BÀI NỘI QUY PHÒNG THÍ NGHIỆM VÀ CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI I NỘI QUY Các quy tắc an toàn phòng thí nghiệm Các thao tác an toàn yêu cầu quan trọng phòng thí nghiệm vi sinh vật nói chung Khoảng cách người làm thí nghiệm phải hợp lý để hạn chế tối đa di chuyển phòng thí nghiệm, di chuyển làm xáo động không khí làm tăng khả nhiễm trình phân tích Khi làm việc với vi sinh vật thường thao tác với số lượng lớn đậm đặc tế bào vi sinh vật (ở mức 10 tế bào/ml) nhiều chủng vi sinh vật tác nhân gây bệnh nên cần luôn cẩn thận với tất chủng loại thao tác Mặt khác sinh viên phải sử dụng nhiều hóa chất, có axit hóa chất có độc tính Do cần tuân thủ số quy tắc để đảm bảo an toàn cho than cho người khác phòng thí nghiệm: - Nắm vững nguyên tắc, phương pháp làm việc với vi sinh vật - Không ăn uống, hút thuốc phòng thí nghiệm, mang trang - thao tác với VSV Mặc áo blouse thời gian làm thí nghiệm Trước bắt đầu làm thí nghiệm cần sát trùng mặt bàn giấy lau tẩm cồn 700 dung dịch diệt khuẩn khác, để khô Thực tương - tự cho hai tay Cần ghi tên chủng, ngày, tháng làm thí nghiệm lên tất hộp - petri, ống nghiệm môi trường, bình nuôi cấy Khi lỡ tay làm đổ, nhiễm VSV nơi làm việc, dung khăn giấy tẩm chất diệt khuẩn lau kỹ, sau thực việc khử trùng bàn làm việc _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội - Cẩn thận thao tác với đèn cồn đèn Busen.Tắt lửa chưa có nhu cầu sử dụng sau thực xong thao - tác Sử dụng bóp cao su thao tác pipet, không hút miệng Khi làm vỡ dụng cụ thủy tinh, cẩn thận mang găng tay thu gom tất - mảnh vỡ vào túi rác riêng Tách riêng chất thải rắn chất thải lỏng Tất chất thải rắn, môi trường chứa nhiễm VSV cần hấp khử trùng trước thải bỏ vào bãi rác Các dụng cụ, bình chứa nhiễm VSV cần ngâm vào dung dịch chất diệt khuẩn trước II - rửa tái sử dụng Cần gói cẩn thận giấy báo ràng băng keo đăt - chồng đĩa pipet lên Không mở hộp petri dung mũi ngửi để tránh nhiễm VSV vào - đường hô hấp Khi đốt que cấy có dính sinh khối VSV, cần đặt vòng đầu que - cấy vào chân lửa để tránh văng nhiễm VSV vào không khí Sát trùng rửa tay xà phòng trước rời phòng thí nghiệm Sổ viết nhật ký làm việc thí nghiệm CÁCH SỬ DỤNG KÍNH HIỂN VI Cấu tạo kính hiển vi - Ống kính Giá đỡ ống kính Đĩa kính Thân kính Đế kính Mâm kính Chốt an toàn Bộ phận điều chỉnh kính Bộ phận điều chỉnh cua Bộ phận điều chỉnh cường độ ánh sáng _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội - ốc sơ cấp Ốc vi cấp Chuyển vật kính: - Khi quan sát kính hiển vi ta cần quan sát từ vật kính theo thứ tự 4X, 10X, 40X đến 100x - Chú ý : không sử dụng vật kính 100X để quan sát không cần thiết - Nếu vật kính có ghi chữ oil cần nhỏ giọt dầu set lên lamen - Sauk hi dung xong kính phải