I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN - - TRN NG TUN NGHIấN CU XC NH OXALAT TRONG MU THC PHM BNG PHNG PHP IN DI MAO QUN S DNG DETECTOR O DN KHễNG TIP XC LUN VN THC S KHOA HC H Ni 2015 I HC QUC GIA H NI TRNG I HC KHOA HC T NHIấN - - TRN NG TUN NGHIấN CU XC NH OXALAT TRONG MU THC PHM BNG PHNG PHP IN DI MAO QUN S DNG DETECTOR O DN KHễNG TIP XC Chuyờn ngnh: Húa phõn tớch Mó s: 60440118 LUN VN THC S KHOA HC NGI HNG DN KHOA HC: TS NGUYN TH NH HNG H Ni 2015 LI CM N Sau mt thi gian nghiờn cu v hc tụi ó hon thnh lun cao hc ca mỡnh vi ti: Nghiờn cu xỏc nh oxalate mu thc phm bng phng phỏp in di mao qun s dng detector o dn khụng tip xỳc di s hng dn ca TS Nguyn Th nh Hng v cỏc thy cụ, anh ch, cỏc bn b mụn Húa phõn tớch Vi lũng kớnh trng v bit n sõu sc tụi xin chõn thnh cm n TS Nguyn Th nh Hng ngi ó giao ti v tn tỡnh ch dn tụi quỏ trỡnh hon thnh lun Tụi xin chõn thnh cm n Cụng ty 3Sanalysis v i tỏc ti Khoa Húa hc, Trng i hc Basel, Thy s ó thit k lp t v h tr cỏc trang thit b cng nh t k thut quỏ trỡnh thc hin nghiờn cu ny Tụi xin chõn thnh cm n cỏc Thy cụ B mụn Húa Phõn tớch núi riờng v khoa Húa hc núi chung ó dy d, ch bo v ng viờn tụi thi gian hc ti trng i hc Khoa hc T nhiờn H Ni Tụi xin cm n sinh viờn Nguyn Th Minh Hũa, lp k57T Ti nng Húa, sinh viờn Nguyn Th Liờn, lp K56A Húa hc ó h tr tụi quỏ trỡnh nghiờn cu Cui cựng, tụi xin gi li cm n gia ỡnh, cỏc bn hc viờn v sinh viờn b mụn Húa phõn tớch ó giỳp tụi thi gian hc v nghiờn cu ny H Ni, ngy 24 thỏng 10 nm 2015 Hc viờn Trn ng Tun MC LC DANH MC CC HèNH Tờn vit tt Tờn y Ace Acetic Arg L- arginine C4D Detector o dn kt ni kiu t in CE Phng phỏp in di mao qun CHES Axit 2-(cyclohexylamino) ethanesunlfomic CTAB Cetyl trimethyl amonium bromide EOF Dũng in di thm thu GC Sc ký khớ His Histidine HPLC Sc ký lng hiu nng cao Leff Chiu di hiu dng ca mao qun Ltot Tng chiu di mao qun LOD Gii hn phỏt hin LOQ Gii hn nh lng MeOH Methanol MEKC in di mao qun in ng hc Mixen MES axit 2-(N-morphonlino)ethane sulfonic PGTP Ph gia thc phm %RSD % lch chun tng i SD lch chun UPLC Sc ký lng siờu hiu nng TAPS Axit N- [tris(hydroxylmetyl)metyl]-3aminopropansunphonic M U Hin nay, tỡnh hỡnh an ton v sinh thc phm nc ta ang rt c quan tõm, vi nhiu v ng c th xy hng lot v nhiu khu vc khỏc Cú nhiu nguyờn nhõn dn n mt an ton thc phm, ú cú nguyờn nhõn xut phỏt t vic s dng cỏc cht ph gia thc phm Gn õy, d lun c bit quan tõm n s xut hin ca oxalate mt s sn phm thc phm nh bia, m tụm,gõy nh hng xu ti sc khe ngi s dng Theo cỏc nghiờn cu, oxalate l mt nhng tỏc nhõn chớnh gõy nờn bnh si thn [12, 23] to kt ta vi cỏc ion kim loi nh magie, canxi (kt ta ny chim ti 80% v lng ca si thn) Cựng vi oxalate, axit tng ng ca tartrate, citrate l nhng cht ph gia thc phm thng xut hin ng thi nhiu loi thc phm S xut hin ca citrate ng thi vi oxalate s lm gim nguy c hỡnh thnh si thn citrate cú kh nng c ch quỏ trỡnh kt tinh hỡnh thnh canxi oxlate [13] Vỡ vy, ngoi vic phõn tớch, kim tra hm lng oxalate, quy trỡnh s kt hp phõn tớch, kim tra xỏc nh ng thi hm lng ca tartrate v citrate mu thc phm Cú nhiu phng phỏp khỏc xỏc nh hm lng cỏc cht oxalate, tartrate, citrate nh: sc kớ lng hiu nng cao (HPLC), phng phỏp sc ký ph (GC-MS), sc ký ion [13, 15], Cỏc phng phỏp ny thng ch c trang b cỏc phũng thớ nghim hin i vi chi phớ khỏ ln v yờu cu i ng k thut cao Trong nghiờn cu ny, vi mc tiờu xõy dng mt phng phỏp phõn tớch nhanh, hiu qu, n gin vi chi phớ thp, hng ti nhu cu phõn tớch tuyn a phng, chỳng tụi ó xõy dng, phỏt trin quy trỡnh phõn tớch ng thi cỏc cht oxalate, tartrate, citrate thc phm bng phng phỏp in di mao qun s dng detector dn khụng tip xỳc kt ni kiu t in (CE-C 