Đang tải... (xem toàn văn)
Báo cáo thực hành công nghệ vi sinh
ĐẠI HỌC Y DƯỢC THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHOA DƯỢC BỘ MÔN VI SINH – KÝ SINH BÁO CÁO THỰC HÀNH CÔNG NGHỆ VI SINH Lớp: DCQ2011 Niên khóa: 2013 - 2014 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh BÀI 1: CHỌN LỌC GIỐNG VI SINH VẬT Phát vi sinh vật có tiềm năng: Amylase Chủng Mô tả khóm Bề mặt phẳng, khô, bìa gợn sóng, màu trắng đục Đường kính 5-7mm Bề mặt lồi, khô, bìa nguyên, màu trắng đục Đường kính 0.5-1.5mm Bề mặt mặt phẳng, khô, bìa cưa, màu trắng đục Đường kính 7-9mm Protease Chủng Mô tả khóm Khóm tròn, bìa nguyên, có tâm, màu vàng Đường kính 3-5mm Khóm đa giác, bìa cưa, tâm, màu vàng Đường kính 6-8mm Đường kính vòng sáng Có vòng sáng, đường kính 13-17mm Không có vòng sáng Có vòng sáng, đường kính 14-18mm Đường kính vòng sáng Có vòng sáng, đường kính 5-6mm Có vòng sáng, đường kính 7-10mm Kháng sinh Chủng kiểm tra B1 B2 B3 B4 S.aureus + + + + E.coli + + - + Chủng thử nghiệm 2.Trả lời câu hỏi: Kể tên nêu nguyên tắc số phương pháp phát đặt tính mong muốn thực nghiệm? Amylase ngoại bào - Phân tán vi sinh vật vào đệm, pha loãng dịch huyền phù vi sinh vật gấp 10 lần, trải lên môi trường, ủ nhiệt độ thích hợp - Phát hiện: thuốc thử Lugol Tráng bề mặt môi trường với dung dịch Lugol môi trường có màu tím than màu iod với tinh bột Nếu chủng vi sinh vật có tính Amylase ngoại bào xung quanh chỗ vi sinh vật mọc có vùng sáng tinh bột bị thủy phân nên không tạo màu với iod Đường kính vòng sáng phân giải tinh bột tỉ lệ với hoạt tính Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Protease ngoại bào - Phân tán vi sinh vật vào đệm, pha loãng dịch huyền phù vi sinh vật gấp 10 lần, trải lên môi trường, ủ nhiệt độ thích hợp - Phát hiện: thuốc thử TCA 50% Tráng lên môi trường TCA 50% môi trường đục ví gelaatin bị kết tủa Nếu chủng vi sinh vật sinh Protease ngoại bào xung quanh chỗ vi sinh vật mọc có vùng sáng gelatin bị thủy phân nên không bị tủa Đường kính vòng phân giải tỉ lệ với hoạt tính Kháng sinh - Nguyên tắc: phát vi sinh vật kháng sinh dựa vào khả ức chế tăng trưởng với vi sinh vật khác - Phương pháp: vạch thẳng vuông góc, khuếch tán Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh BÀI 2: SINH KHỐI VI SINH VẬT Định lượng sinh khối: a Phương pháp đếm sống: Số liệu Nhiệt độ Môi trường TSB TSB+khoáng Lắc Tĩnh Lắc 0 Tĩnh 0 30 C 37 C 30 C 37 C 30 C 37 C 30 C 370C Ống >200 >200 200 >200 >200 >200 >200 Ống >200 >200 200 151 >200 190 Ống 59 109 200 Công thức tính - Chọn hộp có khoảng 30-200 khóm - Số tế bào/ml: A=số khóm x 10số thứ tự hộp+1 Bảng kết Môi trường Nhiệt độ TSB TSB+khoáng Lắc Tĩnh Lắc Tĩnh 0 0 0 30 C 37 C 30 C 37 C 30 C 37 C 30 C 370C 6 6 Số tế bào/ml 59.10 109.10 200.10 190.105 Nhận xét: - Số tế bào/ml cao điều kiện nuôi cấy 300C, môi trường nuôi cấy có khoáng, lắc - Số tế bào/ml thấp điều kiện nuôi cấy 300C, môi trường nuôi cấy không khoáng, tĩnh