BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN 1101229 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ỨC CHẾ PTP1B IN VITRO CỦA CAO VÀ MỘT SỐ CHẤT PHÂN LẬP TỪ DỊCH ÉP THÂN CÂY CHUỐI TIÊU (MUSA PARADISIACA L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2016 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN THỊ HUYỀN 1101229 NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG ỨC CHẾ PTP1B IN VITRO CỦA CAO VÀ MỘT SỐ CHẤT PHÂN LẬP TỪ DỊCH ÉP THÂN CÂY CHUỐI TIÊU (MUSA PARADISIACA L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS Phùng Thanh Hương NCS Ths Nguyễn Thị Đông Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa sinh - Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2016 LỜI CẢM ƠN Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, trước tiên em xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể thầy cô giáo anh chị môn Hóa Sinh, tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực đề tài Em xin cảm ơn người thầy trực tiếp dìu dắt em bước đầu làm khoa học, PGS.TS Phùng Thanh Hương Cô người cô đáng kính giúp chúng em có định hướng định đắn trình làm nghiên cứu mà cô bên chúng em lúc khó khăn nhất, động viên đưa lời khuyên bổ ích cho chúng em Từ cô chúng em học nhiều học quý giá nghiên cứu sống Đó tảng vững để từ em tự bước nghiệp em sau Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới cô NCS Ths Nguyễn Thị Đông nhiệt tình hỗ trợ chúng em trình học tập nghiên cứu Đồng thời em xin cảm ơn tới người thân gia đình bạn bè động viên tiếp sức mạnh cho em lúc khó khăn Em xin chân thành cảm ơn! Sinh viên Nguyễn Thị Huyền MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan enzym PTP1B 1.1.1 Danh pháp phân loại 1.1.2 Cấu trúc 1.1.3 Cơ chế xúc tác 1.1.4 Vai trò PTP1B điều trị đái tháo đường 1.1.6 Các nghiên cứu chất ức chế PTP1B 10 1.2 Cây chuối tiêu 12 1.2.1 Vị trí, phân loại 12 1.2.2 Đặc điểm thực vật 12 1.2.3 Bộ phận dùng 13 1.2.4 Các nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dược lý chuối tiêu 13 CHƯƠNG : NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1 Nguyên vật liệu, trang thiết bị nghiên cứu 17 2.1.1 Nguyên liệu 17 2.1.2 Hóa chất 17 2.1.3 Thiết bị 17 2.1.4 Dụng cụ 17 2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1 Phương pháp thu mẫu nghiên cứu 19 2.3.2 Phương pháp xây dựng đường chuẩn phụ thuộc mật độ quang lượng phosphat tự 20 2.3.3 Phương pháp đánh giá khả ức chế PTP1B 21 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 25 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 26 3.1 Kết 26 3.1.1 Đường chuấn phụ thuộc mật độ quang lượng phosphat tự 26 3.1.2 Kết khảo sát khả ức chế PTP1B 27 3.1.2.1 Khả ức chế PTP1B cao 27 3.1.2.2 Khả ức chế PTP1B chất phân lập 29 3.2 Bàn luận 30 3.2.1 Về phương pháp nghiên cứu 30 3.2.2 Về khả ức chế enzym PTP1B cao chất phân lập 32 KẾT LUẬN 36 KIẾN NGHỊ 36 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ĐTĐ Đái tháo đường EGF Epidermal grow factor (yếu tố tăng trưởng biểu bì) ER