BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ THỊ MINH THU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU TRÊN THỰC NGHIỆM VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DỊCH ÉP THÂN CÂY CHUỐI TIÊU LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI 2016 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI VŨ THỊ MINH THU NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU TRÊN THỰC NGHIỆM VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA DỊCH ÉP THÂN CÂY CHUỐI TIÊU LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC LIỆU – DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển ThS NCS Nguyễn Thị Đông HÀ NỘI 2016 LỜI CẢM ƠN Lời xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Mạnh Tuyển (Bộ môn Dƣợc cổ truyền- Trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội), Ths.NCS Nguyễn Thị Đông (Bộ môn Hóa dƣợc- Trƣờng Cao đẳng Dƣợc TW Hải Dƣơng) thầy cô trực tiếp hƣớng dẫn tận tình giúp hoàn thành luận văn Tôi xin trân trọng gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội, trƣờng Cao đẳng Dƣợc TW Hải Dƣơng tạo điều kiện cho đƣợc học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Bộ môn Dƣợc cổ truyền, Phòng sau đại học trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội; Bộ môn Dƣợc liệu, môn Hóa dƣợc trƣờng Cao đẳng Dƣợc TW Hải Dƣơng; Viện Hóa sinh biển- Viện hàn lâm khoa học công nghệ Việt Nam tạo điều kiện giúp đỡ suốt trình học tập hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn tới thầy cô, anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Dƣợc cổ truyền trƣờng Đại học Dƣợc Hà Nội; Bộ môn Dƣợc liệu, môn Hóa dƣợc trƣờng Cao đẳng Dƣợc TW Hải Dƣơng giúp đỡ trình làm thực nghiệm môn Cuối xin gửi lời cảm ơn tới bạn bè, đồng nghiệp ngƣời thân gia đình động viên giúp đỡ trình học tập nghiên cứu Hà Nội, ngày 20 tháng năm 2016 Học viên Vũ Thị Minh Thu MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng TỔNG QUAN 1.1 ĐẠI CƢƠNG VỀ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƢỜNG THEO Y HỌC HIỆN ĐẠI 1.1.1 Định nghĩa 1.1.2 Tình hình bệnh đái tháo đƣờng giới Việt Nam 1.1.3 Phân loại 1.1.3.1 Đái tháo đường typ 1.1.3.2 Đái tháo đường typ 1.1.3.3 Đái tháo đường thai kỳ 1.1.3.4 Các thể đái tháo đường đặc biệt khác 1.1.4 Cơ chế bệnh sinh 1.1.4.1 Đái tháo đường typ 1.1.4.2 Đái tháo đường typ 1.1.5 Chẩn đoán bệnh đái tháo đƣờng 1.1.6 Điều trị bệnh đái tháo đƣờng 1.1.6.1 Chế độ ăn 10 1.1.6.2 Chế độ luyện tập 10 1.1.6.3 Điều trị thuốc 11 1.2 ĐẠI CƢƠNG VỀ BỆNH ĐÁI THÁO ĐƢỜNG THEO Y HỌC CỔ TRUYỀN 14 1.3 CÂY CHUỐI TIÊU (Musa x paradisiaca L – Musaceae) 18 1.3.1 Vị trí phân loại đặc điểm thực vật 18 1.3.1.1 Vị trí phân loại 18 1.3.1.2 Đặc điểm thực vật phân bố 18 1.3.2 Bộ phận dùng 19 1.3.3 Các nghiên cứu thành phần hóa học tác dụng dƣợc lý Chuối tiêu 19 1.3.3.1 Nghiên cứu thành phần hóa học 19 1.3.3.2 Nghiên cứu tác dụng dược lý 19 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 23 2.1 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 23 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu 23 2.1.2 Động vật thí nghiệm 23 2.1.3 Dụng cụ, hóa chất nghiên cứu 23 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1 Nghiên cứu tác dụng hạ glucose máu 24 2.2.1.1 Chuẩn bị mẫu nghiên cứu 24 2.2.1.2 Phương pháp định lượng glucose máu 26 2.2.1.3 Nghiên cứu ảnh hưởng phân đoạn từ dịch ép thân Chuối tiêu động vật thực nghiệm 26 2.2.1.4 Xử lý số liệu 28 2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học 29 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 30 3.1 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU 30 3.1.1 Ảnh hƣởng phân đoạn dịch chiết từ dịch ép thân Chuối tiêu chuột nhắt trắng tăng glucose máu streptozocin 30 3.1.2 Ảnh hƣởng phân đoạn ethyl acetat glucose máu chuột cống trắng gây ĐTĐ typ 31 3.2 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 32 3.2.1 Định tính nhóm chất 32 3.2.1.1 Định tính nhóm chất dịch ép thân Chuối tiêu 32 3.2.1.2 Định tính nhóm chất phân đoạn ethyl acetat 34 