ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o TRẦN VĂN NAM Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG NẤM MEN CÓ KHẢ NĂNG LÊN MEN RƢỢU CAO TRÊN VỎ TRÁI CÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2012 - 2016 Thái Nguyên, năm 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM o0o TRẦN VĂN NAM Tên đề tài: PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN MỘT SỐ CHỦNG NẤM MEN CÓ KHẢ NĂNG LÊN MEN RƢỢU CAO TRÊN VỎ TRÁI CÂY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Lớp : K44 - CNSH Khoa : CNSH & CNTP Khóa học : 2012 - 2016 Giảng viên hƣớng dẫn : TS Trần Văn Chí Thái Nguyên, năm 2016 i LỜI CẢM ƠN Trong trình học tập nghiên cứu để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp em nhận hướng dẫn, giúp đỡ động viên thầy cô, bạn bè gia đình Nhân dịp hoàn thành khóa luận tốt nghiệp: Trước hết, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Trần Văn Chí - Giảng viên Khoa Công nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên quan tâm giúp đỡ hướng dẫn em tận tình, chu đáo suốt trình làm khóa luận tốt nghiệp Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Th.s Vi Đại Lâm tạo điều kiện giúp đỡ hướng dẫn để em hoàn thành tốt luận văn tốt nghiệp Em xin gửi lời tri ân tới thầy cô giáo Khoa Công nghệ Sinh học - Công nghệ Thực phẩm, trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên dìu dắt truyền đạt cho em không kiến thức mà cao hết đạo đức làm người suốt bốn năm học qua Cuối em xin cảm ơn gia đình, người thân bạn bè động viên, giúp đỡ em suốt trình học tập, nghiên cứu hoàn thành khóa luận Thái Nguyên, tháng năm 2016 Sinh viên Trần Văn Nam ii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Các hóa chất sử dụng đề tài nghiên cứu .28 Bảng 3.2 Các thiết bị sử dụng thí nghiệm 28 Bảng 3.3 Thành phần lít môi trường Hansen 29 Bảng 4.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc sau ngày nuôi cấy 38 Bảng 4.2 Kết thử khả lên men: Thời gian để 50 chủng lên men 5ml CO2 .40 Bảng 4.3 Kết thử khả lên men đường saccharose maltose 41 Bảng 4.4 Kết thử khả tăng sinh khối cách đo OD 43 Bảng 4.5 kết chưng cất xác định hàm lượng rượu dịch dấm chin (môi trường Hansen 18% glucose) .44 Bảng 4.6 Kết theo dõi ảnh hưởng nhiệt độ tới sinh trưởng chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 .47 Bảng 4.7 Ảnh hưởng pH tới phát triển chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 48 Bảng 4.8 Ảnh hưởng hàm lượng peptone tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 .50 Bảng 4.9 Ảnh hưởng nồng độ đường tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 51 Bảng 4.10 Kết thử khả lên men môi trường dịch .52 iii DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 3.1 Các khuẩn lạc phân lập phương pháp cấy trang môi trường Hansen .33 Hình 3.2 Kết thử khả lên men số chủng nấm men .34 Hình 3.3 Một số hình ảnh trình chưng cất rượu 36 Hình 4.1 Hình ảnh khuẩn lạc vi sinh vật tổng số mọc môi trường phân lập .37 Hình 4.2 Hình ảnh số khuẩn lạc khiết 37 Hình 4.3 Kết thử khả lên men đường saccharose maltose chủng 42 Hình 4.4 Biểu đồ thể khả tăng sinh chủng qua kết đo OD 43 Hình 4.5 Hình ảnh tế bào chủng VPk1 soi kính hiển vi 45 Hình 4.6 Khuẩn lạc trước thử nghiệm catalase 46 Hình 4.7 Khuẩn lạc sau thử nghiệm catalase 46 Hình 4.8 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 47 Hình 4.9 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng pH tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 49 Hình 4.10 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng hàm lượng peptone tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 50 Hình 4.11 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 .51 Hình 4.12 Kết chưng cất dịch dấm chín nho 19 độ Brix 53 iv DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt Chú thích VSV : Vi sinh vật KL : Khuẩn lạc OD : Optical density v MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài .1 1.3 Yêu cầu đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 1.4.1 Ý nghĩa khoa học 1.4.2 Ý nghĩa thực tiễn Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Vi sinh vật nói chung nấm men nói riêng vỏ dịch trái 2.2 Đặc điểm chung nấm men .3 2.2.1 Thành phần hóa học nấm men 2.2.2 Đặc điểm hình thái nấm men 2.2.3 Cấu tạo tế bào nấm men 2.2.4 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa nấm men 10 2.2.5 Sự sinh sản nấm men 13 2.2.6 Nhu cầu dinh dưỡng nấm men 16 2.2.7 Sự trao đổi chất nấm men 19 2.2.8 Phân loại nấm men 20 2.2.9 Vai trò nấm men 22 2.2.10 Ứng dụng nấm men 22 2.3 Tình hình nghiên cứu nước 24 2.3.1 Tình hình nghiên cứu nước 24 2.3.2 Tình hình nghiên cứu giới 25 vi Phần 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 28 3.1 Đối tượng nghiên cứu 28 3.2 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 28 3.3 Hóa chất thiết bị sử dụng .28 3.3.1 Hóa chất 28 3.3.2 Dụng cụ thiết bị sử dụng 28 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 29 3.4 Nội dung nghiên cứu 29 3.5 Phương pháp nghiên cứu 29 3.5.1 Phương pháp thu nhận mẫu 29 3.5.2 Phương pháp pha loãng mẫu 30 3.5.3 Phương pháp phân lập tuyển chọn nấm men tổng số 30 3.5.4 Phương pháp cấy chuyển giữ giống 31 3.5.5 Quan sát chủng giống qua khuẩn lạc 33 3.5.6 Xác định khả lên men qua khả sinh khí 34 3.5.7 Thử khả catalaza 34 3.5.8 Xác định mật độ tế bào phương pháp đo OD 35 3.5.9 Phương pháp chưng cất xác định nồng độ cồn .35 3.5.10 Phương pháp xử lý số liệu 36 Phần 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Kết phân lập chủng nấm men từ vỏ số loại 37 4.2 Tuyển chọn chủng nấm men có khả lên men rượu tốt .39 4.2.1 Thử khả lên men .40 4.2.2 Thử khả lên men đường saccharose maltose 41 4.2.3 Kết thí nghiệm khả tăng sinh 42 4.2.4 Nghiên cứu khả sinh rượu chủng nấm men chọn 44 4.3 Định danh sơ chủng VPk1 45 4.3.1 Quan sát hình thái tế bào 45 4.3.2 Thử nghiệm catalase 46 vii 4.4 Tối ưu hóa điều kiện môi trường sinh trưởng phát triển chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 .46 4.4.1 Ảnh hưởng nhiệt độ 47 4.4.2 Ảnh hưởng pH 48 4.4.3 Khả sử dụng nguồn nitơ (peptone) 49 4.4.4 Khả sử dụng nguồn carbon (đường glucose) 51 4.5 Thử khả lên men môi trường dịch 52 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 5.1 Kết luận 54 5.2 Kiến nghị 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO 55 I Tài liệu Tiếng Việt 55 II Tài liệu tiếng anh 56 PHỤ LỤC Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Ở nước ta, rượu thức uống có cồn phổ biến, mang đậm tính truyền thống, gắn bó lâu đời thiếu sống tinh thần văn hóa dân tộc Trên thị trường có nhiều loại rượu tiếng rượu ngô Bản Phố, loại rượu đặc sản người Mông Bản Phố, cao nguyên Bắc Hà, Lào Cai; rượu Làng Vân, đặc sản cổ truyền Bắc Giang; rượu Bầu Đá, đặc sản miền đất võ Bình Định; rượu Gò Đen quê hương Long An; rượu Phú Lễ miền đất Đồng khởi Bến Tre; rượu Xuân Thạnh Trà Vinh [1] Bên cạnh loại