Endoplasmic Reticulum (lưới nội chất) EtOAc Ethylacetat IC50 Half maximal inhibitory concentration (nồng độ ức chế 50%) IR Insulin receptor IRS Insulin receptor substrate (cơ chất Insulin receptor) MeOH Methanol PDK1/2 Phosphoinositide-dependent kinase or PI3K Phosphatidylinositol 3-kinase PTP1B Protein tyrosin phosphatase 1B PTP Protein tyrosin phosphatase ROS Reactive Oxygen Species (quá trình oxy hóa) RTKs Receptor tyrosine kinases STZ Streptozocin TZD Thiazolidindion WPD Tryptophan – Prolin – Acid aspartic DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần phản ứng đánh giá tác dụng ức chế PTP1B Bảng 3.1 Mật độ quang dung dịch Pi Bảng 3.2 Khả ức chế PTP1B mẫu cao từ thân chuối tiêu (Musa paradisiaca L.) Bảng 3.3 Khả ức chế PTP1B của chất phân lập từ thân chuối tiêu (Musa paradisiaca L.) Bảng 3.4 IC50 chất có tác dụng bật DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc không gian PTP1B Hình 1.2 Hai giai đoạn trình xúc tác PTP1B Hình 1.3 Vai trò điều hòa âm tính PTP1B đường truyền tín hiệu insulin Hình 2.1 Nội dung nghiên cứu Hình 2.2 Thiết kế nghiên cứu Hình 2.3 Phương pháp thu cao phân đoạn Hình 2.4 Trình tự tiến hành thí nghiệm đánh giá tác dụng ức chế PTP1B Hình 3.1 Đồ thị tương quan mật độ quang số mol phosphat tự Hình 3.2 Đồ thị phụ thuộc mức độ ức chế PTP1B vào nồng độ cao ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đường (ĐTĐ) typ typ phổ biến nhất, chiếm xấp xỉ 90% tổng số ca mắc ĐTĐ Typ đặc trưng kháng insulin, hormon sản xuất tế bào beta đảo tụy với vai trò trì cân glucose nội môi Trong đường truyền tín hiệu insulin, tín hiệu mà receptor nhận kết cân trình phosphoryl hóa tyrosin protein tyrosin kinase trình khử phosphoryl tyrosin protein tyrosin phosphatase (PTP), đặc biệt protein tyrosin phosphatase 1B (PTP1B) Tuy nhiên, tăng hoạt tính PTP1B mức thay đổi cân enzym, dẫn đến giảm phosphoryl hóa tyrosin giảm tính nhạy cảm với insulin tế bào [36] Trong nhiều nghiên cứu, PTP1B tăng hoạt tính người bệnh ĐTĐ typ động vật thí nghiệm gây ĐTĐ typ 2, ức chế hoạt tính PTP1B làm giảm kháng insulin, cải thiện kiểm soát glucose máu [6], [41] Do nay, PTP1B coi đích tác dụng đầy triển vọng thuốc điều trị ĐTĐ typ Nhiều dược liệu giới chứng minh chế tác dụng giảm kháng insulin thông qua khả ức chế PTP1B rễ dâu, nhàu, ngũ vị tử [36] Cây chuối tiêu (Musa paradisiaca L.) biết đến rộng rãi loại thực phẩm vị thuốc Theo kinh nghiệm dân gian đồng bào dân tộc thiểu số phía bắc Việt Nam số quốc gia giới, phần thân chuối ép lấy nước uống để điều trị đái tháo đường cho kết hạ glucose máu tốt Hiện nay, giới có vài nghiên cứu tác dụng chữa ĐTĐ thân chuối tiêu mức độ sàng lọc, kết chưa thống nhất, chưa có nghiên cứu có hệ thống đánh giá tác dụng chế tác dụng hạ glucose máu dược liệu [29], [34] Để góp phần tìm chứng khoa học tác dụng chế tác dụng thân chuối tiêu điều trị đái tháo đường, tiến hành đề tài: “Nghiên cứu tác dụng ức chế PTP1B in vitro cao toàn phần số chất phân lập từ dịch ép thân Chuối tiêu” với mục