4D) trờn c s h thit b t ch, bỏn t ng CHNG 1: TNG QUAN 1.1 Gii thiu chung v cỏc cht ph gia thc phm 1.1.1 Gii thiu chung v ph gia thc phm Cht ph gia thc phm l nhng cht khụng c coi l thc phm hoc mt thnh phn ca thc phm; t hoc khụng cú giỏ tr dinh dng; B sung vỡ mc ớch cụng ngh quỏ trỡnh sn xut, ch bin [3] Nh vy, PGTP khụng phi l thc phm m nú c thờm vo nhm ỏp ng yờu cu nht nh ca sn phm Vic s dng PGTP phi tuõn theo quy nh hin hnh ca cỏc c quan chc nng, Vit Nam l B Y t 1.1.2 Phõn loi ph gia thc phm Tựy vo tng c s m cú nhiu cỏch phõn loi ph gia thc phm khỏc nh: 1.1.2.1 Phõn loi theongun gc Dng t nhiờn: cú ngun gc ng vt v thc vt Dng tng hp: Do ngi to 1.1.2.2 Phõn loi theo tỏc dng Tỏc dng trc tip: Bao gm cỏc cht cú tỏc dng bo qun (nh chng li quỏ trỡnh oxy húa, chng tỏc hi ca vi sinh vt, cụn trựng, ký sinh gõy hi) v tỏc dng cm quan (nh to mu, to mựi, tng thờm hng v tng thờm v ngt, v mn, lm gim bt v ng, to v chua) Tỏc dng giỏn tip: Bao gm cỏc loi axit, kim, dung mụi chit xut, cỏc cht lm trong, lm lng cn, cht chng ụng c, cỏc cht trao i ion, cht men sinh hc, cỏc cht chng to bt [2] Ngoi cũn nhiu cỏch phõn loi khỏc nh phõn loi theo sc khe ngi s dng, phõn loi theo chc nng, phõn loi theo nhúm cht 1.1.3 Li ớch v tỏc hi ca ph gia thc phm Nu s dng ỳng loi, ỳng liu lng, cỏc ph gia thc phm cú tỏc dng tớch cc, nh: to c nhiu sn phm phự hp vi s thớch v khu v ca ngi tiờu dựng, gi c cht lng ton ca thc phm cho ti s dng, to s d dng sn xut, ch bin thc phm v lm tng giỏ tr thng phm hp dn trờn th trng, kộo di thi gian s dng ca thc phm, Tuy nhiờn, s dng ph gia thc phm khụng ỳng liu lng, chng loi nht l nhng ph gia khụng cho phộp dựng thc phm s gõy nhng tỏc hi cho sc khe nh: Gõy ng c cp tớnh nu dựng quỏ liu cho phộp Gõy ng c mn tớnh dự dựng liu lng nh, thng xuyờn, liờn tc, mt s cht ph gia thc phm tớch ly c th, gõy tn thng lõu di Nguy c gõy hỡnh thnh u, ung th, t bin gen, quỏi thai, nht l cỏc cht ph gia tng hp Nguy c nh hng ti cht lng thc phm nh phỏ hu cỏc cht dinh dng, vitamin [4] Vỡ vy, Khi s dng cht PGTP phi tuõn th cỏc quy nh s dng da trờn cỏc tiờu chun c th theo ISO (International Standard Organization) v Hi ng tiờu chun thc phm CAC (Codex Alimentarius Commision) gm hn 130 nc thnh viờn, ú cú Vit Nam Mi quc gia s qui nh c th v cỏc cht PGTP c dựng cho nc mỡnh Túm li, Vit Nam, cỏc cht PGTP phi nm danh mc cho phộp s dng v m bo cỏc yờu cu v k thut, hm lng v v sinh an ton thc phm theo quy nh B Y t ban hnh 1.2 Thụng tin chung v oxalate, tartrate v citrate Cỏc cht oxalic, tartric v citric l mt s cỏc cht ph gia thc phm nm danh mc c phộp s dng Vit Nam vi hm lng nht nh Bng 1.1 Thụng tin chung v hp cht oxalic, tartaric v citric Tờn cht Danh phỏp Axit oxalic Axit tartaric Axit citric Axit etanedioic Axit 2,3- Axit 2- dihidroxibutandioic hydroxypropan- (IUPAC) 1,2,3-tricacboxylic Cụng thc phõn t C2H2O4 (khan) C4H6O6 C6H8O7 150,087 192,123 C2H2O4.2H2O(ngm nc) Cụng thc cu to Khi lng phõnt (g/mol) 90,03 (khan) 126,07 g/mol(khan) (ngm nc) pKa(1;2;) tan nc 1,23; 4,19 3,04; 4,37 3,15; 4,77; 6,40 0,143 1,33 1,33 (g/ml 20C) Nhit (L hoc D-tartaric) 157 (thng hoa) 171-174 (L hoc D- 153 tartaric, tinh khit) núng chy (oC) 1.3 ng dng v tỏc hi ca cỏc oxalate, tartrate v citrate 1.3.1 Oxalate ng dng L cht h tr ch bin thc phm, ph gia thc phm Axit oxalic c s dng mt s sn phm húa cht dựng gia ỡnh, chng hn mt s cht ty hay vic ỏnh g sột Dung dch axit oxalic c dựng phc ch g Axit oxalic l mt cht c s dng quỏ trỡnh nhum vi, phõn bún Tỏc hi liu cao, axit oxalic (mui oxalate) cú kh nng gõy ng c cp tớnh, cú th dn n t vong vi hm lng 4-5g Liu ng c (LD50) ca axit oxalic nguyờn cht c c khong 378 mg/kg th trng (khong 