Xây dựng phương pháp phát hiện một số chủng human papilloma virus nguy cơ cao gây ung thư cổ tử cung ở việt nam bằng kỹ thuật realtime PCR

13 221 0
Xây dựng phương pháp phát hiện một số chủng human papilloma virus nguy cơ cao gây ung thư cổ tử cung ở việt nam bằng kỹ thuật realtime PCR

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thanh Tâm XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÁT HIỆN MỘT SỐ CHỦNG HUMAN PAPILLOMAVIRUS NGUY CƠ CAO GÂY UNG THƢ CỔ TỬ CUNG Ở VIỆT NAM BẰNG KỸ THUẬT REALTIME PCR LUẬN VĂNTHẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2016 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - Nguyễn Thanh Tâm XÂY DỰNG PHƢƠNG PHÁP PHÁT HIỆN MỘT SỐ CHỦNG HUMAN PAPILLOMAVIRUS NGUY CƠ CAO GÂY UNG THƢ CỔ TỬ CUNG Ở VIỆT NAM BẰNG KỸ THUẬT REALTIME PCR Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60420114 LUẬN VĂNTHẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS NGUYỄN VÂN TRANG TS LÊ HỒNG ĐIỆP Hà Nội – 2016 Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Vân Trang, người thầy tận tình bảo, hướng dẫn suốt thời gian học tập thực luận văn Tôi xin trân trọng cảm ơn TS Lê Hồng Điệp thầy giáo, cô giáo khoa Sinh học, đặc biệt thầy giáo, cô giáo môn Sinh lý Thực vật Hóa sinh học tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, giảng dạy dìu dắt thời gian thực luận văn suốt thời gian học tập trường Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới anh chị, bạn làm việc Phòng Miễn dịch Vắc xin –Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương tận tình giúp đỡ bảo suốt trình học tập thực luận văn phòng Cuối cùng, vô biết ơn gia đình bạn bè khích lệđộng viên suốt thời gian qua Hà Nội, ngày tháng năm 2016 Học viên Nguyễn Thanh Tâm Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 BẢNG KÍ HIỆU VÀ CÁC CHỮ VIẾT TẮT Ký hiệu Tiếng Anh Tiếng Việt ADN/ ARN (Deoxi)ribonucleic acid Vật chất di truyền Primer Mồi - HPV Human Papillomavirus Papillomavirus gây bệnh người Hr-HPV High risk HPV Nhóm HPV nguy cao Lr-HPV Low risk HPV Nhóm HPV nguy thấp LRC Long Control Region Vùng kiểm soát dài gen PCR Polymerase Chain Reaction Probe - Đầu dò gắn huỳnh quang Reverse - Primer ngược ORF Open Reading Frame Khung đọc mở gen ORI Origin Vị trí khở đầu tái OD Optical density Mật độ quang mẫu ADN URR Upstream Regulatory Region Vùng điều hòa gen UTCTC - Ung thư cổ tử cung Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG………………………………………………………………… DANH MỤC CÁC HÌNH…………………………………………………………………… MỞ ĐẦU CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu Human Papillomavirus 1.1.1 Đặc điểm hình thái HPV 1.1.2 Đặc điểm sinh học phân tử 1.1.3 Phân loại HPV Error! Bookmark not defined 1.2 HPV ung thƣ cổ tử cung Error! Bookmark not defined 1.2.1 Tình hình nhiễm HPV Việt Nam giới Error! Bookmark not defined 1.2.2 Đường lây truyền HPV Error! Bookmark not defined 1.2.3 Các bệnh lý thường gặp HPV, cách phòng nhiễm điều trị Error! Bookmark not defined 1.2.4 Chu kỳ nhân lên chế gây bệnh HPV Error! Bookmark not defined 1.2.5 Các phương pháp phát HPV Error! Bookmark not defined CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Error! Bookmark not defined 2.1 Vật liệu Error! Bookmark not defined 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.1.2 Sinh phẩm vật tư tiêu hao Error! Bookmark not defined 2.1.3 Máy móc thiết bị Error! Bookmark not defined 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.2.1 Xây dựng kỹ thuật realtime PCR phát