BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC NGHIÊN CỨU TÌNH TRẠNG NHIỄM VI RÚT VÀ ĐẶC ĐIỂM DI TRUYỀN CỦA VI RÚT SỞI PHÂN LẬP ĐƯỢC Ở NGHỆ AN NĂM 2009- 2011 Người thực hiện: BÙI THU THỦY Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS NGUYỄN THỊ HIỀN THANH PGS.TS BÙI KHẮC HẬU NỘI DUNG ĐẶT VẤN ĐỀ MỤC TIÊU TỔNG QUAN ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NC KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh sởi trước có vắc xin ➢ Thế giới: Hàng nghìn ca tử vong/năm ➢ Khu vực Châu Á Thái Bình Dương: 30.000 TV/ năm ➢ Việt Nam: Tỷ lệ mắc/ chết cao: + Năm 1979 tỷ lệ mắc:137/100.000 dân, tỷ lệ chết 0,44/100.000 dân ĐẶT VẤN ĐỀ Bệnh sỏi thời kỳ sau tiêm vắc xin * Tỷ lệ mắc/ chết giảm ➢ Năm 2005 TCYTTG ước tính: 580.287 ca mắc ➢ Tại Việt Nam năm 2004: số mắc sởi 217 ca ➢ Sau chiến dịch tiêm VX sởi M2: Dịch sởi gián đoạn từ 2004, 2005 2007 Năm 2009 dịch bùng phát nước ĐẶT VẤN ĐỀ Dịch sởi tỉnh Nghệ An ➢ Ca mắc sởi đầu tiên: 1/ 2009 ➢ Dịch kéo dài đến 12/ 2010, 17/20 huyện thị có sởi, 703 trường hợp mắc: tử vong ➢ Hiện Thế giới có nhóm gen, 23 kiểu gen ➢ Việt Nam 2000- 2006 xác định kiểu gen lưu hành gây dịch thuộc kiểu gen H1 H2, D5 Xác định tỷ lệ mắc sởi bênh nhân sốt phát ban nghi sởi phương pháp huyết học tỉnh Nghệ An từ 1/2009- 6/2011 Xác định đặc tính di truyền phân tử chủng vi rút sởi phân lập tỉnh Nghệ An từ 1/2009- 6/2011 TỔNG QUAN HÌNH THỂ CẤU TRÚC VI RÚT SỞI Đầu 3’ Đầu 5’ N ❖1 Vi rút sởi 1.2 Chi Mobillivirus, họ Paramixoviridae P M F H L SINH BỆNH HỌC Sơ đồ đáp ứng miễn dịch sau nhiễm vi rút sởi Vi rút phát họng miệng Vi rút phát máu TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG ● * Triệu chứng lâm sàng thể điển hình: Chia làm thời kỳ ● - Thời kỳ ủ bệnh: 8-12 ngày ● - Thời kỳ khởi phát: 4- ngày - Thời kỳ toàn phát: Ban xuất - Thời kỳ hồi phục: Ban bay dần Phân bố bệnh nhân sởi theo huyện/ thị Tình trạng tiêm vắc xin sởi nhóm bênh nhân dương tính 2009- 2010 Miễn dịch IgM, IgG giảm theo thời gian, hiệu lực VX sởi 90%, Tỷ lệ tiêm VX sởi 90%hoặc bảo quản VX không tốt, tiêm không kỹ thuật Phân bố bệnh nhân sởi theo tháng năm H.V.Tân, H.P.Liên( MB); V.Q,Mai( MT) đỉnh dịch tháng Phân bố bệnh nhân sởi theo tháng năm từ 1/2009- 6/2011 Kết phân lập vi rút Kết Năm Tổng Số lượng bệnh nhân (+)/CPE 2009 2010 2011 Tổng TL (%) Số lượng bệnh nhân (-)/CPE TL (%) 80,0 20,0 19 26,3 14 73,7 0,0 100,0 30,0 21 70.0 Kết xác định vi rút sởi: RT- PCR Dương tính Âm tính Tổng số mẫu n TL (%) n TL (%) (2009) 80,0 20,0 19 (2010) 19 100,0 0 (2011) 0 100,0 30 23 77,0 23,0 Kết khuếch đại gien N phản ứng RT- PCR So sánh hai kỹ thuật RT- PCR ELISA Thời gian Lấy mẫu n Dương tính ELISA Dương tính RT- PCR < ngày 16 3/16 (18,8%) 11/16 (68,8%) -7 ngày 14 12/14 (85,7%) 12/14 (85,7) Tổng 30 15/30 ( 50%) 23/30 (76,7%) Cây