rượu truyền thống thị trường nước ta du nhập thêm rượu vang từ nước phương tây Chế biến rượu vang nước giới nghề cổ xưa Việt Nam xuất vài chục năm gần [7] Việc tiêu thụ rượu vang không mạnh bước người tiêu dùng ưa chuộng có độ cồn nhẹ, hương vị thơm tự nhiên, có tác dụng kích thích tiêu hoá… rượu vang chọn thay cho loại rượu mạnh [7] dịp lễ tết Tuy nhiên, ngành công nghiệp sản xuất rượu vang nước ta nhiều hạn chế, chưa thực đáp ứng yêu cầu ngày cao người tiêu dùng Nghiên cứu nâng cao chất lượng rượu vang vấn đề quan tâm Một phương pháp cải tiến chất lượng sử dụng nguồn nấm men tự nhiên phân lập từ nguyên liệu cho trình sản xuất rượu vang cho rượu có độ cồn cao, chất lượng rượu ổn định mùi vị đặc trưng [15] Xuất phát tử thực tế em xin thực đề tài: “Phân lập tuyển chọn số chủng nấm men có khả lên men rượu cao vỏ trái cây” Hoạt động giúp cải thiện tăng cường chất lượng rượu vang, góp phần đa dạng hóa sản phẩm, nâng cao giá trị kinh tế loại phần đáp ứng nhu cầu sử dụng dạng nước uống có cồn đa dạng 1.2 Mục tiêu đề tài Phân lập chủng nấm men từ vỏ vùng miền khác 51 Ta thấy hàm lượng peptone 10g chủng có khả phát triển tốt (giá trị OD đạt 1.692) Kết hoàn toàn phù hợp với nghiên cứu tác giả Nguyễn Lê Bảo Trâm [23] cho nấm men phát triển tốt hàm lượng 10g peptone Kết luận: Hàm lượng Peptone thích hợp cho chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 phát triển 10g/l môi trường 4.4.4 Khả sử dụng nguồn carbon (đường glucose) Thí nghiệm tiến hành môi trường hansen lỏng lượng đường thay đổi từ 1% - 5% Kết nghiên ảnh hưởng nồng độ đường tới sinh trưởng phát triển chủng nấm men thể qua bảng 4.9 hình 4.11 Bảng 4.9 Ảnh hƣởng nồng độ đƣờng tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 Thời gian Nồng độ đƣờng nuôi cấy 1% 2% 3% 4% 5% 0.015 0.013 0.012 0.015 0.013 0.080 0.113 0.118 0.100 0.112 0.718 0.790 0.780 0.670 0.739 12 1.303 1.570 1.660 1.615 1.654 16 1.361 1.603 1.703 1.721 1.721 20 1.521 1.622 1.682 1.750 1.719 24 1.494 1.583 1.676 1.699 1.770 28 1.461 1.572 1.674 1.766 1.682 32 1.450 1.564 1.661 1.755 1.672 36 1.430 1.555 1.652 1.656 1.595 Hình 4.11 Đồ thị khảo sát ảnh hưởng nồng độ đường tới phát triển chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 52 Từ bảng 4.9 hình 4.11 em nhận thấy rằng: Chủng VPk1 có xu hướng phát triển theo nồng độ đường, cụ thể tăng nồng độ đường cao chủng VPk1 phát triển mạnh (giá trị OD thu từ 0.620 - 1.188), mức nồng độ đường 4% chủng VPk1 có khả sinh trưởng phát triển mạnh (giá trị OD tăng mạnh 0.012 - 1.770), nồng độ đường tăng lên 5% sinh trưởng phát triển chủng nấm men vào mức ổn định có xu hướng giảm Như vậy, nồng độ đường thích hợp để chủng VPk1 sinh trưởng phát triển tốt 4% Kết luận: Nồng độ đường thích hợp cho chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 phát triển 4% 4.5 Thử khả lên men môi trường dịch Với mục đích thử khả lên men môi trường tự nhiên chủng VPk1 em tiến hành thử khả lên men môi trường dịch nho Tiến hành: Lấy khoảng 200ml dịch nho (với mức pha loãng xác định độ Brix) cho vào bình nuôi cấy, mang trùng 600C 20 phút để nguội sau cấy chủng VPk1 vào, nuôi lắc 24 đầu sau chuyển vào tủ ấm 300C lên men ngày Sau trình lên men hoàn tất em tiến hành chưng cất xác định độ cồn dịch dấm chín Kết thể bảng sau 4.10 Bảng 4.10 Kết thử khả lên men môi trƣờng dịch Ct Dịch Dịch Dịch Dịch Dịch 50Brix 70Brix 90Brix 140Brix 190Brix (pl lần) (pl lần) (pl 0.5 lần) (không