dùng tẩm xăng lau đầu vật kính Một số dụng cụ : - Que cấy - Lam kính - Lamen - Đèn cồn - Que chang - Kính hiển vi - Đĩa nuôi cấy vi sinh - Ống nghiệm - Pipet - Ống durham - Bình nước cất - Quả bóp _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội BÀI I QUAN SÁT VI SINH VẬT TRÊN KÍNH HIỂN VI MỤC ĐÍCH, YÊU CẦU - Quan sát, nhận biết đặc điểm sinh học nhóm vi khuẩn, - II khuẩn xạ, nấm mốc, nấm men Vẽ mô tả hình dạng, kích thước vsv thuộc nhóm Yêu cầu kỹ năng: + Kỹ sử dụng kính hiển vi quang học, kính hiển vi điện tử + Kỹ làm tiêu tạm thời, tiêu giọt ép + Kỹ quan sát đặc điểm sinh học vi sinh vật kính hiển vi CHUẨN BỊ Mẫu vi sinh Ngô mốc, cơm mốc, vỏ quýt mốc, sữa chua, bèo Dụng cụ _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội Lam kính Que chang Lamen Kính hiển vi Đèn cồn Dầu soi Hóa chất - Xăng xilen để lau kính hiển vi sau quan sát CÁCH TIẾN HÀNH Làm tiêu - Lấy lam kính lame khử trùng cách hơ qua đèn - III - cồn Khử trùng que cấy, lây mẫu vi sinh vật, phải để nguội que cấy - tiến hành lấy vi sinh vật Cho giọt nước vô trùng lên lame Cho tiếp mẫu vi sinh vật lên giàn khoảng 1cm2 Đặt lamen lên ( tránh có bọt khí) Mang quan sát kính hiển vi Chú ý: Nếu giọt nước tràn lam kính dùng giấy thấm bớt nước dùng vaelin bôi quanh mép lam kính để giọt dung dịch không bị khô Cho vsv vào nước giàn Cách quan sát kính hiển vi - Đặt tiêu (vết bôi) vừa thực vào kinh hiển vi cố định - lại Bật đèn với kính hiển vi điện tử lấy ánh sáng mặt trời kính hiển vi quang học _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội - Sau ta tiến hành quan sát kính hiển vi với vật kính 4X Mắt nhìn vào thị kính tay chỉnh ốc vi cấp ( chỉnh thô để đưa tiêu - lên) nhìn thấy ảnh mờ sinh vật cần quan sát Tiếp tục ta chuyển lên quan sát vật kính 10X, điều chỉnh ốc vi - cấp để nhìn rõ vsv Làm tương tự vật kính 40X Khi dùng đến vật kính 100 X ta phải nhỏ giọt dầu soi lên lame điều chỉnh cho vật kính chìm vào giọt dầu Điều chỉnh nút vi cấp cho nhìn thấy vsv cách rõ IV KẾT QUẢ Mẫu nấm mốc Aspergillus ngô _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội BÀI QUAN SÁT TẾ BÀO VI KHUẨN VÀ NẤM MỐC NHUỘM ĐƠN I II MỤC ĐÍCH, YÊU CẦU - Quan sát, nhận biết đặc điểm sinh học vi sinh vật nấm mốc, nấm men - Vẽ mô tả hình dạng, kích thước vsv thuộc nhóm - Yêu cầu kỹ thực hành: + Kỹ sử dụng kinh hiển vi quang học, kính hiển vi điện tử +Kỹ làm tiêu tạm thời, tiêu giọt ép + Kỹ quan sát đặc điểm sinh học vi sinh vật kính hiển vi CHUẨN BỊ Mẫu vật - Quan sát tế bào vi khuẩn : sữa chua, nước dưa chua, loại thực phẩm ôi thiu… - Nấm men: dịch ép hoa lên men, rượu nếp… - Nấm mốc: thực phẩm bị mốc, bánh mì, hoa bị thối… Dụng cụ - Phiến kính (lamelle) - Lá kính (lame) - Que cấy - Đèn cồn - Bôcan - Kính hiển vi Hóa chất _ Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội Thuốc nhuộm : Xanh Methylen Dung dịch gốc: pha 6g xanh Methylen 100ml rượu ethylic Dung dịch thuốc nhuộm: hút 1ml dd pha 40ml nước cất - Xăng xylen để lau kính hiển vi sau quan sát - Dầu soi CÁCH TIẾN HÀNH Làm tiêu sống - Lấy lam kính, lamelle - Sau nhỏ giọt xanh Metylen lên lam kính - Khử trùng que cấy lửa đèn cồn - Dùng que cấy lấy lượng mẫu vi sinh vật vừa đủ cho lên lam kính - III - ( Đặt mẫu vi sinh vật giọt xanh metylen ssau giàn ) Đậy lamelle lên mang quan sát với vật kính 4X, 10X, 40X 100X Xanh metylen Cho vsv vào Dàn đậy lame Làm tiêu cố định Khử trùng que cấy đèn cồn - Dùng que cấy lấy sinh khối vi sinh vật giàn lên lam kính, sau hơ lửa đèn cồn để cố định vi sinh vật - Nhỏ giọt xanh methylen lên, để 1-2 phút - Rửa lại nước cất, thấm bớt nước lam kính - Đợi phút cho lam kính - Đậy lamelle lên - Mang mẫu quan sát kính hiển vi với vật kính 4X, 10X, 40X 100X.( vật kính 100X quan sát ta phải sử dụng dầu soi) giọt xanh metylen Giàn đậy lame Đèn cồn Quan sát kính hiển vi _ 10 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội VK lactic Mẫu vi khuẩn lactic nước dưa chua Mẫu sữa chua _ 12 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội Mẫu nước thịt Mẫu nấm mốc Aspergillus ngô BÀI QUAN SÁT TẾ BÀO VI SINH VẬT ( NHUỘM GRAM) I MỤC ĐÍCH, YÊU CẦU _ 13 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội - Quan sát, nhận biết phân biệt loại vi sinh vật quan sát - Vẽ mô tả hình thái, kích thước - Yêu cầu ky thực hành: + Kỹ sử dụng kính hiển vi điện tử, kính hiển vi quang hoc + Kỹ làm tiêu tạm thời, tiêu giọt ép + Kỹ quan sát vsv kính hiển vi II CHUẨN BỊ Mẫu vi sinh vật - E.coli - Bacilus - Vi khuẩn nước thịt - Hỗn hợp E.coli Bacilus - Lactic: sữa chua Dụng cụ - Que cấy - Lam kính - Lame - Kính hiển vi - Đèn cồn - Bocan - Pipet - Bình nước cất - Giấy thấm Hóa chất - Thuốc nhuộm: Tím gentian, Lugon, Fuchsin - Cồn 900 - Dầu soi - Nước cất - Xăng xylen để lau vật kính sau sử dụng III CÁCH TIẾN HÀNH Làm tiêu - Cách lấy giống vsv để làm tiêu bản: Đốt đèn cồn lên.Một tay cầm ống nghiệm chứa vsv, tay lại cầm que cấy hơ lửa đèn cồn để khử trùng Sau mở nắp ống nghiệm , khử trùng cách hơ lửa đèn cồn , đưa que cấy vào lấy sinh khối vsv Sau kết thúc thao tác hơ dụng cụ lửa đèn cồn để khử trùng lần _ 14 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội - Cách làm dịch huyền phù cho loại vsv: + Làm vào ống nghiệm + cho nước cất vào ống nghiệm + dùng que cấy lấy khối vi sinh vật cho vào ống nghiêm + Lắc ta dung dịch huyền phù mẫu chứa vsv nước - Làm tiêu bản: + Lấy giọt huyền phù vừa làm nhỏ lên lam kính + Tán dung dịch huyền phù lam kính +Để khô tự nhiên hơ lửa đèn cồn