BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG NGUYỄN THỊ CHÍNH NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHIẾT TÁCH, XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG MỘT SỐ DỊCH CHIẾT CỦA RỄ CÂY RẼ QUẠT Chuyên ngành: HÓA HỮU CƠ Mã số: 60 44 01 14 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Đà Nẵng - Năm 2015 Công trình hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Người hướng dẫn khoa học: GS.TS.NGND ĐÀO HÙNG CƯỜNG Phản biện 1: PGS.TS Lê Tự Hải Phản biện 2: TS Giang Thị Kim Liên Luận văn bảo vệ Hội đồng chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ khoa học Đại học Đà Nẵng vào ngày 26 tháng năm 2015 Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm Thông tin - Học liệu, Đại học Đà Nẵng - Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Từ xưa đến nay, thuốc dân gian đóng vai trò quan trọng việc chăm sóc sức khỏe người Ngày nay, hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học phân lập từ cỏ ứng dụng nhiều ngành công nghiệp, nông nghiệp chăm sóc sức khỏe người Người ta sử dụng hợp chất thiên nhiên cách trực tiếp để làm thuốc, sử dụng làm mô hình để nghiên cứu tổng hợp hoạt chất theo phương pháp phát triển thành thuốc Chúng dùng nguồn nguyên liệu trực tiếp, gián tiếp cung cấp chất đầu cho công nghệ bán tổng hợp nhằm tìm kiếm chất mới, dược phẩm có hoạt tính, tác dụng chữa bệnh tốt hơn, hiệu Mặc dù công nghệ tổng hợp hóa dược ngày phát triển mạnh mẽ, tạo biệt dược khác sử dụng công tác phòng, chữa bệnh, nhờ giảm tỉ lệ tử vong nhiều Song, đóng góp thảo dược không mà chỗ đứng y học Tuy nhiên, phần lớn sử dụng làm thuốc dân gian chưa nghiên cứu đầy đủ có hệ thống mặt hóa học hoạt tính sinh học mà chủ yếu dựa kinh nghiệm dân gian Dó chưa phát huy hết hiệu nguồn tài nguyên Trong giới thực vật muôn màu, nhiều loài cỏ sử dụng dược liệu quý Trong có rẻ quạt, đặc biệt phần rễ Ở Việt Nam Trung Quốc Hàn Quốc, Rẻ quạt sử dụng rộng rãi làm thuốc chữa bệnh viêm nhiễm, đặc biệt bệnh viêm họng, long đờm, viêm nướu lợi, viêm quản, viêm amidan có mủ, ho nhiều đờm, đau sưng miệng Ở nước Đông Nam Á, thân rễ dùng phổ biến để điều trị bệnh đường hô hấp viêm quản, viêm amidan, hen suyễn dùng làm thuốc lọc máu trị đau lưng Ngoài vị thuốc chữa sốt, đại tiểu tiện không thông, sưng vú tắc tia sữa, chữa kinh nguyệt đau đớn, thuốc lọc máu Là loài mang đặc tính dược lý cao nên thành phần hóa học rẻ quạt nhà khoa học quan tâm Các nghiên cứu giới cho thấy Rẻ quạt có lớp chất iridaltritecpenoid, flavonoid isoflavonoid có rễ, phenol, benzoquinon benzofuran có hạt Hiện nay, Việt Nam có công trình nghiên cứu thành phần hóa học, tính chất hợp chất hóa học có rễ rẻ quạt Đây vấn đề cần quan tâm nhằm quy hoạch, khai thác, chế biến ứng dụng sản phẩm rễ rẻ quạt cách hiệu quả, khoa học Với lý trên, chọn đề tài “ Nghiên cứu chiết tách xác định thành phần hóa