TRƢỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA: KHOA HỌC ỨNG DỤNG NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC ***** BÁO CÁO THÍ NGHIỆM CÔNG NGHỆ PROTEIN – ENZYME (Nhóm 2-Chiều thứ 4)  Giáo viên hƣớng dẫn: Th.S Trần Dƣơng Thùy  Nhóm thực hiện: Nguyễn Vũ Vương 61303919 Trần Thanh Vinh 61303917 Phan Thị Trinh 61303859 Phan Thị Thanh Vy 61303413 Thành Phố Hồ Chí Minh, Tháng 10 Năm 2016 Bài SẢN XUẤT ĐẬU PHỤ I Giới thiệu Đậu phụ (tiếng Trung: 荳腐 - đậu hũ) ăn dân dã người dân số quốc gia Đông Á Trung Hoa, Nhật Bản, Hàn Quốc Đông Nam Á Việt Nam Đậu phụ có nguồn gốc từ Trung Quốc Món có nhiều cách gọi: đậu khuôn miền Trung đậu hũ miền Nam Đậu phụ ăn giúp phòng chống xơ vữa động mạch, thường làm ăn chay cho người theo đạo Phật Nguyên liệu làm đậu phụ hạt đậu nành, xay lên ngâm vào nước Tinh bột chảy vào nước thành hình dáng theo người làm tự tạo, bả lọc Các hình dáng thường thấy hình vuông, tròn hay chữ nhật dài Khi sản phẩm hoàn thành chế thêm, cắt thành hình chữ nhật rán với dầu Thành màu vàng bọc thêm gia vị thếm, thành bữa Nếu không rán cắt lát làm thêm phần phụ nồi canh rau hay cá Giá trị dinh dưỡng cho 100 g (3,5 oz) [[Năng lượng]] 318 kJ (76 kcal) Carbohydrates 1.9 g Chất béo 4.8 g Chất béo bão hòa 0.7 g Chất đạm 8.1 g Chất khoáng Canxi (35%) 350 mg Sắt (42%) 5.4 mg Magiê (8%) 30 mg Natri (0%) mg II Thực hành Đậu hũ sản xuất phương pháp xay ướt xay khô Quy trình công nghệ phương pháp xay ướt Đậu nành Ngâm Nước Na2CO3 (Đãi vỏ ) Nước Xay ướt Bã Thức ăn gia súc Rửa bã Chất gây tủa Lọc thu dịch Đun sôi (950 c, khuấy liên tục) Kết tủa Định hình _ép Sản phẩm Chất phá bọt Thuyết minh quy trình a Nguyên liệu: lựa chọn đậu vàng hạt, to , sâu bọ, tạp chất b Ngâm : phương pháp xay ướt, hạt đậu phải qua giai đoạn ngâm, nhăm mực đích Làm cho hạt hút nước trương lên , nước tác động lên phân tử hạt  Xảy trình solvat  Liên kết đậu bị phá ( hình thành lớp áo nước giửa tế bào )  Chuyển sang thể keo linh động nằm tế bào hạt đậu Có yếu tố ảnh hưởng đến trình ngaamlaf thời gian, lượng nước, nhiệt độ ngâm  Tỉ lệ ngâm với nước : 2.5  Nhiệt độ 250c – 300c  Thời gian 3-4 c Xay Xay trình học phá vỡ tế bào nhằm giải phóng protein, lipit gluxid , có nước hòa tan chuyển chất sang dạng huyền phù Yếu tố quan trọng giai đoạn lượng nước Tủ lệ 1:6 Trong trình xay saponin tạo bọt gây ảnh hưởng tới trình sản xuất  Chiếm diện tích  Gây hại cho sản phẩm  Va đâp vào thành thiết bị  Giảm hiệu suất Sử dụng chất phá bọt 0.05% so với lượng đậu d Lọc : lọc qua vải nhiều lần để loại bỏ triệt để bã e Gia nhiệt Sử dụng nhiệt để phá enzyme kháng trypxin độc tố afltoxin Diệt vi sinh vật , khử mùi đậu nành phá vỡ lớp solvat ( màng áo nước bên tế bào) Thời gian gia nhiệt nhanh tốt thời gian phạm