2HPO4 2,75g KH2PO4 2,75g NaCl 5g Sodium lauryl sulfate 0,1g Nước cất Muối mật No.3 1,5g Môi trường Selenite Cystein Broth (SC): 1.5 g 5g K2HPO4 4g KH2PO4 1,5g Nước cất Thuốc thử Methyl red 20g Lactose NaCl Được sử dụng để tăng sinh chọn lọc lít Tryptose Môi trường EC Broth (EC) Được sử dụng để khẳng đònh vi sinh vật Methyl red Ethanol 95% Nước cất Sodium acid selenite (NaHSeO3) Peptone Lactose Disodium hydrogen phosphate Disodium hydrogen phosphate Được sử dụng để tăng sinh chọn lọc 5g lít 0,1g 300ml 500ml 4g 5g 4g 7.5 g Chỉ thò màu Được sử dụng để tăng sinh chọn lọc Salmonella Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 24/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ 7, Sodium dihydrogen phosphate Nước cất 9g lít Cao nấm men L-Lysine HCl 3g 5g Xylose Lactose Môi trường Sucrose Xylose Lysine Sodium desoxycholate Desoxycholat e Agar (XLD): NaCl Na2S2O5 Ammonium ferous (II) citrate 0,8g Phenolred Agar Peptone Lactose Dextrose Môi trường NaCl Kligler Iron Ammonium ferric citrate Agar (KIA): 0,5g Na2S2O5 Phenolred Agar 315g 7,5g 7,5g 1g 5g 6,8g 0.8 g Môi trường Urea Phenol Red Broth: Môi trường Lysine Decarboxylas e Broth (LDC): Môi trường 0,08 18,0g 20g Được dùng thử 20g nghiệm sinh hóa 1g 5g 0.5g 0,5g 0.0125g 15g Cao nấm men 0,1g KH2PO4 Na2HPO4 Urea Phenolred 9,1g 9,5g 20g 0.08g Cao nấm men 3g Dextrose L-Lysine HCl 5g Bromocresolpurple 1g 5g Cao nấm men Được sử dụng để phân lập Salmonella 0.1g Được dùng để thử nghiệm khả phân giải urea Được sử dụng để phát enzym Lysine Decarboxylase vi sinh vật 0,015g 3g Được sử dụng để phát Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 25/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Lysine Decarboxylas e Broth (LDC) 10 11 12 13 14 15 Môi trường Tryptone Broth: Môi trường MR – VP: Thuốc thử Kovacs Thuốc thử Voges – Proskauer Môi trường Sulphite polymyxin sulphadiazin (SPS agar): Môi 3g Dextrose 1g L-Lysine HCl g 5g Bromocresolpurple enzym Lysine Decarboxylase vi sinh vật 0,015g Tryptone 20g Nước cất lít Được sử dụng khẳng đònh sinh hóa Peptone 5g Glucose 5g Phosphat buffer 5g 5g Nước cất lít Được sử dụng khẳng đònh sinh hóa p-Dimethylamineobenzaldehyde (pDMABA) 10g Isoamylalcohol 150ml HCl đậm đặc 50 ml 50ml α-Naphtol Etanol 96% Pepton 15g Yeast extract Ferric citrate 0,5g Sodium sulphite 0,5g polymycinBsulphate sodiumsulfadiazine Agar Glucose Thử phản ứng Indol 5g 100ml 10g 0.5g Được sử dụng để đònh lượng Clostridium perfringens 0.5 g 0,01g 0,12g 13,9g 20 g Được sử dụng để đònh lượng Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 26/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ trường Wilson Blair cải tiến (Sulfite Iron Wilson Blair agar): 16 17 Môi trường Manitol – Egg – Yolk polymyxin (MYP) Môi trường Red 18 Phenol Dextrose Broth : 19 Môi trường Nitrat Broth : Peptone NaCl Cao thòt Agar Nước cất 10g Clostridium perfringens 5g 5g 20g 1000ml Dung dòch phèn