chủng HPV 16, 18 33/52 .Error! Bookmark not defined 2.2.2 Tạo chứng dương xác định giới hạn phát kỹ thuật realtime PCR phát chủng HPV 16, 18 33/52 Error! Bookmark not defined 2.2.3 Thẩm định phương pháp phát chủng HPV16, 18, 33/52 Error! Bookmark not defined 2.3 Nội dung thực Error! Bookmark not defined CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Error! Bookmark not defined 3.1 Xây dựng kỹ thuật Realtime PCR phát chủng HPV 16, 18 33/52 Error! Bookmark not defined 3.1.1 Kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe Error! Bookmark not defined 3.1.2 Kỹ thuật realtime PCR đa cặp primer probe Error! Bookmark not defined 3.2 Tạo chứng dƣơng xác định giới hạn phát kỹ thuật realtime PCR phát chủng HPV 16, 18 33/52 Error! Bookmark not defined 3.2.1 Khuếch đại trình tự đích Error! Bookmark not defined 3.2.2 Nhân dòng gen tạo chứng dương Error! Bookmark not defined 3.2.3 Xác định giới hạn phát kỹ thuật Realtime PCR Error! Bookmark not defined 3.3 Thẩm định phƣơng pháp phát chủng HPV16, 18 33/52Error! Bookmark not defined 3.3.1 Xác định độ xác kỹ thuật realtime PCR phát chủng HPV16, 18 33/52 Error! Bookmark not defined 3.3.2 Xác định độ chụm (hệ số tái lâp hệ số lặp lại) kỹ thuật realtime PCR phát chủng HPV16, 18 33/52 Error! Bookmark not defined 3.3.2.1 Xác định hệ số lặp lại phương pháp Error! Bookmark not defined 3.3.2.2 Xác định hệ số tái lập phương pháp Error! Bookmark not defined Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 3.3.3 Xác định độ đặc hiệucủa kỹ thuật realtime PCR phát chủng HPV16, 18 33/52 Error! Bookmark not defined 3.3.4 Xác định độ nhạycủa kỹ thuật realtime PCR phát chủng HPV16, 18 33/52 Error! Bookmark not defined KẾT LUẬN Error! Bookmark not defined KIẾN NGHỊ Error! Bookmark not defined TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Các type HPV bệnh có liên quan 11 Bảng 1.2 Tỷ lệ nhiễm HPV số tỉnh thành phố Việt Nam .13 Bảng 1.3 Các cặp mồi dùng cho PCR phát HPV………………………………… 22 Bảng 2.1 Thành phần kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe 29 Bảng 2.2 Thành phần kỹ thuật realtime PCR đa cặp primer probe………………….29 Bảng 2.3 Thành phần phản ứng khuếch đại trình tự đích .30 Bảng 2.4 Chu kì nhiệt phản ứng khuếch đại trình tự đích 30 Bảng 3.1 Kết kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe phát HPV16….34 Bảng 3.2 Kết kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe phát HPV18….36 Bảng 3.3 Kết kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe phát HPV33/52.37 Bảng 3.4 Kết kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe IC………………… 38 Bảng 3.5 Kết kỹ thuật realtime PCR cặp primer probe phát HPV16, HPV18 HPV33/52…………………………………………………………………………… 39 Bảng 3.6 Kết phản ứng Realtime PCR đa cặp primer probe với chứng dương….47 Bảng 3.7.Kết thí nghiệm xác định độ xác phương pháp…………………50 Bảng 3.8.Kết thí nghiệm xác định hệ số lặp lại phương pháp………………… 52 Bảng 3.9 Giá trị trung bình độ lệch chuẩn thí nghiệm đánh giá hệ số lặp lại…….53 Bảng 3.10.Kết thí nghiệm xác định hệ số tái lập phương pháp…………………55 Bảng 3.11 Giá trị trung bình độ lệch chuẩn thí nghiệm đánh giá hệ số tái lập….57 Bảng 3.12 Kết thí nghiệm xác định độ đặc hiệu phương pháp…………………58 Bảng 3.13.Kết thí nghiệm xác định độ nhạy phươngpháp…………………… 61 Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hạt vi rút HPV …………………………………………………………… Hình 1.2 Cấu trúc bộgen Papillomavirus HPV 16 ……………………………….4 Hình 1.3 Cây phả hệ 118 genotype Papilomavirus