pl) Thêm glucose 3.5e 4.3d 5.4c 7.4b 11.8a Độ rượu LSD05 0.462629 Cv% 3.9 PL: Pha loãng 53 Hình 4.12 Kết chưng cất dịch dấm chín nho 19 độ Brix Từ kết lên men dịch cho thấy chủng VPk1 có khả lên men tốt môi trường dịch quả, nồng độ 19 Brix đạt nồng độ rượu 11,8 % Theo tác giả Lường Đức Phẩm [14] độ rượu vang sau giai đoạn lên men thường đạt từ – 10 độ cồn Đối với kết thí nghiệm đạt độ rượu 11,8% đạt yêu cầu rượu vang Đây công thức có nhiều tiềm năng, nghiên cứu để hoàn thiện quy trình sản xuất rượu vang quy mô công nghiệp 54 Phần KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Qua trình thực đề tài: “Phân lập tuyển chọn chủng nấm men có khả lên men rượu cao vỏ trái cây” em thu số kết sau: Phân lập 50 chủng nấm men từ mẫu thu thập tỉnh Nghệ An, Thái Nguyên, Thanh Hóa, Vĩnh Phúc Tuyển chọn chủng nấm men VPk1 có khả lên men mạnh nhất, nồng độ đường 18% nồng độ cồn rượu đạt 11,4% Định danh sơ chủng nấm men đặt tên tạm thời cho chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 Tối ưu điều kiện sinh trưởng phát triển chủng em thấy chủng sinh trưởng phát triển tốt điều kiện môi trường có chứa 40g/l đường glucoza, 10g/l pepton, nuôi cấy nhiệt độ 300C pH Thử khả lên men môi trường dịch cho chủng VPk1 Ở 190Brix nồng độ cồn đạt 11,8% 5.2 Kiến nghị Nghiên cứu sâu đặc điểm sinh học chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 Nghiên cứu ứng dụng chủng Saccharomyces cerevisiae VPk1 lên men công nghiệp Công nghệ Thực phẩm Định danh giải mã trình tự cho chủng nấm men Saccharomyces cerevisiae VPk1 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu Tiếng Việt Lý Nguyễn Bình, Trần Văn Khánh, Hà Phương Thảo Phân lập tuyển chọn Nấm men có hoạt lực cao từ men rượu Tạp chí khoa học đại học Cần Thơ, 2015 Nguyễn lân Dũng, Vũ Đức Minh Nghiên cứu chủng nấm men phân giải tinh bột Endomycopsis 119 khả sử dụng chúng để sản xuất sinh khối phục vụ chăn nuôi Tập san Đại học Tổng hợp, 1978 Nguyễn Lân Dũng Nghiên cứu số loại nấm men phân lập Việt Nam để nâng cao chất lượng thức ăn gia súc gia cầm Tin tức hoạt động khoa học, 1969 Nguyễn Lân Dũng, Dương Văn Hợp Nghiên cứu lựa chọn chủng nấm men điều kiện sản xuất sinh khối Tạp chí sinh học, 1986 Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty Giáo trình vi sinh vật học NXB Giáo dục, 2007 Nguyễn Lân Dũng Vi Sinh Vật Học Giáo dục, 2009 Vũ Công Hậu Làm vang trái gia đình NXB nông nghiệp Hà Nội 1987 Phạm Hồng Hải, Ngô Kim Chi Xử lý số liệu quy hoạch thực nghiệm nghiên cứu hóa học Hà Nội NXB khoa học tự nhiên công nghệ, 2007 Nguyễn Thị Hiền MALT VÀ BIA NXB Khoa học Kỹ thuật, 2009 10 Nguyễn Văn Hiệu Hoàn thiện quy trình sản suất bánh men cổ truyền ứng dụng sản suất rượu Hà nội : Luận án phó tiến sĩ, 1992 11 Lê Đình Lương Nấm men – đối tượng cổ điển đại công nghệ sinh học Tạp chí hoạt động khoa học, 1990 12 Lê Thanh Mai, Nguyễn Thị Hiền, Phạm Thu Thủy, Nguyễn Thanh Hằng, Lê Thị Lan Chi Các phương pháp phân tích ngành công nghệ lên men Hà Nội : NXB KHKT, 2005 13 Lê, Văn Mẫn, Lại Mai Hương Thí nghiệm vi sinh vật học thực phẩm NXB ĐHQGTPHCM, 2006 14 Lường Đức phẩm Công nghệ vi sinh NXB khoa học công nghệ, 2015 15 Lường Đức Phẩm Nấm men công nghiệp NXB Khoa học Kỹ thuật, 2006 16 Lường Đức Phẩm, Hồ Sướng Vi sinh tổng hợp Hà Nội : NXB KHKT, 1978 17 Nguyễn Đình Quyến Sinh lý, sinh hóa vi sinh vật NXBKH- KT, Hà Nội, 2009 18 Lê Ngọc Tú, Lê Doãn Duyên, Phạm Quốc Thăng, Hóa sinh học công nghiệp Hà Nội : Đại học THCN, 1977 19 Nguyễn Khắc Tuấn Nguyễn Khắc Tuấn Tuyển chọn số chủng nấm men từ bánh men cổ truyền để sản xuất để sản xuất số chế phẩm sinh học sử dụng chăn nuôi lợn Hà Nội : Luận án phó tiến sĩ, 1996 20 Đặng Thị Thu Nghiên cứu glucoamilaza Endomycopsis Fibuliger vài ứng dụng Hà Nội : Luận án phó tiến sĩ khoa học, 1989 21 Trần Linh Thước Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm NXB Giáo dục, 2007 22 Trần Thanh Thủy Hướng dẫn thực hành vi sinh vật học NXB Giáo Dục,1999 23 Lê Nguyễn Bảo Trâm Khảo sát nuôi cấy nấm men dùng làm chế phẩm bổ sung selen Khóa luận tốt nghiệp cử nhân CNSH Đại Học Mở - Bán công TP.HCM, 2005 II Tài liệu tiếng anh 24 C Maragatham and A Panneerselvam Isolation, identification and characterization of wine yeast from rotten papaya fruits for wine production Pelagia Research Library Advances in Applied Science Research, 2011, (2): 93-98 25 Dângelly Lins Figuerôa Martins de Melo; Flávia Cristiana Santos; Antônio Marcio Barbosa Junior; Patrícia Oliveira Santos; Marcelo Augusto Gutiérrez Carnelossi; Rita de Cássia Trindade Identification of yeasts isolated from the pulp in nature and the production of homemade "umbu" wine Brazilian Archives of Biology and Technology, 2007 26 Mantell S.H Principles of plant Oxfor London, 1985 27 Prescott S.C, and Dunn C.G Industrial microbiology Mc Graw – hill book Company new york, 1979 28 R.S Rao, B Bhadra and S Shivaji Isolation and characterization of ethanol-producing yeasts from fruits and tree barks Institution Centre for Cellular and Molecular Biology, Hyderabad, India, 2007 29 Villee C A Vincent G , Pethier Biolgical principles and processes Philadelphia- London- Toronto : s.n., 1971 PHỤ LỤC BẢNG CHUYỂN ĐỔI ĐỘ RƢỢU Phụ lục 1: Bảng chuyển đổi độ rƣợu nhiệt độ khác 200C (từ 25,5– 30%) Nhiệt độ oC 30,0 29,5 + 30 + 29 + 28 + 27 + 26 + 25 + 24 + 23 + 22 + 21 + 20 + 19 + 18 + 17 + 16 + 15 + 14 + 13 + 12 + 11 + 10 +9 +8 +7 +6 +5 +4 +3 +2 +1 +0 26,1 26,4 26,8 27,2 27,6 28,0 28,4 28,8 29,2 29,6 30,0 30,4 30,8 31,2 31,6 32,0 32,4 32,8 33,3 33,7 34,4 34,5 35,0 35,4 35,8 36,2 36,6 37,1 37,5 37,9 38,3 25,6 26,0 26,4 26,7 27,1 27,5 27,9 28,3 28,7 29,4 29,5 29,9 30,3 30,7 31,1 31,5 31,9 32,3 32,8 33,2 33,6 34,0 34,4 34,9 35,3 35,7 36,1 36,6 37,0 37,4 37,8 Thông số đo đƣợc rƣợu kế 24,9 28,5 28,0 27,5 27,0 26,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 oC 25,4 24,6 24,2 23,7 23,2 22,8 25,5 25,1 24,6 24,1 23,6 23,2 25,9 25,4 24,9 24,4 24,0 23,5 26,3 25,8 25,3 24,8 24,4 23,9 26,6 26,2 25,7 25,2 24,7 24,2 27,0 26,6 26,1 25,6 25,1 24,6 27,4 26,9 26,4 26,0 25,5 25,0 27,8 27,3 26,8 26,3 25,8 25,4 28,2 27,7 27,2 26,7 26,2 25,8 28,6 28,1 27,6 27,4 26,6 26,1 29,0 28,5 28,0 27,5 27,0 26,5 29,4 28,9 28,4 27,9 27,4 26,9 29,8 29,3 28,8 28,3 27,8 27,2 30,2 29,7 29,2 28,6 28,1 27,6 30,6 30,1 29,6 29,0 28,5 28,0 31,0 30,5 30,0 29,5 28,9 28,4 31,4 30,9 30,4 29,9 29,3 28,9 31,8 31,3 30,8 30,3 29,7 29,2 32,2 31,7 31,2 30,7 30,2 29,6 32,7 32,4 31,6 31,1 30,6 30,1 33,1 32,6 32,0 31,5 31,0 30,4 33,5 33,0 32,5 32,0 31,4 30,9 33,9 33,4 32,9 32,4 31,8 31,3 34,4 33,8 33,3 32,8 32,2 31,7 34,8 34,2 33,7 33,2 32,7 32,4 35,2 34,7 34,2 33,6 33,1 32,6 35,6 35,1 34,6 34,0 33,5 33,0 36,0 35,5 35,0 34,5 34,0 33,4 36,5 36,0 35,4 34,9 34,4 33,8 36,9 36,4 35,9 35,3 34,8 34,3 37,3 36,8 36,3 35,8 35,3 34,7 26,0 25,5 22,3 22,7 23,0 23,4 23,8 24,1 24,5 24,9 25,3 25,6 26,0 26,4 26,7 27,1 27,5 27,9 28,3 