tiêu:  Khảo sát khả ức chế enzym PTP1B cao chất phân lập từ thân Chuối tiêu  Xác định IC50 chất có tác dụng bật 36 KẾT LUẬN Ở nồng độ thử nghiệm, cao toàn phần, cao phân đoạn ethyl acetat n-butanol từ thân chuối tiêu (Musa paradisiaca L.) có tác dụng ức chế enzym PTP1B in vitro Tác dụng phụ thuộc vào nồng độ cao Đặc biệt phân đoạn ethylacetat có mức độ ức chế đạt 82,73% nồng độ 30 µg/ml Trong chất phân lập từ thân chuối tiêu, chất cycloeucalenon, acid myristic thể tác dụng ức chế PTP1B mạnh với IC50 3,11 10,75 µM Các chất lại tác dụng ức chế PTP1B KIẾN NGHỊ Tiến hành nghiên cứu động học enzym để tìm hiểu chế ức chế hoạt tính enzym PTP1B chất có tác dụng Cần có thêm nghiên cứu tác dụng của cao toàn phần, cao phân đoạn chất phân lập protein đích khác liên quan đến đường truyền tín hiệu insulin để giúp làm rõ tác dụng chế tác dụng dược liệu TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Võ Văn Chi (2012), Từ điển thuốc Việt nam, Nhà xuất Y học, tr.467, 468 Đỗ Thị Nguyệt Quế (2013), “Nghiên cứu tác dụng hạ glucose huyết rễ chóc máu Nam (Salasia cochinchinensis L., Celastraceae) thực nghiệm”, Luận án tiến sĩ dược học, Viện Dược liệu, tr.7, 28 -32 Tiếng Anh Bakke Jesse and Haj Fawaz G (2015), “Protein-Tyrosine Phosphatase 1B Substrates and Metabolic Regulation”, Seminars in Cell & Developmental Biology 37, pp 58-65 Bharat Raj Bhattarai , Bhooshan Kafle , Ji-Sun Hwang , Seung Wook Ham (2010), “Novel thiazolidinedione derivatives with anti-obesity effects: Dual action as PTP1B inhibitors and PPAR-c activators”, Bioorg Med Chem Lett, 20(22), pp 6758-6763 Diego Miranda-Saavedra, Noriko Uetani, Akhilesh Kumar Tamrakar, Chandan K Maurya & Amit K Ra (2014), “PTP1B inhibitors for type diabetes treatment: a patent review (2011 2014)”, Expert Opin Ther Patents, 24(10), pp 1101-15 Elchebly M, Paul Payette, Eva Michaliszyn, Wanda Cromlish, Susan Collins, Ailsa Lee Loy,Denis Normandin, Alan Cheng, Jean HimmsHagen, Chi-Chung Chan, Chidambaram Ramachandran, Michael J Gresser, Michel L Tremblay, Brian P Kennedy (1999), “Increased insulin sensitivity and obesity resistance in mice lacking the protein tyrosine phosphatase-1B gene”, Science, 283(5407), pp 1544-8 Fang Linlin, Cao Jiaqing, Lili Duan, Yun Tang, Yuqing Zhao (2014), “Protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) and α-glucosidase inhibitory activities of Schisandra chinensis (Turcz) Baill.”, Journal of Functional Foods 9, pp 264-270 Hussain A, Khan.M, Sajid.Z, M Iqbal (2010), “In vitro screening of the leaves of Musa paradisiaca for anthelmintic activity”, he Journal of Animal & Plant Sciences 20(1), pp 5-8 Imam M Z, S Akter (2011), “Musa paradisiaca L and Musa sapientum L.: A Phytochemical and Pharmacological Review”, Journal of Applied Pharmaceutical Science 01(5), pp 14-20 10 Jiang Cheng-shi, Liang Lin-fu, Guo Yue-wei (2012), “Natural products possessing protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory activity found in the last decades”, Acta Pharmacologica Sinica 33, pp 1217– 1245 11 Lapchak Paul A , Lara Jacqueline A , Boitano Paul D (2014), “4-1E-2-54-hydroxy-3-methoxystyryl-1-phenyl-1H-pyrazoyl-3-yl-vinyl-2-methoxyphenol-CNB-001 Does Not Regulate human Recombinant Protein Tyrosin Phosphatase 1B (PTP1B) Activity in vitro”, Journal of Neurology & Neurophysiology, 5(5), 232-234 12 Lee Seokjoon, Wang Qian (2006), “Recent Development of Small Molecular Specific Inhibitor of ProteinTyrosine Phosphatase 1B”, Medicinal Research Reviews, 27(4), pp 553-573 13 Li Jin-long, Gao Li-xin et al (2015), “PTP1B inhibitors from stems of Angelica keiskei (Ashitaba)”, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 25, pp 2028–2032 14 Li Na, Lee Hyun-Sun et al (2015), “Two new diphenyl ethers from Acanthopanax senticosus (Rupr & Maxim.) Harms with PTP1B inhibitory activity”, Phytochemistry Letters 13, pp 286–289 15 Long Cui, MinKyun Na, Hyuncheol Oh, Eun Young Bae, Dae Gwin Jeong, Seong Eon Ryu, Sohee Kim, Bo Yeon Kim, Won Keun Oha, Jong Seog Ahna (2006), “Protein tyrosine phosphatase 1B inhibitors from Morus root bark”, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 16, pp 1426-1429 16 Low JL1, Chai CL, Yao SQ (2014), “Bidentate inhibitors of protein tyrosine phosphatases”, Antioxid Redox Signal, 20(14), pp 2225-50 17 Ma Yi-ming, Tao Rong-ya, Liu Qian, Li Juan, Tian Jin-ying, Zhang Xiaolin, Xiao Zhi-yan, Ye Fei (2011), “PTP1B inhibitor improves both insulin resistance and lipid abnormalities in vivo and in vitro”, Molecular and Cellular Biochemistry, 357(1), pp.65-72 18 Montalibet Jacqueline, Kennedy Brian P (2005), “Therapeutic strategies for targeting PTP1B in diabetes”, Drug Discovery Today: Therapeutic Strategies, 2(2), pp 129-135 19 Nguyen T D., Nguyen H N., Phung T H (2015), “Chemical constituents from Musa paradisiaca”, Proceedings of 1st Asean Pharmnet Conference 20 Nguyen Phi-Hung, Yang Jun-Li, Mohammad N Uddin, Park So-Lim, Lim Seong-Il, Jung Da-Woon, Williams Darren R., and Oh Won-Keun (2013), “New triterpenoids with protein tyrosine phosphatase 1B inhibition from Cedrela odorata”; J Nat Prod., 76, pp 2080-2087 21 Nguyen Thi Thuan, Do Thi Mai Dung, Do Nguyet Que, Phan Thi Phuong Dung, Tran Khac Vu, Hyunggu Hahn, Byung Woo Han, Youngsoo Kim, Sang-Bae Han, Nguyen-Hai Nam (2015), “Synthesis and bioevaluation of new 5-benzylidenethiazolidine-2,4-diones bearing benzenesulfonamide moiety”, Medicinal chemistry research 24, pp 1422-1431 22 Nicholas K Tonks (2003), “PTP1B: From the sidelines to the front lines!”, FEBS Letters 546, pp 140-148 23 Paul C Onyenekwe, Okereke Omoaruemike E., Owolewa Sikiru O (2013), “Phytochemical Screening and Effect of Musa paradisiaca Stem Extrude on Rat, Haematological Parameters”, Current Research Journal of Biological Sciences 5(1), pp 26-29 24 Phung Thanh Huong , Nguyen Thi Dong (2015), “Effects of Musa paradisiaca L stem juice on experimentally diabetic rats”, Proceedings of 1st Asean Pharmnet Conference 25 Shanmuga S.C, S