di truyền chủng vi rút sởi Nghệ An năm 2009-2010 So sánh phân bố kiểu gen chủng vi rút sởi phân bố NA 2009- 2010 Nơi phát Năm phát Nhóm gen Kiểu gen Nghệ An 2009-2010 H H1 Việt Nam 2000- 2002 H, D H1, H2, D5 Việt Nam 2006-2010 H H1 Trung Quốc 1992-2011 H,D,A,G H1,H2,D3,D5,D8,D9,D11,G2 Campuchia 2001- 2002 D D5 Indonesia 1999- 2002 G G2,G3 Thái Lan 1993-2011 D,G D5,D8,D9,G2 KẾT LUẬN Tỷ lệ mắc sởi bệnh nhân sốt phát ban nghi sởi phương pháp huyết học ➢ Tỷ lệ xác định dương tính với Sởi năm 2009 – 2010 59,6% Không có trường hợp mắc Sởi năm 2011 ➢ Bệnh có nhiều độ tuổi khác từ th đến 38 tuổi, tập trung cao lứa tuổi từ 1-9 tuổi ➢ Không có khác biệt Nam Nữ ➢ Bệnh xuất Đồng bằng, Thành thị cao nhiều Miền núi với tỷ lệ mắc 49,5%, 43,1% 7,4% ➢ Bệnh phân bố quanh năm có tỷ lệ cao vào tháng 1, 3, 5, 11 1.Đặc điểm di truyền phân tử chủng vi rút sởi phân lập NA năm 1/2009- 6/2011 ➢ Vi rút sởi lưu hành gây dịch tỉnh NA năm 2009 – 2010 thuộc nhóm gen H, kiểu gen H1, giống với chủng vi rút sởi lưu hành tỉnh khác nước năm 2008- 2010 với chủng đại diện MVi/ Hunan.CHN 93/H1 KIẾN NGHỊ Cần tiến hành tiêm nhắc lại vắc xin sởi mũi trẻ 4-5 tuổi chương trình tiêm chủng thường xuyên, tổ chức chiến dịch tiêm vắc xin sởi nhắc lại định kỳ năm /lần cho toàn trẻ1-15 tuổi Tiếp tục trì việc xác định kiểu gen vi rút sởi hàng năm để làm sở liệu cho công tác toán bệnh sởi Việt Nam [...]... VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐỐI TƯỢNG, ĐỊA ĐIỂM VÀ THỜI GIAN NGHIÊN CỨU Địa điểm nghiên cứu Thời gian nghiên cứu Địa điểm xét nghiệm Tỉnh Nghệ An Từ tháng 1/2009 - tháng 6/2011 Khoa vi rút Viện VSDT Trung ương ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 1 Tiêu chuẩn xác định ca bệnh: Bệnh nhân có phát ban nghi sởi trong cộng đồng tỉnh Nghệ An theo tiêu chuẩn của TCYTTG: ➢ Sốt cao ➢ Ban đỏ ➢ Có ít nhất một trong các triệu chứng:... bênh nhân mắc sởi giữa nam và nữ Phân bố bệnh nhân sởi theo nhóm tuổi 1975-1979: 12-23 tháng; Việt Nam (2008- 2010): 1-6 và 18-26 Phân bố bệnh nhân sởi theo vùng địa lý Thành công hoạt động tiêm văc xin 10 huyện miền núi 2002- 2007 Phân bố bệnh nhân sởi theo huyện/ thị Tình trạng tiêm vắc xin sởi trên nhóm bênh nhân dương tính 2009- 2010 Miễn dịch IgM, IgG giảm theo thời gian, hiệu lực VX sởi 90%, Tỷ... chuẩn PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ KỸ THUẬT THU THẬP THÔNG TIN ➢ Thiết kế nghiên cứu: Nghiên cứu mô tả cắt ngang ➢ Cỡ mẫu nghiên cứu: Tính theo công thức: n = Z2 1-α/2 ➢ Phỏng vấn: Bệnh nhân hoặc người nhà ➢ Lấy mẫu: Huyết thanh: 475 mẫu Dịch họng: 30 mẫu p(1-p) ∆2 KỸ THUẬT ELISA PHÁT HIỆN KHÁNG THỂ IgM Céng hîp /kh¸ng KT IgM g¾n enzym IgM /sëi(huyÕt thanh ®· lo¹i IgG) KN vi rút sởi PHÂN TÍCH KẾT QUẢ... GEN CỦA VI RÚT SỞI ❖Có 8 nhóm gen ký hiệu từ A đến H: 23 kiểu gen ❖Các nhóm gen: A,B,D,G,H chứa nhiều kiểu gen ❖Các nhóm gen: A, E, F chỉ có một kiểu gen ❖Việt Nam: ❖Có 2 nhóm gen ký hiệu H và D: 3 kiểu gen ❖Năm 2000 -2002: Kiểu gen H1, H2, D5 ❖Từ 2006: Kiểu gen H1 PHÂN BỐ KIỂU GEN CỦA VI RÚT SỞI Ở KHU VỰC CHÂU Á THÁI BÌNH DƯƠNG H1 D9 H1 H1 H1 H2 H1 D5 D8 D5 G2 D3 D3 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU... bằng chương trình: Excel, SPSS ➢ Tính toán, phân tích số liêu: thuật toán χ2 ➢ Tính toán phân tích kiểu gen: phần mềm lasergene, BioEdit và Mega 4 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tỷ lệ mắc/tử vong trên nhóm bệnh nhân phát ban nghi sởi ở NA từ 1/2009- 6/2011 Năm Tổng số mắc Tỷ lệ chết Tỷ lệ mắc/100.000 Tỷ lệ chết/100.000 2009 400 0 12,9 0 2010 304 0 10,4 0 2011 19 0 Thanh Hóa: 5,2/100.000 dân 0 Hà tĩnh: 7,3/100.000... 2010 Miễn dịch IgM, IgG giảm theo thời gian, hiệu lực VX sởi 90%, Tỷ lệ tiêm VX sởi 90%hoặc bảo quản VX không tốt, tiêm không đúng kỹ thuật Phân bố bệnh nhân sởi theo tháng trong năm H.V.Tân, H.P.Liên( MB); V.Q,Mai( MT) đỉnh dịch tháng 5 Phân bố bệnh nhân sởi theo từng tháng trong các năm từ 1/2009- 6/2011 Kết quả phân lập vi rút Kết quả Năm Tổng Số lượng bệnh nhân (+)/CPE 2009 5 2010 2011 Tổng TL... IgM kháng sởi từ 1/2009-6/2011 KẾT QUẢ Năm Dương tính n (%) Âm tính n (%) Nghi ngê n (%) Tổng n (%) 2009 185 (79,0) 30 (12,8) 19 (8,1) 234 (49,3) 2010 98 (44,1) 110 (49,5) 14 (6,3) 222 (46,7) 2011 0 (0) 19 (100.0) 0 (0) 19 (4,0) Tổng n( %) 283 (59,6) 159 (33,5) 33 (6,9) 475 (100,0) V.Q Mai( 1997- 2002): 486 BN: 80,3%; H.V.Tân (1991-1992): 77 BN: 97,4% Sự phân bố sởi và rubella 1/2009-6/2011 Phân bố bệnh... kít QIAamp Viral ARN Mini kít của hãng QIAgen ● Phản ứng RT- PCR MV- 60nt 1109 MV-63 nt 1709 Sản phẩm PCR 600 bp PHƯƠNG PHÁP SEQUENCING ➢ Tinh sạch sản phẩm PCR: Sử dụng bộ kit Wizard SV ➢ Tổng hợp sản phẩm PCR/Seq ➢ Tinh sạch sản phẩm PCR/Seq ➢ Giải mã bằng máy Sequencer ABI 3100 ➢ Phân tích trình tự, kết nối trình tự và vẽ cây di truyền bằng phần mềm lasergene, BioEdit và Mega 4 XỬ LÝ SỐ LIỆU ➢ Nhập,... các điều kiện sau của phản ứng sau Chứng (+): ∆A/P/P> 0,200 Giới hạn dưới < ∆A/P/P < giới hạn trên Chứng (-): ∆A/P/N < 0,100 Kết quả phản ứng: Âm tính nếu ∆A < 0,100 Dương tính nếu ∆A > 0,200 Nghi ngờ nếu 0,100 ≤ ΔA ≤ 0,200 KỸ THUÂT PHÂN LẬP VI RÚT ➢ Xử lý bệnh phẩm Xử lý bệnh phẩm với kháng sinh ➢ GÂY NHIỄM tế bào Vero/SLAM Gây nhiễm 0,5- 1ml bệnh phẩm vào chai tế bào Theo dõi sự hủy di t tế bào dưới... vi rút Kết quả Năm Tổng Số lượng bệnh nhân (+)/CPE 2009 5 2010 2011 Tổng TL (%) Số lượng bệnh nhân (-)/CPE TL (%) 4 80,0 1 20,0 19 5 26,3 14 73,7 6 0 0,0 6 100,0 9 30,0 21 70.0 Kết quả xác định vi rút sởi: RT- PCR Dương tính Âm tính Tổng số mẫu n TL (%) n TL (%) 5 (2009) 4 80,0 1 20,0 19 (2010) 19 100,0 0 0 6 (2011) 0 0 6 100,0 30 23 77,0 7 23,0