TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM HUẾ KHOA NÔNG HỌC BÀI TIỂU LUẬN MÔN: KIỂM DỊCH THỰC VẬT Đề bài: Phân loại, phân bố ký chủ, đặc điểm hình thái sinh học, triệu chứng gây hại, phương pháp giám định, phòng trừ tuyến trùng Globodera rostochiensis Sinh viên thực hiện: Đoàn Thị Ngọc Uyên GVHD: TS Nguyễn Vĩnh Trường Tuyến trùng bào nang ánh vàng khoai tây Tên khoa học: Globodera rostochiensis Phân bố kí chủ: 1.1 Phân bố: Tuyến trùng Globodera rostochiensis phân bố hầu hết toàn giới: - Khu vực EPPO: Albania, Algeria, Áo, Belarus, Bỉ, Bulgaria, Cộng hòa Séc, Síp, Đan Mạch, Ai Cập, Estonia, Quần đảo Faroe, Phần Lan, Pháp, Đức, Hy Lạp, Hungary, Iceland, Ireland, Latvia, Lebanon, Libya, Lithuania, Luxembourg, Malta, Ma-rốc, Hà Lan, Na Uy, Ba Lan, Bồ Đào Nha, Tây Ban Nha, Nga, Slovakia, Thụy Điển, Thụy Sĩ, Tunisia, Vương quốc Anh (Anh, Channel Islands), Ukraine, Nam Tư Tìm thấy Israel năm 1954 1965 khu vực nhỏ vùng Sharon - Châu Á: Ấn Độ, Nhật Bản, Lebanon, Pakistan, Philippines, Sri Lanka, Tajikistan, Nga - Châu Phi: Algeria, Ai Cập, Libya, Morocco, Sierra Leone, Nam Phi, Tunisia - Bắc Mỹ: Canada, Columbia, Mexico, Mỹ - Trung Mỹ Caribbean: Costa Rica, Panama - Nam Mỹ: Trong suốt khu vực Andean cao: Argentina, Bolivia, Brazil, Chile, Colombia, Ecuador, Peru, Venezuela - Châu Đại Dương: Úc, New Zealand, Norfolk - EU: Hiện 1.2 Kí chủ: Gây hại chủ yếu cà chua khoai tây, có số trồng có củ khác Phân loại: Ngành: Lớp: Nematoda Secernentea Lớp phụ: Bộ: Diplogasteria Tylenchida Họ: Họ phụ: Chi: Heteroderidae Heteroderinae Globodera Loài: Globodera rostochiensis Triệu chứng gây hại: Triệu chứng thể biến vàng, khô héo trước đến trên, rễ có nốt sưng, u nhỏ Cây chết trước hình thành củ hình thành củ củ nhỏ, suất khoai tây giảm 1g m đất có từ 10 đến 50 trứng Triệu chứng thể bệnh củ khoai tây Đặc điểm sinh thái sinh học: 4.1 Đặc điểm hình thái: Đây loài tuyến trùng tạo nang hình tròn, gần tròn, hình quarlee hình trứng, âm đạo Lỗ tài tiết chấm cấu tạo hình chữ V, vỏ cutin mỏng, bọc trứng Tuyến trùng non tuổi thứ dài 0.4 – 0.6mm, kim chích hút phát triển, đuôi nhọn Con đực hình giun dài 0.8 – 1.5mm, đuôi lợn tròn Con có hình cầu, hình chanh lê dài 0.2 -1.1mm Hình thái cảu tuyến trùng Globodera rostochiensis 4.2 Đặc điểm sinh học: Bệnh hại nặng loài đất giàu chất hữu làm giảm suất đáng kể Trên đất cát nhẹ bị hại nặng, suất thấp Sự gây hại phụ thuộc vào mật độ tuyến trùng đất Tuyến trùng phát triển phụ thuộc nhiều vào nhiệt độ, ẩm độ giai đoạn sinh trưởng trồng (bộ rễ khoai tây thường bị hại sau rồng tuần), tuyến trùng hại khoai tây phát triển nở trúng nhiệt độ 15 - 20oC, củ cải 20 – 25oC Con tuyến trùng nảy trở thành bào nang, bào nang vỡ tuyến trùng