b Phương pháp đo quang: Công thức: Số tế bào/ml = OD600nm x 0.8 x 109 Môi trường Nhiệt độ TSB TSB+khoáng Lắc Tĩnh Lắc Tĩnh 0 0 0 30 C 37 C 30 C 37 C 30 C 37 C 30 C 370C Giá trị OD 0.466 0.361 0.367 0.364 0.348 0.322 0.367 0.381 8 8 8 Số tế bào/ml 3.73x10 2.89x10 2.94x10 2.91x10 2.78x10 2.58x10 2.94x10 3.05x108 Nhận xét: - Số tế bào/ml cao điều kiện nuôi cấy 300C, môi trường nuôi cấy không khoáng, lắc - Số tế bào/ml thấp điều kiện nuôi cấy 370C, môi trường nuôi cấy có khoáng, lắc c Nhận xét chung: - Có khác số tế bào/ml thực phương pháp đo quang đếm sống - Kết số tế bào/ml phương pháp đo quang cao phương pháp đếm sống Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Trả lời câu hỏi: So sánh phương pháp xác định số lượng tế bào: Phương pháp Ưu điểm Chính xác xác định số tế bào sống Đếm sống Đo quang Thực nhanh tiện lợi Nhược điểm Quá trình thực phức tạp Cần thời gian nhân công để nuôi cấy vi khuẩn Mang tính thủ công cảm quan đếm số lượng khóm Không xác độ đục xác tế bào chết Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh BÀI 4: TINH CHẾ ENZYME AMYLASE BẰNG ALGINAT Xây dựng đường chuẩn để xác định hoạt tính amylase: Bảng 1.1 Mối quan hệ hàm lượng tinh bột (mg) mật độ quang (OD) Ống Tinh bột (mg) 10 ∆OD560nm 0.000 0.139 0.286 0.351 0.486 0.579 10 U/mL Hình 1.1: Đường chuẩn hoạt độ Amylase a Các thông số quy trình tinh chế Tổng số protein (A ) 280nm Enzyme thô (pha loãng 10 lần) - OD280=1.173 - Tổng thể tích thô: V1=15mL - Tổng lượng protein thô: A = OD280 x V x Độ pha loãng = 1.173 x 15 x 10 = 175.95 280(1) Enzyme tinh chế (không pha loãng) - OD280 = 0.665 - Tổng thể tích tinh chế: V2 = 35mL Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh - Tổng lượng protein tinh chế: A = OD280 x V x Độ pha loãng = 0.665 x 35 x = 23.28 280(2) Tổng hoạt tính (U) Dựa vào phương trình hồi quy: y = 0.0572x + 0.0210 với y ∆OD x hoạt độ amylase (U/ml) Enzyme thô (pha loãng 50 lần) - OD : 0.393 OD = 0.097 ∆OD = 0.296 chứng thử - Hoạt độ amylase thô: 4.808 U/ml - Hoạt tính tổng amylase thô (U ): U = Hoạt độ x Độ pha loãng x V = 4.808 x 50 x 15 = 3606.00U 1 Enzyme tinh chế - OD = 0.572 OD = 0.231 ∆OD = 0.341 chứng thử - Hoạt độ enzyme sau tinh chế : 5.594 U/ml - Hoạt tính tổng amylase tinh chế (U ): U = Hoạt độ x Độ pha loãng x V = 5.594 x x 35 = 978.95U 2 Hoạt tính chuyên biệt (U/A ) 280nm Của enzyme thô: U1/A280(1) = 3606/175.95 ≈ 20.49 Của enzyme tinh chế: U2/A280(2) = 978.95/23.28 ≈ 42.05 Hiệu suất tinh chế: U2/U1100 = (978.95/3606) × 100 = 27.15% Mức tinh chế: Hoạt tính chuyên biệt Enzyme sau tinh chế/Hoạt tính chuyên biệt Enzyme thô = 42.05/20.49 = 2.052 lần Thông số A280 U Hoạt tính chuyên biệt Dịch thô 175.95 3606.00 20.49 Enzyme sau tinh chế 23.28 978.95 42.05 Hiệu suất (%) Nhận xét: - Hiệu suất tinh chế: 27.15% Tương đối thấp - Hoạt tính chuyên biệt: + Của Enzyme thô: 20.49 Tốt + Của Enzyme sau tinh chế: 42.05 Tốt - Mức tinh chế: 2.096 lần Tốt Mức tinh chế Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh b Vẽ quy trình tinh chế enzyme Dịch Enzym thô - Natri Alginat - Calcium chlorid - Lọc lấy tủa Dịch tạp chất - Phản hấp phụ - Lọc lấy dịch Alginat calci - Cô đặc - Thẩm tích 10 Phức Tủa Sản Dịch Enzym Enzym phẩm Enzym Alginat Alginat Amylase tinhcalci natri Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh 11 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh BÀI 5: CỐ ĐỊNH CGTASE LÊN ALGINATE Kết xác định hàm lượng protein chế phẩm CGTase protein cố định: a Xây dựng đường chuẩn định lượng protein Ống nghiệm Nồng độ BSA (µg/mL) 10 20 30 40 50 0.000 0.097 0.124 0.194 0.242 0.310 OD595 nm Hình 1.1: Đường chuẩn định lượng protein theo phương pháp Bradford Phương trình hồi quy: y = 0.0059x + 0.0144 (y ∆OD550 nm,x nồng độ CD mg/mL) (1) b Tính hàm lượng protein chế phẩm CGTase: - Pha loãng chế phẩm 50 lần Lấy 0.1mL chế phẩm 0.9mL thuốc thử Bradford, đo OD giá trị 0.177 - Dựa theo phương trình hồi quy (1): Nồng độ protein mẫu thử = (∆OD595 nm - 0.0144)/0.0059 = 27.56 µg/mL 12 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh - Hàm lượng protein 1mL enzyme = n*x*10-3 = 50*27.56*10-3 = 1.38mg Với n hệ số pha loãng, x: nồng độ protein có mẫu thử (µg/mL) - Hàm lượng protein 2mL enzyme ban đầu = 1.38*2 = 2.76mg ∆OD595 nm 0.177 Nồng độ protein (µg/mL) 27.56 Hàm lượng protein (mg) 2.76 c Tính hàm lượng protein cố định: i) Phương pháp bắt giữ: - Dịch lọc: ∆OD595 nm = 0.165 Theo phương trình hồi quy (1), nồng độ protein 25.53µg/mL Hàm lượng protein dịch lọc = 25.53*Vlọc = 25.53*30 = 766µg - Dịch rửa: ∆OD595 nm = 0.066 Theo phương trình hồi quy (1), nồng độ protein 8.75µg/mL Hàm lượng protein dịch rửa = 8.75*Vlọc = 8.75*20 = 175µg Suy ra, hàm lượng protein không cố định: 766+175=941µg=0.941mg Hàm lượng protein cố định: - mpr cố định = mpr ban đầu – mpr không cố định = 2.76 mg – 0.941mg = 1.819mg - Hiệu suất cố định protein: Dịch lọc Dịch rửa ∆OD595 nm 0.165 0.066 Nồng độ protein mẫu thử (µg/mL) 25.53 8.75 30 20 0.766 0.175 Thể tích (mL) Hàm lượng protein (mg) Tổng hàm lượng protein không cố định (mg) 0.941 Hàm lượng protein cố định (mg) 1.819 Hiệu suất cố định (%) 65.91 13 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh ii) Phương pháp hấp phụ: Dịch lọc Dịch rửa ∆OD595 nm 0.384 0.127 Nồng độ protein mẫu thử(µg/mL) 62.64 19.08 20 20 1.253 0.382 Thể tích (mL) Hàm lượng protein (mg) Tổng hàm lượng protein không cố định (mg) 1.635 Hàm lượng protein cố định (mg) 1.125 Hiệu suất cố định (%) 40.76 Nhận xét: Hiệu suất cố định enzyme phương pháp bắt giữ cao phương pháp hấp phụ (65.82% so với 40.73%) Tuy nhiên, nhìn chung, tỉ lệ lượng enzyme cố định thấp, lượng hao hụt thất thoát cao Kết xác định hoạt tính enzyme chế phẩm hoạt tính enzyme cố định: a Xây dựng đường chuẩn cyclodextrin Số thứ tự Nồng độ CD (mg/mL) ∆OD550 nm 0.207 0.372 0.508 0.602 0.661 Hệ số góc (a) 0.066 14 