28,7 29,1 29,5 29,9 30,3 30,7 31,1 31,6 32,0 32,4 32,9 33,3 33,7 34,2 21,9 22,2 22,6 22,9 23,3 23,7 24,0 24,4 24,8 25,1 25,5 25,9 26,2 26,6 27,0 27,4 27,8 28,2 28,5 28,9 29,3 29,7 30,2 30,6 31,0 31,4 31,8 32,3 32,7 33,1 33,6 Phụ lục 2: Bảng chuyển đổi độ rƣợu nhiệt độ khác 200C (từ 20,5– 25%) Nhiệt độ oC 25,0 24,5 + 30 + 29 + 28 + 27 + 26 + 25 + 24 + 23 + 22 + 21 + 20 + 19 + 18 + 17 + 16 + 15 + 14 + 13 + 12 + 11 + 10 +9 +8 +7 +6 +5 +4 +3 +2 +1 +0 21,4 21,8 22,4 22,5 22,8 23,2 23,5 23,9 24,3 24,6 25,0 25,4 25,7 26,1 26,5 26,8 27,2 27,6 28,0 28,4 28,8 29,2 29,6 30,0 30,4 30,8 31,3 31,7 32,2 32,6 33,0 20,9 21,3 21,6 22,0 22,4 22,7 23,1 23,4 23,8 24,1 24,5 24,8 25,2 25,6 25,9 26,3 26,7 27,1 27,4 27,8 28,2 28,6 29,0 29,4 29,8 30,3 30,7 31,1 31,5 32,0 32,4 Thông số đo đƣợc rƣợu kế 24,0 23,5 23,0 22,5 22,0 21,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 oC 20,5 20,0 19,6 19,1 18,6 18,2 20,8 20,4 19,9 19,4 19,0 18,5 21,2 20,7 20,2 19,8 19,3 18,8 21,5 21,0 20,6 20,1 19,6 19,2 21,8 21,4 20,9 20,5 20,0 19,5 22,2 21,8 21,3 20,8 20,3 19,8 22,6 22,1 21,6 21,1 20,7 20,2 22,9 22,4 22,0 21,5 21,0 20,5 23,3 22,8 22,3 21,8 21,3 20,8 23,6 23,1 22,6 22,2 21,7 21,2 24,0 23,5 23,0 22,5 22,0 21,5 24,4 23,8 23,3 22,8 22,3 21,8 24,7 24,2 23,7 23,2 22,6 22,1 25,1 24,5 24,0 23,5 23,0 22,5 25,4 24,9 24,4 23,8 23,3 22,8 25,8 25,3 24,7 24,2 23,7 23,1 26,2 25,6 25,1 24,6 24,0 23,5 26,5 26,0 25,4 24,9 24,4 23,8 26,9 26,4 25,8 25,3 24,7 24,2 27,3 26,7 26,2 25,6 25,0 24,5 27,7 27,1 26,6 26,0 25,4 24,8 28,1 27,5 26,9 26,3 25,8 25,8 28,5 27,9 27,3 26,7 26,1 25,5 28,9 28,3 27,7 27,1 26,5 25,9 29,3 28,7 28,1 27,5 26,9 26,2 29,7 29,1 28,5 27,9 27,2 26,6 30,1 29,5 28,9 28,2 27,6 27,0 30,5 29,9 29,3 28,6 28,1 27,4 30,9 30,3 29,7 29,0 28,4 27,8 31,4 30,7 30,1 29,5 28,8 28,2 31,8 31,2 30,6 29,9 29,2 28,6 21,0 20,5 17,7 18,0 18,4 18,7 19,0 19,4 19,7 20,0 20,4 20,7 21,0 21,3 21,6 22,0 22,3 22,6 23,0 23,3 23,6 23,9 24,3 24,2 24,9 25,3 25,6 26,0 26,4 26,8 27,1 27,5 27,9 17,3 17,6 17,9 18,2 18,6 18,9 19,2 19,5 19,9 20,2 20,5 20,8 21,2 21,4 21,8 22,1 22,4 22,7 23,0 23,4 23,7 24,6 24,3 24,7 25,0 25,4 25,7 26,1 26,4 26,8 27,2 Phụ lục 3: Bảng chuyển đổi độ rượu nhiệt độ khác 200C (từ 15,5 – 20%) Nhiệt độ oC Thông số đo đƣợc rƣợu kế 20,0 19,5 19,0 18,5 18,0 17,5 17,0 16,5 16,0 15,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 C o + 30 16,8 16,4 16,0 15,5 15,1 14,7 14,2 13,8 13,4 12,9 + 29 17,2 16,7 16,3 15,8 15,4 15,0 14,5 14,1 13,6 13,2 + 28 17,5 17,0 16,6 16,1 15,7 15,2 14,8 14,4 13,9 13,4 + 27 17,8 17,3 16,9 16,4 16,0 15,5 15,1 14,6 14,2 13,7 + 26 18,1 17,6 17,2 16,7 16,3 15,8 15,4 14,9 14,4 14,0 + 25 18,4 18,0 17,5 17,0 16,6 16,1 15,6 15,2 14,7 14,2 + 24 18,7 18,3 17,8 17,3 16,9 16,4 15,9 15,4 15,0 14,5 + 23 19,0 18,6 18,1 17,8 17,1 16,6 16,2 15,7 15,2 14,7 + 22 19,4 18,9 18,4 17,9 17,4 17,0 16,5 16,0 15,5 15,0 + 21 19,7 19,2 18,7 18,2 17,7 17,2 16,7 16,2 15,7 15,2 + 20 20,0 19,5 19,0 18,5 18,0 17,5 17,0 16,5 16,0 15,5 + 19 20,3 19,8 19,3 18,6 18,3 17,8 17,3 16,8 16,3 15,8 + 18 20,6 20,1 19,6 19,1 18,6 18,1 17,6 17,0 16,5 16,0 + 17 20,9 20,4 19,9 19,4 18,9 18,3 17,8 17,3 16,8 16,2 + 16 21,2 20,7 20,2 19,7 19,2 18,6 18,1 17,5 17,0 16,5 + 15 21,6 21,0 20,5 20,0 19,4 18,9 18,3 17,8 17,2 16,7 + 14 21,9 21,3 20,8 20,2 19,7 19,1 18,6 18,0 17,5 16,9 + 13 22,2 21,6 21,1 20,5 20,0 19,4 18,8 18,3 17,7 17,2 + 12 22,5 21,9 21,4 20,8 20,2 19,7 19,1 18,5 18,0 17,4 + 11 22,8 22,2 21,7 21,1 20,5 20,0 19,4 18,8 18,2 17,6 + 10 23,1 22,5 22,0 21,4 20,8 20,2 19,8 19,0 18,4 17,8 +9 23,4 22,8 22,3 21,7 21,1 20,5 19,9 19,2 18,6 18,0 +8 23,8 23,2 22,6 21,9 21,3 20,7 20,1 19,5 18,9 18,2 +7 24,1 23,4 22,8 22,2 21,6 21,0 20,4 19,7 19,1 18,4 +6 24,4 23,8 23,2 22,5 21,9 21,2 20,6 19,9 19,3 18,6 +5 24,7 24,1 23,4 22,8 22,2 21,5 21,9 20,2 19,5 18,8 +4 25,1 24,4 23,8 23,1 22,5 21,8 21,1 20,4 19,7 19,0 +3 25,4 24,8 24,1 23,4 22,7 22,0 21,4 20,6 19,9 19,2 +2 25,8 25,1 24,1 23,7 23,0 22,3 21,6 20,8 20,1 19,4 +1 26,1 25,1 24,7 24,0 23,3 22,6 21,8 21,1 20,3 19,6 +0 26,5 25,8 25,1 24,3 23,6 22,8 22,0 21,3 20,5 19,7 Phụ lục 4: Bảng chuyển đổi độ rượu nhiệt độ khác 200C (từ 10,5 – 15%) 11,0 10,5 12,0 Thông số đo đƣợc rƣợu kế 14,0 13,5 13,0 12,5 12,0 11,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 oC 11,6 11,1 10,7 10,2 9,8 9,3 8,9 8,4 12,7 12,3 11,8 11,4 10,9 10,5 10,0 9,5 9,1 8,6 + 28 13,0 12,6 12,1 11,6 11,2 10,7 10,3 9,8 9,3 8,9 + 27 13,2 12,8 12,3 11,9 11,4 10,9 10,5 10,0 9,5 9,1 + 26 13,5 13,0 12,6 12,1 11,7 11,2 10,7 10,2 9,8 9,3 + 25 13,8 13,3 12,8 12,4 11,9 11,4 10,9 10,4 10,0 9,5 + 24 14,0 13,5 13,1 12,6 12,1 11,6 11,2 10,7 10,2 9,7 + 23 14,3 13,8 13,3 12,8 12,3 11,8 11,4 10,9 10,4 9,9 + 22 14,5 14,0 13,6 13,1 12,6 12,1 11,6 11,1 10,6 10,1 + 21 14,8 14,3 13,8 13,3 12,8 12,3 11,8 11,3 10,8 10,3 + 20 15,0 14,5 14,0 13,5 13,0 12,5 12,0 11,5 11,0 10,5 + 19 15,2 14,7 14,2 13,7 13,2 12,7 12,2 11,7 11,2 10,7 + 18 15,5 15,0 14,4 13,9 13,4 12,9 12,4 11,9 11,4 10,9 + 17 15,7 15,2 14,7 14,1 13,6 13,1 12,6 12,1 11,5 11,0 + 16 15,9 15,4 14,9 14,3 13,8 13,3 12,8 12,2 11,7 11,2 + 15 16,2 15,6 15,1 14,5 14,0 13,5 12,9 12,4 11,9 11,3 + 14 16,4 15,8 15,3 14,7 14,2 13,6 13,1 12,5 12,0 11,5 + 13 16,6 16,0 15,5 14,9 14,4 13,8 13,2 12,7 12,2 11,6 + 12 16,8 16,2 15,7 15,1 14,5 14,0 13,4 12,8 12,3 11,8 + 11 17,0 16,4 15,8 15,3 14,7 14,1 13,6 13,0 12,4 11,9 + 10 17,2 16,6 16,0 15,4 14,9 14,3 13,7 13,1 12,6 12,0 +9 17,4 16,8 16,2 15,6 15,0 14,4 13,8 13,2 12,7 12,1 +8 17,6 17,0 16,4 15,8 15,2 14,6 14,0 13,4 12,8 12,2 +7 17,8 17,2 16,5 15,9 15,3 14,7 14,1 13,5 12,8 12,3 +6 18,0 17,3 16,7 16,1 15,4 14,8 14,2 13,6 13,0 12,4 +5 18,2 17,5 16,8 16,2 15,6 14,9 14,3 13,7 13,0 12,4 +4 18,3 17,7 17,0 16,3 15,7 15,0 14,4 13,8 13,1 12,5 +3 18,5 17,8 17,1 16,4 15,8 15,1 14,2 13,8 13,2 12,6 +2 18,6 17,9 17,2 16,6 15,9 15,2 14,5 13,9 13,2 12,6 +1 18,8 18,1 17,3 16,8 15,9 15,3 14,6 13,9 13,3 12,6 +0 19,0 18,2 17,5 16,7 16,0 15,3 14,8 14,0 13,3 12,7 Nhiệt độ oC 15,0 14,5 + 30 12,5 + 29 Phụ lục 5: Bảng chuyển đổi độ rượu nhiệt độ khác 200C (từ 5,5 – 10%) Nhiệt độ oC Thông số đo đƣợc rƣợu kế 10,0 9,5 9,0 8,5 8,0 7,5 7,0 6,5 6,0 5,5 Độ rƣợu tính theo thể tích nhiệt độ 20 C o + 30 7,9 7,5 7,0 6,6 6,1 5,9 5,2 4,7 4,2 3,8 + 29 8,2 7,7 7,2 6,8 6,3 5,8 5,4 4,9 4,4 4,0 + 28 8,4 7,9 7,7 7,0 6,5 6,1 5,6 5,1 4,6 4,2 + 27 8,6 8,1 7,7 7,2 6,7 6,3 5,8 5,3 4,8 4,3 + 26 8,8 8,3 7,9 7,4 6,9 6,4 6,0 5,5 5,0 4,5 + 25 9,0 8,6 8,1 7,6 7,1 6,6 6,2 5,7 5,2 4,7 + 24 9,2 8,8 8,3 7,8 7,3 6,8 6,3 5,8 5,4 4,9 + 23 9,4 8,9 8,4 8,0 7,5 7,0 6,5 6,0 5,5 5,0 + 22 9,7 9,1 8,6 8,2 7,7 7,2 6,7 6,2 5,7 5,2 + 21 9,8 9,3 8,8 8,3 7,8 7,3 6,8 6,3 5,8 5,4 + 20 10,0 9,5 9,0 8,5 8,0 7,5 7,0 6,5 6,0 5,5 + 19 10,2 9,7 9,2 8,7 8,2 7,6 7,2 6,6 6,1 5,6 + 18 10,4 9,8 9,3 8,8 8,3 7,8 7,3 6,8 6,3 5,8 + 17 10,5 10,0 9,5 9,0 8,5 8,0 7,4 6,9 6,4 5,9 + 16 10,7 10,2 9,6 9,1 8,6 8,1 7,6 7,0 6,5 6,0 + 15 10,8 10,3 