vi từ 510 phút tốt kết hợp khuấy đảo liên tục chống khét f Kết tủa Dùng muối ( CaSO4, MgCl, MgSO4, nước chua tự nhiên nước cốt chanh giấm ) để thay đổi PH vùng đẳng điện kết hợp với nhiệt độ 950c tới 1000c để gây biến tính protein tác dụng gây tủa protein Dùng CaSO4.pha cao CaSO4 200ml nước cho vào vật chứa đổ mạnh sữa đun sôi để nguội 850c vào để yên phút để tạo tửa Dùng nước chua: PH nước chua 4-4.5 lượng nước chua chiếm 20%22% lượng sữa cần kết tủa g Định hình – Ép Đưa hoa đậu vào khuông ép lót sẵn vải Gấp vai ép, lấy vật nặng đè lên nhiệt độ tốt 700c -800c Kết thí ngiệm 3.1hình ảnh thí nghiệm Sữa đun sôi Dịch lọc sau tủa Kết tủa sau lọc Đậu hũ thành phẩm Nhận xét cảm quan Đánh giá nhóm thực hành Màu : màu trắng ngà Vị : chát chua nhẹ ( ảnh giấm võ hạt ) Hơi béo Mùi :thơm sữa mùi khét Trạng thái : khối đậu vết cắt thô Không có lỗ khí không mịn 3.2Xác định hàm lƣợng chất khô Tiến hành sử dụng máy đo độ ẩm Đồ ẩm ban đầu máy 100% độ ẩm sau máy 38% Vậy độ ẩm sản phẩm đậu hũ Độ ẩm sản phẩm = 100% -38% =62% Độ ẩm đậu hũ 62% 3.3 xác định hàm lƣợng protein phƣơng pháp kjendahl a Nguyên tắc Tất dạng nito có thể hay mô gọi nito tổng số Nito có thành phần amino acid protein nito protein Nito thành phần protein muối vơ cơ, acid nitric, amino acid tự do, peptid,ure dẫn xuất ure, purin pirimidin… nito phi protein Dưới tác dụng H2SO4 đặc nhiệt độ cao, hợp chất có chứa nito bị phân huỷ oxy hoá đến CO2 H2O nito chuyển thành amoniac (NH3) tiếp tục kết hợp với H2SO4 tạo thành muối amoni sulfat Quá trình thực theo bước sau: Bước 1: Vô hoá nguyên liệu R-CH-COOH + H2SO4 CO2+H2O+(NH4)2SO4 NH2 Bước 2: Cất đạm phản ứng xảy thiết bị cất đạm (NH4)2SO4 +2NaOH Na2SO4 +2NH3 +2H2O Phản ứng xảy bình hứng NH3 +H2SO4 (NH4)2SO4 +H2SO4 dư Bước 3: Chuẩn độ lượng H2SO4 thừa bình hứng NaOH b Kết tính toán Gọi X hàm lượng nitơ tính g/kg Gọi a số ml H2SO4 đem hấp thụ NH3 Gọi b số NaOH 0.1 N tiêu tốn chuẩn điị H2SO4 thừa V số ml mẫu đem vô hóa 0.0014 lượng gam nitow ứng với 1ml H2SO4 0.1 N F hệ số hiệu chỉnh nồng độ đ NaOH 0.1 N Ta đo kết a = 10 ml b = 4.6 ml V = ml F=1 Hàm lượng nito tính theo công thức ( ) ( ) X= = = 25.2 g/kg Vậy N(%)= 2.25 % Protein (%)= N(%) x 5.7 = 2.25 x 5.7 = 12.85 (%) Nhận xét Hàm lượng protein đậu hủ tương đối cao Sai số tương đối lương trình thao tác sai số dụng cụ 3.3xác đinh hàm lượng chất béo theo phương pháp soxhlet Nguyên tắc Lipid nguyên liệu trích ly ether ethylic etrer dầu hỏa máy soxhlet Xác định lượng lipid cách tính lượng mẩu bị sau trích ly cân khối lượng chất béo thi sai đuổi dung môi Tính toán kết Thực định lượng lipid gián tiếp m : trọng lượng mẫu (g) c : trọng lượng giấy lọc +mẫu trước chiết (g) d: trọng lượng giấy lọc + mẫu sai chiết (g) kết thí nghiệm m = 