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Hình 2.1: Đường chuẩn cyclodextrin Phương trình hồi qui: y= 0.0661x (y ∆OD550 nm, x nồng độ CD mg/mL) (2) b Xác định hoạt tính CGTase - Pha loãng 20 lần Với ∆OD550 nm=0.49, theo phương trình (2), nồng độ CD 7.42mg/mL - Hoạt tính CGTase mL dung dịch chế phẩm: Với CD: nồng độ cyclodextrin mẫu đo (µg/mL) n: hệ số pha loãng, M: khối lượng mol CD (M= 1135g/mol=1135 µg/µmol), 10: tỷ lệ enzyme phản ứng - Hoạt tính riêng enzyme tự do: ∆OD550 nm 0.49 Hoạt tính CGTase (U/mg protein) 63.15 15 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh c Xác định hoạt tính enzyme cố định: i Phương pháp bắt giữ: - ∆OD550 nm=0.306 Theo phương trình hồi qui (2), nồng độ CD 4.64 mg/ml Lượng CD tương ứng với 300mg (10 hạt) gel bắt giữ enzyme Mà tổng khối lượng hạt gel 10g - Hoạt tính riêng enzyme cố định theo phương pháp bắt giữ: - Tỉ lệ hoạt tính enzyme cố định so với enzyme tự do: ∆OD550 nm 0.306 4.99 7.9 Hoạt tính riêng (U/mg) Tỉ lệ hoạt tính (%) ii Phương pháp hấp phụ: - ∆OD550 nm=0.184 Theo phương trình hồi qui (2), nồng độ CD 2.79 mg/ml Lượng CD tương ứng với 750mg (25 hạt) gel bắt giữ enzyme Mà tổng khối lượng hạt gel 10g ∆OD550 nm 0.184 1.94 3.08 Hoạt tính riêng (U/mg) Tỉ lệ hoạt tính (%) Nhận xét: Tỉ lệ hoạt tính enzyme cố định so với enzyme tự thấp Trong đó, enzyme cố định phương pháp hấp phụ có tỉ lệ hoạt tính thấp (3.08%) Enzyme cố định phương pháp bắt giữ giữ hoạt tính cao hơn, không nhiều (7.9%) 16 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Câu hỏi: 1) So sánh hai phương pháp cố định: Phương pháp bắt giữ Trộn enzyme alginate, cho hỗn hợp tạo hạt gel với CaCl2 Tạo hạt gel alginate CaCl2, cho hạt gel tiếp xúc với dung dịch có enzyme Ủ 15 phút để trình bắt giữ xảy Lọc, rửa thu hạt gel Để 45 phút để trình hấp phụ xảy Lọc, rửa thu hạt gel Enzyme cố định bên hạt gel Enzyme định vị bề mặt hạt gel Cách thực Kiểu cố định Phương pháp hấp phụ Hiệu suất cố định (thực nghiệm) 65.82% 40.73% Tỉ lệ hoạt tính (thực nghiệm) 7.9% 3.08% 2) Bàn luận khả tái sử dụng enzyme cố định Enzyme cố định sử dụng nhiều lần với kiểu phản ứng, số lần phụ thuộc vào chấn enzyme, chất chất mang, kiểu phản ứng kiểu cố định cụ thể enzyme Quá trình bảo quản dễ dàng so với enzyme tự Việc tách enzyme khỏi thành phần chất, sản phẩm để thu hồi tiện lợi dựa vào đặc điểm chất mang để thực Tuy nhiên, hoạt tính enzyme bị ảnh hưởng thay đổi cấu trúc enzyme tạo liên kết với chất mang cản trở không gian có mặt chất mang 17 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh BÀI 9: TINH CHẾ PROTEIN BẰNG SẮC KÍ ÁI LỰC Mô tả tượng xảy thực phá hủy tế bào: Ly tâm môi trường nuôi cấy E.coli thu cắn, đổ bỏ phần nước Phân tán cắn tế bào đệm voxtex, ta dịch đục, không đồng có độ nhớt cao Tán siêu âm để thu dịch đồng không nhớt chứa đoạn peptid, ý siêu âm gia nhiệt nên cần chia nhiều lần, giữ nhiệt độ lạnh Để loại tạp cần ly tâm để thu dịch chứa đoạn peptid đích có độ dài trung bình hòa tan phần dịch Xây dựng đường chuẩn định lượng protein: Ống nghiệm Nồng độ BSA (µg/mL) 10 20 30 40 50 0.000 0.097 0.124 0.194 0.242 0.310 ∆OD595 nm Hình: Đường chuẩn định lượng protein theo phương pháp Bradford Phương trình hồi quy: y = 0.0059x + 0.0144 (y ∆OD550 nm, x nồng độ CD mg/mL) 18 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Mẫu thử Protein: Mẫu A B1 B2 C D1 D2 D3 D4 Thể tích (mL) 2.00 1.75 2.50 1.50 0.80 1.00 1.00 0.90 OD595 0.478 0.773 0.364 0.824 0.271 0.169 0.087 0.067 Nồng độ Protein (µg/mL) 78.58 128.58 59.25 137.22 43.49 26.20 12.31 8.92 Hệ số pha loãng 20 1 1 1 3143.2 1125.08 148.13 205.83 34.79 26.2 12.31 8.03 Lượng (µg) Hiệu suất (%) Mẫu gộp 73.30 HS = [(Mẫu gộp)/Mẫu A] x 100% = (73.33/3143.2) x 100% = 2.33% (Loại ống D4 nằm khoảng tuyến tính) Nhận xét: Hiệu suất tinh chế có 2.33% thấp Giải thích: - Do thao tác định lượng chưa xác gây hao hụt - Có thể cột sắc kí chưa hoạt hóa tốt, cột dùng nhiều lần nên hiệu suất bị 19 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Vẽ sơ đồ trình tinh chế: Cột rỗng Dịch nuôi cấy E.coli - Rửa nước cất vô trùng - Phân tán nhựa sắc kí Cột chứa nhựa sắc kí Cắn tế bào - Thêm 2mL Ni-Sepharose, để yên 1h Cột chứa nhựa sắc kí (gắn Ni-Sepharose) - Phân tán đệm chạy H 1X - Tán siêu âm (giữ lạnh) - Ly tâm 10.000rpm, phút Dịch A (nước nổi) Hoạt hóa cột - 0,5mL x lần nước cất vô trùng - 0,5mL x lần đệm ion 1X - 0,5mL x lần đệm chạy H 1X Cột hoạt hóa - Ly tâm 10.000 rpm, phút - Thu lấy cắn tế bào Lấy 1,0mL nạp vào cột Dịch B - 0,5mL x đệm chạy H 1X - 0,5mL x đệm rửa H 1X Dịch C - Từng 1mL đệm H 1X Dịch D - 0,5mL x đệm chạy H 1X Cột cân 20 [...]...Phức Tủa Sản Dịch Enzym Enzym phẩm Enzym Alginat Alginat Amylase tinhcalci natri Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh 11 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh BÀI 5: CỐ ĐỊNH CGTASE LÊN ALGINATE 1 Kết quả xác định hàm lượng protein trong chế phẩm CGTase và protein cố định: a Xây dựng đường chuẩn định lượng protein Ống... dàng hơn so với enzyme tự do Vi c tách enzyme ra khỏi các thành phần cơ chất, sản phẩm để thu hồi sẽ tiện lợi hơn khi có thể dựa vào đặc điểm của chất mang để thực hiện Tuy nhiên, hoạt tính của enzyme có thể bị ảnh hưởng do sự thay đổi trong cấu trúc enzyme khi tạo liên kết với chất mang cũng như cản trở về không gian khi có mặt chất mang 17 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh BÀI 9: TINH CHẾ PROTEIN... (µg/mL) 25.53 8.75 30 20 0.766 0.175 Thể tích (mL) Hàm lượng protein (mg) Tổng hàm lượng protein không cố định (mg) 0.941 Hàm lượng protein cố định (mg) 1.819 Hiệu suất cố định (%) 65.91 13 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh ii) Phương pháp hấp phụ: Dịch lọc Dịch rửa ∆OD595 nm 0.384 0.127 Nồng độ protein trong mẫu thử(µg/mL) 62.64 19.08 20 20 1.253 0.382 Thể tích (mL) Hàm lượng protein (mg) Tổng hàm lượng... phẩm và hoạt tính enzyme cố định: a Xây dựng đường chuẩn cyclodextrin Số thứ tự 1 2 3 4 5 6 Nồng độ CD (mg/mL) 0 2 4 6 8 1 ∆OD550 nm 0 0.207 0.372 0.508 0.602 0.661 Hệ số góc (a) 0.066 14 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh Hình 2.1: Đường chuẩn cyclodextrin Phương trình hồi qui: y= 0.0661x (y là ∆OD550 nm, x là nồng độ CD mg/mL) (2) b Xác định hoạt tính CGTase - Pha loãng 20 lần Với ∆OD550 nm=0.49, theo... số pha loãng, M: khối lượng mol CD (M= 1135g/mol=1135 µg/µmol), 10: tỷ lệ enzyme phản ứng - Hoạt tính riêng của enzyme tự do: ∆OD550 nm 0.49 Hoạt tính của CGTase (U/mg protein) 63.15 15 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh c Xác định hoạt tính enzyme cố định: i Phương pháp bắt giữ: - ∆OD550 nm=0.306 Theo phương trình hồi qui (2), nồng độ CD là 4.64 mg/ml Lượng CD này tương ứng với 300mg (10 hạt) gel... thấp Trong đó, enzyme cố định bằng phương pháp hấp phụ có tỉ lệ hoạt tính rất thấp (3.08%) Enzyme cố định bằng phương pháp bắt giữ giữ được hoạt tính cao hơn, nhưng không nhiều (7.9%) 16 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh 3 Câu hỏi: 1) So sánh hai phương pháp cố định: Phương pháp bắt giữ Trộn enzyme và alginate, cho hỗn hợp này tạo hạt gel với CaCl2 Tạo hạt gel bằng alginate và CaCl2, cho hạt gel tiếp... Lấy 0.1mL chế phẩm và 0.9mL thuốc thử Bradford, đo OD được giá trị 0.177 - Dựa theo phương trình hồi quy (1): Nồng độ protein trong mẫu thử = (∆OD595 nm - 0.0144)/0.0059 = 27.56 µg/mL 12 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh - Hàm lượng protein trong 1mL enzyme = n*x*10-3 = 50*27.56*10-3 = 1.38mg Với n là hệ số pha loãng, x: nồng độ protein có trong mẫu thử (µg/mL) - Hàm lượng protein trong 2mL enzyme... 0.097 0.124 0.194 0.242 0.310 ∆OD595 nm Hình: Đường chuẩn định lượng protein theo phương pháp Bradford Phương trình hồi quy: y = 0.0059x + 0.0144 (y là ∆OD550 nm, x là nồng độ CD mg/mL) 18 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh 2 Mẫu thử Protein: Mẫu A B1 B2 C D1 D2 D3 D4 Thể tích (mL) 2.00 1.75 2.50 1.50 0.80 1.00 1.00 0.90 OD595 0.478 0.773 0.364 0.824 0.271 0.169 0.087 0.067 Nồng độ Protein (µg/mL) 78.58... chỉ có 2.33% là quá thấp Giải thích: - Do thao tác định lượng chưa chính xác gây hao hụt - Có thể do cột sắc kí chưa được hoạt hóa tốt, cột dùng nhiều lần nên hiệu suất bị kém đi 19 Báo cáo thực hành: Công nghệ vi sinh 3 Vẽ sơ đồ quá trình tinh chế: Cột rỗng Dịch nuôi cấy E.coli - Rửa sạch bằng nước cất vô trùng - Phân tán đều nhựa sắc kí Cột chứa nhựa sắc kí Cắn tế bào - Thêm 2mL Ni-Sepharose, để... gel Để 45 phút để quá trình hấp phụ xảy ra Lọc, rửa thu hạt gel Enzyme được cố định bên trong hạt gel Enzyme được định vị trên bề mặt hạt gel Cách thực hiện Kiểu cố định Phương pháp hấp phụ Hiệu suất cố định (thực nghiệm) 65.82% 40.73% Tỉ lệ hoạt tính (thực nghiệm) 7.9% 3.08% 2) Bàn luận về khả năng tái sử dụng enzyme cố định Enzyme cố định có thể sử dụng nhiều lần với cùng một kiểu phản ứng, số lần