dựa trình tự gen vùng L1 ORF Hình 1.4 Tỷ lệ nhiễm HPV nữ giới giới .12 Hình 1.5 Chu kỳ nhân lên HPV …………………………………………………….16 Hình 1.6 Phương pháp lai phân tử phát HPV 21 Hình 3.1 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang phản ứng Realtime PCR đơn cặp primer probe phát HPV16 ……………………………………………………….35 Hình 3.2 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe phát HPV18 ………………………………………………………………36 Hình 3.3 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe phát HPV33/52 ………………………………………………………… 37 Hình 3.4 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang kỹ thuật realtime PCR đơn cặp primer probe IC ………………………………………………………………………………39 Hình 3.5 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang kỹ thuật realtime PCR cặp primer probe phát HPV16, 18 33/52 …………………………………………………40 Hình 3.6 Ảnh điện di sản phẩm khuếch đại trình tự HPV16E6-E7, HPV18L1 …………41 Hình 3.7 Ảnh điện di sản phẩm khuếch đại trình tự HPV52L1 ……………………… 42 Hình 3.8 Kiểm tra kết nhân dòng trình tư HPV16E6-E7 43 Hình 3.9 Kết tinh Plasmid mang đoạn chèn HPV16E6-E7 44 Hình 3.10 Kiểm tra kết nhân dòng trình tự HPV18L1 44 Hình 3.11 Kết tinh Plasmid mang đoạn chèn HPV18L1 45 Hình 3.12 Kiểm tra kết nhân dòng trình tự HPV52L1 46 Hình 3.13 Kết tinh Plasmid mang đoạn chèn HPV52L1 46 Hình 3.14 Kết kỹ thuật realtime đa cặp primer probe với chúng dương ……… 48 Hình 3.15 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang thí nghiệm xác định độ xác …………………………………………………………………………………………….51 Hình 3.16 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang thí nghiệm xác định hệ số lặp lại …………………………………………………………………………………………….52 Hình 3.17 Biến động giá trị Ct thí nghiệm đánh giá hệ số lặp lại ………………… 53 Hình 3.18.Đường tín hiệu huỳnh quang thí nghiệm xác định hệ số tái lập kỹ thuật viên …………………………………………………………………………………… 56 Hình 3.19.Đường tín hiệu huỳnh quang thí nghiệm xác định hệ số tái lập kỹ thuật viên …………………………………………………………………………………… 56 Hình 3.20.Đường tín hiệu huỳnh quang thí nghiệm xác định hệ số tái lập kỹ thuật viên …………………………………………………………………………………… 56 Hình 3.21 Biến động giá trị Ct thí nghiệm đánh giá hệ số tái lập ………………… 57 Hình 3.22.Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang thí nghiệm đánh giá độ đặc hiệu …………………………………………………………………………………………….59 Hình 3.23 Đường biểu diễn tín hiệu huỳnh quang thí nghiệm đánh giá độ nhạy … 62 Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 MỞ ĐẦU Human papillomavirus (HPV) tác nhân thường gặp nhiễm trùng lây truyền qua đường tình dục nguyên nhân quan trọng dẫn tới ung thư cổ tử cung (UTCTC), loại ung thư xếp thứ tư loại ung thư mà nữ giới thường mắc phải xếp thứ hai với nữ giới độ tuổi 15-44[41] HPV mối liên quan mật thiết với UTCTC mà có vai trò quan trọng nguyên nhân dẫn đến ung thư hậu môn, âm đạo, dương vật, ung thư phổi số ung thư vùng hầu họng Đồng thời, HPV nguyên nhân nhiều bệnh lý lâm sàng da niêm mạc hạt cơm, sùi mào gà sinh dục-hậu môn, u nhú quản trẻ sơ sinhv.v…[32] Hàng năm giới ước tính có khoảng 529.000 ca mắc UTCTC, tử vong khoảng 275.000 trường hợp, 85% tổng số trường hợp bệnh gặp nước phát triển[21] Mỗi năm, Châu Á có thêm khoảng 312.000 bệnh nhân UTCTC, chiếm 59% trường hợp mắc toàn giới – đặc biệt khu vực Nam Á Đông Nam Á, nơi có tỷ lệ nhiễm HPV cao châu lục[21, 34].Cùng với lây nhiễm HPV cộng đồng, UTCTC thực trở thành gánh nặng bệnh tật toàn cầu, gây ảnh hưởng nặng nề đến sức khỏe tâm lý nữ giới Tại Việt Nam, theo thống