2.79 g c = ( 0.78 + 2.79) = 3.57 g d = 2.696 g L(%)= ( ) = ( ) = 37.8 % Nhận xét lượng lipid cao đậu hũ Có sai số cao trình xấy mẩu chưa tuyệt đối sai số thiết bị III Kết luận Bằng phương pháp xay ướt tạo sản phẩm đậu hủ có chất lượng tốt thành phầm dinh dưởng cảm quan Với hàm lượng protein 12.85% hàm lượng chất béo 37.8 % thực nghiệm phòng thí nghiệm cho thấy giá trị dinh dưởng đậu hũ tốt đáp ứng đủ nhu cầu cho người sử dụng Nhưng thực tế , với kinh nghiệm nhà nghề kỹ thuật làm đậu hũ lâu năm hộ sản xuất danh nghiệp thành phần dinh dưởng cao cảm quan tốt nhiều người việc đáp ứng nhu cầu dinh dưởng cho người sử dụng có giá trị cảm quan cao Bài 2: THU NHẬN CHẾ PHẨM PROTEIN TỪ PHẾ LIỆU TÔM GIỚI THIỆU CHUNG Tôm phế liệu tôm Tôm nhóm động vật thuộc giáp sát mười chân( Deccapoda) sống môi trường nước, phần lớn có kích thước lớn, phần đầu ngực bọc vỏ giáp( giáp đầu ngực) có đoi chân hàm, đôi chân ngực( số đôi đàu tiên biến thành càng) đôi chân bụng Cơ thể gồm phần đầu ngực,bụng tận telson Phế liệu tôm chủ yếu đầu mảnh vỏ, kể đến phần thịt vụn bóc nõn không cẩn thận số tôm bị biến màu Phế liệu tôm chứa nhiều chất dinh dưỡng, chủ yếu acid amin nucleotide Đến người ta thường dùng phế liệu tôm làm thức ăn gia súc, tách chiết chitin/chitosan từ vỏ giải hết lượng phế thải tôm khổng lồ này; Một hướng tận thu phế liệu tôm thu nhận chế phẩm từ đầu tôm Các loại chế phẩm protein  Protein concentrated loại chế phẩm protein có hàm lượng protein tối thiểu 65%  Protein isolated giống chế phẩm hàm lương protein thực vật cao 90% THỰC HÀNH Quy trình công nghệ sản suất bột tôm - Api: hoạt tính riêng enzyme công đoạn i IV KẾT LUẬN Ƣu điểm pp Bradford: Hóa chất đơn giản ,ít tốn thời gian Có độ nhạy cao xác định tới 1µg protein Nhạy pp Lowry gấp lần Ít bị cản trở hóa chất sử dụng nghiên cứu protein Nhƣợc điểm pp Bradford Phụ thuộc nhiều vào việc xây dựng đường chuẩn Dẫn đến đường chuẩn sai kết thí nghiệm sai Phụ thuộc vào máy đo OD Nếu cuvet có chứa tạp chất ảnh hưởng đến việc đo mật độ quang - Kết thí nghiệm có sai khác lớn sử dụng phương pháp xác để xác định hàm lượng protein hoạt tính enzyem Nguyên nhân: - Mẫu thí nghiệm có lẫn tạp chất khác Khi đo OD lấy kết chưa thật ổn định Thể tích hóa chất hút không xác Thao tác thí nghiệm không Tính toán không xác BÀN LUẬN Bản chất hoạt tính enzyme mạnh lượng chất chuyển hóa hay lượng sản phẩm tạo thành đơn vị thời gian lớn Hai nhóm phương pháp xác định hoạt tính enzyme: - Đo lượng chất hay lượng sản phẩm tạo thành đơn vị thời gian định ứng với nồng độ enzyme xác định Đo thời gian cần thiết để thu lượng biến thiên định chất hay sản phẩm tương ứng với nồng độ enzyme xác định Sau có chế phẩm enzyme bán tinh khiết người ta tinh enzyme sắc kí lọc gel để