học số dịch chiết rễ rẻ quạt ” Mục đích nghiên cứu - Xây dựng quy trình chiết tách hợp chất hóa học có rễ rẻ quạt khô dung môi khác nhau; - Xác định thành phần hóa học, công thức cấu tạo hợp chất có rễ rẻ quạt Đối tượng phạm vi nghiên cứu 3.1 Đối tượng nghiên cứu Rễ rẻ quạt thu hái phường Hương Văn, thị xã Hương Trà, tỉnh Thừa Thiên Huế 3.2 Phạm vi nghiên cứu - Xác định số tiêu vật lý nguyên liệu độ ẩm, hàm lượng tro, thành phần hàm lượng kim loại nặng; - Chiết tách cấu tử hữu rễ rẻ quạt khô dung môi n-hexane, ethyl acetate, dichloromethane, methanol; - Định danh, xác định thành phần cấu tử rễ rẻ quạt phương pháp GC-MS; - Tinh chế chất rắn thu từ dịch chiết Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết - Thu thập thông tin tài liệu liên quan đến đề tài; - Xử lí thông tin lý thuyết để đưa vấn đề cần thực trình thực nghiệm 4.2 Phương pháp thực nghiệm - Phương pháp nghiên cứu xử lí mẫu; - Phương pháp trọng lượng xác định thông số vật lý nguyên liệu; - Phương pháp AAS xác định thành phần hàm lượng kim loại nặng; - Phương pháp chiết nóng soxhlet dung môi nhexane, ethyl acetate, dichloromethane, methanol; - Phương pháp sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS) để định danh cấu tử có dịch chiết; - Phương pháp kết tinh lại Nội dung nghiên cứu 5.1 Nghiên cứu lý thuyết Thu thập, tổng hợp tài liệu, sách báo có liên quan đến đề tài 5.2 Nghiên cứu thực nghiệm - Xử lý mẫu, áp dụng phương pháp trọng lượng, phân hủy mẫu phân tích để khảo sát độ ẩm, hàm lượng tro, hàm lượng kim loại nặng - Chiết mẫu phương pháp soxhlet với dung môi n- hexane, ethyl acetate, dichloromethane, methanol - Nghiên cứu, khảo sát trình chiết thành phần có rễ Rẻ quạt với dung môi n-hexane, ethyl acetate, dichloromethane, methanol - Khảo sát chọn dung môi kết tinh lại chất rắn thu từ dịch chiết dung môi tiến hành kết tinh lại Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài 6.1 Ý nghĩa khoa học - Cung cấp thông tin khoa học quy trình chiết tách thành phần cấu tạo số hợp chất có rễ rẻ quạt - Cung cấp số liệu thực nghiệm cho nghiên cứu sâu rễ rẻ quạt 6.2 Ý nghĩa thực tiễn - Cung cấp tư liệu quy trình chiết tách rễ rẻ quạt với dung môi khác nhau, từ đề quy trình ứng dụng thực tế - Giải thích cách khoa học số kinh nghiệm dân gian thuốc cổ truyền ứng dụng rễ rẻ quạt Cấu trúc luận văn Ngoài phần mở đầu, kí hiệu chữ viết tắt, danh mục bảng, hình, kết luận kiến nghị, tài liệu tham khảo Luận văn chia làm chương sau: Chương 1: Tổng quan tài liệu Chương 2: Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Chương 3: Kết thảo luận CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 GIỚI THIỆU THỰC VẬT HỌC HỌ LAY ƠN (IRIDACEAE) 1.2 GIỚI THIỆU CHI BELAMCANDA 1.3 TỔNG QUAN VỀ RẺ QUẠT 1.3.1 Giới thiệu chung rẻ quạt 1.3.2 Hình thái thực vật rẻ quạt 1.3.3 Đặc điểm bột dược liệu 1.3.4 Phân bố, thu hái chế biến 1.3.5 Tác dụng dược lý - Công dụng 1.4 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÓ TRONG CÂY RẺ QUẠT 1.4.1 Các hợp chất endion 1.4.2 Dẫn xuất stilbene 1.4.3 Các flavonoit 1.4.4 Các hợp chất phenolic 1.4.5 Các isoflavonoit 1.4.6 Các hợp chất iridal 1.5 HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA BELAMCANDA CHINENSIS (BCL) 1.5.1 Hoạt tính kháng viêm 1.5.2 Hoạt tính điều trị bệnh tiểu đường 1.5.3 Hoạt tính chống oxi hóa chống đột biến 1.5.4 Hoạt tính chống ung thư tuyến tiền liệt 1.5.5 Hoạt tính chống ung thư vú 1.5.6 Hoạt tính kháng nấm 1.5.7 Tác dụng estrogen CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LIỆU, HÓA CHẤT, DỤNG CỤ 2.1.1 Nguyên liệu Thu gom nguyên liệu Cây rẻ quạt thu hái phường Hương Văn, thị xã Hương Trà, tỉnh Thừa Thiên Huế Xử lý nguyên liệu: Cây rẻ quạt thu hái về, bỏ thân lấy phần rễ, loại bỏ tạp chất Rửa thật nước, để ráo, xắt lát phơi khô, nghiền thành bột mịn 2.1.2 Hóa chất 2.1.3 Dụng cụ 2.1.4 Các loại máy móc, thiết bị 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Phương pháp chiết Soxhlet 2.2.2 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) 2.2.3 Phương pháp sắc ký ghép khối phổ (GC-MS) 2.2.4 Phương pháp kết tinh lại 2.2.5 Phương pháp sắc kí mỏng 2.3 NGHIÊN CỨU THỰC NGHIỆM 2.3.1 Sơ đồ nghiên cứu thực nghiệm 2.3.2 Xác định số tiêu hóa lý 2.3.3 Phương pháp chiết tách chất từ rễ rẻ quạt với dung môi n-hexane, ethyl acetate, dichloromethane, methanol phương pháp Soxhlet 2.3.4 Tinh chế chất rắn thu từ dịch chiết 2.3.5 Chạy sắc kí mỏng dịch tan chất rắn sau tinh chế CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU HÓA LÝ 3.1.1 Độ ẩm Lấy mẫu bột rễ rẻ quạt sấy nhiệt độ 1050C đến khối lượng không đổi Độ ẩm bột rễ rẻ quạt kết trung bình mẫu Kết xác định độ ẩm trung bình mẫu thể bảng 3.1 Bảng 3.1 Kết khảo sát độ ẩm bột rễ rẻ quạt STT m0 (g) m1 (g) m2 (g) ɷ (%) ɷ𝐓𝐁 (%) 31.989 2.122 33.979 6.221 32.014 2.089 33.971 6.342 6.235 31.998 2.102 33.971 6.143 Nhận xét: Độ ẩm trung bình bột rễ rẻ quạt khô 6.235%, với độ ẩm này, bảo quản nguyên liệu thời gian dài mà không bị mốc, thay đổi mặt cảm quan, nguyên liệu có độ ổn định tốt 3.1.2 Xác định hàm lượng tro Lấy mẫu bột rễ rẻ quạt nung nhiệt độ 400 – 4500C thời gian từ – Hàm lượng tro bột rễ rẻ quạt hàm lượng tro trung bình mẫu Kết xác định hàm lượng tro trung bình mẫu thể Bảng 3.2 Bảng 3.2 Kết khảo sát hàm lượng tro bột rễ Rẻ quạt STT m0 (g) 31.989 32.014 31.998 m1 (g) 2.122 2.089 2.102 m3 (g) 32.055 32.076 32.062 %Tro 3.110 2.968 3.044 %TroTB 3.041 10 Sử dụng phương pháp chiết soxhlet với lượng bột rễ rẻ quạt khoảng 10g, với dung môi nhiệt độ sôi dung môi Tiến hành chiết mẫu với thời gian khác nhau, 4, 6, 8, 10, 12 Thu dịch chiết, hút 10ml dịch chiết, cân, xác định khối lượng riêng dịch chiết, từ tính phần trăm khối lượng chiết a Dung môi n-hexane Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi n-hexane trình bày bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi n-hexane Thời gian (h) m1 (g) V (ml) Khối Thể tích lượng bột sau chiết rễ 10.024 146.2 d (g/ml) Khối lượng riêng dung môi 0.6423 m(g) %m Khối Hàm lượng lượng riêng cao cao chiết chiết 0.6644 3.22 10.034 145.3 0.6423 0.6708 4.12 10.046 144.6 0.6423 0.6786 5.23 10 10.056 143.2 0.6423 0.6768 4.92 12 10.064 142.3 0.6423 0.6757 4.72 Nhận xét: Từ kết bảng 3.4 cho thấy tăng thời gian chiết từ lên khối lượng sản phẩm chiết tăng lên tiếp tục tăng thời gian chiết khối lượng sản phẩm chiết liên tục giảm Điều giải thích ban đầu gia nhiệt khả hòa tan chất nguyên liệu vào dung môi lớn nên khối lượng chất chiết tăng lên Sau thời gian, chất có nguyên liệu tan vào dung môi thêm nữa, trình hòa tan dần trình bay tăng lên nên khối lượng sản phẩm chiết giảm Hơn nữa, chất tan dung môi hexane 11 chất phân cực, dễ bay nên đun lâu lượng chất chiết hao hụt dần Vì vậy, dung môi hexane chọn thời gian chiết thích hợp giờ, tỉ lệ % khối lượng sản phẩm chiết 5.23% b Dung môi ethyl acetate Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi ethyl acetate trình bày bảng 3.5 Nhận xét: Từ kết bảng 3.5 cho thấy khối lượng sản phẩm chiết theo thời gian nhìn chung tăng, đạt cao thời gian chiết Nếu tiếp tục tăng thời gian chiết lên 10, 12 % khối lượng chiết giảm dần Nguyên nhân cấu tử dịch chiết ethyl acetate chủ yếu hợp chất có độ phân cực yếu trung bình nên dễ bay Khi cấu tử bột nguyên liệu tan hết vào dung môi, tăng thời gian chiết, với tác động nhiệt độ, cấu tử dễ dàng bay khiến khối lượng chất chiết hao hụt dần Vì vậy, dung môi ethyl acetate, chọn thời gian chiết thích hợp 10 giờ, tỉ lệ % khối lượng sản phẩm chiết 9.11% c Dung môi dichloromethane Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi dichloromethane trình bày bảng 3.6 Bảng 3.5 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi ethyl acetate Thời m1 (g) V (ml) d (g/ml) m(g) %m gian (h) Khối Thể tích Khối Khối Hàm lượng bột sau chiết lượng lượng lượng rễ riêng riêng cao cao dung môi chiết chiết 10.032 146.5 0.8210 0.8670 6.72 10.043 145.7 0.8210 0.8700 7.11 10.045 144.1 0.8210 0.8836 8.98 10 10.046 143.4 0.8210 0.8848 9.11 12 10.072 142.9 0.8210 0.8844 8.99 12 Nhận xét: Từ kết bảng 3.6 cho thấy khối lượng sản phẩm chiết tăng theo thời gian từ đến 10 giờ, đến 12 khối lượng chiết giảm nhẹ Điều giải thích tương tự với trình khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi ethyl acetate Các cấu tử chiết dung môi dichloromethane chủ yếu hợp chất có độ phân cực yếu trung bình Khi cấu tử hòa tan hoàn toàn vào dung môi, trình bay tăng lên nên tỉ lệ % khối lượng chiết giảm 10 Vì vậy, dung môi dichloromethane, chọn thời gian chiết thích hợp 10 giờ, tỉ lệ % khối lượng sản phấm chiết 9.23% Bảng 3.6 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi diclomethane Thời gian (h) m1 (g) Khối lượng bột rễ V (ml) Thể tích sau chiết 146.4 d (g/ml) Khối lượng riêng dung môi 0.9870 m(g) Khối lượng riêng cao chiết 1.0339 %m Hàm lượng cao chiết 6.82 10.065 10.080 145.7 0.9870 1.0370 7.22 10.010 144.8 0.9870 1.0453 8.43 10 10.049 143.1 0.9870 1.0518 9.23 12 10.082 142.5 0.9870 1.0501 8.92 d Dung môi methanol Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi methanol trình bày bảng 3.7 Nhận xét: Từ kết bảng 3.7 cho thấy tăng thời gian chiết khối lượng sản phẩm chiết tăng dần đạt giá trị cao sau 10 giờ; tiếp tục tăng thời gian chiết đến 12 khối lượng sản phẩm chiết 13 giảm nhẹ Điều giải thích methanol dung môi có khả hòa tan nhiều cấu tử nên tăng thời gian chiết, lượng chất chiết nhiều đun với thời gian lâu số cấu tử có khối lượng phân tử lớn, mạch phân tử dài bị bẻ gãy thành phân tử nhỏ nên dễ bị bay Do đó, khối lượng sản phẩm chiết giảm Vì vậy, dung môi methanol, chọn thời gian chiết thích hợp 10 giờ, tỷ lệ % khối lượng sản phẩm chiết 25.98% Bảng 3.7 Kết khảo sát ảnh hưởng thời gian chiết đến khối lượng sản phẩm chiết dung môi methanol Thời gian (h) m1 (g) Khối lượng bột rễ V (ml) Thể tích sau chiết 145.9 d (g/ml) Khối lượng riêng dung môi 0.7531 m(g) Khối lượng riêng cao chiết 0.8859 %m Hàm lượng cao chiết 19.32 10.026 10.091 145.1 0.7531 0.9007 21.12 10.089 144.4 0.7531 0.9183 23.65 10 10.083 143.1 0.7531 0.9362 25.98 12 10.062 142.2 0.7531 0.9260 24.43 e Nhận xét chung Qua trình khảo sát ảnh hưởng thời gian đến trình chiết tách, thu thời gian chiết tốt dung môi nhexane giờ; dung môi ethyl acetate 10 giờ; dung môi dichloromethane 10 giờ; dung môi methanol 10 Khối lượng cắn chiết chiết với dung môi methanol thời gian tốt lớn với 25,98% 3.2.2 Kết xác định thành phần hóa học có dịch chiết rễ Rẻ quạt Sử dụng phương pháp chiết Soxhlet với lượng bột rễ rẻ 14 quạt xác khoảng 10g với dung môi, nhiệt độ sôi dung môi, khoảng thời gian chiết tốt khảo sát Thu dịch chiết, cô đuổi dung môi bếp cách thủy 800C đến cắn, gửi cắn đến “Trung tâm đo lường chất lượng kỹ thuật, số Ngô Quyền, Thành phố Đà Nẵng”để xác định thành phần hóa học a Thành phần hóa học dịch chiết n-hexane Thành phần hóa học dịch chiết phương pháp chiết Soxhlet với số cấu tử có thời gian lưu, hàm lượng phần trăm trình bày bảng 3.8 Bảng 3.8 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết nhexane rễ rẻ quạt STT RT (phút) MW Area (%) 4.998 Undecane, 2-methyl 170 0.82 6.229 n–decanoic acid 172 2.69 11.498 Nonadecanoic acid, metyl ester 312 1.87 12.588 Tetradecanoic acid 228 63.18 37.927 Vitamin E 430 2.70 Tên Nhận xét: Từ bảng 3.8 cho thấy, phương pháp GC – MS định danh cấu tử dịch chiết n-hexane rễ rẻ quạt khô Thành phần hóa học dịch chiết n-hexan chủ yếu cấu tử phân cực yếu đến không phân cực, bao gồm ankan, axit hữu mạch dài 10C este chúng Cụ thể, cấu tử có hàm lượng cao Tetradecanoic acid chiếm tới 63.18%, cấu tử có hàm lượng ≤ 5% bao gồm Undecane, 2-methyl (0.82%); n– decanoic acid (2.69%); nonadecanoic acid, metyl ester (1.87%); vitamin E (2.70%) 15 Với thành phần chủ yếu acid hữu (4 cấu tử), dịch chiết n-hexan rễ rẻ quạt dự đoán có tiềm kháng khuẩn, vi khuẩn nhạy cảm với pH Acid vào tế bào vi khuẩn, (pH = 7) acid phân ly cho H+ ( RCOOH → RCOO- + H+ ), pH bên tế bào giảm, vi khuẩn phải sử dụng chế bơm ATPase để đẩy H+ khỏi tế bào, vi khuẩn bị lượng Mặt khác pH giảm ức chế trình đường phân (glycolysis), tế bào vi khuẩn bị nguồn cung cấp lượng Khi phân ly tế bào, anion acid không khỏi tế bào, gây rối loạn thẩm thấu Những nguyên nhân làm cho vi khuẩn bị chết [3] b Thành phần hóa học dịch chiết ethyl acetate Thành phần hóa học dịch chiết phương pháp chiết Soxhlet với số cấu tử có thời gian lưu, hàm lượng phần trăm trình bày bảng 3.9 Hình 3.2 Sắc ký đồ biểu thị thành phần hóa học dịch chiết ethyl acetate rễ rẻ quạt 16 Bảng 3.9 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết ethyl acetate rễ rẻ quạt STT RT (phút) MW Area (%) 4.787 Octanoic acid 284 1.45 6.221 n-decanoic acid 172 1.57 7.493 D-allose 180 3.20 7.574 Ethanone, 1-(4-hydroxy-3methoxyphenyl- 166 2.79 12.572 Tetradecanoic acid 228 30.83 19.803 n-hexadecanoic acid 256 5.52 Tên Nhận xét: Từ bảng 3.9 cho thấy phương pháp GC – MS định danh cấu tử dịch chiết ethyl acetat từ rễ rẻ quạt khô Thành phần hóa học chủ yếu cấu tử có độ phân cực trung bình yếu axit hữu tồn chủ yếu dạng tự do, hợp chất phenolic, aldohexoses Do có cấu trúc tương tự nên cấu tử dễ dàng phân bố vào pha dung môi ethyl acetat Cấu tử có hàm lượng cao Tetradecanoic acid (30.83%), n-hexadecanoic acid (5.52%); D-allose (3.20%); Ethanone, 1-(4hydro-3-methoxylphenyl) (2.79%); n-decanoic acid (1.57%); thấp Octanoic acid (1.45%) c Thành phần hóa học dịch chiết dichloromethane Thành phần hóa học dịch chiết phương pháp chiết Soxhlet với số cấu tử có thời gian lưu, hàm lượng phần trăm trình bày bảng 3.10 17 Bảng 3.10 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết dichloromethane rễ rẻ quạt STT RT (phút) MW Area (%) 4.796 Octanoic acid 284 1.46 6.227 n-decanoic acid 172 1.92 7.578 Ethanone, 1-(4-hydroxy-3methoxyphenyl- 166 1.60 10.166 1H-Indene, 2,3-dihydro-1,1,6trimethyl- 160 0.63 11.506 Nonandecanoic acid, methyl ester 312 0.66 12.685 Tetradecanoic acid 228 29.84 19.896 n-hexadecanoic acid 256 7.16 27.038 9,12-octadecadienoic acid (z,z)- 280 1.31 37.985 Vitamin E 430 1.43 Tên Nhận xét: Từ bảng 3.10, cho thấy phương pháp GC-MS định danh cấu tử từ dịch chiết dicholoromethane rễ rẻ quạt Tetradecanoic acid có hàm lượng cao với 29.84% Các cấu tử khác Octanoic acid (1.46%); n-decanoic acid (1.92%); Ethanone, 1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl- (còn gọi Apocynin) (1.60%); Nonandecanoic acid, methyl ester (0.66%); n-hexadecanoic acid (7.16%); vitamin E (1.43%) định danh dịch chiết n-hexane ethyl acetate với hàm lượng khác Ngoài ra, có cấu tử 1H-Indene, 2,3-dihydro-1,1,6-trimethyl- chiếm 0.63% cấu tử 9,12-octadecadienoic acid (z,z)- acid không no mạch thẳng với tên thông thường linoleic acid với hàm lượng 1.31% 18 d Thành phần hóa học dịch chiết methanol Thành phần hóa học dịch chiết phương pháp chiết Soxhlet với số cấu tử có thời gian lưu, hàm lượng phần trăm trình bày bảng 3.11 Bảng 3.11 Kết định danh thành phần hóa học dịch chiết methanol rễ rẻ quạt STT RT (phút) Tên MW Area (%) 4.671 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5dihydroxy-6-methyl- 300 1.40 5.184 Benzofuran, 2,3-dihydro- 144 1.42 5.417 1,2,3-propanetriol, monoacetate 134 3.15 5.901 2-methoxy-4-vinylphenol 150 3.79 7.561 Ethanone, 1-(4-hydroxy-3methoxyphenyl)- 166 3.21 7.937 Hexanoic acid 116 9.16 8.601 3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid 168 0.48 11.507 Methyl tetradecanoate 242 1.25 12.590 Tetradecanoic acid 228 7.95 10 19.794 n-hexadecanoic acid 256 3.47 11 27.330 Octadecanoic acid 284 0.65 12 4H-1-benzopyran-4-one, 5,735.358 dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-6methoxy- 144 4.99 Nhận xét: Từ bảng 3.11 cho thấy phương pháp GC-MS định danh 12 cấu tử dịch chiết methanol rễ rẻ quạt khô Thành phần chủ yếu dịch chiết metanol rễ rẻ quạt acid mạch 19 dài, hợp chất phenolic, đặc biệt xuất hợp chất flavonid Cụ thể, 4H-Pyran-4-one,2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl(1.40%); Benzofuran, 2,3-dihydro- (1.42%); 1,2,3-propanetriol, monoacetate (3.15%); 2-methoxy-4-vinylphenol (3.79%); Ethanone,1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)- (3.21%); Hexanoic acid (9.16%); 3-hydroxy-4-methoxybenzoic acid (0.48%); Methyl tetradecanoate (1.25%); Tetradecanoic acid (7.95%); n-hexadecanoic acid (3.47%); Octadecanoic acid (0.65%); 4H-1-benzopyran-4one,5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-6-methoxy- (4.99%) e Nhận xét chung thành phần hóa học định danh bột rễ rẻ quạt Bằng phương pháp GC-MS, số thành phần hóa học dịch chiết từ rễ rẻ quạt khô định danh Tổng kết xác định 20 cấu tử dịch chiết khác từ rễ rẻ quạt khô, bao gồm acid hữu cơ, este acid hữu cơ, hợp chất phenolic, aldohexoses, flavonoid Trong đó, dịch chiết định danh nhiều cấu tử methanol với 12 cấu tử Trong dịch chiết, có chung cấu tử Tetradecanoic acid với hàm lượng dịch chiết cao 3.3 TINH CHẾ CHẤT RẮN Trong tất cấu tử định danh từ dịch chiết cấu tử Tetradecanoic acid với hàm lượng phần trăm dịch chiết cao nên định tách kết tinh cấu tử 3.3.1 Đuổi dung môi dịch chiết, thu chất rắn kết tủa Đối với dung môi, tiến hành gom dịch chiết thời gian chiết, đuổi dung môi đến khoảng 30ml, cho vào ống nghiệm, để tủ lạnh 24 giờ,sau ly tâm, thu chất rắn, gộp chung chất rắn vào ống nghiệm 20 3.3.2 Chọn dung môi kết tinh lại Tiến hành trích lượng chất rắn cho vào ống nghiệm, cho giọt dung môi acid acetic, dichloromethane, methanol, cloroform vào ống nghiệm Đun ống nghiệm bếp cách thủy với nhiệt độ sôi dung môi quan sát tượng Đối với chất rắn ống nghiệm chưa tan hoàn toàn, tiến hành nhỏ thêm từ từ giọt dung môi tương ứng vào tiếp tục đun bến cách thủy, quan sát tượng, thu kết bàng 3.13 Bảng 3.13 Khảo sát tính tan chất rắn dung môi Dung môi Tính tan Acid Acetic - Dichloromethane Methanol Cloroform - + + Ghi chú: (+) tan (-) không tan Nhận xét: Ở nhiệt độ sôi dung môi acid acetic, dichloromethane, methanol, cloroform chất rắn tan dung môi methanol cloroform Với dung dịch tan ống nghiệm, để tủ lạnh 24 Sau quan sát kết tinh lại chất rắn Kết thu thể bàng 3.14 Bảng 3.14 Sự kết tinh chất rắn dung môi Dung môi Methanol Cloroform Kết tinh + - Ghi chú: (+) kết tinh (-) không kết tinh Nhận xét: Trong điều kiện nhiệt độ thấp, dung dịch tan chất rắn dung môi methanol kết tinh lại Vậy, sau tiến hành khảo sát kết tinh, chọn dung môi methanol để tinh chế chất rắn 21 3.3.3 Kết tinh lại chất rắn, thu chất rắn tinh khiết Nhỏ 1ml dung môi methanol vào ống nghiệm chứa toàn chất rắn Tiến hành đun ống nghiệm bếp cách thủy nhiệt độ sôi methanol (650C), nhỏ thêm từ từ giọt methanol vào ống nghiệm đồng thời đun đến chất rắn tan hết tiến hành lọc nhanh qua phễu Dung dịch thu để tủ lạnh 24h Theo nguyên tắc, chất rắn phải kiểm tra độ tinh khiết phương pháp nóng chảy, phương pháp khối phổ (MS) Nhưng điều kiện thời gian hạn hẹp nên thực phương pháp đo nóng chảy, nhiên nhiệt độ nóng chảy thu chưa thích hợp Nguyên nhân chất rắn tinh chế chưa 3.4 CHẠY SẮC KÍ BẢN MỎNG DỊCH TAN CHẤT RẮN SAU KHI TINH CHẾ Chất rắn thu sau tính chế, hòa tan dung môi metanol Sau tiến hành chạy sắc kí mỏng với hệ dung môi Cloroform/Butanol với tỷ lệ 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 Tiến hành quan sát, thu kết bảng 3.15 Bảng 3.15 Kết chạy sắc kí mỏng dịch tan chất rắn sau tinh chế Tỷ lệ Cloroform: Butanol Rf Màu sắc Hình dạng vệt 1:1 Rf = 0.982 Vàng cam Đuôi dài lan rộng 1:2 Rf = 0.901 Vàng cam Đuôi dài lan rộng 1:3 Rf = 0.782 Vàng cam Đuôi dài lan rộng 1:4 Rf = 0.673 Vàng cam Đuôi dài lan rộng 1:5 Rf = 0.527 Vàng cam Đuôi dài lan rộng 22 Nhận xét Kết chạy sắc kí mỏng dịch tan chất rắn sau kết tinh thấy màu sắc vệt thu màu vàng cam, hình dạng vết đuôi dài rộng với diện tích lớn Với tỷ lệ dung môi Cloroform : Butanol : giá trị Rf = 0.527 Đây giá trị tham khảo để tiến hành sắc kí cột sau với dịch tan chất rắn sau tinh chế 23 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Qua nghiên cứu thực nghiệm, thu số số vật lý nguyên liệu sau: + Độ ẩm trung bình rễ rẻ quạt khô 6.235% + Hàm lượng tro trung bình rễ rẻ quạt khô 3.041% + Hàm lượng kim loại nặng Cu (3.93mg/kg), Zn (14.2mg/kg), Pb (0.31mg/kg), As(0.078mg/kg), Hg(