kê Tổ chức Y tế giới năm 2012, UTCTC loại ung thư chiếm tỷ lệ cao nữ giới, xếp thứ số loại ung thư mà nữ giới độ tuổi 15-44 hay mắc phải, với 5000 ca nhiễm (tỷ lệ: 8.1/100.000 phụ nữ) tử vong 2000 trường hợp năm[40] Điều đặc biệt quan tâm phần lớn trường hợp UTCTC thường phát giai đoạn muộn, trình diễn biến từ nhiễm virus đến ung thư thường trải qua thời gian dài Quá trình tiến triển từ mức dộ loạn sản nhẹ, loạn sản vừa, loạn sản nặng đến ung thư chỗ (giai đoạn tổn thương phục hồi) đến giai đoạn ung thư xâm nhập kéo dài từ 10 – 25 năm[22].Đây hội cho việc phát nhiễm HPV, sàng lọc người có nguy mắc ung thư cổ tử cung nhằm giúp trình điều trị hiệu tổn thương tiền ung thư ung thư giai đoạn sớm.Hiện Việt Nam, xét nghiệm tế bào mô bệnh học (Pap smear) đưa vào thành thường quy chương trình sàng lọc UTCTC, xét nghiệm HPV phổ biến nhiên chi phí cao kit chẩn đoán thương mại hóavà yêu cầu đảm bảo chất lượng xét nghiệm với xét nghiệm nước[8] Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 Với tầm quan trọng ý nghĩa việc xác định genotype HPV, xuất phát từ thực tiễn nêu trên, đề tài “Xây dựng phƣơng pháp phát số chủng Human Papillomavirus có nguy cao gây ung thƣ cổ tử cung Việt Nam kỹ thuật Realtime PCR” thực với mục tiêu sau: Xây dựng phương pháp phát chủng HPV 16, 18 33/52 kỹ thuật multiplex Realtime PCR Thẩm định phương pháp phát chủng HPV 16, 18, 33/52 kỹ thuật multiplex realtime PCR mẫu dịch quét cổ tử cung Đề tài nàyđược thực phòng Miễn dịch Vắc xin,ViệnVệ sinh Dịch tễ Trung ương Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 CHƢƠNG1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu Human Papillomavirus Papillomaviruslàcác thành viên họ Papillomaviridae, tìm thấy nhiều loài động vật có vú có người Các loài vật chủ khác nhiễm loại Papillomavirus đặc thù cho loài đó.CácPapillomavirusgây bệnh cho người gọi Human papillomavirus(HPV) 1.1.1Đặc điểm hình thái HPV HPV nhóm virus có kích thước nhỏ, không vỏ.Hạt virus có đường kính 5255nm, vỏ gồm 72 đơn vị capsomer.Mỗi đơn vị capsid gồm pentamer protein cấu trúc L1 kết hợp với protein L2 (protein thành phần kháng nguyên sử dụng phản ứng miễn dịch đặc hiệu) Hình 1.1.Hạt vi rút HPV[14] Cả hai protein cấu trúc virus tự mã hóa: Protein capsid (L1) có kích thước khoảng 55 kDa chiếm khoảng 80% tổng số protein virus Protein capsid phụ (L2) có kích thước khoảng 70 kDa[14] 1.1.2Đặc điểm sinh học phân tử 1.1.2.1 Cấu trúc hệ gen HPV virus có vật liệu di truyền ADN, mạch đôi không hoàn chỉnh, tồn dạng siêu xoắn hình vòng (circular ds-ADN).ADN virus liên kết với histone tạo Luận văn tốt nghiệp Nguyễn Thanh Tâm – K22 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Dung N T N D (2004), "Khảo sát liên quan mẹ nhiễm HPV bệnh u nhú quản," Thời Y Dược học, 4, Hiếu N T H (2004), "Tần xuất nhiễm HPV phụ nữ thành phố Hồ Chí Minh," Thời Y Dược học, 4, Trung N T H (2007), "HPV tổn thương cổ tử cung," Y Học TP Hồ Chí Minh, 3, Vân P H V (2009), "PCR real-time PCR: Các vấn đề áp dụng thường gặp Sinh học phân tử," Nhà xuất Y học, 27 Văn T T V (2010), "PCR số kỹ thuật Y sinh học phân tử Sinh học phân tử," Nhà xuất Y học, 68 Tài liệu tiếng Anh 10 11 12 13 14 15 A B.