có chế phẩm enzyme tinh khiết Xác định trọng lượng phân tử phương pháp điện di SDS-PAGE Một số phương pháp xác định hàm lượng protein khác: - Phương pháp Kjendal Phương pháp Biuret Phương pháp Lowry Ngoài thu nhận protease từ vi sinh vật, ngƣời ta thu nhận từ Vi sinh vật (vi khuẩn, nấm virus) : protease, amylase,cellulase,pectinase,… Thực vật (đu đủ, dứa…) : papain, bromalin, urease, Động vật (gan, dày bê…) : tripsin,pepsin,tripsinogen,… Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình trích ly Tỉ lệ nước dùng để trích ly : gấp 2-3,5 lần so với lượng chế phẩm Thời gian trích ly: thời gian lâu dịch chiết chứa nhiều tạp chất thông thường khoảng 40 -45ph thích hợp Dung môi trích ly: lựa chọn dung môi thích hợp với chất cần trích ly MỤC LỤC HÌNH ẢNH Hình 5: Chế phẩm enzyme thô trước sau sấy khô 40oC Hình 6: Dịch lọc enzyme thô tâm Hình 7: Dịch lọc enzyme thô sau ly tâm Hình 7: Dịch lọc enzyme thô trước ly Hình 8: Tủa protein ethanol lạnh Hình 9: Tủa protein trước ly tâm Hình 10: Chế phẩm enzyme bán tinh khiết Hình 11: Ống nghiệm dùng để dựng đường chuẩn protein ( trái) ống nghiệm mẫu (phải) pha loãng nồng độ 1, 10-1,10-2,10-3 theo phương pháp Bradford Hình 12: Ống nghệm dùng để dựng đường chuẩn tyrosin ( phải) ống nghiệm mẫu theo phương pháp Anson cải tiến ( trái) BÀI 4: CHIẾT TÁCH VÀ TINH SẠCH UREASE TỪ ĐẬU NÀNH I Giới thiệu enzyme urease Tổng quan enzyme urease - Urease enzyme thuộc nhóm enzyme thủy phân (hydrolase), phân nhóm amidase Urease có số hiệu phân loại quốc tế EC 3.5.1.5 Tên hệ thống là: Cacbamit amido hydrolase Trong đó: số nhóm – hydrolase, số nhóm phụ enzyme tác dụng lên liên kết C-N khác liên kết peptide, số phân nhóm phụ cắt amid thẳng (amidohydrolase), số số thứ tự urease phân nhóm phụ - Urease ứng dụng nhiều Y học Công nghiệp thực phẩm để định lượng ure mẫu bệnh phẩm nước chấm Trên giới, có nhiều nhà khoa học nghiên cứu enzym urease và đặc tính chúng, nhiên nghiên cứu urease từ nguồn nguyên liệu đậu khác cho kết khác đặc tính urease Điều chứng tỏ urease từ nguyên liệu đậu khác có số khác biệt tính chất Còn Việt Nam có nghiên cứu để tinh urease, hoàn toàn chưa có tác giả nghiên cứu đặc tính urease từ nguyên liệu đậu nành Việt Nam - Để ứng dụng urease Y học Thực Phẩm hiệu cần thiết phải nắm đặc tính urease.ở nước ta phải nhập chế phẩm urease kit urease từ nước với giá thành cao Do thực đề tài nhằm tìm số đặc tính urease đậu nành hạt vàng Việt Nam: phân tử lượng urease chuỗi tiểu đơn vị, thông số động học urease Tóm tắt đặc tính enzyme urease Đặc tính Trọng lượng phân tử Số trung tâm hoạt động / phân tử Phân tử lượng trung tâm hoạt động pHopt pI Coenzyme Topt Chất kiềm hãm Cơ chất Tính xúc tác - Giá trị 483.000 dalton 3–4 14.000 dalton Khoảng pH 