3.2.2 Chiết xuất phân lập hợp chất 35 3.2.3 Kiểm tra độ tinh khiết chất phân lập đƣợc 38 3.2.4 Nhận dạng hợp chất phân lập đƣợc 39 3.2.4.1 Nhận dạng hợp chất FE1C 39 3.2.4.2 Nhận dạng hợp chất FE6B 41 3.2.4.3 Nhận dạng hợp chất FE10A 43 3.2.4.4 Nhận dạng hợp chất FE12A 45 Chƣơng BÀN LUẬN 47 4.1 VỀ TÁC DỤNG HẠ GLUCOSE MÁU 48 4.2 VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC 50 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DPP-IV Dipeptidyl-peptidase-IV ĐTĐ Đái tháo đƣờng FFA Free fatty acid (acid béo tự do) GLP-1 Glucagon-like peptide-1 GLUT Glucose transporter HLA Human leucocyte antigen (kháng nguyên bạch cầu ngƣời) IDF International Diabestes Federation (Hiệp hội Đái tháo đƣờng Quốc tế) IR Insulin receptor IRS Insulin receptor substrate PTP1B Protein tyrosine phosphatase 1B STZ Streptozocin YHHĐ Y học đại YHCT Y học cổ truyền WHO World Heath Organization (Tổ chức y tế giới) DANH MỤC BẢNG TRANG Bảng 2.1 Thành phần dinh dưỡng phần ăn chuột thí nghiệm 27 Bảng 3.1 Kết nồng độ glucose máu lô chuột thí nghiệm sau 15 ngày uống mẫu thử 30 Bảng 3.2 Nồng độ glucose máu chuột cống ĐTĐ typ sau 15 ngày uống mẫu thử 32 Bảng 3.3 Kết định tính nhóm chất dịch ép thân Chuối tiêu 33 Bảng 3.4 Kết định tính nhóm chất phân đoạn ethyl acetat dịch ép thân Chuối tiêu 34 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất FE1C chất tham khảo 40 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất FE6B chất tham khảo 42 Bảng 3.7 Dữ liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hợp chất FE10A chất tham khảo 44 Bảng 3.8: Dữ liệu phổ 1H-NMR, 13C-NMR hợp chất FE12A chất tham khảo 46 DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 Sơ đồ chiết phân đoạn lỏng-lỏng TRANG 25 Hình 3.1 Phần trăm hạ glucose máu lô chuột thí nghiệm sau 15 ngày uống mẫu thử 31 Hình 3.2 Sơ đồ phân lập phân đoạn Ethyl acetat 37 Hình 3.3 Cấu trúc hóa học hợp chất FE1C 41 Hình 3.4 Cấu trúc hóa học hợp chất FE6B 43 Hình 3.5 Cấu trúc hóa học hợp chất FE10A 44 Hình 3.6 Cấu trúc hóa học hợp chất FE12A 47 ĐẶT VẤN ĐỀ Đái tháo đƣờng (ĐTĐ) thực mối lo ngại lớn xã hội tốc độ gia tăng nhanh chóng Theo nghiên cứu Hiệp hội Đái tháo đƣờng Quốc tế (IDF), năm 2013, số lƣợng bệnh nhân mắc bệnh ĐTĐ 382 triệu ngƣời, chiếm 6,6% dân số giới ƣớc tính đến năm 2035 có khoảng 592 triệu ngƣời mắc bệnh ĐTĐ Sự gia tăng đột biến tỷ lệ ngƣời mắc bệnh đái tháo đƣờng gánh nặng cho ngành y tế Chi phí để quản lý, chăm sóc điều trị bệnh tốn Chi phí trực tiếp năm cho bệnh nhân ĐTĐ ƣớc tính khoảng 548 tỷ đô la, chiếm khoảng 7- 13% ngân sách chăm sóc sức khoẻ giới [53] Mặt khác, thuốc điều trị đái tháo đƣờng có nguồn gốc tổng hợp hoá học thƣờng kèm theo nhiều tác dụng không mong muốn, chi phí điều trị cao ngƣời bệnh có xu hƣớng phải tăng liều sau thời gian dài dùng thuốc [4] Do vậy, việc nghiên cứu tìm kiếm thuốc nguồn gốc từ dƣợc liệu có tác dụng hạ glucose máu hiệu hơn, an toàn hơn, giá thành giẻ vấn đề đƣợc đặt cấp thiết Dựa theo hƣớng nghiên cứu này, có nhiều dƣợc liệu đƣợc chứng minh có tác dụng hạ glucose máu dần đƣợc áp dụng cho bệnh nhân đái tháo đƣờng giới nhƣ Việt Nam: Thân Ý dĩ, thân Mƣớp đắng, Chuối hột [15], [19], [32] Cây Chuối tiêu đƣợc sử dụng dân gian để điều trị nhiều bệnh: Quả chuối xanh chữa tiêu chảy, kiết lỵ; Quả chuối chín có tác dụng nhuận tràng, chữa táo bón; Vỏ chuối có tác dụng làm săn se, diệt nấm, chữa lỵ, đau bụng cách sắc uống sắc lấy nƣớc rửa chỗ mẩn ngứa, lở loét; Bột chuối xanh phòng loét dày; Nhựa chuối xanh chữa hắc lào, chuối tiêu non giã nát cầm máu vết thƣơng, làm dịu vết bỏng; Củ rễ chuối tiêu giã lấy nƣớc cốt dịch thân uống chữa sƣng tấy, nhọt sƣng đau, nóng phát cuồng, mê sảng, co giật, kiết lỵ, tiêu chảy [13] Năm 2015, Phùng Thanh Hƣơng Nguyễn Thị Đông chứng minh đƣợc dịch ép thân Chuối tiêu có tác dụng hạ glucose máu chuột nhắt trắng gây ĐTĐ STZ liều 150 mg/kg cân PHỤ LỤC 5: PHỔ CỦA HỢP CHẤT FE10A Phổ MS Phổ H1-NMR Phổ 13C-NMR Phổ DEPT PHỤ LỤC 6: PHỔ CỦA HỢP CHẤT FE12A Phổ MS Phổ H1-NMR Phổ 13C-NMR Phổ DEPT