sắt 5% (pha trước dùng) Dung dòch Na2SO3 5% (pha trước dùng) Nuôi cấy vi khuẩn kò khí Thạch Cao thòt Peptone Mannitol NaCl Phenol red Thạch Nước cất Nuôi cấy Bacillus 1g 10g 10g 10g 2,5ml 15g 900ml Proteose peptone No.3 10g Cao thòt 1g Dextrose 5g NaCl 5g Phenol red 0,018g Nước cất lít o Hấp khử trùng 121 C, 10 phút pH cuối = 7,4 ± 0,2 - Được sử dụng để thử nghiệm khả lên men glucose vi sinh vật Caothòt Peptone KNO3 Nước cất Được sử dụng khẳng đònh sinh hóa 3g 5g 1g lít Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 27/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ 20 Trypticase peptone 15g Phytone peptone 5g NaCl 5g lít Môi trường Nước cất Trypticase Đun nóng, phân phối môi trường vào Soy Agar ống nghiệm, hấp khử trùng 15 phút, (TSA) : 121oC Đặt ống nghiệm nghiêng pH cuối = 7,3 ± 0,2 Môi trường thạch 21 Tyrosine: Được sử dụng để bảo quản, phục hồi vi sinh vật trình thí nghiệm Nutrient agar: Dùng để thử nghiệm khả phân hủy Tyrosine Cao thòt Bacillus cereus 3g Peptone 5g Agar 15g Nước cất lít Hấp khử trùng 121oC, 15 phút pH cuối = 6,8 ± 0,2 - Dung dòch Tyrosine 5% Tyrosine 5g Nước cất 100ml Hấp khử trùng 121oC, 15 phút - Môi trường hoàn chỉnh: trộn 90ml môi trường Nutrient agar đun chảy làm nguội 45oC với 10ml dung dòch Tyrosine 5%, phân phối 5ml vào ống nghiệm đặt nghiêng ống nghiệm Nutrient Broth Cao thòt 3g Môi trường Peptone 5g Nutrient Broth 22 với lysozyme Nước cất lít o Hấp khử trùng 121 C, 15 phút pH cuối = 6,8 ± 0,2 - Lysozyme 0,1% Tăng sinh vi khuẩn Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 28/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Lysozyme hydrochloride Nước cất - 23 Thuốc thử nitrit 0,1g 100ml Thuốc thử A : Acid sulfanilic CH3COOH 5N Thuốc thử B: α-Napthol CH3COOH 5N Định tính nitrit 8g lít 2,5g lít Thuốc thử hoàn chỉnh: Dung dòch A Dung dòch B - 24 25 0,25ml 0,25ml - Môi trường Tryptone 10g Cao thòt 5g Cao nấm men 1g Sodium pyruvate 10g 10g Môi trường 12 g Baird-Parker: Glycine 12g Lithium chlorid 5g 5g Agar 20g Nướccất 1000ml Trypticase peptone peptyl Môi trường Phyton 5g Trypticase Soy Agar NaCl 5g (TSA Nước cất Fuchsi n theo Zil Fuchsin bazơ 1g Phenol tinh thể 15 g 15 g 1000ml Nuôi cấy S aureus Được sử dụng để bảo quản, phục hồi vi sinh vật trình thí nghiệm Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 29/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ 5g Cồn 96% 10ml Glycerin vài giọt Nước cất 100ml Nghiền fuchsin với phenol cối sứ, thêm vài giọt glycerin cồn hết Khi hỗn hợp trộn đều, không cục nhỏ, ta thêm nước cất vào, quấy đều, để yên 48 giờ, lọc Dung dòch thuốc nhuộm bảo quản nhiều tháng thường dùng để nhuộm phức tạp Fuchsin loãng: - Fuchsin 1ml Nước cất 9ml 26 27 28 Xanh Mêtylen bão hòa cồn Xanh Metylen theo Lôffle(Loeffe r) Thuốc nhuộm gram - Cho g xanh mêtylen vào 100ml cồn 90%, lắc để yên vài ngày, ngày lắc vài lần, sau lọc Dung dòch bảo quản lâu Khi dùng pha