6,4 – 7,6 (tùy loại đậu) – 5,1 Ni2+ Trong khoảng 45 – 50oC Kim loại nặng ( Ag+, Cu2+, Hg2+ ), borat, H2O2, acid ascorbic… Urea, thiourea, hydroxyurea Đặc hiệu chất tuyệt đối Trong tự nhiên có 200 loài vi khuẩn có khả tổng hợp enzyme urease H.pylori, Klebsiella aerogenses, Proteus mirabilis, Yersinia enterocolitia, Bacillus pasterurii, Escherchia coli…Enzyme urease có dịch tiêu hóa động vật trâu, bò, dê, chó - Enzyme urease có nhiều bậc cao, đặc biệt thuộc họ đậu đậu rựa (Canavila ensiformis, jack bean), đậu nành (Glycine hispida)… - Enzyme urease xúc tác cho phản ứng thủy phân ure, tạo thành khí cacbonic amoniac theo phương trình sau: H2 N C=O + urease H2O CO2 + 2NH3 H2 N - Lợi dụng tính đặc hiệu urease, người ta ứng dụng urease việc nhận biết có mặt ure thực phẩm, nước giải khát lên men sữa II Thực hành Thu nhận bột enzyme urease thô: Hạt đậu Xay nhỏ Ete dầu hỏa (tỷ lệ 1g bột:2mL ete) Trích ly loại lipid Dung dịch EDTA 5.10-3M, Cystein 5.10-3 Trích ly urease (12h) Chỉnh pH Ly tâm (4000v/p, 15p) Hoặc lọc chân không Thu dịch trích ly M Đông khô (chân không, -40oC) Bột urease thô Lipid Bã Lưu ý: trình phải thực nhiệt độ lạnh, thấp 4oC 2.Tinh sơ enzyme urease Tiến hành thu nhận dịch trích ly urease giống quy trình thu nhận trình bày với tỷ lệ bột : dung dịch trích ly 12g: 100mL thu dung dịch M Lấy dung dịch M pha loãng khoảng 20-30 lần để phân tích hàm lượng protein hoạt lực urease Dịch enzyme thô M tiếp tục tiến hành tinh phương pháp: - Tủa aceton: làm lạnh dịch trích ly rót dung môi aceton làm lạnh đến -20oC theo tỷ lệ 60% cho chảy thành dòng theo thành cốc hay nhỏ giọt, khuấy nhẹ để hạn chế biến tính protein Để lắng tủa 30 phút, ly tâm 4000v/p 10 phút Tủa cho bay hết acetone tủ lạnh sấy đông khô - Tủa phân đoạn sunfate amon theo phương pháp sau: tất công đoạn phải thực 4oC Tính toán lượng (NH4)2SO4 Dịch trích ly M Tủa (NH4)2SO4 20% bão hòa Để yên 30p, to phòng Ly tâm thu dịch Tủa (NH4)2SO4 55% bão hòa Để yên 30p, to phòng Ly tâm thu tủa Hòa tan tủa Thẩm tích Đông khô Bột urease thô III Phân tích chế phẩm  Xác định hàm lƣợng protein theo phƣơng pháp Bradford Xây dựng phương trình đường chuẩn protein ỐNG NGHIỆM HÀM LƯỢNG ALBUMIN (µg) 10 20 30 40 50 ΔOD595 nm 0.673 0.69 0.716 0.739 0.765 0.79 0.8 0.78 0.76 y = 0.0024x + 0.6693 R² = 0.997 0.74 0.72 0.7 0.68 0.66 10 20 30 40 50 60 Từ kết ta tính phương trình đường chuẩn protein : y = 0.002x + 0.669 ODmẫu = 1.354 ΔODmẫu = 0.766 Dựa vào phương trình đường chuẩn ta có: 0.766= 0.002x + 0.669 X =(0.766 – 0.669) / 0.002 = 48.5 (µg/ml) hàm lượng protein có 0.1ml dịch chế phẩm ban đầu Từ ta tính hàm lượng protein 1ml mẫu 48.5*10 = 485 (µg protein/ml) Hàm lƣợng protein tổng có 10ml dịch enzyme Ct = C*V = 485*10 = 4850 (µg/ml) = 4.85 (mg protein/ml) Trong đó: - C: hàm lượng protein có 1m dịch enzyem (µg protein/ml) V: thể tích dịch enzyme ( 10ml) Vậy hàm lƣợng protein 1ml mẫu 485 (µg/ml) 10ml dịch enzym 4.85 (mg protein/ml)  Xác định hoạt tính urease thro phƣơng pháp nessler Xây dựng phương trình đường chuẩn Nessler: ỐNG NGHIỆM HÀM LƯỢNG NH3 (µg) 10 15 20 25 ΔOD595 nm 0.610 0.653 0.690 0.724 0.820 0.893 0.9 0.8 0.7 y = 0.0062x + 0.6408 R² = 0.9443 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 10 15 20 25 Từ kết ta tính phương trình đường chuẩn NH3 : y = 0.009x + 0.601 ΔODmẫu = 0.672 ODmẫu = 0.834 Ta xác định hoạt tính urease: *10-3 1.4.10-3 UI/mL Trong đó: F: độ pha loãng m: khối lượng bột đông khô đem thử nghiệm (mg) mt: tổng khối lượng bột (mg) Vt: tổng thể tích dịch (mL) Tính hoạt tính tổng: At = A *100 = 1,4.10-3 * 100 = 0.14 UI/mg Tính hoạt tính riêng: Ap Độ tinh sạch: Hiệu suất thu hồi: = = 0.03 UI/mg IV Hình ảnh  Cảm nghĩ sau kết thúc môn thí nghiệm: Sau học xong môn chúng em hiểu rõ quy trình sản xuất đậu hũ, thu nhận chế phẩm bột tôm, thu nhận enzyme protease từ nấm mốc Aspergillus oryzae, chiết tách tinh Urease từu đậu nành ứng dụng đời sống Bên cạnh chúng em thực hành làm đậu hũ miếng bánh phồng tôm, học cách làm việc tập thể…Cảm ơn cô tận tình giúp đỡ chúng em suốt môn học [...]... trong 1ml dung dịch enzyme là 0.1419 (UI/ml) Hoạt tính tổng của chế phẩm enzyme là 14.19 (UI/mg CP) Hoạt tính riêng của chế phẩm enzyme là 3.171 (UI/ mg protein) Hiệu suất thu hồi chế phẩm enzyme bán tin khiết Trong đó: - He: hiệu suất thu hồi enzyme At1: hoạt tính tổng của enzyme ở công đoạn 1 Ati: hoạt tính tổng của enzyme ở công đoạn i Độ tinh sạch enzyme: Trong đó: - : độ tinh sạch enzyme Ap1: hoạt... (µg/ml) là hàm lượng protein có trong 0.1ml dịch chế phẩm ban đầu Từ đó ta tính được hàm lượng protein trong 1ml mẫu là 44.74*10 = 447.4 (µg protein/ ml) Hàm lƣợng protein tổng có trong 10ml dịch enzyme Ct = C*V = 447.4*10 = 4474 (µg/ml) = 4.474 (mg protein/ ml) Trong đó: - C: là hàm lượng protein có trong 1m dịch enzyem (µg protein/ ml) V: là thể tích dịch enzyme ( 10ml) Vậy hàm lượng protein trong 1ml... tủ đá cho những thí nghiệm tiếp theo III KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM 1 Xác Định Hàm Lƣợng Protein Bằng Phƣơng Pháp Bradford Xây dựng phương trình đường chuẩn protein ỐNG NGHIỆM HÀM LƢỢNG ALBUMIN (µg) OD595 nm ΔOD595 nm 0 0 1 10 2 20 3 30 4 40 5 50 0.617 0 0.653 0.036 0.680 0.063 0.768 0.151 0.804 0.187 0.858 0.241 Từ kết quả trên ta tính được phương trình đường chuẩn protein là : y = 0.005x – 0.0117 ODmẫu =... 