cho khô + Nhỏ giọt thuốc tím nhuộm gentian vào vết bôi, để 1-2p +Rửa nước( rửa nhẹ cho tiêu trôi hết màu) Để khô +Nhỏ giọt thuốc nhuộm Lugol vào vết bôi (để 12p) sau rửa lại cồn +Nhỏ giọt thuốc nhuộm FuchSin vào vết bôi để tầm 1-1.5p Sau rửa lại nước +Để khô hơ lửa đèn cồn để vết bôi khô +Mang quan sát kính hiển vi Tím gentina lugol FuchSin giọt huyền phù Quan sát kính hiển vi _ 15 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội - Đặt tiêu vết bôi vừa làm vào giá để tiêu kính hiển vi cố định lại - Tiến hành quan sát vật kính 4X, thấy hình ảnh mờ vsv ta chuyển lên vật kính 10X 40X - Tiếp theo sử dụng dầu soi để soi vật kính 100X IV KẾT QUẢ ST T Tên VSV Hình dạng Kích thước Đặc điểm E.coli Có hình que Từ 23×0.5 µm Đầu tròn, thường đứng riêng rẽ trùng tế bào, có tiêu mao mọc khắp thể, di động , không hình thành bào tử Nhuộm gram âm (-) Bacillus Hình mầm Nhỏ, bé tròn hình bầu dục Hỗn hợp E.coli Bacillus Gồm hình que hình bầu dục Ghi Là trực khuẩn có bào tử Nhuộm gram dương (+) _ 16 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội E.coli Vi khuẩn E.coli _ 17 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội Hỗn hợp E.coli Bacillus BÀI I II QUAN SÁT TẾ BÀO VI KHUẨN RĂNG MIỆNG Chuẩn bị Mẫu vi khuẩn Vi khuẩn miệng Vi khuẩn cộng sinh : rễ Dụng cụ - Lam kính - Lame - Kính hiển vi - Que cấy - Bocan - Đèn cồn - Tăm Hóa chất - Thuốc nhuộm : Xanh metylen tím Gential - Xăng xylen để lau vật kính CÁCH TIẾN HÀNH Làm tiêu ép giọt - Cho giọt thuốc nhuộm xanh metylen tím Gential vào lam kính - Lấy cao cho vào giọt thuốc nhuộm - Tán cao với thuốc nhuộm - Đậy lame phía mang quan sát kính hiển vi thuốc nhuộm cao tán Quan sát kính hiển vi - Đặt tiêu (vết bôi) vừa thực đặt vào giá để tiêu kính hiển vi kẹp lại _ 18 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội III Sau tiến hành quan sát từ vật kính 4X, 10X, 40X 100X Riêng vật kính 100X phải sử dụng dầu soi KẾT QUẢ Vi khuẩn miệng Vi khuẩn miệng _ 19 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội Vi khuẩn nốt sần _ 20 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên môi trường Hà Nội BÀI CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG ĐỂ NUÔI CẤY VI SINH VẬT I Chuẩn bị Dụng cụ, thiết bị - Cốc thuỷ tinh - Pipet - Que trang - Đèn cồn - Đĩa petri - Ống nghiệm - Cân điện tử - Ống Durham Mẫu môi trường - Mẫu đất : Hòa tan 0.5g đất vào 4ml nước cất - Mẫu không khí phòng thí nghiệm: Mở nắp đĩa thạch đặt độ cao 1.5m phòng thí nghiệm Để sau phút sai đậy nắp ghi nhãn - Mẫu không khí cănng tin ký túc xá - Mẫu không khí Cầu Diễn - Từ Liêm - Hà Nội - Mẫu nước xống gần khu tái định cư Cầu Diễn - Mẫu nước ký túc xá Môi trường nuôi cấy lỏng (MPN) - Môi trường Coliform ( pha 1l ) + Lactoza : 10g + Cao thịt : 5g + Pepton : 10g + NaCl : 5g + Nước : 1000ml Cân xác hóa chất, thành phần môi trường hòa tan 1l nước cất Môi trường nuôi cấy đặc (MPA) - Thành phần: + Cao thịt : 5g +Pepton : 5g +Muối : 5g + Thạch : 20g + Nước : 1000ml II Cân xác lượng hóa chất, thành phần môi trường hòa tan 1000ml nước cất CÁCH TIẾN HÀNH Đối với phương pháp CFU (Colony for ming unit) a Đối với mẫu đất - Bước 1: Pha loãng mẫu: + Mẫu gốc: Hòa tan 0.5g đất với 4ml nước cất + Hút 0.5ml cho vào ống nghiệm có chứa 4.5 ml nước cất (ống 1) + Hút 0.5ml dung dịch từ ống cho vào 4.5ml nước cất (ống 2) +Hút 0.5ml dung dịch từ ống cho vào 4.5ml nước cất (ống 3) + Hút 0.5ml dung dịch từ ống cho vào 4.5ml nước cất (ống 4) Ta dãy ống nghiệm có nồng độ giảm dần: 10-1 , 10-2 , 10-3, 10-4 0.5 g đất 0.5ml dd 4ml nước 0.5ml dd bình 1(10-1) 0.5ml dd bình 2(10-2) 0.5ml dd bình 3(10-3) bình 4(10-4) Chú ý: Trước hút mẫu cần lắc ống nghiệm - Bước 2: Lấy 0.1ml dd ống có độ pha loãng 10-4 cho vào đĩa petri 0.1ml dd có nồng độ 10-4 Yêu cầu: Khi chuyển dd vào đĩa petri cần tiến hành quan sát lửa đèn cồn đê tránh nhiễm bẩn mẫu, mở đĩa petri nhỏ dd mẫu vào sau dùng que trang khử trùng trang ( nhẹ nhàng), vừa trang vừa quay hộp thạch Sau để vào tủ ấm 370C - Bước : Đếm mẫu pha loãng tối đa từ 25 – 300 khuẩn lạc Tính toán số lượng CFU/1ml mẫu + Kết quả: Đĩa có 25 khuẩn lạc Đĩa có 36 khuẩn lạc + Đĩa 1: CFU = A*D/V = 25*10-4/0.1 = 0.025(CFU/0.1ml) +Đĩa 2: CFU = A*D/V= 35*10-4/0.1 = 0.036(CFU/0.1ml) + Trong đó: A số khuẩn lạc trung bình / đĩa D độ pha loãng V thể tích dung dịch huyền phù (ml) -4 - Ở nồng độ 10 1ml mẫu có 0.25 CFU → Ở dd gốc 1ml mẫu có 2500 CFU nên 4ml dd ban đầu có 10000 CFU →Trong 1g đất có 20000CFU b Mẫu không khí: - Tại căng tin ký túc: +Thời gian lấy mẫu: 14h đến 14h02 ngày 21/11/2011 + Thời gian phân tích: 15h ngày 21/11/2011 + Thời gian đọc kết : 15h20 ngày 25/11/2011 + Số khuẩn lạc 15 - Tại phòng thí nghiệm: + Thời gian lấy mẫu: 14h đến 14h05 ngày 21/11/2011 +Thời gian phân tích: 14h 40 ngày 21/11/2011 + Thời gian đọc kết quả: 14h30 ngày 23/11/2011 + Số khuẩn lạc :10 Phương pháp MPN (Most Probable numer) - Tiến hành mẫu nước cống (gần khu tái định cư Phú Diễn) - Ngày phân tích: 21/11/2011 - Bước 1: Cho vào ống nghiệm ống Durham 9ml dd môi trường nuôi cấy Coliform, đánh số ống nghiệm Chú ý: Khi cho ống Durham vào tránh tạo bọt khí Sau hấp trùng 1200 30 phút, sau để nguội 9ml dd môi trường nuôi cấy ống Durham - Bước 2: Pha loãng mẫu + Chuẩn bị dãy ống nghiệm dãy có ống nghiệm + Hút 1ml dung dịch nước cống cho vào ống nghiệm dãy Ta có nồng độ 10-1 + Hút 1ml dung dịch ống cho sang ống dãy ống nghiệm thứ Ta có nồng độ 10-2 + Hút 1ml dung dịch ống sang cho ống nghiệm thứ 3.Ta nồng