loãng 5-10 lần, nước cất Thuốc nhuộm - Xanh Mêtylen bão hòa cồn 30ml - Dung dòch KOH 1% 1ml - Nước cất 100ml Dung dòch để lâu Thuốc nhuộm Dung dòch gentien violet: + gential violet 2g / 20ml cồn 96% + amoni oxalat 0,8g / 80ml nước cất Trộn hai dung dòch, để lắng sau 24h, lọc giấy lọc thô Dung dòch Lugol: + Iod 1g + KI 2g + Nước cất 300ml Hòa KI vào 5ml nước cất cho tan hết cho I2 vào thêm nước đến 300ml Thuốc nhuộm Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 30/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ 29 30 Thuốc thử Voges – Proskauer Thuốc thử Kovacs α-Naphtol 5g Etanol96% 100ml Dung dòch Kali hydroxit Kali hydroxit (KOH) Nước cấr Thử phản ứng sinh hoá 40% (KOH) 40g 100ml p-Dimethylamineobenzaldehyde (pDMABA) 10g Isoamylalcohol 150ml HCl đậm đặc 50ml Thuốc thử Indol Thuốc thử đựng chai màu tối, tránh ánh sáng 4oC 31 32 33 34 Môi trường Trypticase Soy Agar (TSA) : Trypticase peptone Phytone peptone NaCl Nước cất 15g 5g 5g lít Được sử dụng để bảo quản, phục hồi vi sinh vật trình thí nghiệm Peptone Glucose Phosphate buffer Nước cất 5g 5g 5g lít Được sử dụng khẳng đònh sinh hóa Môi trường canh Tryptone: Tryptone Nước cất 20g lít Được sử dụng để khẳng đònh sinh hóa 20g 1.5 g 5g 4g 1,5g 5g lít Được sử dụng để tăng sinh chọn lọc Môi trường EC Broth (EC): Tryptose Muối mật No.3 Lactose K2HPO4 KH2PO4 NaCl Nước cất Môi trường MR – VP : Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 31/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ 35 36 Môi trường Lauryl Sulphate Broth (LSB): Tryptose Lactose K2HPO4 KH2PO4 NaCl Sodium lauryl sulfate Nước cất lít Môi trường Brilliant Green Bile Lactose Broth (canh BGBL): Peptone Lactose Mật bò Brilliantgreen NaCl Nước cất 37 Môi trường Lauryl Sulphate Broth (LSB): H2SO4 20% Tryptose Lactose K2HPO4 KH2PO4 NaCl Nước cất 20g 5g 2,75g 2,75g 5g 0,1g Được sử dụng để tăng sinh chọn lọc 10g 5g 20g 0,0133g 5g lít Được sử dụng để khẳng đònh vi sinh vật 20g Được sử dụng để tăng sinh 5g chọn lọc 2,75g 2,75g 5g lít 204ml H2SO4 đ98% III PHẦN THEO DÕI SỬA ĐỔI TÀI LIỆU Ngày sửa Nội dung cũ Nội dung sửa lại Số tài liệu : HD/38/ CNTP Lần ban hành: 01 Hiệu lực từ ngày:01-04-2005 Trang/tổng số : s 32/28 Tên hướng dẫn công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Ngày 01 tháng 04 năm 2005 Người duyệt Đàm Mai Người soạn thảo Nguyễn thò Thu Giang ... việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ CN nồng độ đương lượng hoá chất cần pha, N Đ số đương lượng hoá chất cần pha VPha thể tích mẫu cần pha, ml P độ tinh khiết hoá chất - Pha. .. công việc: PHA CHẾ HOÁ CHẤT _ Trong đó: Vđđ thể tích hoá chất đậm đặc cần hút để pha, ml CM nồng độ hoá chất cần pha, mol/lít VPha thể tích mẫu cần pha, ml C%... độ đương lượng hoá chất cần pha, N VPha thể tích mẫu cần pha, ml C% độ tinh khiết hoá chất cần pha, % d khối lượng riêng dung dòch cần pha - Pha theo nồng độ % Vđđ = C 2d V pha C 1d Trong đó: