TRƯỜNG ĐẠI HỌC LÂM NGHIỆP VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LÂM NGHIỆP BỘ MÔN CÔNG NGHỆ VI SINH - HÓA SINH BÁO CÁO THỰC HÀNH HÓA SINH ĐẠI CƯƠNG ThS NGUYỄN NHƯ NGỌC HỌ VÀ TÊN: NÔNG KIM NGOAN MSV: 1353010528 LỚP: L03.TH2 Năm 2015 MỞ ĐẦU THỰC HÀNH HÓA SINH ĐẠI CƯƠNG Mục đích: - Thông qua thực hành giúp sinh viên củng cố, hệ thống hoá phần kiến thức lý thuyết học lớp môn học “Hóa Sinh Học” - Thông qua thực thực tập cụ thể phòng thí nghiệm Hóa sinh giúp sinh viên bước đầu làm quen, nắm nguyên lý thực số phương pháp hóa sinh thường dùng phòng thí nghiệm, như: định tính hợp chất thể (Protein; axit amin; Lipid; Saccarit; Vitamin ) định lượng hợp chất - Tăng cường kỹ nghiên cứu làm thực nghiệm sinh viên chuyên ngành Công nghệ sinh học Yêu cầu: 2.1 Kiến thức kỹ - Qua thực hành, sinh viên phải nắm nội dung môn học Hóa Sinh Học + Hiểu nắm nguyên lý hoạt động loại máy móc, thiết bị dụng cụ cần thiết sử dụng phòng thí nghiệm hóa sinh: máy ly tâm, máy đo pH, , cân điện tử, cân phân tích, pipet mant, ống đong, cốc đong định mức, bình định mức, bếp từ, bể ổn nhiệt + Hiểu nắm vai trò, nguyên tắc cách sử dụng, bảo quản loại hóa chất dùng phòng thí nghiệm hóa sinh: axit, kiềm, muối, hợp chất hữu bay - Thông qua thực nội dung cụ thể, sinh viên phải có kỹ thực hiện: + Sử dụng thực thành thạo thao tác sử dụng loại máy móc, thiết bị dụng cụ cần thiết dùng phòng thí nghiệm hóa sinh: máy ly tâm, máy đo pH, , cân điện tử, cân phân tích, pipet mant, ống đong, cốc đong định mức, bình định mức, bếp từ, bể ổn nhiệt + Thực tính toán xác khối lượng hóa chất cần thiết để pha dung dịch chuẩn dung dịch đệm thường sử dụng thí nghiệm hóa sinh + Thực thí nghiệm chứng minh tính chất, định tính hợp chất: Protein; axit amin; Saccarit; Lipid; Vitamin - Thực thí nghiệm định tính hợp chất: Protein; Saccarit 2.2 Thái độ - Chấp hành tốt nội quy, quy định Nhà trường; nội quy phòng thí nghiệm Hóa sinh thuộc Trung tâm Giống & Công nghệ sinh học - Thực đầy đủ nội dung thực hành đạt kết cao 2.3 Kết Sau thực hành, sinh viên phải tự thu thập số liệu từ kết thu Cuối sinh viên phải viết báo cáo kết thực hành tất nội dung BÀI 1: TÍNH CHẤT CỦA PROTEIN – AXIT AMIN Tính chất Protein Tính chất keo dung dịch Protein Dung dịch protein keo ưa nước, chúng bền vững nhờ màng nước bao quanh phân tử Các yếu tố vật lý hay hóa học có khả tác dụng lên phá hủy màng nước xung quanh phân tử protein ảnh hưởng đến protein làm chúng kết tủa I I.1 Kết tủa thuận nghịch không thuận nghịch Ứng dụng phương pháp kết tủa thuận nghịch protein để tách protein enzym dạng tinh khiết a Kết tủa muối trung tính Muối trung tính làm trung hòa điện làm loại lớp vỏ nước phân tử keo protein làm chúng kết tủa Protein khác kết tủa nồng độ muối khác Hóa chất: Lòng trắng trứng không pha loãng; (NH4)2SO4 bão hòa; NaCl bão hòa, tinh thể (NH4)2SO4 a Dụng cụ, thiết bị: Ống nghiệm, pipet; giấy lọc, cân kỹ thuật b Tiến hành: - Cho vào ống nghiệm 2ml lòng trắng trứng - Thêm vào 2ml (NH4)2SO4 bão hòa, lắc → Kết quả:Thu kết tủa trắng dẻo (1) Kết tủa Globumin - Để yên phút, lọc thu dịch lọc sang ống nghiệm khác - Cho vào dịch lọc 2-3 gam tinh thể (NH4)2SO4 , lắc c → Kết quả: Thu kết tủa thứ hai màu trắng bông, đặc có tính dẻo (2) Kết tủa Albumin - Cho kết tủa vào ống nghiệm khác - Thêm vào ống – ml nước cất, lắc → Kết Quả: Kết tủa tan hết tạo dung dịch keo - Giải thích kết quả: Dung dịch protein keo ưa nước, chúng bền vững nhờ màng nước bao quanh phân tử Các phân tử keo có kích thước lớn, không qua màng bán thấm Do bề mặt phân tử protein có nhóm phân cực, hào vào nước cac phân tử nước lưỡng cực hấp thụ nhóm tạo thành màng nước bao quanh phân tử protein gọi lớp vỏ hidrat Khi có mặt tác nhân vật lý hay hóa học màng nước bao quanh bị phá vỡ làm trung hòa diện tích ảnh hưởng đến protein làm chúng kết tủa Sự kêt tủa thuận nghịch không thuận nghịch tùy thuộc vào chất yếu tố gây kết tủa, thời gian điều kiện phản ứng Dưới tác động nhân tố gây kết tủa protein trở lại trạnh thái ban đầu tạo thành dung dịch keo bền trước Đó tượng kết tủa thuận nghịch hay khả tạo thành dung dịch keo Các nhân tố gây kết tủa thuận nghịch protein là: muối trung tính, kim loại kiềm, kiềm thổ, dung môi hữu cơ, Muối (NH4)2SO4 loại muối trung tính (nhân tố gây kết tủa thuận nghịch) vừa làm trung hòa điện vừa làm loại lớp vỏ nước phân tử keo protein làm chúng kết tủa Các protein khác kết tủa nồng độ khác Lòng trắng trứng chứa hai loại protein chính: Albumin vafGlubulin người ta dùng muối (NH4)2SO4 có độ bão hòa khác để tách riêng hai loại Albumin bị kết tủa nồng độ muối (NH4)2SO4 khóa cao khoảng 70% - 100% Glubulin bị kết tủa nồng độ muối (NH4)2SO4 bán bão hòa Do thêm 5ml (NH4)2SO4 ta thu kết tủa Albumin Còn sau cho hai kết tủa tác dụng với nước, kết tủa tan tạo thành dung dịch keo muối trung tính (NH4)2SO4 tác nhân thuận nghịch nên ta loại bỏ tác nhân proteitnlaij trở lại trạng thái ban đầu I.2 Kết tủa protein muối kim loại nặng Những muối kim loại nặng (Cu2+; Fe3+; Pb2+ ) tác dụng với protein tạo thành kết tủa không tan Nhưng dư muối, kết tủa lại tan phần tử keo hấp thụ ion kim loại nặng, trở nên tích điện Ion có hóa trị cao, kết tủa dễ tan trở lại Hóa chất: Dung dịch lòng trắng trứng 5%; FeCl3 5%; (chì axetat [(CH3COO)2Pb] 5%); CuSO4 5% a Dụng cụ, thiết bị: ống nghiệm; đũa thủy tinh b c - Tiến hành: Lấy ống nghiệm sạch, khô Cho vào ống 2ml dung dịch lòng trắng trứng 5% Thêm vào ống I: giọt dung dịch FeCl3 5% ống II: giọt chì axetat 5% ống III: giọt CuSO4 5% - - d - Quan sát kỹ, sau cho thêm vào lượng muối kim loại tương ứng vào ống So sánh hòa tan kết tủa ống Kết giải thích Kết Quả:→ Khi cho thêm giọt muối vào ống nghiệm + Ống I tạo thành kết tủa có màu đỏ cam + Ống II tạo thành kết tủa có màu trắng sữa + Ống III tạo thành kết tủa có màu xanh nhạt → Khi cho thêm dung dịch muối để kết tủa tan + Ống I giọt để kết tủa tan + Ống II 27 giọt + Ống III 25 giọt - Giải thích: Những kim loại nặng (Cu2+; Fe3+; Pb2+ ) tác dụng với protein tạo thành kết tủa ion kim loại làm phá vỡ màng nước bao quanh phân tử protein trung hòa điện tích Muối kim loại nặng tạo kết tủa làm biến tính protein phá hủy sâu sắc cấu trúc bậc 2,3 phân tử protein Nhưng thừa ion kim loại nặng kết tủa lại bị tan phân tử keo hấp thụ ion kim loại nặng trở thành trạng thái tích điện Ion có hóa trị cao kết tủa dễ tan trở lại Mặc dù protein tan bị bến tính hoàn toàn Ứng dụng: khả tạo kết tủa không tan protein với muối kim loại nặng sử dụng trường hợp bị ngộ độc muối Cu; Pb; Fe; thể chưa hấp thu protein sữa, trứng thường dùng để giải độc BÀI 2: Các phản ứng màu protein, axit amin I Phản ứng biure Là phản ứng đặc trưng liên kết peptit Trong môi trường kiềm, hợp chất có chứa từ liên kết peptit trở lên phản ứng với CuSO4 tạo phức chất màu xanh tím, tím tím đỏ tùy thuộc số lượng liên kết peptit nhiều hay Phản ứng: Phản ứng Biure thường ứng dụng để định lượng protein Hóa chất: Dung dịch lòng trắng trứng 5%; ure tinh thể; NaOH10%; CuSO4 1% a Dụng cụ, thiết bị: ống nghiệm; đèn cồn; pipet b Tiến hành: Phản ứng với biure: - Cho vào ống nghiệm khô tinh thể ure - Đun lửa yếu để ure nóng chảy, đến cứng lại ngừng đun - Để ống nguội, thêm vào 2ml NaOH 10%, lắc cho tan - Thêm vài giọt CuSO4 1%, quan sát màu → Kết quả: thu dung dịch có màu tím hồng c • → Giải thích: đun nóng phân tử ure kết hợp lại tạo thành Biure làm xuất liên kết peptit: – CO – NH phản ứng Biure phản ứng dặc trưng liên kết peptit Trong môi trường kiềm, Biure kết hợp với CuSO4 cho phức muối Cu có màu tím hồng Ta có phương trình: • Phản ứng với Protein Cho vào ống nghiệm 3ml dung dịch lòng trắng trứng 5% - Thêm vào 1ml NaOH 10% 1-2 giọt dung dịch CuSO4 1%, lắc kỹ → Kết quả: Thu dung dịch có màu tím → Giải thích: dung dịch lòng trắng trứng có liên kết peptit – CO – NH – nên cho phản ứng biure tạo phức chất muối Cu với poly peptit có màu tím - Các polypeptit chất phức màu Biure  Kết Luận : Phản ứng biure phản ứng đặc trưng liên kết peptit Trong môi trường kiềm, hợp chất có chứa từ hai liên kết peptit trở lên phản ứng với CuSO4 tạo phức chất màu xanh tím, tím tím đỏ tùy thuộc số lượng liên kết peptit nhiều hay Phản ứng biure sử dụng rộng rãi để phát định lượng protein II Phản ứng xantoprotein axit amin vòng Các axit amin vòng: phenylalanin; tirozin; triptophan tác dụng với HNO3 đặc tạo dẫn xuất nitro màu vàng Khi thêm dung dịch kiềm vào tạo thành muối có màu da cam Các axit amin không vòng, protein không chứa axit amin vòng không cho phản ứng Hóa chất Dung dịch lòng trắng trứng 5%; dung dịch gelatin 1%; HNO3 đặc; NH4OH đặc a Dụng cụ, thiết bị ống nghiệm, tủ hút, bếp từ, nồi inox, pipet b Tiến hành: - Lấy ống nghiệm sạch, khô, đánh dấu - Cho vào ống I: 3ml lòng trắng trứng 5% - Cho vào ống II: 3ml gelatin 1% - Thêm vào ống nghiệm 1ml HNO3 đặc - Đun sôi cách thủy hỗn hợp phản ứng phút - Làm nguội, thêm từ từ vài giọt NH4OH đặc → Kết quả: c + Ống 1: đun dung dịch có màu vàng dẫn xuất nitro Khi thêm kiềm NH4OH sản phẩm chuyển thành muối có màu vàng da cam đặc trưng + Ống 2: Gelatin axit amin nhân thơm nên phản ứng không xảy → Giải Thích: cho HNO3 vào protein lòng trắng trứng, axit amin nhân thơm có protein lòng trắng trứng bị nitro hóa nhân thơm tạo dẫn xuất nitro có màu vàng Ta có phương trình phả ứng sau: H H2N – C – COOH H H 2N - C – COOH CH2 CH + 2HNO + O 2N OH (Tirozin) OH H 2O NO2 (Dinitrotirozin màu vàng) H H2N – C – COOH H H 2N - C – COOH CH2 CH O2N NO2 OH O 2N N – OH O O (Dinitrotirozin màu vàng) (Thể quiroit Dinitrotirozin ) H H2N – C – COOH H H 2N - C – COOH CH2 CH + NH4OH O 2N N – OH O 2N O N – ONH4 O O O (Thể quiroit Dinitrotirozin ) (Muối amoni Dinitrotirozin có cấu tạo quirroit vàng da cam ) → Kết Luận: Phản ứng xantoprotein phản ứng đặc trưng để phát axit amin nhân thơm Các axit amin nhân thơm: phenylalanin; tirozin; triptophan; tác dụng với HNO3 đặc tạo dẫn xuất nitro màu vàng Khi thêm dung dịch kiềm vào tạo thành muối có màu da cam III Phản ứng axit amin chứa lưu huỳnh (phản ứng Folia) Các axit amin chứa lưu huỳnh như: xistein; xistin; metionin tác dụng kiềm bị phân hủy tạo thành natri sunfua RSH + NaOH Na2S + ROH + H2O Thêm chì axetat vào Na2S phản ứng tạo thành kết tủa nâu đen chì sunfua (PbS) Na2S + Pb(CH3COO)2 = (CH3COO)Na + PbS a Hóa chất: Dung dịch lòng trắng trứng 1%; NaOH 10%; đồng axetat 1%; Xistein 1%; b Dụng cụ, thiết bị: ống nghiệm; pipet; bếp từ, nồi inox c Tiến hành: - Lấy ống nghiệm khô, - Cho vào ống I: 2ml nước cất - Cho vào ống II: 2ml lòng trắng trứng 1% - Cho vào ống III: 2ml Xistein 1% - Cho vào ống 2ml NaOH 10% - Đun sôi phút - Lắc đều, thêm vào vài giọt Cu(CH3COO)2 1% - Quan sát tạo thành kết tủa, giải thích d Kết qua giải thích: →Kết quả: - Ống I: Không có tượng xảy - Ống II III: ốn nghiệm xuất kết tủa màu xám, đen, lơ lửng dung dịch → Giải thích: protein lòng trắng trứng có chứa cá axit amin có lưu huỳnh như: xistein, xistin Khi đun nóng với kiềm dư muối chì tạo kết tủa chì sunfua lơ lửng dung dịch Ta có phương trình phản ứng: SH OH CH2 CH2 H2N – C – COOH + 2NaOH H Pb(CH3COO)2 + 2NaOH Pb(OH)2 + 2NaOH Na2S + Na2PbO2 + 2H2O - H2N – C – COOH + NA2S + H2O + NaOH dư H 2CH3COONa + Pb(OH)2 + NaOH dư Na2PbO2 + H2O + NaOH dư PbS đen + NaOH Xistein axit amin chứa lưu huỳnh (S) có phản ứng Chì axetat them nước cất có thêm NaOH dư có phản ứng xảy nhiên sản phẩm tạo thành dung dịch suốt Ta có phương trình phản ứng sau: Pb(CH3COO)2 + 2NaOH Pb(OH)2 Trắng + 2CH3COONa + NaOH Pb(OH)2 + 2NaOH dư Pb(OH)4Na2 (Không màu) → Kết luận: Các axit amin chưa lưu huỳnh tác dụng kiềm bị phân hủy tạo thành natri sunfua RSH + 2NaOH Na2S + RO + H2O Thêm chì axetat vào Na2S phản ứng tạo thành kết tủa nau đen chì sunfua (PbS) Na2S + Pb(CH3COO)2 2CH3COONa + PbS Đây phản ứng đặc trưng để phát axit amin chứa lưu huỳnh BÀI TÍNH CHẤT CỦA SACCARIT, LIPID ENZYM I Các phản ứng định tính Phản ứng Tromer Dưới tác dụng mono số sacarit môi trường kiềm, Cu2+ bị khử thành Cu+, đồng thời nhóm chức aldehyt xeton đường bị oxi hóa thành muối tương ứng a Hóa chất: Glucoz 5%; NaOH 10%; CuSO4 5%; b Dụng cụ, thiết bị ống nghiệm, nồi đun cách thủy, pipet c Tiến hành: - Cho vào ống nghiệm 2ml dung dịch glucoz 5%, 2ml dung dịch NaOH 10% - Thêm giọt CuSO4 5% vào đến xuất kết tủa xanh Cu(OH)2 - Đun đến sôi, quan sát tượng giải thích d Kết giải thích → Kết quả: đun sôi có kết tủa màu đỏ xuất hiện, dư CuSO4 tạo kết tủa màu đen → Giải thích: Glucozo đường có tính khử nên dễ dàng tác dụng với CuSO4 tạo Cu2O kết tủa màu đỏ gạch (có nghĩa khử Cu2+ thành Cu+) - Phương trình phản ứng: CuSO4 + NaOH + C6H12O6 (Glucozo) nhiệt độ Cu2O đỏ gạch + C6H11O7Na (Sodium gluconate) - Công thức: CH2OH H O H OH H Glucozo có nhóm (- CHO) Andehit nên có tính khử H OH OH H OH Màu đen xuất do: CuSO4 dư, NaOH dư nên xảy phản ứng: CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 nhiệt độ Cu(OH)2 + Na2SO4 CuO đen + H2O Phản ứng khử Xanh metylen Dưới tác dụng glucoz, xanh metylen bị khử thành chất không màu a Hóa chất: Xanh metylen 1%; NaOH 5%; Glucoz 1% b dụng cụ ống nghiệm, nồi đun cách thủy, pipet, phích đá c Tiến hành - Lấy ống nghiệm, ống 1: cho 2ml nước, thêm giọt xanh metylen 1% giọt NaOH 5%, đun sôi – quan sát - Ống 2: làm trên, thay nước cất dung dịch glucoz 1% Quan sát - Làm lạnh ống vài phút Quan sát giải thích d Két giải thích → Kết quả: - Ống 1: dung dịch không thay đổi màu - Ống 2: Dung dịch màu, trở thành dung dịch suốt đun nóng màu xanh xuất trở lại làm lạnh → Giải thích: Dưới tác dụng glucozo, xanh metylen khử thành chất không màu II Tính chất enzym Amilaz nước bọt Amilaz nước bọt người thuộc loại alpha –amylaz, xúc tác cho phản ứng thủy phân tinh bột thành dextrin khác Các dextrin khác khối lượng phân tử, khả cho phản ứng màu với I ốt khả khử dung dịch Fehling Hóa chất: Dung dịch tinh bột 1%, thuốc thử Liugon, thuốc thử Fehling a Dụng cụ, thiết bị: Nồi cách thủy ổn nhiệt (400C), sứ thử pH, phễu thủy tinh, bình nón ( V100ml), ống đong, ống nghiệm b Tiến hành - Chuẩn bị dung dịch nước bọt: súc miệng sạch, lấy 50ml nước cất để súc miệng nhẹ vài lần khoảng 3-5 phút Lọc dịch nước bọt qua dịch bọt dùng để thí nghiệm c - Thủy phân tinh bột: chuẩn bị ống nghiệm, cho vào ống 5ml dung dịch tinh bột Thêm vào ống thứ I: 5ml dung dịch nước bọt , ống thứ II: 5ml nước cất , lắc - Để vào ống đũa thủy tinh, đặt ống vào nồi cách thủy 40 o C Sau 1, 2, 4, 6, phút dùng đũa thủy tinh lấy từ ống nghiệm 1giọt hỗn hợp phản ứng nhỏ vào miếng sứ, thêm vào giếng giọt thuốc thử liugôn - Quan sát mầu ta thấy dẫy thí nghiệm (chứa nước bọt) có biến đổi màu giọt sứ, tùy theo thời gian phản ứng: từ màu xanh tím đến đỏ nâu, đỏ cuối màu vàng dãy kiểm tra, tất giọt có màu xanh tím - Giải thích kết thu - Thử khả khử hỗn hợp Fehling: Thêm vào ống I II ống 2ml hỗn hợp Fehling, đun sôi, ống có amilaz xuất kết tủa đỏ nâu Cu2O d Kết giải thích → Kết quả: Thời Ống Ống gian Phút Xanh tím Xanh tím Phút Xanh tím nhạt Xanh tím Phút Vàng nhạt Xanh tím Phút Vàng đậm Xanh tím Phút Đỏ nâu Xanh tím - Tiếp tục thêm vào hai ống nghiệm ống 2ml hốn hợp Fehling, đun sôi ống (amylaza) ta thấy xuất kết tủa đỏ nâu Cu2O → Giải thích: Trong nước bọt có chứa enzym amylaza Amylaza nước bọt người thuộc laoij alpha – amylaza, xúc tác cho phản ứng thủa phân tinh bột thành dextrin khác Các dextrin khác khối lượng phân tử, khả cho phản ứng màu với I ốt khả khử dung dịch Fehling - Ống 1: enzym xúc tác thủy phân tinh bột thành dextrin hàm lượng tinh bột giảm dần hết Nếu tinh bột màu quan sát màu xanh tím Màu xanh tím nhạt dần có nghĩa hàm lượng tinh bột bị thủy phân dần Khi ống nghiệm hết màu xanh tím chuyển qua màu vàng có nghĩa chứng tỏ tinh bột bị enzym thủy phân hết Khi phút ta nhận thấy màu đỏ nâu lượng dư thuốc thử luigon gây nên Khi Tiếp tục thêm vào hai ống nghiệm ống 2ml hốn hợp Fehling, đun sôi ống (amylaza) ta thấy xuất kết tủa đỏ nâu Cu2O Đó tác dụng enzym amylaza thủy phân tinh bột thành nhiều loại dextrin khác • III Giải thích thêm thuốc thử Fehling hỗn hợp hai dung dịch: dung dịch CuSO4 Fehling dung dịch kieemfcuar muối seignett(muối kalinatritactrat) gọi Fehling Khi trộng hai dung dịch với xảy phản ứng chúng theo hai giai đoạn Đầu tiên tạo kết tủa đồng hidroxit màu xanh da trời PTPU: CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 + Na2SO4 Giai đoạn tiếp theodung dịch Cu(OH)2 tác dụng với dung dịch muối seignett tạo thành muối phức hòa tan, dung dịch có màu xanh thẫm Muối phức hợp chất không bền Các đường có chứa nhóm andehit xeton dễ dàng khử Cu2+ tạo kết tủa đồng ô xít màu đỏ gạch đường bị oxi hóa tác dụng với dung dịch Fehling Các phản ứng định tính lipid Tính chất lý hóa mỡ 1.1 Tính tan Dưới tác dụng dung môi hữu khác nhau, độ hòa tan mỡ khác a Hóa chất: dầu lạc, etanol, ete etylic, cloroform, benzen b Dụng cụ, thiết bị ống nghiệm, pipet c Tiến hành: - Chuẩn bị ống nghiệm sạch, khô - Cho vào ống nghiệm 1: 2ml nước cất, ống 2, 3, ống tương ứng 2ml dung dịch etanol, cloroform - Thêm giọt dầu lạc vào ống , lắc - Quan sát sai khác độ hòa tan dầu lạc dung môi khác d Kết giải thích: → Kết quả: ống nghiệm (nước cất) (Etanol) Kết Dầu lạc không tan, lên bề mặt Dầu lạc không tan, chìm xuống đáy ống (Cloroform) nghiệm Dầu lạc tan hết tạo dung dịch đồng → Giải thích: Do thành phần lipit có chứa gốc axit béo bậc cao không phân cực nên lipit tan tốt dung môi hữu dung môi không phân cực Dầu lạc oại lipit triết xuất từ thực vật nên có tính tan tính chất chung lipit Ống nghiệm nước cất etanol Mà nước cất dung môi phân cực etanol dung môi vô nên dầu lạc khong tan hai dung môi ống dầu lạc lên mặt dầu nhẹ nước ống dầu lạc chìm xuống dầu lạc nặng etanol Cloroform dung môi hữu nên dầu lạc dễ dàng tan cloroform 1.2 Sự tạo thành nhũ tương Mỡ không hòa tan nước, vậy, sau lắc mạnh mỡ với nước để yên hỗn hợp lúc, mỡ lại tạo thành lớp bề mặt, nhiên, có mặt chất tạo nhũ tương (axit mật, xà phòng ) tạo nhũ tương mỡ trắng đục a Hóa chất: dầu lạc, dung dịch xà phòng 2% mật động vật b Dụng cụ, thiết bị ống nghiệm, nồi đun cách thủy, pipet c Tiến hành: - Lấy ống nghiệm, cho vào ống ống 4ml nước cất - cho vào ống thêm vài giọt dầu - Cho vào ống 2ml dung dịch xà phòng 2% dung dịch mật, lắc mạnh ống - Quan sát tượng Giải thích kết d Kết giải thích → Kết quả: ống nghiệm Kết (Nước cất + Dầu lạc) Không tan 2(Nước cất + Dầu lạc + 2ml xà phòng 2%) Xuất nhũ tương màu trắng đục lơ lửng ống nghiệm → Giải thích: Các hợp chất tạo thành nhũ tương thường chất hòa tan vào nước tạo thành dung dịch keo có hoạt động bề mặt lớn Do chúng làm giảm sức căng bề mặt làm giảm độ bền giọt dầu mỡ Điều làm cho giọt dầu mỡ có khuynh hướng phân thành giọt nhỏ tạo điều kiện để tạo nhũ tương bền [...]... 1 Phản ứng Tromer Dưới tác dụng của các mono và 1 số đi sacarit trong môi trường kiềm, Cu2+ bị khử thành Cu+, đồng thời nhóm chức aldehyt hoặc xeton của đường bị oxi hóa thành các muối tương ứng a Hóa chất: Glucoz 5%; NaOH 10%; CuSO4 5%; b Dụng cụ, thiết bị ống nghiệm, nồi đun cách thủy, pipet c Tiến hành: - Cho vào ống nghiệm 2ml dung dịch glucoz 5%, 2ml dung dịch NaOH 10% - Thêm từng giọt CuSO4 5%... dịch kiềm vào sẽ tạo thành muối có màu da cam III Phản ứng của axit amin chứa lưu huỳnh (phản ứng Folia) Các axit amin chứa lưu huỳnh như: xistein; xistin; metionin dưới tác dụng của kiềm bị phân hủy tạo thành natri sunfua RSH + 2 NaOH Na2S + ROH + H2O Thêm chì axetat vào Na2S sẽ phản ứng tạo thành kết tủa nâu đen của chì sunfua (PbS) Na2S + Pb(CH3COO)2 = 2 (CH3COO)Na + PbS a Hóa chất: Dung dịch lòng... seignett tạo thành muối phức hòa tan, dung dịch có màu xanh thẫm Muối phức trên là hợp chất không bền Các đường có chứa nhóm andehit hoặc xeton dễ dàng khử Cu2+ tạo kết tủa đồng ô xít màu đỏ gạch và đường bị oxi hóa khi tác dụng với dung dịch Fehling Các phản ứng định tính lipid 1 Tính chất lý hóa của mỡ 1.1 Tính tan Dưới tác dụng của các dung môi hữu cơ khác nhau, độ hòa tan của mỡ là khác nhau a Hóa chất:... cloroform 1.2 Sự tạo thành nhũ tương Mỡ không hòa tan trong nước, vì vậy, sau khi lắc mạnh mỡ với nước rồi để yên hỗn hợp một lúc, mỡ lại tạo thành một lớp nổi trên bề mặt, tuy nhiên, nếu có mặt của chất tạo nhũ tương (axit mật, xà phòng ) sẽ tạo nhũ tương mỡ trắng đục a Hóa chất: dầu lạc, dung dịch xà phòng 2% hoặc mật động vật b Dụng cụ, thiết bị ống nghiệm, nồi đun cách thủy, pipet c Tiến hành: - Lấy 2... dịch không thay đổi màu - Ống 2: Dung dịch mất màu, trở thành dung dịch trong suốt khi đun nóng và màu xanh xuất hiện trở lại