Subramanian (2011), “Biochemical Evaluation of Hypoglycemic Activity of Musa paradisiaca (Plantain) Flowers in STZinduced”, Asian Journal of Research in Chemistry, 4(5), pp 827-833 26 Shibata Eisuke, Takeshi Kannob, Ayako Tsuchiyab Kohzo Kuribayashic Chiharu Tabataa Takashi Nakanoa Tomoyuki Nishizakib (2013), “Free Fatty Acid Inhibit Protein Tyrosin Phosphatase 1B and Activate Akt”, Cellular Physiology and Biochemistry, 32, pp 871-879 27 Sidiqat A.S, Ganiyu.O (2012), “In vitro antioxidant activities and inhibitory effects of aqueous extracts of unripe plantain pulp (Musa paradisiaca) on enzymes linked with type diabetes and hypertension”, Journal of Toxicology and Environmental Health Sciences, 4(4), pp 6575 28 Soni Priyanka, Siddiqui Anees Ahmad, Dwivedi Jaya, Soni Vishal (2013), "Antiovulatory and Estrogenic Activity of Stem of Musa paradisiaca in Female Albino Rats", Journal of Applied Pharmaceutical Science, 3(08), pp 102-106 29 Suneetha B, Sujatha D, Pasad.K V (2010), “Antidiabetic and antioxidant activities of stem juice of Musa paradisiaca on alloxan induced diabetic rats”, Pharmanest an international journal of advances in pharmaceutical sciences, 1(2), pp 167 - 176 30 Sunil J, Kumara Y, Khan MSY (2012), “Antimicrobial and antihyperglycemic activities of Musa”, Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 2(2), pp 914-918 31 Theodore O Johnson, Jacques Ermolieff and Michael R Jirousek (2002), “Protein tyrosin phosphatase 1B for diabetes”, Natural review Drug discovery, 1, pp 696-709 32 Theodore O Johnson, Jacques Ermolieff and Michael R Jirousek, (2003), “PTP1B inhibitors as potential therapeutic in the treatment of Type diabetes and obesity”, Expert Opinion on Investigational Drugs 12, pp 223-233 33 Tremblay Michel L., (2013), “PTP1B: A simple enzyme for a complex world”, Crit Rev Biochem Mol Biol, Early Online: pp 1–16 34 Vijai Lakshmi, Agarwal.S.K, Ansari Jamal Akhtar (2014), “Antidiabetic potential of Musa paradisiaca in Streptozotocin- induced diabetic rats”, The Journal of Phytopharmacology 3(2), pp 77-81 35 Virginia D, Kappel I, H Luisa (2013), “Beneficial effects of banana leaves (Musa paradisiaca) on glucose homeostasis: multiple sites of action”, Revista Brasileira de Farmacognosia, 23(4), pp 706-715 36 Vo Quoc Hung, Nguyen Phi Hung, Bing Tian Zhao, Md Yousof Ali, Jae Soo Choi, Byung Sun Min, Nguyen Thi Hoai, Mi Hee Woo (2015), “Protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory constituents from the aerial parts of Tradescantia spathacea Sw”, Fitoterapia,103, pp 113121 37 Wang Li-Jun, Jiang Bo, Wu Ning, Wang Shuai-Yu and Shi Da-Yong (2015), “Natural and semisynthetic protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitors as anti-diabetic agents”, The Royal Society of Chemistry 5, pp 48822-48834 38 Weremfo A, Adinortey M.B, A.N.M Pappoe (2011), “Haemostatic Effect of the Stem Juice of Musa paradisiaca L (Musaceae) in Guinea Pigs”, Advances in Biological Research, (4), pp 190-192 39 Zhang Juan, Shen Qiang et al (2010), “Phenolic compounds from the leaves of Cyclocarya paliurus (Batal.) Ijinskaja and their inhibitory activity against PTP1B”, Food Chemistry 119, pp 1491–1496 40 Zhang Yan-Ling, Keng Yen-Fang, Zhao Yu, Wu Li and Zhang ZhongYin (1998), “Suramin Is an Active Site-directed, Reversible, and Tightbinding Inhibitor of Protein-tyrosine Phosphatases”, The Journal of Biological Chemistry 273, pp 12281-12287 41 Zhang ZY, Lee SY (2003), “PTP1B inhibitor as novel therapeutics of type diabetes and obesity”, Expert Opi Investig Drug, 12(2), pp 223233 PHỤ LỤC Quy trình phân lập xác định cấu trúc chất dịch chiết nbutanol Cặn butanol Khoảng 4,5g Chạy cột sephadex Dung môi MeOH 100% FB1 (1,5 g) Chất keo màu nâu FB2 (2,3g) FB3 (0,5g) Chất rắn FB4 (0,2g) Rửa MeOH Chạy cột silicagel Dung môi Aceton/MeOH (100% Acton -> 9/1) FB2.1 (130mg) FB2A (15mg) Chạy cột silicagel Dung môi nHx/CH2Cl2 (100% nHx -> 1/1) FB2B (5mg) Không có UV dạng dầu màu vàng FB3 (130mg) Chất rắn vô định hình màu trắng, tan nước, UV, không thuốc thử (có thể muối amonium) FB2.2 1,4g FB2 0,5g Chạy cột silicagel Dung môi Aceton/MeOH (100% Acton -> 9/1) FB2.1.2 100mg FB2C (90mg) Hỗn hợp đường Dịch chiết Butanol tổng (4,5g), cho lên cột Sephadex LH-20, khai triển với dung môi MeOH 100% thu phân đoạn: FB1 (1,5g), FB2 (2,3g), FB3 (0,5g), FB4 (0,2g) Các phân đoạn tinh chế tiếp để thu chất Trong phân đoạn FB1 chủ yếu chất keo màu nâu, triển khai sắc ký lớp mỏng vệt không tách hệ dung môi nên không tinh chế tiếp Phân đoạn FB2 tinh chế qua cột silicagel với hệ dung môi Aceton/MeOH với gradient (0-10%) thu phân đoạn nhỏ FB2.1 (130mg) FB2.2 (1,4g), FB2.3(0,5g) chất FB2A (15mg) Phân đoạn FB2.1 tiếp tục tinh chế qua cột silicagel n-Hexan/CH2Cl2 gradient (0-50%) thu chất FB2B (5mg) chất dầu màu vàng Phân đoạn FB2.3 tinh chế qua cột silicagel với hệ dung môi Aceton/MeOH với gradient (0-10%) thu hợp chất FB2C (90mg) chất keo màu trắng Phân đoạn FB2.2 chủ yếu FB2C xác định hỗn hợp đường Phân đoạn FB3 có nhiều chất rắn không tan MeOH, dùng dung môi MeOH rửa thu hợp chất FB3 (130mg) chất rắn vô định hình màu trắng, tan nước, UV, không thuốc thử xác định muối vô ammoni Kết xác định cấu trúc chất phân lập STT Cắn n-butanol FB2B Tên chất: bis(2-Ethylhexyl)hexanoate Công thức phân tử: C22H42O4 M=370.57 g/mol FB2A Tên chất: β-Sistosterol Công thức phân tử: C29H50O M=414.72 g/mol Quy trình phân lập xác định cấu trúc chất dịch chiết ethyl acetat Cặn Ethyl acetat Khoảng 3,5g Cột Silica gel Dung môi n-Hexan/ CH2Cl2 CH2Cl2/Aceton (0-100%) FE1 0,7g FE2 0,2g FE3 0,1g FE4 0,09g FE5 0,5g FE7 0,3g FE6 0,2g SK cột Silica gel n-hexan/ CH2Cl2 (0-50%) FE1.B 30mg FE1.2 20mg FE1.A 130mg FE1.34 00mg FE8 0,4g FE9 0,3g Chạy cột Sephadex dung môi MeOH/CH2Cl2 (8/2) FE6.2 60mg FE10.1 50mg FE6.1 100mg SK cột Silicagel n-hexan/ CH2Cl2 (0-30%) FE11 0,1g FE10 0,1g FE12 0,2g Sephadex MeOH/CH2Cl2 (8/2) FE10.A 28mg SK cột Silicagel n-hexan/ EA (5:1) FE1.C 9mg FE6.2.2 50mg FE6.B 30mg FE12.A 15mg FE12.1 150mg Dịch chiết tổng EtOAc (3,5g) cho lên cột Silica gel, khai triển với hệ dung môi n-Hexan/CH2Cl2 với gradient tăng dần từ 0-100% Sau tiếp tục khai triển với hệ dung môi CH2Cl2/Aceton với gradient tăng dần từ 0-100% thu 12 phân đoạn ký hiệu từ FE1 đến FE12 Các phân đoạn tiếp tục tinh chế qua cột silica gel Sephadex LH-20 + Phân đoạn FE1 (0,7 g) cho lên cột silicagel, khai triển với hệ dung môi n-Hexan/CH2Cl2 với gradient tăng dần từ 0-50% thu phân đoạn: FE1B (30mg) chất dầu màu trắng hỗn hợp chất thuộc khung sterol, FE1.2 (20mg) FE1.3 (400mg), FE1A (130 mg) Phân đoạn FE1.2 tinh chế qua cột silica gel với hệ dung môi nHexan/ CH2Cl2 gradient (0-30%) thu hợp chất FE1C (9 mg) chất dầu màu trắng + Phân đoạn FE4 (90 mg) tinh chế qua cột silica gel với hệ dung môi n-Hexan/ CH2Cl2 gradient (0-30%) thu hợp chất β-sistosterol (18 mg) + Phân đoạn FE6 (0,2 g) cho lên cột cột Sephadex LH20 khai triển với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH (8/2) thu phân đoạn FE6.1 (100mg) FE6.2 (60mg) Phân đoạn FE6.1 tinh chế qua cột silica gel hệ dung môi nHexan/EtOAc (5:1) thu chất FE6B (30mg) chất rắn màu trắng + Phân đoạn FE10 (0,1 g) tinh chế qua cột Sephadex LH20 khai triển với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH (8/2) thu hợp chất ký hiệu FE10A (28 mg) chất rắn màu trắng + Phân đoạn FE12 tinh chế qua cột Sephadex LH20 khai triển với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH (8/2) thu chất FE12A (15mg) chất rắn màu trắng Kết xác định cấu trúc chất phân lập STT Cắn ethylacetat FE1C Tên chất: Cycloeucalenone Công thức phân tử: C30H48O M=424.70152 g/mol FE10A Tên chất: Protocatechuic acid Công thức phân tử: C7H6O4 M= 154.12g/mol FE6B Tên chất: Myristic acid Công thức phân tử: C14H28O2 M=228.38 g/mol FE12.A Tên chất: Daucosterol Công thức phân tử: C35H60O6 M=576.86 g/mol [...]... 8-(1,1-dimethylallyl)-5’-(3-methylbut-2enyl)-3’,4’,5,7-tetrahydroxyflanvonol, 3’-(3-methylbut-2-enyl)-3’,4’,7- trihydroxyflavan, quercetin, uralenol, broussochalcone A được phân l p từ cây Broussonetia papyrifera được chứng minh tác dụng ức chế PTP1B với IC50 trong khoảng 4,3 - 36,8 μmol /L [41] Tất cả các hợp chất phân l p được từ thân cây Angelica keiskei đều có tác dụng ức chế PTP1B, trong đó 6 chalcon thể... trong đó 6 chalcon thể hiện tác dụng ức chế PTP1B mạnh với giá trị IC50 trong khoảng 0,82-2,53 μg/mL [13] Dịch chiết từ cây ngũ vị tử (Schisandra chinensis (Turcz .) Baill .) có tác dụng ức chế PTP1B, dịch chiết ether (IC50 = 1,77 ± 0,20 μg/mL) và dịch chiết EtOAc (IC50 = 1,04 ± 0,20 μg/mL) [7] Các hợp chất phenolic phân l p từ l cây Cyclocarya paliurus (Batal .) có tác dụng ức chế PTP1B mạnh với IC50 trong... hoa, l , thân, thân giả, rễ 1.2.4 Các nghiên cứu về thành phần hóa học và tác dụng dược l của cây chuối tiêu a) Nghiên cứu về quả - Năm 2010, Suneetha.B và cộng sự đã nghiên cứu và chứng minh được trong dịch ép quả chuối tiêu có tác dụng hạ glucose máu trên chuột ĐTĐ bởi alloxan (150mg/kg) Kết quả của nghiên cứu này còn cho thấy dịch ép quả chuối tiêu còn có tác dụng hạ triglycerid máu, cholesterol toàn... và α-glucosidase trên chuột cống bị ĐTĐ typ 2 [27] b) Nghiên cứu về l - Nghiên cứu từ l cây chuối tiêu vào năm 2010 của Hussain A và cộng sự đã cho kết quả dịch chiết ethanol của l cây chuối tiêu có tác dụng điều trị giun [8] - Để xác định được thành phần hóa học trong l cây chuối tiêu, năm 2013 Virginia D Kappel và cộng sự đã nghiên cứu và kết quả cho thấy trong l cây chuối tiêu có chứa flavonorid... µg/mL [39] 12 Dịch chiết EtOAc của cây Acanthopanax senticosus (Rupr & Maxim .) Harms phân l p được hai diphenyl ethers mới và 8 hợp chất đã biết Tất cả các hợp chất phân l p được đều có tác dụng ức chế PTP1B Trong đó 2 hợp chất mới ức chế PTP1B với IC50 trong khoảng từ 9,2 ± 1,4 đến 12,6 ± 1,2 µM [14] Tại Việt Nam, một số thảo dược đã được chứng minh tác dụng ức chế PTP1B và song song l tác dụng. .. Đông và cộng sự nghiên cứu về tác dụng chữa ĐTĐ của dịch ép thân cây chuối tiêu Những kết quả ban đầu cho thấy mẫu thử có tác dụng hạ glucose máu, giảm lipid máu và hoạt tính G6Pase ở gan giảm đáng kể trên chuột ĐTĐ typ 2 thực nghiệm [24] Một số chất cũng đã được phân l p từ thân cây chuối tiêu và xác định cấu trúc Những kết quả này chứng minh vì sao dịch ép thân chuối tiêu được dùng l m giảm glucose... (IR) (KLPT 340 00 0), được cấu tạo bởi hai tiểu đơn vị (α và ) có bản chất glycoprotein Tiểu đơn vị β có hoạt tính tyrosin kinase Khi insulin liên kết với IR l m thay đổi hình dạng của IR, hoạt hóa hoạt tính kinase, gây ra sự tự phosphoryl hóa tiểu đơn vị β Sự hoạt hóa IR l m phosphoryl hóa một số cơ chất protein phía dưới bao gồm cơ chất của insulin receptor (IRS) và một số protein khác (Gab1 và Shc),... minh được tác dụng hạ glucose máu của thân cây chuối tiêu (Musa paradisiaca L. ) [34] Như vậy, các bộ phận phận dùng khác nhau của cây chuối tiêu (Musa paradisiaca L. ) được nghiên cứu khá nhiều, riêng về phần thân chuối tiêu, số l ợng nghiên cứu rất ít và đặc biệt với tác dụng hạ glucose máu thì các nhiên cứu còn rất sơ sài và kết quả chưa thống nhất Ở Việt Nam cho đến nay, mới chỉ có nhóm của Phùng... Cơ chế ức chế PTP1B của các hợp chất dạng này được cho l ức chế cạnh tranh với enzym [12] Các hợp chất của vanadi từ l u được coi l có triển vọng trong điều trị ĐTĐ ở người Vanadat và pervanadat l 2 chất ức chế PTP1B được nghiên cứu l m sàng rộng rãi [5], [33] Một vấn đề quan trọng trong nghiên cứu tìm kiếm các chất ức chế PTP1B để điều trị ĐTĐ l khả năng ức chế chọn l c, bởi PTP l 1 họ enzym l n... PTP1B l một cơ chế hữu hiệu để điều hòa đáp ứng stress của ER Quá trình sumoyl hóa: PTP1B bị sumoyl hóa ở hai đơn phân lysin (Lys335 và 34 7) Đáng chú ý, insulin gây ra sự sumoyl hóa PTP1B, l m giảm hoạt tính của enzym và ức chế tác dụng điều hòa âm của PTP1B trong quá trình truyền tín hiệu của insulin Hơn nữa sự thay đổi này cũng ảnh hưởng gián tiếp đến sự khử phosphoryl của emerin- một protein phía