22,68 g/ngi 60 kg) S kt hp ca axit oxalic vi canxi to canxi oxalate, cú th gõy kt ta lng ng to thnh si cỏc c quan tit niu, gan mt, ty [9] 1.3.2 Tartrate ng dng Ph gia thc phm (ký hiu: E334) vi tỏc dng l cht iu v, chng oxi húa ng dng lnh vc dc phm ng dng cụng nghip v nụng nghip Tỏc hi Khi s dng quỏ mc cú th gõy nhiu tỏc dng ph khú chu nh: nụn ma, tiu chy v gia tng kh nng viờm ng tiờu húa 1.3.3 Citrate ng dng Ph gia thc phm (ký hiu: E330): iu v, chng oxi húa Gim tỏc hi ca nc cng S dng cụng ngh sinh hc, hot húa mt s dung dch ty ra, Tỏc hi Axit citric c hu ht cỏc quc gia v t chc quc t cụng nhn l an ton s dng thc phm Nú hin din t nhiờn gn nh mi dng s sng, cỏc lng axit citric d tha d dng trao i v bi tit c th Tuy nhiờn, vic tip xỳc vi axit citric khụ hay m c cú th gõy kớch ng da v mt, vỡ th phi s dng cỏc trang b bo h lao ng tip xỳc vi axit citric Vic s dng quỏ nhiu axit citric cng d lm tn hi men rng Tip xỳc gn vi mt cú th gõy bng v lm mt th giỏc ụi hm lng quỏ cao axit citric cú th gõy tn hi cho túc, nú m lp cutin ca túc Nú cú th lm mt cỏc cht cn thit cho túc v lm túc b bc mu 1.4 Vn s dng oxalate, tartrate v citrate trờn th gii v Vit Nam 1.4.1 Vn s dng oxalate, tartrate v citrate trờn th gii Vn s dng oxalate trờn th gii Hin ti, y ban chuyờn gia ca FAO/WHO v ph gia thc phm (JECFA) cha cú nghiờn cu ton din v nh hng ca axit oxalic cng nh mui oxalate thc phm i vi sc khe ngi v a 10 20,8 166 277 22,1 169 275 21,0 166 290 21,2 167 270 21,1 171 281 Spic trung bỡnh RSD (%) 21,4 2,46 168 1,19 278 2,47 T bng kt qu cho thy, c mc nng u cú lch chun tng i (RSD) < 3% nm gii hn cho phộp c hm lng ppm Nh vy phng phỏp cú lp li tt ỳng ca phng phỏp Ngoi lp li thỡ ỳng l mt yu t ỏnh giỏ phng phỏp phõn tớch ỳng ca phng phỏp c ỏnh giỏ qua hiu sut thu hi ca phng phỏp phõn tớch, bao gm c x lý v o mu phõn tớch Nú cho bit lng cht b mt i quỏ trỡnh x lý mu ỏnh giỏ hiu sut thu hi l ỏnh giỏ tin cy ca phng phỏp x lý mu ó la chn Trong cỏc thc phm núi chung v cỏc mu thc phm c la chn thng cú thnh phn húa hc phc tp, rt khú cú th tỡm c mu trng cú thnh phn nn ging nh mu thc nhng khụng cha cht phõn tớch Vỡ vy, ỏnh giỏ thu hi ca phng phỏp, chỳng tụi s dng phng phỏp thờm chun, hn hp cht chun oxalate, tartrate v citrate c thờm vo nn mu th l mu bia chai H Ni Quỏ trỡnh ỏnh giỏ c thc hin mc thờm chun khỏc + Mc 0: Cha thờm hn hp dung dch chun vo 1000 àL mu th + Mc 1: Thờm 30àL hn hp dung dch chun ba cht nng 10 -3M vo 970àL mu th 42 + Mc 2: Thờm 60àL hn hp dung dch chun ba cht nng 10 -3M vo 940 àL mu th + Mc 3: Thờm 90àL hn hp dung dch chun ba cht nng 10 -3M vo 910 àL mu th Mu th c pha nh sau: Mu bia chai H Ni c rung siờu õm, sau ú lc qua mng lc 0,45àm, Pha loóng 20 ln bng nc ion Mi mu th c o lp li ln Kt qu thu c trỡnh by bng 3.11, bng 3.12 v bng 3.13 Bng 3.11 Kt qu kho sỏt ỳng ca phng phỏp da trờn thờm chun oxalate Mc Mc Mc -5 Nng oxalate chun thờm vo (1,00.10 M) 3,00 6,00 9,00 -5 Nng oxalate thu hi c (1,00.10 M) 2,85 6,24 87,0 Hiu sut thu hi (%) 95,0 104 96,7 Hiu sut thu hi trung bỡnh (%) 98,6 Bng 3.12 Kt qu kho sỏt ỳng ca phng phỏp da trờn thờm chun tartrate Mc Mc Mc -5 Nng tartrate chun thờm vo (1,00.10 M) 3,00 6,00 9,00 -5 Nng tartrate thu hi c (1,00.10 M) 2,91 5,94 9,09 Hiu sut thu hi (%) 97,0 99,0 101 Hiu sut thu hi trung bỡnh (%) 99,0 Bng 3.13 Kt qu kho sỏt ỳng ca phng phỏp da trờn thờm chun citrate Mc Mc Mc -5 Nng citrate chun thờm vo (1,00.10 M) 3,00 6,00 9,00 Nng citrate thu hi c (1,00.10-5M) 2,85 6,36 8,82 Hiu sut thu hi (%) 95,0 106 98,0 43 Hiu sut thu hi trung bỡnh (%) 99,7 Cỏc kt qu thu c bng 3.10 - 3.12 vi thu hi ca oxalate, tartrate v citrate khỏ cao, t 98,4ữ99,7%, cho thy