khi làm lạnh → Giải thích: Dưới tác dụng của glucozo, xanh metylen khử thành chất không màu II 1 Tính chất của enzym Amilaz nước bọt Amilaz nước bọt người thuộc loại alpha –amylaz, xúc tác cho phản ứng thủy phân tinh bột thành các dextrin khác nhau Các dextrin này khác nhau về... ứng xảy ra tuy nhiên sản phẩm tạo thành là dung dịch trong suốt Ta có các phương trình phản ứng sau: Pb(CH3COO)2 + 2NaOH Pb(OH)2 Trắng + 2CH3COONa + NaOH Pb(OH)2 + 2NaOH dư Pb(OH)4Na2 (Không màu) → Kết luận: Các axit amin chưa lưu huỳnh dưới tác dụng của kiềm bị phân hủy tạo thành natri sunfua RSH + 2NaOH Na2S + RO + H2O Thêm chì axetat vào Na2S sẽ phản ứng tạo thành kết tủa nau đen của chì sunfua... CuSO4 + 2NaOH Cu(OH)2 2 nhiệt độ Cu(OH)2 + Na2SO4 CuO đen + H2O Phản ứng khử Xanh metylen Dưới tác dụng của glucoz, xanh metylen bị khử thành chất không màu a Hóa chất: Xanh metylen 1%; NaOH 5%; Glucoz 1% b dụng cụ ống nghiệm, nồi đun cách thủy, pipet, phích đá c Tiến hành - Lấy 2 ống nghiệm, ống 1: cho 2ml nước, thêm 1 giọt xanh metylen 1% và 4 giọt NaOH 5%, đun sôi – quan sát - Ống 2: làm như trên,... hiện nhũ tương màu trắng đục lơ lửng trong ống nghiệm → Giải thích: Các hợp chất tạo thành nhũ tương thường là những chất khi hòa tan vào nước tạo thành dung dịch keo và có hoạt động bề mặt lớn Do đó chúng làm giảm sức căng bề mặt làm giảm độ bền của các giọt dầu mỡ Điều này làm cho các giọt dầu mỡ có khuynh hướng phân thành các giọt nhỏ hơn tạo điều kiện để tạo nhũ tương bền ... amylaza Amylaza trong nước bọt người thuộc laoij alpha – amylaza, xúc tác cho các phản ứng thủa phân tinh bột thành các dextrin khác nhau Các dextrin này khác nhau về khối lượng phân tử, khả năng cho phản ứng màu với I ốt và khả năng khử dung dịch Fehling - Ống 1: do enzym xúc tác thủy phân tinh bột thành các dextrin và hàm lượng tinh bột giảm dần cho đến hết Nếu tinh bột còn màu quan sát được là màu xanh... dung dịch có màu vàng của dẫn xuất nitro Khi thêm kiềm NH4OH sản phẩm này chuyển thành muối có màu vàng da cam đặc trưng + Ống 2: Gelatin không có axit amin nhân thơm nên phản ứng không xảy ra → Giải Thích: khi cho HNO3 vào protein lòng trắng trứng, các axit amin nhân thơm có trong protein lòng trắng trứng sẽ bị nitro hóa nhân thơm tạo dẫn xuất nitro có màu vàng Ta có phương trình phả ứng sau: H H2N ...MỞ ĐẦU THỰC HÀNH HÓA SINH ĐẠI CƯƠNG Mục đích: - Thông qua thực hành giúp sinh viên củng cố, hệ thống hoá phần kiến thức lý thuyết học lớp môn học Hóa Sinh Học” - Thông qua thực thực tập cụ... Chấp hành tốt nội quy, quy định Nhà trường; nội quy phòng thí nghiệm Hóa sinh thuộc Trung tâm Giống & Công nghệ sinh học - Thực đầy đủ nội dung thực hành đạt kết cao 2.3 Kết Sau thực hành, sinh. .. dụng, bảo quản loại hóa chất dùng phòng thí nghiệm hóa sinh: axit, kiềm, muối, hợp chất hữu bay - Thông qua thực nội dung cụ thể, sinh viên phải có kỹ thực hiện: + Sử dụng thực thành thạo thao tác