9,9 9,3 8,8 8,2 7,7 7,2 6,6 6,1 + 14 11,0 10,4 10,0 9,4 8,9 8,3 7,8 7,3 6,7 6,2 + 13 11,1 10,6 10,0 9,5 9,0 8,4 7,9 7,4 6,8 6,3 + 12 11,2 10,7 10,1 9,6 9,1 8,5 8,0 7,5 6,9 6,4 + 11 11,3 10,8 10,2 9,7 9,2 8,6 8,1 7,6 7,1 6,5 + 10 11,4 10,9 10,3 9,8 9,3 8,7 8,2 7,6 7,1 6,5 +9 11,5 11,0 10,4 9,9 9,3 8,8 8,2 7,7 7,2 6,6 +8 11,6 11,1 10,5 10,0 9,4 8,8 8,3 7,7 7,2 6,6 +7 11,6 11,0 10,6 10,0 9,5 8,9 8,4 7,8 7,3 6,7 +6 11,8 11,2 10,6 10,1 9,5 8,9 8,4 7,8 7,3 6,9 +5 11,8 11,3 10,7 10,1 9,6 9,0 8,4 7,8 7,3 6,7 +4 11,9 11,3 10,7 10,2 9,6 9,0 8,4 7,8 7,3 6,7 +3 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 8,4 7,8 7,3 6,7 +2 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 8,4 7,8 7,3 6,7 +1 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 8,4 7,8 7,4 6,6 +0 12,0 11,4 10,8 10,2 9,6 9,0 8,4 7,8 7,4 6,6 Phụ lục Kết xử lý số liệu lên men môi trường dịch BALANCED ANOVA FOR VARIATE DC FILE NVV 12/ 5/16 0:55 :PAGE Bang phan tich sai khac giua cac cong thuc dich qua ve VARIATE V003 DC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT 131.631 * RESIDUAL 32.9077 10 646666 508.88 0.000 646666E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 132.277 9.44838 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE NVV 12/ 5/16 0:55 :PAGE Bang phan tich sai khac giua cac cong thuc dich qua ve MEANS FOR EFFECT CT CT NOS DC 3.50000 4.30000 3 5.43333 7.40000 11.8000 SE(N= 3) 0.146818 5%LSD 10DF 0.462629 -ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE NVV 12/ 5/16 0:55 :PAGE Bang phan tich sai khac giua cac cong thuc dich qua ve F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE DC GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) DEVIATION NO BASED ON BASED ON OBS TOTAL SS RESID SS 3.0738 0.25430 15 6.4867 C OF V |CT % | | | | | | 3.9 0.0000 Phụ lục 7: kết phân tích sai khác chủng nấm men đô cồn BALANCED ANOVA FOR VARIATE DC FILE B2 12/ 5/16 8: :PAGE ket qua phan tich sai khac giua cac chung nam men ve VARIATE V003 DC LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB SQUARES SQUARES ER LN ============================================================================= CT 34.1707 * RESIDUAL 8.54267 10 526665 162.20 0.000 526665E-01 * TOTAL (CORRECTED) 14 34.6973 2.47838 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE B2 12/ 5/16 8: :PAGE ket qua phan tich sai khac giua cac chung nam men ve MEANS FOR EFFECT CT CT NOS DC 7.76667 9.03333 3 11.4333 7.03333 8.30000 SE(N= 3) 0.132497 5%LSD 10DF 0.417503 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE B2 12/ 5/16 8: :PAGE ket qua phan tich sai khac giua cac chung nam men ve F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD (N= SD/MEAN | 15) NO OBS DC 15 8.7133 DEVIATION BASED ON BASED ON TOTAL SS RESID SS 1.5743 0.22949 C OF V |CT % | | | | | | 2.6 0.0000 ... miền khác 2 Tuyển chọn chủng nấm men có hoạt lực cao chủng phân lập 1.3 Yêu cầu đề tài Phân lập chủng nấm men có vỏ Tuyển chọn chủng nấm men có hoạt lực lên men rượu cao để sản xuất rượu vang Sơ... QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 4.1 Kết phân lập chủng nấm men từ vỏ số loại 37 4.2 Tuyển chọn chủng nấm men có khả lên men rượu tốt .39 4.2.1 Thử khả lên men .40 4.2.2 Thử khả lên men. .. vang cho rượu có độ cồn cao, chất lượng rượu ổn định mùi vị đặc trưng [15] Xuất phát tử thực tế em xin thực đề tài: Phân lập tuyển chọn số chủng nấm men có khả lên men rượu cao vỏ trái cây Hoạt