rời khỏi bào nang xâm nhập vào rễ trồng đầu rễ, sau chúng di chuyển dọc theo thân bắt đầu hút chất dinh dưỡng Cơ thể tuyến trùng Globodera rostochiensis phát triển theo chiều ngang chuyển sang tuổi sau 10 – 14 ngày, sau vài ngày chúng phân giới tính tuổi thứ phân biệt rõ cá thể đực cá thể cái, vỏ cutin màu trắng sau hình thành bào nang chuyển sang màu vàng sáng màu nâu Phần lớn cá thể chứa trứng thể chúng Một tuyến trùng có khoảng 200 – 500 trứng trình phát triển nó, lớp vỏ cutin dày lên tạo thành bào nang, bào nang tách ròi khỏi rễ nằm mặt đất Trứng phân chia phát triển vỏ đến tuổi tuyến trùng bao bọc bào nang Các bào nang tồn tới 20 năm Khi khồn có kí chủ có khoảng 1/3 tuyến trùng dời khỏi bào nang làm giảm mật độ tuyến trùng đất Trong điều kiện nhiệt độ thấp, số lượng tuyến trùng giảm 18% nhiệt độ cao (trên 30oC) giảm tới 95% Số lượng tuyến trùng đất cát nhìu đất thịt nặng Ở điều kiện nhiệt độ 15 – 25.5oC tuyến trùng Globodera rostochiensis có chu kì phát triển 38 – 48 ngày Ở nước ôn đới có vài hệ năm Trong điều kiện nhiệt độ thấp (nhỏ 12oC) nhiệt độ cao ( lớn 25 oC) tuyến trùng nở Trứng tuyến trùng non bị chết nhiệt độ cao nước Bào nang tuyến trùng Globodera rostochiensis rễ Phương pháp giám định: 5.1 Quy định chung: - Phạm vi điều chỉnh: Quy chuẩn quy định Quy trình giám định tuyến trùng bào nang Globodera rostochiensis (Wollenweber, 1923) Behrens, 1975 dịch hại kiểm dịch thực vật nhóm I Việt Nam - Đối tượng áp dụng : Quy chuẩn áp dụng tổ chức, cá nhân Việt Nam nước có hoạt động liên quan đến lĩnh vực bảo vệ kiểm dịch thực vật Việt Nam (viết tắt KDTV) thực giám định tuyến trùng bào nang Globodera rostochiensis (Wollenweber, 1923) Behrens, 1975 dịch hại kiểm dịch thực vật (KDTV) nhóm I thuộc Danh mục dịch hại KDTV Việt Nam ban hành kèm theo Quyết định số 73/2005/QĐ-BNN ngày 14/11/2005 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp PTNT 5.2 Quy định kỹ thuật: 5.2.1 Phương pháp thu thập bảo quản mẫu: Thu thập mẫu - Đối với hàng hoá xuất, nhập khẩu, cảnh vận chuyển, bảo quản nước: Tiến hành lấy mẫu theo tiêu chuẩn Việt Nam TCVN 4731-89, Qui chuẩn kỹ thuật quốc gia QCVN 01-21:2010/BNNPTNT, QCVN 01-22: 2010/BNNPTNT, QCVN 01-23: 2010/BNNPTNT - Đối với trồng đồng ruộng: Lấy mẫu theo phương pháp qui chuẩn kỹ thuật quốc gia phương pháp điều tra phát sinh vật hại trồng Bảo quản mẫu Mẫu lưu giữ bảo quản sau: - Các phận tươi có triệu chứng nghi tuyến trùng (củ rễ) để túi ni-lông có lỗ thông khí, có đính nhãn bảo quản tủ lạnh nhiệt độ khoảng 5oC - Mẫu đất cho vào túi ni-lông, có lỗ thông khí, có đính nhãn để khô tự nhiên điều kiện nhiệt độ phòng sấy nhiệt độ 35– 400C đất khô để bào nang dễ dàng tách rời khỏi đất - Dung dịch có tuyến trùng tách từ phận bị hại để lọ kín có dán nhãn bảo quản tủ lạnh nhiệt độ – 10oC - Tiêu lam phải có nhãn ký hiệu mẫu, để hộp chuyên dụng đựng tiêu lam bảo quản nhiệt độ phòng 5.2.2 Thiết bị, dụng cụ, hoá chất dùng làm tiêu giám định: - Kính lúp soi có độ phóng đại 10 – 40 lần (10x – 40x), kính hiển vi có độ phóng đại 40 – 1.000 lần (40x – 1000x) - Chậu thuỷ tinh có dung tích lít, cốc thuỷ tinh 100ml, chén thuỷ tinh 4ml, đũa thuỷ tinh, khay men, giấy lọc - Kim gắp tuyến trùng, đĩa đồng hồ, kim dầm mẫu, đĩa petri, lam, lamen - Rây lọc tuyến trùng có đường kính mắt rây là: 25µm, 75µm, 150µm, 250µm, 700µm, 1.000µm, lưới lọc có đường kính mắt lưới 2mm - Máy ly tâm, tủ định ôn, bình hút ẩm - Dung dịch ZnSo4 MgSO4 đường sacazosa (tỷ trọng 1,18), formaldehyde (40%), glycerol (tinh khiết), triethanolamine (tinh khiết), nước cất 5.2.3 Phương pháp lọc tuyến trùng: 5.3.2.1 Phương pháp tách tuyến trùng bào nang từ phận cây: Rửa phận (rễ, củ) vòi nước thu phần nước rửa lọc qua rây có đường kính mắt lỗ 0,05-0,1mm Hong khô rây đưa lên kính lúp soi có độ phóng đại từ 40-70 lần để quan sát đếm bào nang Cắt rễ rửa, ngâm đĩa Petri có chứa nước Sau 2-4 giờ, đưa đĩa Petri lên kính lúp soi có độ phóng đại 40 – 70 lần để quan sát bào nang tuyến trùng 5.3.2.2 Phương pháp tách tuyến trùng bào nang từ đất: Phương pháp giấy lọc Burh: khối lượng mẫu đất từ 5-10gam Cho đất vào cốc chứa 0,5 lít nước, cho thêm vào 3-5 giọt dung dịch kiềm bão hoà (NaOH KOH), khuấy Đổ hỗn hợp dịch qua rây có đường kính mắt lỗ 2mm để lọc đá, rác Lấy giấy lọc xung quanh mặt cốc thuỷ tinh cho mép giấy chồng lên 1cm, đổ dịch lọc vào, khuấy theo chiều phút sau dừng lại cho bào nang bám vào mép giấy lọc Lấy nhẹ giấy lọc ra,quan sát trực tiếp kính lúp cầm tay có độ phóng đại 10 lần, để phát bào nang dính bám vào phần đường thẳng vòng giấy tiếp giáp giấy lọc với mặt nước rửa giấy lọc vào cốc nước sạch, đổ nước lên rây có đường kính mắt lỗ 0,05-0,1mm, quan sát kính lúp cầm tay có độ phóng đại 10 lần Phương pháp dung dịch NaCL Khối lượng mẫu đất từ 10-100gam Pha dung dịch NaCl nồng độ 20% Cho đất vào dung dịch NaCl trên, khuấy cho bào nang lên Đổ hỗn hợp dịch nói qua rây có đường kính mắt lỗ 2mm để lọc đá, rác Đổ hỗn hợp dịch qua rây có đường kính mắt lỗ 0,05-0,1mm để giữ lại bào nang Quan sát bào nang thu kính lúp cầm tay có độ phóng đại 10 lần Phương pháp bình lọc Fenwick Khối lượng mẫu đất từ 100-200 gam Đổ đất vào rây có đường kính mắt lỗ 2mm, xối nước trực tiếp vào đất để đất tan vào bình lượng nước gần đầy bình, loại bỏ phần cặn rây Mở vòi bình lọc với tốc độ chảy vừa phải cho hạt đất tiếp tục chìm xuống bào nang lên mặt nước tràn qua miệng bình theo máng dẫn xuống rây thu bào nang có đường kính mắt lỗ 0,05-0,1mm phía Hong khô rây nhiệt độ phòng, thu bào nang quan sát đếm Rây Phễu Máng Rây Đưòng nước vào Đường nước Bình Fenwick để tách bào nang đất 5.2.4 Phương pháp làm tiêu tuyến trùng: 5.2.4.1 Dung dịch bảo quản tuyến trùng: Tuyến trùng ký sinh thực vật thu từ phương pháp tách lọc nêu đưa vào ba loại dung dịch để bảo quản tuyến trùng * Chú ý: để tiêu tuyến trùng giữ hình dáng đặc trưng, trước cho vào dung dịch bảo quản nên xử lý nhiệt tuyến trùng nước nhiệt độ 70–80oC phút - Dung dịch 1: Formalin Dung dịch Formadehyde 4% - Dung dịch 2: Formalin - glycerol (FG) Formalin (40%) Formaldehyde): 10ml Glycerol: 01ml Nước cất: 89ml - Dung dịch 3: TAF Triethanolamine: 02ml Formalin (40% formaldehyde): 07ml Nước cất: 91ml 5.2.4.2 Phương pháp xử lý làm tiêu tuyến trùng: Phương pháp xử lý tuyến trùng - Dung dịch xử lý: Dung dịch 1: Cồn (96%) 20ml Glycerol 01ml Nước cất 79ml Dung dịch 2: Cồn (96%) Glycerol 95ml 05ml - Cách tiến hành: Gắp tuyến trùng từ dung dịch bảo quản vào chén thuỷ tinh có chứa 0,5ml dung dịch xử lý (dung dịch 1) Đặt chén bình hút ẩm đậy kín có chứa 1/10 thể tích cồn 96o Bình hút ẩm đặt tủ ấm điều kiện nhiệt độ 40oC với thời gian tối thiểu 12 Lấy chén thuỷ tinh khỏi bình hút ẩm, thêm dung dịch Đậy nắp phần miệng chén để cồn bay từ từ Chén thuỷ tinh có chứa tuyến trùng tiếp tục giữ tủ ấm 40oC Sau 2-3 bổ sung thêm dung dịch vào chén thuỷ tinh cho gần đầy, làm lại – lần Sau tuyến trùng lại Glycerol sử dụng làm tiêu Hoặc đặt chén thuỷ tinh chứa tuyến trùng glycerol nguyên chất bình hút ẩm có chứa vôi Bảo quản lâu dài để làm tiêu cố định Phương pháp làm tiêu Lấy lam kính làm vòng parapin sáp ong (đuờng kính khoảng 1cm) lam kính Cho giọt glycerol nguyên chất vào vòng parapin sáp ong Dùng kim gắp, gắp tuyến trùng (đã xử lý dung dịch cố định) đặt vào giọt glycerol, chỉnh cho cá thể tuyến trùng nằm hướng Đậy lamen đặt lam kính bàn nhiệt cho parapin sáp ong tan chảy Nhấc nhanh lam kính đặt chỗ mát Gắn keo bảo vệ Phương pháp làm tiêu phần sau bào nang (lỗ sinh dục lỗ hậu môn): Ngâm tuyến trùng bào nang tách lọc nước 24 Vớt ra, quan sát kính lúp soi có độ phóng đại từ 40 – 70 lần dùng dao lam cắt lấy phần thân có hậu môn Cắt tiêu phần thân có hậu môn 5.2.5 Trình tự giám định: Quan sát tiêu kính hiển vi có độ phóng đại từ 40 – 1.000 lần (40x – 1.000x) tiêu sau - Hình dạng đo chiều dài kim hút, đếm số vòng vùng môi, quan sát gai giao cấu đuôi tuyến trùng đực - Hình dạng đo kích thước tuyến trùng - Hình dạng đo kích thước ấu trùng - Hình dạng đo kích thước trứng - Màu sắc, nếp nhăn đường vân, vị trí lỗ sinh dục bào nang - Đặc điểm lỗ hậu môn Biện pháp phòng trừ: Thực biện pháp kiểm dịch thực vật nghiêm ngặt nhập giống Chỉ nhập giống khoai tây tuyến trùng, không nhập củ giống, giống chứa bào nang, dùng giống chống chịu Thực biện pháp canh tác – năm mật độ giảm 30 – 50%, luân canh với họ thập tự có kết hợp xử lý đất loại thuốc trừ tuyến trùng Phòng trừ thuốc Carbation trồng lúa liên tục năm để làm giảm mật độ tuyến trùng Có thể luân canh tròng – năm kết hợp dùng thuốc hóa học loại thuốc: D-D, Telon, Dazomet, Basamid nhiều loại thuốc khác (Methyl bromide, Carbamat, Aldicarb Oxamide) Ngoài cần điểu chỉnh thời vụ trồng khoai tây sớm sử dụng phân hữu bón kết hợp với phân khoáng Có thể xử lý khoai tây nhiệt độ 44 – 45oC dung dịch foocmol 5% Một số loại thuốc trị tuyến trùng TÀI LIỆU THAM KHẢO - QUY CHUẨN KỸ THUẬT QUỐC GIA QCVN 01-35:2010/BNNPTNT VỀ QUY TRÌNH GIÁM ĐỊNH TUYẾN TRÙNG BÀO NANG LÀ DỊCH HẠI KIỂM DỊCH THỰC VẬT CỦA VIỆT NAM - https://en.wikipedia.org/wiki/Globodera_rostochiensis - https://translate.google.com.vn/translate?hl=vi&sl=en&u=https://www.ep po.int/QUARANTINE/data_sheets/nematodes/HETDSP_ds.pdf&prev=search - https://en.wikipedia.org/wiki/Globodera_rostochiensis - http://text.123doc.org/document/1422774-mot-so-benh-do-tuyentrung.htm [...]...6 Biện pháp phòng trừ: Thực hiện các biện pháp kiểm dịch thực vật nghiêm ngặt khi nhập giống Chỉ nhập giống khoai tây sạch tuyến trùng, không nhập củ giống, cây giống chứa bào nang, dùng giống chống chịu Thực hiện biện pháp canh tác 2 – 3 năm thì mật độ giảm 30 – 50%, luân canh với họ thập tự có kết hợp xử lý đất bằng các loại thuốc trừ tuyến trùng Phòng trừ bằng thuốc Carbation và trồng lúa... độ tuyến trùng Có thể luân canh cây tròng 5 – 6 năm kết hợp dùng thuốc hóa học như các loại thuốc: D-D, Telon, Dazomet, Basamid và nhiều loại thuốc khác (Methyl bromide, Carbamat, Aldicarb và Oxamide) Ngoài ra cần điểu chỉnh thời vụ trồng khoai tây sớm hơn và sử dụng phân hữu cơ bón kết hợp với phân khoáng Có thể xử lý khoai tây ở nhiệt độ 44 – 45oC hoặc dung dịch foocmol 5% Một số loại thuốc trị tuyến. .. tuyến trùng TÀI LIỆU THAM KHẢO - QUY CHUẨN KỸ THUẬT QUỐC GIA QCVN 01-35:2010/BNNPTNT VỀ QUY TRÌNH GIÁM ĐỊNH TUYẾN TRÙNG BÀO NANG LÀ DỊCH HẠI KIỂM DỊCH THỰC VẬT CỦA VIỆT NAM - https://en.wikipedia.org/wiki /Globodera_ rostochiensis - https://translate.google.com.vn/translate?hl=vi&sl=en&u=https://www.ep po.int/QUARANTINE/data_sheets/nematodes/HETDSP_ds.pdf&prev=search - https://en.wikipedia.org/wiki /Globodera_ rostochiensis. .. https://en.wikipedia.org/wiki /Globodera_ rostochiensis - https://translate.google.com.vn/translate?hl=vi&sl=en&u=https://www.ep po.int/QUARANTINE/data_sheets/nematodes/HETDSP_ds.pdf&prev=search - https://en.wikipedia.org/wiki /Globodera_ rostochiensis - http://text.123doc.org/document/1422774-mot-so-benh-do-tuyentrung.htm