40 -45ph là thích hợp nhất Dung môi trích ly: lựa chọn dung môi thích hợp với chất cần trích ly MỤC LỤC HÌNH ẢNH Hình 5: Chế phẩm enzyme thô trước và sau khi sấy khô ở 40oC Hình 6: Dịch lọc enzyme thô tâm 1 Hình 7: Dịch lọc enzyme thô sau khi ly tâm 1 Hình 7: Dịch lọc enzyme thô trước khi ly Hình 8: Tủa protein bằng ethanol lạnh Hình 9: Tủa protein trước khi ly tâm 2 Hình 10: Chế phẩm enzyme bán tinh... thì kết quả thí nghiệm sai Phụ thuộc vào máy đo OD Nếu trong cuvet có chứa tạp chất sẽ ảnh hưởng đến việc đo mật độ quang - Kết quả thí nghiệm có sự sai khác lớn khi sử dụng các phương pháp xác để xác định hàm lượng protein và hoạt tính enzyem Nguyên nhân: - Mẫu thí nghiệm có lẫn tạp chất khác Khi đo OD lấy kết quả chưa thật sự ổn định Thể tích hóa chất hút không chính xác Thao tác thí nghiệm không đúng... đơn vị hoạt tính enzyme trong 1ml dung dịch enzyme V: là thể tích toàn bộ hỗn hợp phản ứng ( 5ml dd casein + 1ml enzyme + 5ml TCA) - t: là tổng thời gian xảy ra phản ứng thủy phân (10ph) Hoạt tính tổng của chế phẩm enzyme = (UI/mg CP) Trong đó: - At : là hoạt tính tổng của chế phẩm enzyme V : là thể tích định mức của hỗn hợp enzyme ( 100ml) Hoạt tính riêng của chế phẩm enzyme (UI/mg protein) Vậy : Số... 11: Ống nghiệm dùng để dựng đường chuẩn protein ( trái) và các ống nghiệm mẫu (phải) đã pha loãng ở 4 nồng độ 1, 10-1,10-2,10-3 theo phương pháp Bradford Hình 12: Ống nghệm dùng để dựng đường chuẩn tyrosin ( phải) và các ống nghiệm mẫu theo phương pháp Anson cải tiến ( trái) BÀI 4: CHIẾT TÁCH VÀ TINH SẠCH UREASE TỪ ĐẬU NÀNH I Giới thiệu về enzyme urease 1 Tổng quan về enzyme urease - Urease là enzyme. .. protein là : y = 0.002x + 0.669 ODmẫu = 1.354 ΔODmẫu = 0.766 Dựa vào phương trình đường chuẩn ta có: 0.766= 0.002x + 0.669 X =(0.766 – 0.669) / 0.002 = 48.5 (µg/ml) là hàm lượng protein có trong 0.1ml dịch chế phẩm ban đầu Từ đó ta tính được hàm lượng protein trong 1ml mẫu là 48.5*10 = 485 (µg protein/ ml) Hàm lƣợng protein tổng có trong 10ml dịch enzyme Ct = C*V = 485*10 = 4850 (µg/ml) = 4.85 (mg protein/ ml)... NHẬN ENZYME PROTEASE TỪ Aspergillus oryzae I CƠ SỞ LÝ THUYẾT 1 Tổng Quan Về Enzyme Protease - Nhóm enzyme protease xúc tác quá trình thuỷ phân liên kết liên kết peptit (-CONH-)n trong phân tử protein, thành các polypeptit đến sản phẩm cuối cùng là các axit amin Ngoài ra, nhiều protease cũng có khả năng thuỷ phân liên kết este và vận chuyển axit amin Hình 1: Cấu tạo hình học của enzyme trypsin – một enzyme. .. của enzyme ở công đoạn 1 - Api: hoạt tính riêng của enzyme ở công đoạn i IV KẾT LUẬN Ƣu điểm của pp Bradford: Hóa chất đơn giản ,ít tốn thời gian Có độ nhạy cao có thể xác định được tới 1µg protein Nhạy hơn pp Lowry gấp 4 lần Ít bị cản trở bởi các hóa chất sử dụng trong nghiên cứu protein Nhƣợc điểm của pp Bradford Phụ thuộc nhiều vào việc xây dựng đường chuẩn Dẫn đến nếu đường chuẩn sai thì kết quả thí