-P (2009), "Molecular Signature of HPV-Induced Carcinogenesis: pRb, p53 and Gene Expression Profiling," Current genomics, 10, Anco M B K., Wim Q., Leen-J.D (2005), "Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections," Journal of Clinical Virology, 32, Bao Y.P S J S., Qiao Y.L., ACCPAB members (2008), "Human papillomavirus type distribution in women from Asia: a meta-analysis," International Journal of Gynecologycal cancer, 18, 10 Bernard H.U B R D., de Villiers E.M, et al (2010), "Classification of papillomaviruses (PVs) based on 189 PV types and prodương tínhal of taxonomic amendments," Virology, 401, 10 Boccardo E L A V L (2010), "The role of inflammation in HPV carcinogenesis," Carcinogenesis, 31, Bodaghi S W L V., Roby G., Ryder C., et al (2010), "Could human papillomaviruses be spread through blood?," Journal of Clinical Microbiology, 43, Bontkes H J., T.D deGruijl, J.M.Walboomers, J.T.Schiller, J Dillner, T.J Helmerhorst, R.H.Verheijen, R.J.Scheter, and C.J.Meijer (1999), "Immune responses again human papillomavirus (HPV) type 16 virus-like particles in a cohort study of women with cervical intraepithelial neoplasia II Systemic but not local IgA responses correlate with clearance of HPV-16," J.Gen Virol, 80, Burchell AN W R., de Sanjose S, FrancoEL (2006), "Chapter epiderniology and transmission dynamics of genital HPV infection vaccine 2006," Vaccine, 24, 10 Burd E M (2003), "Human papillomavirus and cervical cancer," Clin Microbiol Rev, 16, 1-17 Chan P K., M.Y Chan, W.W.Li, D.P.Chan, J.L.Cheung, and A.F.Cheung (2001), "Association of human beta-herpesvirus with the development of cervical cancer; by standers or cofactor?," J.Clin Pathol, 54, Luận văn tốt nghiệp 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 Nguyễn Thanh Tâm – K22 Clifford G F S., Diaz M., Munoz N., Villa L.L (2006), "Chapter 3: HPV typedistribution in women with and without cervical neoplastic diseases," Vaccine, 24, Daojun Yu Y C., Shenghai Wu, Baohong Wang, Yi-Wei Tang, Lanjuan Li (2012), "Simultaneous Detection and Differentiation of Human Papillomavirus Genotypes 6, 11, 16 and 18 by AllGlo Quadruplex Quantitative PCR," PLoS One, 11, De Villiers E.M F C., Broker T.R., Bernard H.U., zur Hausen H (2004), "Classification of papillomaviruses," Virology, 324, 11 Doorbar J (2006), "Molecular biology of human papillomavirus infection and cervical cancer," Clin Sci (Lond), 110, 525-541 EM B (2003), "Human papillomavirus and cervical cancer," Clinical Microbiology Review, 16, 17 Ferlay J., Shin H R., Bray F., Forman D., Mathers C and Parkin D M (2010), "Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008," Int J Cancer, 127, 2893-2917 H Z H (2011), "Vaccines: what remains to be done?," Vaccine, 10, Hebner C M and Laimins L A (2006), "Human papillomaviruses: basic mechanisms of pathogenesis and oncogenicity," Rev Med Virol, 16, 83-97 Ishizaki A., Matsushita K., Hoang H T., Agdamag D M., Nguyen C H., Tran V T., et al (2013), "E6 and E7 variants of human papillomavirus-16 and -52 in Japan, the Philippines, and Vietnam," J Med Virol, 85, 1069-1076 Jenkins A., Allum A G., Strand L and Aakre R K (2013), "Simultaneous detection, typing and quantitation of oncogenic human papillomavirus by multiplex consensus realtime PCR," J Virol Methods, 187, 345-351 Lehoux M., D'Abramo C M and Archambault J (2009), "Molecular mechanisms of human papillomavirus-induced carcinogenesis," Public Health Genomics, 12, 268-280 Ly Thi-Hai Tran L T T., Thanh Cong Bui, Dung Thi-Kieu Le, Alan G Nyitray, Christine M Markham, Michael D Swartz, Chau Bao Vu-Tran and Lu-Yu Hwang (2015), "Risk factors for high-risk and multi-type Human Papillomavirus infections among women in Ho Chi Minh City, Vietnam: A