phng phỏp cú ỳng cao T cỏc kt qu nghiờn cu thu c cho thy qui trỡnh phõn tớch ó ỏp ng c cỏc yờu cu v lp li v thu hi phõn tớch lng nh cỏc hp cht hu c nn mu phc lch chun tng i ca cỏc cht phõn tớch (RSD) nh hn 3, thu hi ca cỏc cht phõn tớch khong 98,6ữ99,7% Vi quy trỡnh phõn tớch ny chỳng tụi ỏp dng phng phỏp CE-C 4D phõn tớch mt s i tng mu thc t 3.3 Phõn tớch mu thc t 3.3.1 Phõn tớch mu bia Cỏc mu bia c la chn bao gm mt s loi bia chai v bia lon.Thụng tin v cỏc mu dc phm ny c nờu bng 3.14 Bng 3.14 Thụng tin v c im ca tng loi bia Tờn sn phm c im Xut x Bia chai H Ni Dng thnh phm: úng chai Tng cụng ty ru bia nc Dung tớch: 450ml gii khỏt H Nụi Dng thnh phm: úng lon Tng cụng ty ru bia nc Dung tớch: 330ml gii khỏt H Nụi Dng thnh phm: úng lon Nh mỏy Bia ụng Nam Bia lon H Ni Bia lon Halida Dung tớch: 330ml Bia chai Saigon Dnh thnh phm: úng chai Tng cụng ty Ru bia Special Dung tớch: 330ml Nc gii khỏt Si Gũn Bia lon Tiger Dng thnh phm: úng lon Cụng ty TNHH nh mỏy Dung tớch: 330ml Bia Vit Nam 44 Bia lon Haliken Dng thnh phm: úng lon Cụng ty TNHH nh mỏy Dung tớch: 330ml Bia Vit Nam Quy trỡnh x lý cỏc mu bia Rung siờu õm 30 phỳt (loi b khớ ga) Lc qua mng lc (0,45àm) Pha loóng vi t l thớch hp Mu bia chai H Ni c pha loóng 20 ln Mu bia lon H Ni c pha loóng ln Mu bia lon Halida c pha loóng 20 ln Mu bia chai Si Gũn Special c pha loóng 20 ln Mu bia lon Tiger c pha loóng 10 ln Mu bia lon Haliken pha loóng 10 ln Cỏc mu bia sau pha loóng c tin hnh phõn tớch iu kin ó ti u Tin hnh phõn tớch oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp thờm chun Kt qu in di ca mu phõn tớch cha thờm chun c th hin hỡnh 3.11 n hỡnh 3.16 + Mu bia lon H Ni v mu bia chai H Ni 45 20mV Bia lon Hà Nôi Bia chai Hà Nội 100 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (giây) 600 700 Hỡnh 3.11 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu bia chai H Ni v mu bia lon H Ni + Mu bia lon Halida v Mu bia chai Si Gũn Special 20mV Bia chai Sai Gòn Special Bia lon Halida 100 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (giây) 600 700 Hỡnh 3.12 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu bia lon Halida v mu bia chai Si Gũn Special + Mu bia lon Haliken v Mu bia lon Tiger 46 50mV Bia lon tiger Bia lon Haliken 100 200 300 400 500 Thời gian di chuyển (giây) 600 700 Hỡnh 3.13 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu bia lon Haliken Cn c vo din tớch pic thu c trờn in di , bng phng phỏp thờm chun mt ln s xỏc nh c nng oxalate, tartrate v citrate cú mu bia lon Haliken Kt qu thu c nh bng 3.15 Bng 3.15 Kt qu xỏc nh hm lng cỏc cht oxalate, citrate mt s mu bia Mu Oxalate (mg/100ml) Citrate (mg/100ml) Bia lon H Ni - 9,40 0,1 Bia lon Halida - 23,0 2,0 Bia lon Tiger - 17,0 1,0 Bia lon Haliken - 12,0 0,7 Bia chai H Ni 2,10 0,1 11,6 0,8 Bia chai Si Gũn 1,57 0,08 10,4 0,6 Trong cỏc mu bia c la chn, khụng cú mu no xut hin tartrate Ch xỏc nh c oxalate mu hai mu bia chai (bia chai H Ni v bia chai Si Gũn) vi hm lng oxalate trung bỡnh hai mu l 1,84 mg/ml Citrate xut hin tt c cỏc mu bia Hm lng citrate cao nht mu bia lon Halida 47 v thp nht mu bia lon H Ni Hm lng citrate trung bỡnh cỏc mu bia c la chn l 13,9 mg/ml 3.3.2 Phõn tớch mu mỡ gúi Quy trỡnh x lý mu Mu mỡ gúi c nghin nh, trn u, cõn mt lng nht nh trờn cõn phõn tớch (khong 0,5 g), thờm 4ml nc deion, rung siờu õm 30 phỳt, ly tõm (8000 rpm) 30 phỳt, lc qua mng lc 0,45àm, pha loóng vi t l thớch hp Mu mỡ gúi Ho Ho c pha loóng ln Mu mỡ gúi Ba Min pha loóng vi 20 Cỏc mu mỡ gúi sau pha loóng c phõn tớch bng thit b CE-C 4D Tin hnh phõn tớch oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp thờm chun in di phõn tớch mu m tụm Ba Min v mu m tụm Ho Ho cha thờm chun c th hin hỡnh 3.14 20mV Mỳ tôm Ba Miền Mỳ tôm Hảo Hảo 100 200 300 Thời gian di chuyển (giây) 48 400 500 Hỡnh 3.14 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu m tụm Ho Ho v mu m tụm Ba Min Cn c vo din tớch pic thu c trờn in di , bng phng phỏp thờm chun s xỏc nh c nng oxalate, tartrate v citrate cú mu mỡ gúi Ba Min Kt qu mu m tụm Ho Ho hm lng oxalate xỏc nh c l 22,0 2,0 mg/kg v hm lng citrate l 22,0 2,0 mg/kg Mu m tụm Ba Min hm lng oxalate xỏc nh c l 38,0 2,0mg/kg v hm lng citrate l 86,0 4,0 mg/kg Khụng phỏt hin tatrate cỏc mu m tụm c la chn 3.3.3 Phõn tớch mu tr tỳi lc lipton (tr trỏi cõy, v dõu) Quy trỡnh x lý mu Mu tr tỳi lc Lipton c xỏc nh lng trung bỡnh ca mt tỳi tr l 1,6gam La chn ngu nhiờn 01 tỳi tr, ngõm phỳt 150 ml nc deion ó un sụi (tng t quy trỡnh nh s dng) sau ú 45 phỳt nhit phũng Lc qua mng lc 0,45àm, pha loóng 20 ln v phõn tớch trờn thit b CE-C 4D Tin hnh phõn tớch oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp thờm chun Tin hnh phõn tớch in di vi cỏc iu kin ti u lp li ln ly kt qu trung bỡnh xỏc nh hm lng cỏc cht oxalate, tartrate v citrate cú mu 3.3.4 Phõn tớch mu nc tr khụ va hố Quy trỡnh x lý mu Mu nc tr khụ va hố c lc qua mng lc 0,45àm sau ú pha loóng 20 ln trc thc hin phõn tớch trờn thit b CE-C 4D Tin hnh phõn tớch oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp thờm chun Tin hnh phõn tớch in di vi cỏc iu kin ti u lp li ln ly kt qu trung bỡnh xỏc nh hm lng cỏc cht oxalate, tartrate v citrate cú mu Kt qu in di ca mu phõn tớch v thờm chun c th hin hỡnh 3.15 49 20mV Trà khô vỉa hè Trà túi lọc Lipton 200 400 Thời gian di chuyển (giây) 600 Hỡnh 3.15 in di phõn tớch 1-oxalate, 2-tartrate, 3-citrate mu tr tỳi lc Lipton v mu tr khụ va hố Cn c vo din tớch pic thu c trờn in di , bng phng phỏp thờm chun s xỏc nh c nng oxalate, tartrate v citrate cú mu tr tỳi lc Lipton v mu nc tr khụ va hố Phng phỏp xỏc nh c hm lng oxalate mu tr tỳi lc Lipton l 66,0 3,0 mg/kg, mu nc tr khụ va hố l 8,60 0,5 mg/kg v hm lng citrate mu tr tỳi lc Lipton l 0,94 0,05 mg/kg mu nc tr khụ va hố l 117 9,0 mg/kg Nh vy, s ba cht nghiờn cu, khụng phỏt hin tartrate bt c mu no, nhng phỏt hin citrate hoc ng thi oxalate v citrate mt s mu 3.3.5 Phõn tớch i chng phng phỏp CE-C4D vi phng phỏp HPLC kim chng kt qu phõn tớch bng phng phỏp CE-C 4D, chỳng tụi ó la chn 02 mu cú thnh phn phc nht l m tụm (nhón hiu Ho Ho v Ba Min) gi sang phõn tớch i chng ch tiờu quan trng l oxalate vi phng phỏp tiờu chun Sc ký lng hiu nng cao (HPLC) ti Vin Kim nghim an ton v sinh thc phm quc gia Cỏc kt qu ny c trỡnh by bng 3.15 50 Bng 3.16 So sỏnh kt qu phõn tớch i chng hm lng oxalate, citrate v tartrate mu m tụm Hm lng Oxalate (mg/kg) M tụm Ho Ho M tụm Ba Min T kt qu bng 3.16 cho thy, sai s gia hai phng phỏp di 15% iu ny chng t hm lng ca oxalate thu c theo hai phng phỏp khỏ phự hp Nh vy, cú th s dng phng phỏp CE-C 4D xỏc nh hm lng ca oxalate mu m tụm, bia, tr, v m rng nghiờn cu cho cỏc i tng mu khỏc 51 KT LUN Nh vy, quy trỡnh xỏc nh ng thi ba cht oxalate, tartrate v citrate mu thc phm bng phng phỏp in di mao qun s dng detector dn khụng tip xỳc ó c nghiờn cu phỏt trin vi nhng kt qu sau: ó ti u c cỏc iu kin tỏch ng thi ba cht oxalate, tartrate v citrate bng phng phỏp CE - C4D Cỏc iu kin ti u bao gm: detector: CE - C 4D; dung dch din ly: m His 50mM MES 30mM (pH = 6,3), CTAB 25àM; Th tỏch: -15kV; S dng mao qun silica trn, tng chiu di 60 cm, chiu di hiu dng 50cm, ng kớnh 75àm; Thi gian bm mu: 30s; Phng phỏp bm mu: thy ng lc hc kiu xiphụng, h = 25cm Th t cỏc cht tỏch c vi mao qun silica l: oxalate, tartrate, citrate ó nghiờn cu nh hng ca mt s cht cú th xut hin cỏc nn mu nghiờn cu, ú chloride, formate cú nh hng ỏng k v xut bin phỏp khc phc ỏnh giỏ c phng phỏp phõn tớch: xõy dng ng chun xỏc nh cht khong nng 2,5 10-4M, tớnh tuyn tớnh (cỏc giỏ tr R2 u ln hn 0,999), lp li (cỏc giỏ tr RSD nh hn 3), ỳng (hiu sut thu hi ca oxalate, tartrate v citratet khong 99% - 99,5%), gii hn phỏt hin (LOD) ca oxalate, tartrate l 2,5.10-6M v ca citrate l 5,0.10-6M; gii hn nh lng (LOQ) ca oxalate, tartrate l 8,3.10-6M v ca citrate l 16,7.10-6M Quy trỡnh ó c ỏp dng phõn tớch mt s mu thc phm (bia, mỡ gúi, tr) ó tin hnh phõn tớch i chng ch tiờu oxalate mu mỡ tụm vi phng phỏp tiờu chun HPLC Vin Kim nghim An ton thc phm thc hin cho kt qu ỏng tin cy Phng phỏp ny cho thy u im n gin, nhanh, d s dng, cú th hng ti mc tiờu ỏp dng ti cỏc phũng thớ nghim tuyn a phng nhm gúp phn kim tra mt s ch tiờu an ton thc phm, ỏp ng nhu cu thc t ca Vit Nam 52 DANH MC TI LIU THAM KHO Ting vit Nguyn Th nh Hng (2010), Nghiờn cu xỏc nh cỏc dng asen vụ c nc ngm bng phng phỏp in di mao qun s dng detector dn khụng tip xỳc, Lun ỏn Tin s Húa hc, Trng i hc Khoa hc T nhiờn - HQGHN o M Thanh (2012), Ph gia thc phm v sc khe ngi tiờu dựng, Trung tõm Y t D phũng TP.HCM T Th Tho (2010), Bi ging chuyờn thng kờ húa phõn tớch, H Quc gia H Ni Nguyn Duy Thnh(2004), Cỏc cht ph gia s dng thc phm, bi ging cho hc viờn cao hc chuyờn ngnh cụng nghip thc phm, H Bỏch khoa H Ni Vin kim nghim ATVSTP Quc Gia (2010), Thm nh phng phỏp phõn tớch húa hc v vi sinh vt, Nh xut bn khoa hc k thut H Ni Ting Anh Ali A Ensafi, S Abbasi, B Rezaei (2001) Kinetic spectrophotometric method for the determination of oxalic acid by its catalytic effect on the oxidation of safranine by dichromate, Spectrochimica Acta Part A, (57), 1833 1838 B.G Wolthers, W Koolstra, M Hayer, H Elzinga (1987), Development of a reference method for determining urinary oxalate by means of isotope dilution mass spectrometry (ID-MS) and its usefulness in testing existing assays for urinary oxalate, Clinica Chimica Acta, 170:227-235 53 Corinne Rivasseau , Anne-Marie Boisson, Gaă elle Mong elard, Georgy Couram, Olivier Bastien, Richard Bligny (2006) Rapid analysis of organic acid in plant extracts by capillary electrophoresis with indirect UV detection Directed metabolic analyses during metal stress, Journal of Chromatography A, (112), 283290 Curhan (1999), GC epidemiologische Hinweise fỹr die Rolle des OxalatNierensteine spontan, J Endourol 13 (9): 629-31 10 Hoppe B, Kemper MJ, Hvizd MG, Sailer DE, Langman CB (1998), Simultaneous determination of oxalate, citrate and sulfate in children's plasma with ion chromatography, Kidney Int, 53(5):1348-52 11 Mariỏn Masỏr et al (2003), Determination of oxalate in beer by zone electrophoresis on a chip with conductivity detection, Journal of seperation science, 26, 647-652 12 Michael Trevaskis, V Craige Trenerry (1996) An investigation into the determination of oxalic acid in vegetables by capillary electrophoresis, Food Chemisfry, (57), 323-330 13 Muhammad Iqbal Bhanger, M Hassan Khaskhali, F D Khand (1996), Simultaneous Determination of Oxalic acid and Citric acid in Urine by Higherformance Liquid Chromatogrphy, Journal of chromatography.B, Biomedical applications, 675(1), 147-51 14 M Hassan Khaskhali, M Iqbal Bhanger, F.D Khand (1996) Simultaneous determination of oxalic and citric acid in urine by highperformance liquid chromatography, Journal of Chromatography B, (675), 147-151 15 Nguyen Thi Anh Huong et al (2014), Simple semi-automated portable capillary electrophoresis instrument with contactless conductivity detection for the determination of -agonists in pharmaceutical and pig-feed samples, Journal of Chromatography A, Vol 1360, pp 305-311 54 16 Nguyen Thi Anh Huong, Pavel Kubỏn, Viet Hung Pham, Peter C Hauser (2007), Study of the determination of inorganic arsenic species by CE with capacitively coupled contactless conductivity detection, Electrophoresis 2007, (28), 35003506 17 Petr Kubỏet al (2014), Separation of oxalate, formate and glycolate in human body fluid samples by capillary electrophoresis with contactless conductometric detection, Journal of Chromatography A, 1325, 24124 18 Ph Puig, M Arellano, J Andrianary, F Dedieu, F Couderc (1997), Method development and validation for the simultaneous determination of organic and inorganic acid by capillary zone electrophoresis, Journal of Chromatography A, 765, 321328 19 Ruben Rellan-Alvarez (2011), Development of a new high-performance liquid chromatography-electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry method for the determination of low molecular mass organic acid in plant tissue extracts, J.Agric Food Chem, 59, 6864-6870 20 United States Department of Agriculture (1984), Informationsdienst Human Nutrition, Landwirtschaftliches Handbuch Nr 8-11 21 Verúnica Galli, Coral Barbas (2004), Capillary electrophoresis for the analysis of short-chain organic acid in coffee, Journal of Chromatography A, 1032: 299304 22 Xiumei Geng , Sufang Zhang , Qian Wang , Zongbao (Kent) Zhao (2008), Determination of organic acid in the presence of inorganic anions by ion chromatography with suppresse d conductivity detection, Journal of Chromatography A, 1192 : 187190 23 Fengwu Wu, Zhike He, Qingyao Luo, Yun'e Zeng (1999), HPLC determination of oxalic acid using tris(1,10-phenanthroline) ruthenium (II) chemiluminescence application to the analysis of spinach, Food Chemistry, (65),543-546 55 24 H.Z.Liana, L.Mao, X.L.Ye, J.Miao (1999), Simultaneous determination of oxalic, fumaric, maleic and succinic acid in tartaric and malic acid for pharmaceutical use by ion-suppression reversed-phase high performance liquid chromatography, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, (19), 621-625 25 J G March, B M Simonet, F Grỏses, J A Muủoz, M Valiente (2003), Determination of trace amounts of oxalate in renal calculi and related samples by gas chromatography-mass spectrometry, Journal of Chromatography A,57(11), 811-817 26 Thanh Duc Mai, Peter C Hauser (2012), Simultaneous separations of cations and anions by capillary electrophoresis with contactless conductivity detection employing a sequential injection analysis manifold for flexible manipulation of sample plugs, Journal of Chromatography A, 1267, 266 272 27 Thanh Duc Mai, Peter C Hauser (2011), Anion separations with pressure- assisted capillary electrophoresis using a sequential injection analysis manifold and contactless conductivity detection, Electrophoresis, 32, 3000 3007 28 Virginia Garca-Canas, Miguel Herrero, Carolina Simo, Alejandro Cifuentes (2010), Recent advances in the application of capillary electromigration methods for food analysis and Foodomics, Electrophoresis, (31), 20522 56 [...]... bơm mẫu vào mao quản (Hình 1.5 C) Phương pháp bơm mẫu này cho kết quả các pic phân tách có độ sắc nét cao Tuy nhiên phương pháp này có nhược điểm rất lớn là 20 di n tích pic (dùng để định lượng) có độ lặp lại thấp với các nền mẫu khác nhau, do đó thường chỉ dùng để định tính [1, 2] 1.7 Phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc (CE - C4D) Trong phương pháp điện di mao quản, ... tích 22 CHƯƠNG 2: THỰC NGHIỆM 2.1 Mục tiêu và nội dung nghiên cứu 2.1.1 Mục tiêu nghiên cứu Mục tiêu của luận văn là nghiên cứu xác định oxalate đồng thời với tartrate và citrate trong mẫu thực phẩm bằng phương pháp điện di mao quản sử dụng detector đo độ dẫn không tiếp xúc theo kiểu kết nối tụ điện (CE – C4D) 2.1.2 Nội dung nghiên cứu Để đạt được mục tiêu đề ra, các nội dung nghiên cứu của luận văn... cho trong hình 1.1 [1] Hình 1.1 Sơ đồ phân tích hệ điện di mao quản Độ điện di, tốc độ điện di và thời gian điện di Trong điện di, tốc độ di chuyển của các hạt tích điện (v) tỉ lệ thuận với cường độ điện trường (E): 16 v = μ E (1.1) Trong đó: v: tốc độ di chuyển của ion μ: là độ di n di E: là điện trường ngoài Trong điều kiện tốc độ của dòng ổn định, lực tác động lên các tiểu phân tích điện từ phía điện. .. sao không cho dòng điện I quá lớn trong mao quản, dòng điện I này chỉ nên nằm trong vùng từ 10 – 75 µA Việc chọn điện thế V là bao nhiêu tùy thuộc vào bản chất của chất phân tích, chất nền của mẫu, giá trị pH của pha động điện di, … [1] 1.6.4 Kỹ thuật bơm mẫu trong phương pháp điện di mao quản Trong điện di mao quản có ba phương pháp thường dùng nạp mẫu phân tích vào trong mao quản, bao gồm: 19 • Phương. .. Phương pháp thủy động lực học dùng áp suất • Phương pháp thủy động lực học theo kiểu xiphông • Phương pháp điện động học Hình 1.5 Các kĩ thuật bơm mẫu trong phương pháp điện di mao quản * Kĩ thuật bơm mẫu kiểu thuỷ động học kiểu xiphông Trong kĩ thuật này, mẫu được bơm vào mao quản nhờ áp lực (hình 1.5 A, B) Khi đó, lượng mẫu bơm vào trong mao quản phụ thuộc vào áp lực sử dụng (áp suất, lực hút chân không. .. 1.6.1 Mao quản Mao quản là một bộ phận quan trọng trong phương pháp điện di mao quản Đây chính là một trong các yếu tố quyết định sự điện di hỗn hợp của các chất mẫu Mao quản được chế tạo chủ yếu là silica được gọi là mao quản silica Trong một số trường hợp cũng có thể dùng mao quản teflon, khi mao quản silica không phù hợp, ví dụ mẫu có ion F- và tách ở pH thấp [1] Hình 1.2 Mặt cắt ngang của mao quản. .. phẩm bằng phương pháp CE-C4D Đánh giá phương pháp nghiên cứu: Xác định khoảng tuyến tính, xây dựng đường chuẩn Xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) Đánh giá độ chụm, độ đúng của phương pháp phân tích Áp dụng phân tích một sỗ mẫu thực tế như: bia lon, bia hơi, mì tôm gói, mẫu bia, mẫu trà túi lọc và mẫu trà vỉa hè 2.2 Phương pháp xử lý mẫu Các mẫu phân tích được lựa chọn gồm mẫu. .. có oxalate, tartrate và citrate bằng phương pháp điện di mao quản vùng kết hợp với detector UV với độ lệch chuẩn tương đối (RSD) nhỏ hơn 1% Giới hạn phát hiện của các ion trong khoảng 0,006-1,072 mg/l Phương pháp có thể dễ dàng áp dụng xác định đồng thời 11 anion trong đó có oxalate, tartrate và citrate trong các mẫu nước giải khát và mẫu thực phẩm với thời gian phân tích ngắn và độ nhạy tốt Trong nghiên. .. 1.6.3 Nguồn điện thế cao Quá trình điện di trong mao quản chỉ xảy ra khi có nguồn thế V một chiều nhất định đặt vào hai đầu mao quản Thế V này tạo ra lực điện trường E và dòng điện I trong mao quản, nó điều khiển và duy trì sự điện di của các chất Trong điện di mao quản, điện thế V một chiều thường được dùng để đặt vào hai đầu mao quản là từ 15 - 40 kV/1m, hay là từ 150 – 550 V/1cm mao quản Tuy nhiên,... cao bơm mẫu) và thời gian bơm mẫu Trong đó bơm mẫu theo nguyên lý xiphông (hình 1.5B): mẫu được dẫn vào mao quản nhờ chênh lệch độ cao giữa vị trí đặt lọ mẫu và vị trí đặt lọ đựng dung dịch đệm Đây là giải pháp bơm mẫu đơn giản nhất, và được sử dụng cho các hệ điện di mao quản xách tay vận hành thủ công * Kĩ thuật bơm mẫu kiểu điện động học Kĩ thuật này sử dụng lực điện khi áp thế cao (5 - 10 kV trong