độ 10-3 +Sau ủ ấm 370 C Dd gốc 1ml 1ml 1ml Dãy 1: 10-1 ml 9ml dịch dưỡng 1ml 1a 1ml 1b 1c Dãy 2: 10-2 1ml 1ml 2a 1ml 2b 2c Dãy : 10-3 3a - 3b Bước 3: Đọc kết + Dãy (độ pha loãng 10-1): ống sinh bọt khí + Dãy (độ pha loãng 10-2): ống sinh bọt khí +Dãy (độ pha loãng 10-3): ống sinh bọt khí 3c Chỉ số dương tính 3:3:3, so sánh với bảng tra MPN, dung cho dãy ống ngiệm nồng độ pha loãng liên tiếp, cho biết số Coliform có xác suất lớp MPN ông nghiệm có độ pha loãng 10 -2 tính 1ml mẫu không pha loãng lớn 2400 Vậy 100ml mẫu không pha loãng >240000 MPN So sánh với QCVN 14:2008/BTNMT Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia nước thải sinh hoạt lượng Coliform vượt quy chuẩn cho phép Theo QCVN 14:2008/BTNMT tổng Coliform cho phép nước thải sinh hoạt thải vào nguồn nước không dung cho mục đích cấp nước sinh hoạt 5000CFU/100ml HÌNH ẢNH VỀ MẪU Mẫu đất Mẫu nước ký túc xá Mẫu khí phòng thí nghiệm Mẫu khí căng tin ký túc xá [...]... có 2 10000 CFU →Trong 1g đất sẽ có 20 000CFU b Mẫu không khí: - Tại căng tin ký túc: +Thời gian lấy mẫu: 14h đến 14h 02 ngày 21 /11 /20 11 + Thời gian phân tích: 15h ngày 21 /11 /20 11 + Thời gian đọc kết quả : 15h20 ngày 25 /11 /20 11 + Số khuẩn lạc 15 - Tại phòng thí nghiệm: + Thời gian lấy mẫu: 14h đến 14h05 ngày 21 /11 /20 11 +Thời gian phân tích: 14h 40 ngày 21 /11 /20 11 + Thời gian đọc kết quả: 14h30 ngày 23 /11 /20 11... tài nguyên và môi trường Hà Nội E.coli Vi khuẩn E.coli _ 17 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên và môi trường Hà Nội Hỗn hợp E.coli và Bacillus BÀI 5 I II QUAN SÁT TẾ BÀO VI KHUẨN RĂNG MIỆNG Chuẩn bị 1 Mẫu vi khuẩn Vi khuẩn răng miệng Vi khuẩn cộng sinh : rễ cây 2 Dụng cụ - Lam kính - Lame - Kính hiển vi - Que cấy - Bocan - Đèn cồn - Tăm 3... 10-3 +Sau đó ủ ấm ở 370 C Dd gốc 1ml 1ml 1ml Dãy 1: 10-1 1 ml 9ml dịch dưỡng 1ml 1a 1ml 1b 1c Dãy 2: 10 -2 1ml 1ml 2a 1ml 2b 2c Dãy 3 : 10-3 3a - 3b Bước 3: Đọc kết quả + Dãy 1 (độ pha loãng 10-1): 3 ống đều sinh bọt khí + Dãy 2 (độ pha loãng 10 -2) : 3 ống đều sinh bọt khí +Dãy 3 (độ pha loãng 10-3): 3 ống đều sinh bọt khí 3c Chỉ số dương tính là 3:3:3, so sánh với bảng tra MPN, dung cho 3 dãy ống ngiệm... pha loãng 10 -2 tính trong 1ml mẫu không pha loãng sẽ là lớn hơn 24 00 Vậy trong 100ml mẫu không pha loãng sẽ là >24 0000 MPN So sánh với QCVN 14 :20 08/BTNMT Quy chuẩn kỹ thuật quốc gia về nước thải sinh hoạt thì lượng Coliform vượt quá quy chuẩn cho phép Theo QCVN 14 :20 08/BTNMT thì tổng Coliform cho phép đối với nước thải sinh hoạt khi thải vào nguồn nước không dung cho mục đích cấp nước sinh hoạt là... soi KẾT QUẢ Vi khuẩn răng miệng Vi khuẩn răng miệng _ 19 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên và môi trường Hà Nội Vi khuẩn nốt sần _ 20 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên và môi trường Hà Nội BÀI 6 CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG ĐỂ NUÔI CẤY VI SINH VẬT I Chuẩn bị 1 Dụng cụ, thiết bị - Cốc... tối đa từ 25 – 300 khuẩn lạc Tính toán số lượng CFU/1ml mẫu + Kết quả: Đĩa 1 có 25 khuẩn lạc Đĩa 2 có 36 khuẩn lạc + Đĩa 1: CFU = A*D/V = 25 *10-4/0.1 = 0. 025 (CFU/0.1ml) +Đĩa 2: CFU = A*D/V= 35*10-4/0.1 = 0.036(CFU/0.1ml) + Trong đó: A là số khuẩn lạc trung bình / đĩa D là độ pha loãng V là thể tích dung dịch huyền phù (ml) -4 - Ở nồng độ 10 trong 1ml mẫu có 0 .25 CFU → Ở dd gốc trong 1ml mẫu có 25 00 CFU... 4 QUAN SÁT TẾ BÀO VI SINH VẬT ( NHUỘM GRAM) I MỤC ĐÍCH, YÊU CẦU _ 13 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên và môi trường Hà Nội - Quan sát, nhận biết và phân biệt được các loại vi sinh vật đang quan sát - Vẽ và mô tả về hình thái, kích thước - Yêu cầu về ky năng thực hành: + Kỹ năng sử dụng kính hiển vi điện tử, kính hiển vi quang hoc + Kỹ... kính hiển vi quang hoc + Kỹ năng làm tiêu bản tạm thời, tiêu bản giọt ép + Kỹ năng quan sát các vsv trên kính hiển vi II CHUẨN BỊ 1 Mẫu vi sinh vật - E.coli - Bacilus - Vi khuẩn nước thịt - Hỗn hợp E.coli và Bacilus - Lactic: sữa chua 2 Dụng cụ - Que cấy - Lam kính - Lame - Kính hiển vi - Đèn cồn - Bocan - Pipet - Bình nước cất - Giấy thấm 3 Hóa chất - Thuốc nhuộm: Tím gentian, Lugon, Fuchsin - Cồn... hiển vi thuốc nhuộm cao răng tán đều 2 Quan sát trên kính hiển vi - Đặt tiêu bản (vết bôi) vừa thực hiện ở trên đặt vào giá để tiêu bản của kính hiển vi và kẹp lại _ 18 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên và môi trường Hà Nội III Sau đó tiến hành quan sát từ vật kính 4X, 10X, 40X và 100X Riêng vật kính 100X phải sử dụng dầu soi KẾT QUẢ Vi. .. từng môi trường nuôi cấy Từ 4 - 20 µm 2 Nấm mốc Có cấu tạo hình sợi phân nhánh, màu sắc phong phú Từ 3 – 10µm Ghi chú _ 11 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên và môi trường Hà Nội VK lactic Mẫu vi khuẩn lactic của nước dưa chua Mẫu sữa chua _ 12 Phan Thị Thùy Dung – CĐ8KM2 - Trường đại học tài nguyên ... + Kỹ sử dụng kính hiển vi quang học, kính hiển vi điện tử + Kỹ làm tiêu tạm thời, tiêu giọt ép + Kỹ quan sát đặc điểm sinh học vi sinh vật kính hiển vi CHUẨN BỊ Mẫu vi sinh Ngô mốc, cơm mốc,... ngày 21 /11 /20 11 + Thời gian đọc kết : 15h20 ngày 25 /11 /20 11 + Số khuẩn lạc 15 - Tại phòng thí nghiệm: + Thời gian lấy mẫu: 14h đến 14h05 ngày 21 /11 /20 11 +Thời gian phân tích: 14h 40 ngày 21 /11 /20 11... dụng kinh hiển vi quang học, kính hiển vi điện tử +Kỹ làm tiêu tạm thời, tiêu giọt ép + Kỹ quan sát đặc điểm sinh học vi sinh vật kính hiển vi CHUẨN BỊ Mẫu vật - Quan sát tế bào vi khuẩn : sữa