crosssectional study," BMC Women's Health, Martin Moberg I G., and Ulf Gyllensten (2003), "Real-Time PCR- Based system for Simultaneous Quantification of Human Papillomavirus Types Associated with High Risk of Cervival Cancer," Journal of clinical microbiology, 41, Munoz N., Bosch F X., de Sanjose S., Herrero R., Castellsague X., Shah K V., et al (2003), "Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer," N Engl J Med, 348, 518-527 Munoz N., Castellsague X., de Gonzalez A B and Gissmann L (2006), "Chapter 1: HPV in the etiology of human cancer," Vaccine, 24 Suppl 3, S3/1-10 Nicol A.F N G J., Dillner J (2010), "A summary of the 25th International Papillomavirus Conference 2009: Vaccines, screening, epidermiology and therapeutics," Journal of Clinical Virology, 47, 10 Luận văn tốt nghiệp 32 33 34 35 36 37 38 39 Nguyễn Thanh Tâm – K22 Parkin D M., Bray F., Ferlay J and Pisani P (2005), "Global cancer statistics, 2002," CA Cancer J Clin, 55, 74-108 Rachel L Winer T G H., Long Fu Xi, Kathrin U Jansen, James P Hughes, Qinghua Feng, Carolee Welebob, Jesse Ho, Shu-Kuang Lee, Joseph J Carter, Denise A Galloway, Nancy B Kiviat, and Laura A Koutsky (2009), "Quantitative human papilloma virus 16 and 18 levels in incident infections and cervical lesion development," Journal of Medical Virology, 81, Sahiner F K A., Yapar M, Şener K, Dede M, Gumral R (2014), "Detection of major HPVs by a new multiplex real-time PCR assay using type-specific primers," Journal of Microbiological Method, 97, Sydney (2011), "Verification and Validation Symposium Event - National Institude of Hygiene and Epidemiology," T C Dung F R., N Becker, P T Huong, N V Trang, L M Tan, P V Hung, and N T Hien "Prevalence of human papillomavirus (HPV) infection and genotype distribution among women in Vietnam: a meta-analysis," submitted 2015, Tham Chi Dung N V T., Frank Roesl, Pham Ngoc Hung, Vu Ba Quyet, Le Quang Thanh, Huynh Xuan Nghiem, Tran Thi Mai Hung, Luong Minh Tan, Nguyen Phuong Anh and Nguyen Tran Hien "Prevalence of high-risk Human Papillomavirus infection among women aged 18-45 in two major cities in Vietnam," submitted 2015, William T Seaman E A., Marion Couch, Erna M Kojic, Susan Cu-Uvin, Joel Palefsky, Allison M Deal and Jennifer Webster-Cyriaque (2010), "Detection and quantitation of HPV in genital and oral tissues and fluids by real time PCR," Virology Journal, 194, Yiqun Liao Y Z., Qiwei Guo, Xiaoting Xie, Ena Luo, Jian Li,and Qingge Li (2013), "Simultaneous Detection, Genotyping, and Quantification of Human Papillomaviruses by Multicolor Real-Time PCR and Melting Curve Analysis," Journal of Clinical Microbiology 2013 Feb; 51(2): 429–435., 2, Tài liệu Internet 40 41 42 43 44 HPV Information Centre (2015), VietNam: Human papilomavirus and Related Diseases, Sumamary Report 2015 http://www.hpvcentre.net/statistics/reports/VNM.pdf (20/12/2015), HPV Information Centre (2015), World: Human papilomavirus and Related Diseases, Sumamary Report 2014 http://www.hpvcentre.net/statistics/reports/XWX.pdf (20/12/2015), http://en.wikipedia.org/wiki/HPV_vaccines, (20/12/2015)," WHO, Human papillomavirus laboratory manual, first edition 2009 http://www.who.int/immunization/hpv/learn/hpv_laboratory_manual who_ivb_2009_2 010.pdf (20/12/1015) https://www.google.com/webhp?sourceid=chrome-instant&ion=1&espv=2&ie=UT F 8#q=calculate%20copy%20numb 11

Ngày đăng: 08/07/2016, 15:13

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan