TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC - - TRẦN HOÀNG HẢI KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CAO METHANOL VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN ĐƢỢC LY TRÍCH TỪ THÂN CÂY CỎ MỰC (Eclipta alba) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: SINH HỌC Cần Thơ, 2015 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC - - TRẦN HOÀNG HẢI KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CAO METHANOL VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN ĐƢỢC LY TRÍCH TỪ THÂN CÂY CỎ MỰC (Eclipta alba) LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: SINH HỌC CÁN BỘ HƢỚNG DẪN GV VÕ THỊ TÚ ANH Cần Thơ, 2015 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 LỜI CAM KẾT Em xin cam đoan công trình nghiên cứu thân cô hướng dẫn Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa công bố luận văn trước Cán hướng dẫn Ký tên Võ Thị Tú Anh Tác giả luận văn Ký tên Trần Hoàng Hải Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 PHẦN KÝ DUYỆT Cán hướng dẫn Tác giả luận văn Ký tên Ký tên Võ Thị Tú Anh Trần Hoàng Hải DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 LỜI CẢM ƠN  Để hoàn thành luận văn nổ lực phấn đấu thân việc học tập, tìm tòi nghiên cứu không khó khăn Nhờ có giúp đỡ, động viên quý thầy cô, cha mẹ, gia đình, bạn bè nguồn động viên to lớn, tạo nên động lực để hoàn thành tốt luận văn Với lòng trân trọng biết ơn sâu sắc, em xin gởi lời cám ơn sâu sắc đến: Cô TS Đái Thị Xuân Trang GV Võ Thị Tú Anh tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức vô quý báu, tạo điều kiện thuận lợi động viên giúp đỡ em suốt trình làm luận văn Cô Ngô Thị Kim Thoa, cô Lý Thị Thanh Thủy, thầy TS Nguyễn Trọng Tuân tạo điều kiện cho em sử dụng thiết bị dụng cụ phòng thí nghiệm để thực luận văn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô Bộ môn Sinh Học, Bộ môn Hóa Học - Khoa Khoa Học Tự Nhiên Cuối cùng, xin gửi lời cám ơn sâu sắc đến cha mẹ, gia đình tập thể lớp Sinh học K37 bên cạnh, động viên tinh thần tạo điều liện cho suốt trình học tập nghiên cứu Xin trân trọng cám ơn Cần Thơ, tháng 04 năm 2014 TRẦN HOÀNG HẢI Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 MỤC LỤC DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT iv DANH SÁCH HÌNH v DANH SÁCH CÁC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ vi TÓM TẮT vii MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 2 LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Các khái niệm dịch tễ học nhiễm trùng 2.1.1 Thực trạng 2.1.2 Sơ lƣợc bệnh nhiễm trùng 2.1.2.1 Nhiễm trùng lây lan 2.1.2.2 Bệnh nhiễm trùng cộng đồng nói chung bệnh nhiễm trùng bệnh viện 2.1.2.3 Bệnh nhiễm trùng nhanh bệnh nhiễm trùng chậm 2.1.2.4 Bệnh nhiễm trùng ngoại sinh bệnh nhiễm trùng nội sinh 2.2 Một số vi khuẩn gây hại phổ biến 2.2.1 Vi khuẩn Escherichia coli 2.2.1.1 Hệ thống phân loại khoa học 2.2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.2.1.3 Tính chất nuôi cấy 2.2.1.4 Kháng nguyên 2.2.1.6 Dịch bệnh E coli gây 2.2.2 Vi khuẩn Pseudomonas aeruginosa 2.2.2.1 Hệ thống phân loại khoa học 2.2.2.2 Đặc điểm hình thái 2.2.2.3 Tính chất nuôi cấy 2.2.2.4 Kháng nguyên 2.2.2.6 Dịch bệnh P aeruginosa gây 2.2.3 Vi khuẩn Staphylococcus aureus 10 2.2.3.1 Hệ thống phân loại khoa học 10 2.2.3.2 Đặc điểm hình thái 10 2.2.3.3 Tính chất nuôi cấy 10 2.2.3.4 Kháng nguyên 11 2.2.3.5 Dịch bệnh S aureus gây 11 i Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 2.2.4 Vi khuẩn Vibrio parahaemolyticus 12 2.2.4.1 Hệ thống phân loại khoa học 12 2.2.4.2 Đặc điểm hình thái 12 2.2.4.3 Tính chất nuôi cấy 13 2.2.4.4 Kháng nguyên 13 2.2.4.5 Dịch bệnh V parahaemolyticus gây 13 2.3 Sơ lƣợc cỏ mực 14 2.3.1 Hệ thống phân loại khoa học 14 2.3.2 Đặc điểm cỏ mực 14 2.3.3 Khả kháng khuẩn hợp chất bên cỏ mực 14 2.4.4 Một số dƣợc tính quan trọng khác 16 PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 3.1 Phƣơng tiện vật liệu thí nghiệm 17 3.1.1 Phƣơng tiện thí nghiệm 17 3.1.2 Vật liệu thí nghiệm 17 3.2 Địa điểm thời gian thực 18 3.2.1 Địa điểm 18 3.2.2 Thời gian 18 3.3 Hóa chất 18 3.4 Phƣơng pháp tiến hành 19 3.4.1 Xử lý nguyên liệu điều chế cao tổng (methanol) 19 3.4.2 Điều chế cao phân đoạn (hexane, chloroform, ethyl acetate) 21 3.4.3 Phƣơng pháp khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao thân ly trích từ cỏ mực (Eclipta alba) 24 3.4.3.1 Chuẩn bị môi trƣờng 24 3.4.3.2 Pha loãng cao chiết 24 3.4.3.3 Nhân mật số vi khuẩn 26 3.4.3.4 Khuếch tán thạch 26 3.4.4 Thống kê phân tích số liệu 26 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 4.1 Hiệu suất chiết cao 27 4.2 Đối chứng âm… 28 4.3 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao thân cỏ mực với kháng sinh thƣơng mại 28 4.3.1 Khảo sát hoạt tính kháng E coli loại cao thân cỏ mực với kháng sinh thƣơng mại 28 ii Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 4.3.2 Khảo sát hoạt tính kháng P aeruginosa loại cao thân cỏ mực với kháng sinh thƣơng mại 31 4.3.3 Khảo sát hoạt tính kháng S aureus loại cao thân cỏ mực với kháng sinh thƣơng mại 33 4.3.4 Khảo sát hoạt tính kháng V parahaemolyticus loại cao thân cỏ mực với kháng sinh thƣơng mại 35 4.4 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn loại cao thân cỏ mực 37 4.4.1 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao methanol thân cỏ mực 37 4.4.2 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao hexane thân cỏ mực 38 4.4.3 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao chloroform thân cỏ mực 39 4.4.4 Khảo sát hoạt tính kháng khuẩn cao ethyl acetate thân cỏ mực 41 Kết luận kiến nghị 42 5.1 Kết luận 42 5.2 Kiến nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 PHỤ LỤC 48 iii Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT µm cm CDC DA DPPH EMB EMS/AHPNS HUS FRAP LB mm PABA PCA SS TCBS micrometers centimeters Trung tâm kiểm soát phòng ngừa dịch bệnh Môi trường Desoxycholate Agar 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl Môi trường Eosine Methylene Blue Hội chứng hủy hoại gan tụy cấp Hội chứng tán huyết – tăng urê máu Phương pháp chống oxy hóa cách khử sắt Ferric Reducing Antioxidant Power Môi trường Luria – Bertani millimeters para-aminobenzoic acid Môi trường Plate Count Agar Môi trường Salmonella-Shigella Môi trường Thiosulfate-Citrate Bile Salts iv Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1: E coli Hình 2.2: P aeruginosa Hình 2.3: S aureus 10 Hình 2.4: V parahaemolyticus 12 Hình 2.5: Cỏ mực (Eclipta alba) 14 Hình 3.1: Sự tách lớp trình chiết cao hexane 22 Hình 3.2: Quy trình pha loãng cao chiết 25 Hình 4.1: Khả kháng E coli cao methanol thân đƣợc xếp theo chiều tăng dần nồng độ 29 Hình 4.2: Biểu đồ thể hoạt tính kháng số loài vi khuẩn cao methanol thân 37 Hình 4.3: Khả kháng khuẩn loại cao methanol thân điều kiện nồng độ 38 Hình 4.4: Biểu đồ thể hoạt tính kháng số loài vi khuẩn cao hexane thân 38 Hình 4.5: Biểu đồ thể hoạt tính kháng số loài vi khuẩn cao chloroform thân 40 Hình 4.6: Biểu đồ thể hoạt tính kháng số loài vi khuẩn cao ethyl acetate thân 41 v Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 -+ -+ -+ -+ -0.0 8.0 16.0 24.0 Pooled StDev = 0.707 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Ethyl acetate Chloroform Methanol Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 28.000 25.333 22.333 20.333 0.000 0.000 Grouping A B C D E E Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 32 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 0.5270 DF 12 17 Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol R-Sq = 99.87% N 3 3 3 Mean 0.000 0.000 23.000 26.667 29.333 21.000 SS 2624.667 3.333 2628.000 MS 524.933 0.278 F 1889.76 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.82% StDev 0.000 0.000 1.000 0.577 0.577 0.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(*) (*) (*) *) (* (*) -+ -+ -+ -+ -0.0 8.0 16.0 24.0 Pooled StDev = 0.527 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Ethyl acetate Chloroform Methanol Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 29.333 26.667 23.000 21.000 0.000 0.000 Grouping A B C D E E Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 64 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total DF 12 17 SS 1761.78 19.33 1781.11 MS 352.36 1.61 60 F 218.70 P 0.000 Luận văn tốt nghiệp Đại học S = 1.269 R-Sq = 98.91% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 0.000 10.333 23.333 26.333 27.667 21.667 Sinh học k37 R-Sq(adj) = 98.46% StDev 0.000 1.155 0.577 1.528 2.309 0.577 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) (-*-) + -+ -+ -+ 0.0 8.0 16.0 24.0 Pooled StDev = 1.269 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Ethyl acetate Chloroform Methanol Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 27.667 26.333 23.333 21.667 10.333 0.000 Grouping A A B B C D Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 128 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 2.211 R-Sq = 89.95% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 9.333 24.000 21.000 25.333 24.333 20.333 DF 12 17 SS 524.94 58.67 583.61 MS 104.99 4.89 StDev 0.577 2.646 1.000 2.517 3.786 0.577 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * ) ( * ) ( -* ) ( * -) ( * ) -+ -+ -+ -+ 12.0 18.0 24.0 30.0 Grouping Information Using Fisher Method N 3 3 Mean 25.333 24.333 24.000 21.000 P 0.000 R-Sq(adj) = 85.76% Pooled StDev = 2.211 Cao chiết kháng sinh Ethyl acetate Hexane Ampicillin Chloroform F 21.47 Grouping A A B A B C B C 61 Luận văn tốt nghiệp Đại học Methanol Amoxicillin 3 Sinh học k37 20.333 9.333 C D Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng S aureus loại cao thân cỏ mực kháng sinh thƣơng mại 3.1 Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng S.aureus loại cao thân kháng sinh thƣơng mại nồng độ khác Anova đường kính vòng vô khuẩn kháng sinh ampicillin nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 1.238 Level 16 32 64 128 SS 961.07 15.33 976.40 MS 240.27 1.53 R-Sq = 98.43% N 3 3 Mean 0.000 0.000 0.000 8.667 20.333 StDev 0.000 0.000 0.000 1.155 2.517 F 156.70 P 0.000 R-Sq(adj) = 97.80% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) ( * ) (-* ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.0 6.0 12.0 18.0 Pooled StDev = 1.238 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 64 32 16 N 3 3 Mean 20.333 8.667 0.000 0.000 0.000 Grouping A B C C C Anova đường kính vòng vô khuẩn kháng sinh amoxicillin nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 3.425 Level 16 32 64 128 N 3 3 SS 913.1 117.3 1030.4 MS 228.3 11.7 R-Sq = 88.61% Mean 0.000 0.000 0.000 12.667 18.333 StDev 0.000 0.000 0.000 3.786 6.658 F 19.45 P 0.000 R-Sq(adj) = 84.06% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0 7.0 14.0 21.0 Pooled StDev = 3.425 62 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 64 32 16 N 3 3 Mean 18.333 12.667 0.000 0.000 0.000 Grouping A A B B B Anova đường kính vòng vô khuẩn cao methanol thân nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = Level 16 32 64 128 SS 11.33 10.00 21.33 MS 2.83 1.00 R-Sq = 53.13% N 3 3 Mean 22.000 23.000 23.667 24.667 23.333 F 2.83 P 0.083 R-Sq(adj) = 34.38% StDev 1.000 1.000 0.577 0.577 1.528 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) ( * -) ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+ 21.0 22.5 24.0 25.5 Pooled StDev = 1.000 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 64 32 128 16 N 3 3 Mean 24.667 23.667 23.333 23.000 22.000 Grouping A A B A B A B B Anova đường kính vòng vô khuẩn cao hexane thân nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 0.9661 Level 16 32 64 128 N 3 3 SS 4.400 9.333 13.733 MS 1.100 0.933 R-Sq = 32.04% Mean 24.000 25.000 25.000 24.667 23.667 StDev 1.000 0.000 1.000 1.528 0.577 F 1.18 P 0.377 R-Sq(adj) = 4.85% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( * -) + -+ -+ -+ 23.0 24.0 25.0 26.0 Pooled StDev = 0.966 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ N Mean Grouping 63 Luận văn tốt nghiệp Đại học 32 16 64 128 3 3 25.0000 25.0000 24.6667 24.0000 23.6667 Sinh học k37 A A A A A Anova đường kính vòng vô khuẩn cao chloroform thân nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 1.732 Level 16 32 64 128 SS 8.93 30.00 38.93 MS 2.23 3.00 R-Sq = 22.95% N 3 3 Mean 22.000 22.333 23.667 23.667 22.000 StDev 2.000 0.577 1.155 1.528 2.646 F 0.74 P 0.583 R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( * -) + -+ -+ -+ 20.8 22.4 24.0 25.6 Pooled StDev = 1.732 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 64 32 16 128 N 3 3 Mean 23.667 23.667 22.333 22.000 22.000 Grouping A A A A A Anova đường kính vòng vô khuẩn cao ethyl acetate thân nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 1.265 Level 16 32 64 128 N 3 3 SS 1.73 16.00 17.73 MS 0.43 1.60 R-Sq = 9.77% Mean 22.667 23.000 23.667 23.333 23.000 StDev 0.577 1.000 1.528 2.082 0.000 F 0.27 P 0.890 R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( -* ) ( * -) ( * -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -21.6 22.8 24.0 25.2 Pooled StDev = 1.265 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 32 64 128 N 3 Mean 23.667 23.333 23.000 Grouping A A A 64 Luận văn tốt nghiệp Đại học 16 3 23.000 22.667 Sinh học k37 A A 3.2 Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng S aureus loại cao thân kháng sinh thƣơng mại điều kiện nồng độ Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 1.027 DF 12 17 R-Sq = 99.39% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 0.000 0.000 22.000 22.667 24.000 22.000 SS 2063.11 12.67 2075.78 MS 412.62 1.06 F 390.91 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.14% StDev 0.000 0.000 2.000 0.577 1.000 1.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (*-) (*-) (-*-) (*-) + -+ -+ -+ 0.0 7.0 14.0 21.0 Pooled StDev = 1.027 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Ethyl acetate Methanol Chloroform Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 24.000 22.667 22.000 22.000 0.000 0.000 Grouping A A B B B C C Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 16 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 0.6236 DF 12 17 Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol R-Sq = 99.79% N 3 3 3 Mean 0.000 0.000 22.333 23.000 25.000 23.000 SS 2189.778 4.667 2194.444 MS 437.956 0.389 F 1126.17 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.70% StDev 0.000 0.000 0.577 1.000 0.000 1.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(*) (*) (*) (*) (*) (*) 65 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 -+ -+ -+ -+ -0.0 7.0 14.0 21.0 Pooled StDev = 0.624 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Methanol Ethyl acetate Chloroform Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 25.000 23.000 23.000 22.333 0.000 0.000 Grouping A B B B C C Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 32 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 0.9129 DF 12 17 R-Sq = 99.57% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 0.000 0.000 23.667 23.667 25.000 23.667 SS 2308.000 10.000 2318.000 MS 461.600 0.833 F 553.92 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.39% StDev 0.000 0.000 1.155 1.528 1.000 0.577 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-*-) (-*-) (-*) (-*) (-*) (-*) + -+ -+ -+ 0.0 7.0 14.0 21.0 Pooled StDev = 0.913 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Methanol Ethyl acetate Chloroform Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 25.000 23.667 23.667 23.667 0.000 0.000 Grouping A A A A B B Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 64 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 2.041 R-Sq = 93.74% DF 12 17 SS 748.28 50.00 798.28 MS 149.66 4.17 F 35.92 R-Sq(adj) = 91.13% 66 P 0.000 Luận văn tốt nghiệp Đại học Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 12.667 8.667 23.667 23.333 24.667 24.667 Sinh học k37 StDev 3.786 1.155 1.528 2.082 1.528 0.577 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ 6.0 12.0 18.0 24.0 Pooled StDev = 2.041 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Methanol Hexane Chloroform Ethyl acetate Amoxicillin Ampicillin N 3 3 3 Mean 24.667 24.667 23.667 23.333 12.667 8.667 Grouping A A A A B C Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 128 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 3.171 R-Sq = 34.81% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 18.333 20.333 22.000 23.000 23.667 23.333 DF 12 17 SS 64.4 120.7 185.1 MS 12.9 10.1 F 1.28 P 0.334 R-Sq(adj) = 7.65% StDev 6.658 2.517 2.646 0.000 0.577 1.528 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * ) ( -* ) ( -* ) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ 17.5 21.0 24.5 28.0 Pooled StDev = 3.171 67 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Methanol Ethyl acetate Chloroform Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 23.667 23.333 23.000 22.000 20.333 18.333 Grouping A A A A A A Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng V parahaemolyticus loại cao thân cỏ mực kháng sinh thƣơng mại 4.1 Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng V.parahaemolyticus loại cao thân kháng sinh thƣơng mại nồng độ khác Anova đường kính vòng vô khuẩn kháng sinh ampicillin nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 1.966 Level 16 32 64 128 SS 184.67 38.67 223.33 MS 46.17 3.87 R-Sq = 82.69% N 3 3 Mean 20.333 22.333 26.667 27.333 30.000 StDev 1.528 2.082 0.577 0.577 3.464 F 11.94 P 0.001 R-Sq(adj) = 75.76% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* ) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -20.0 24.0 28.0 32.0 Pooled StDev = 1.966 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 64 32 16 N 3 3 Mean 30.000 27.333 26.667 22.333 20.333 Grouping A A A B B Anova đường kính vòng vô khuẩn kháng sinh amoxicillin nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 2.082 Level 16 N 3 SS 176.40 43.33 219.73 MS 44.10 4.33 R-Sq = 80.28% Mean 19.000 20.667 StDev 2.646 0.577 F 10.18 P 0.001 R-Sq(adj) = 72.39% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * -) ( * -) 68 Luận văn tốt nghiệp Đại học 32 64 128 3 25.667 26.000 28.000 2.517 1.000 2.646 Sinh học k37 ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ 20.0 24.0 28.0 32.0 Pooled StDev = 2.082 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 64 32 16 N 3 3 Mean 28.000 26.000 25.667 20.667 19.000 Source Nồng độ Error Total DF 10 14 Grouping A A A B B Anova đường kính vòng vô khuẩn methanol thân nồng độ S = 1.732 Level 16 32 64 128 SS 101.73 30.00 131.73 MS 25.43 3.00 R-Sq = 77.23% N 3 3 Mean 27.000 30.667 32.000 33.667 34.333 StDev 3.464 1.155 1.000 0.577 0.577 F 8.48 P 0.003 R-Sq(adj) = 68.12% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( * ) ( * -) ( -* ) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+-27.0 30.0 33.0 36.0 Pooled StDev = 1.732 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 64 32 16 N 3 3 Mean 34.333 33.667 32.000 30.667 27.000 Source Nồng độ Error Total DF 10 14 Grouping A A B A B B C Anova đường kính vòng vô khuẩn hexane thân nồng độ S = 1.673 Level 16 32 N 3 SS 15.33 28.00 43.33 MS 3.83 2.80 R-Sq = 35.38% Mean 29.000 29.333 30.000 StDev 2.000 2.517 1.000 F 1.37 P 0.312 R-Sq(adj) = 9.54% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( * ) 69 Luận văn tốt nghiệp Đại học 64 128 3 27.667 30.667 1.528 0.577 Sinh học k37 ( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+ 26.0 28.0 30.0 32.0 Pooled StDev = 1.673 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 32 16 64 N 3 3 Mean 30.667 30.000 29.333 29.000 27.667 Grouping A A A A A Anova đường kính vòng vô khuẩn chloroform thân nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 3.777 Level 16 32 64 128 SS 65.1 142.7 207.7 MS 16.3 14.3 R-Sq = 31.32% N 3 3 Mean 25.667 27.000 28.667 29.667 31.667 StDev 5.132 4.359 3.055 3.215 2.517 F 1.14 P 0.392 R-Sq(adj) = 3.85% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+24.0 28.0 32.0 36.0 Pooled StDev = 3.777 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 64 32 16 N 3 3 Mean 31.667 29.667 28.667 27.000 25.667 Grouping A A A A A Anova đường kính vòng vô khuẩn ethyl acetate thân nồng độ Source Nồng độ Error Total DF 10 14 S = 1.291 Level 16 32 64 N 3 3 SS 35.33 16.67 52.00 MS 8.83 1.67 R-Sq = 67.95% Mean 28.333 30.667 31.000 32.333 StDev 2.082 0.577 1.732 0.577 F 5.30 P 0.015 R-Sq(adj) = 55.13% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( * -) ( -* ) ( -* -) ( * -) 70 Luận văn tốt nghiệp Đại học 128 32.667 0.577 Sinh học k37 ( -* ) -+ -+ -+ -+-28.0 30.0 32.0 34.0 Pooled StDev = 1.291 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 128 64 32 16 N 3 3 Mean 32.667 32.333 31.000 30.667 28.333 Grouping A A A A B B 4.2 Thí nghiệm khảo sát hoạt tính kháng V parahaemolyticus loại cao thân kháng sinh thƣơng mại điều kiện nồng độ Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 3.055 R-Sq = 70.51% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 19.000 20.333 25.667 28.333 29.000 27.000 DF 12 17 SS 267.78 112.00 379.78 MS 53.56 9.33 P 0.006 R-Sq(adj) = 58.22% StDev 2.646 1.528 5.132 2.082 2.000 3.464 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) ( * -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ 15.0 20.0 25.0 30.0 Pooled StDev = 3.055 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Hexane Ethyl acetate Methanol Chloroform Ampicillin Amoxicillin F 5.74 N 3 3 3 Mean 29.000 28.333 27.000 25.667 20.333 19.000 Grouping A A A A B B C C 71 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 16 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 2.297 DF 12 17 R-Sq = 81.65% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 20.667 22.333 27.000 30.667 29.333 30.667 SS 281.78 63.33 345.11 MS 56.36 5.28 F 10.68 P 0.000 R-Sq(adj) = 74.00% StDev 0.577 2.082 4.359 0.577 2.517 1.155 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* ) ( * ) ( -* ) ( -* ) ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ 20.0 24.0 28.0 32.0 Pooled StDev = 2.297 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Methanol Ethyl acetate Hexane Chloroform Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 30.667 30.667 29.333 27.000 22.333 20.667 Grouping A A A A B B Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 32 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 1.871 R-Sq = 68.66% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 25.667 26.667 28.667 31.000 30.000 32.000 DF 12 17 SS 92.00 42.00 134.00 MS 18.40 3.50 F 5.26 P 0.009 R-Sq(adj) = 55.60% StDev 2.517 0.577 3.055 1.732 1.000 1.000 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* ) ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ 24.0 27.0 30.0 33.0 Pooled StDev = 1.871 72 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Methanol Ethyl acetate Hexane Chloroform Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 32.000 31.000 30.000 28.667 26.667 25.667 Grouping A A B A B B C C C Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 64 µg/ml Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 1.563 R-Sq = 82.38% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 26.000 27.333 29.667 32.333 27.667 33.667 DF 12 17 SS 137.11 29.33 166.44 MS 27.42 2.44 F 11.22 P 0.000 R-Sq(adj) = 75.03% StDev 1.000 0.577 3.215 0.577 1.528 0.577 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) ( * -) ( * -) ( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+ 24.0 27.0 30.0 33.0 Pooled StDev = 1.563 Grouping Information Using Fisher Method Cao chiết kháng sinh Methanol Ethyl acetate Chloroform Hexane Ampicillin Amoxicillin N 3 3 3 Mean 33.667 32.333 29.667 27.667 27.333 26.000 Grouping A A B B C C D C D D Anova đường kính vòng vô khuẩn loại cao thân kháng sinh thương mại nồng độ 128 µg/ml 73 Luận văn tốt nghiệp Đại học Source Cao chiết kháng sinh Error Total S = 2.095 R-Sq = 57.90% Level Amoxicillin Ampicillin Chloroform Ethyl acetate Hexane Methanol N 3 3 3 Mean 28.000 30.000 31.667 32.667 30.667 34.333 DF 12 17 Sinh học k37 SS 72.44 52.67 125.11 MS 14.49 4.39 StDev 2.646 3.464 2.517 0.577 0.577 0.577 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * ) ( * -) ( * ) ( * ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -27.0 30.0 33.0 36.0 Grouping Information Using Fisher Method N 3 3 3 Mean 34.333 32.667 31.667 30.667 30.000 28.000 P 0.042 R-Sq(adj) = 40.36% Pooled StDev = 2.095 Cao chiết kháng sinh Methanol Ethyl acetate Chloroform Hexane Ampicillin Amoxicillin F 3.30 Grouping A A B A B C A B C B C C 74 [...]... từ cỏ mực 1 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 Việc chứng minh một cách khoa học tác dụng kháng khuẩn của các hợp chất được ly trích từ thân cây cỏ mực là cần thiết Kết quả thí nghiệm nhằm góp phần làm ổn định chất lượng sống của con người, đồng thời đưa nền y học dân tộc lên một tầm cao mới Đề tài “KHẢO SÁT HOẠT TÍNH KHÁNG KHUẨN CỦA CAO METHANOL VÀ CÁC CAO PHÂN ĐOẠN ĐƢỢC LY TRÍCH TỪ THÂN CÂY CỎ... hầu hết các loại cao thân cỏ mực đều có hoạt tính kháng khuẩn tốt ở cả 4 dòng vi khuẩn Các hợp chất bên trong cao methanol thân cây cỏ mực rất có hiệu quả đối với V parahaemolyticus, kích thước vòng vô khuẩn lớn nhất do cao methanol thân tạo ra là 34,33±0,58 mm ở nồng độ 128 µg/ml Hiệu quả kháng khuẩn của cao chiết thân cây cỏ mực đối với E coli tương đối thấp trong số 4 dòng vi khuẩn khảo sát, cao hexane... Sinh học k37 DANH SÁCH CÁC BẢNG VÀ SƠ ĐỒ Bảng 4.1: Hiệu suất chiết cao của 3 bộ phận rễ, thân và lá cỏ mực 27 Bảng 4.2: Hoạt tính kháng E coli của các loại cao thân với kháng sinh thƣơng mại 28 Bảng 4.3: Hoạt tính kháng P aeruginosa của các loại cao thân với kháng sinh thƣơng mại 31 Bảng 4.4: Hoạt tính kháng S aureus của các loại cao thân với kháng sinh thƣơng mại ... phân đoạn (hexane, chloroform, ethyl acetate) 3.4.2 Để quá trình khảo sát hoạt tính kháng khuẩn của các hợp chất được ly trích từ thân cỏ mực được chính xác, các cao chiết cần phải được đảm bảo cô quay thật đặc Quá trình ly trích các cao phân đoạn từ cao tổng cần được thực hiện theo đúng thứ tự các loại dung môi, đầu tiên là hexane rồi đến chloroform và cuối cùng là ethyl acetate Trước khi điều chế các. .. aureus và Vibrio parahaemolyticus của cao thân cây cỏ mực ở 5 nồng độ: 8 µg/ml, 16 µg/ml, 32 µg/ml, 64 µg/ml và 128 µg/ml ● Xác định loại cao thân có hiệu quả kháng khuẩn tối ưu nhất đối với từng loại vi khuẩn khảo sát ● So sánh hoạt tính kháng khuẩn cao chiết thân cây cỏ mực với một số kháng sinh thương mại phổ biến 2 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 Chƣơng 2 LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Các khái... Nam, cây cỏ mực còn có thể phát triển tốt ở một số nước châu Á và châu Âu 2.3.3 Khả năng kháng khuẩn của các hợp chất bên trong cỏ mực Các bộ phận của cỏ mực như rễ, thân, lá đều có chứa các hợp chất hữu cơ như: sterol, tanin, glycosid, flavonoid, riêng alkaloid chỉ có trong thân và lá 14 Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 Các cao eter dầu hỏa và cao ethanol của phần trên mặt đất cây cỏ mực đều... CÂY CỎ MỰC (Eclipta alba) là một vấn đề mang tính cấp thiết trong cuộc sống hiện nay Từ kết quả mong muốn có được sẽ làm tiền đề cho những nghiên cứu tiếp theo về khả năng kháng khuẩn của các các cơ quan còn lại cây cỏ mực, làm giảm nhẹ nỗi lo về dịch bệnh trên người và gánh nặng kinh tế quốc gia 1.2 Mục tiêu đề tài: ● Tách chiết các hợp chất bên trong thân cây cỏ mực ● Khảo sát hoạt tính kháng Escherichia... 33 Bảng 4.5: Hoạt tính kháng V parahaemolyticus của các loại cao thân với kháng sinh thƣơng mại 35 Sơ đồ 3.1: Quy trình xử lý nguyên liệu và điều chế cao methanol cỏ mực 20 Sơ đồ 3.2: Quy trình điều chế các cao phân đoạn 23 vi Luận văn tốt nghiệp Đại học Sinh học k37 TÓM TẮT Cỏ mực sau khi được thu hái ở huyện Cờ Đỏ, Thành phố Cần Thơ được tách lấy phần thân, sấy khô và xử lý qua... môi như methanol, hexane, chloroform và ethyl acetate để có được cao tổng (methanol) và các cao phân đoạn Hoạt tính kháng khuẩn của các cao chiết được thực hiện trên các đối tượng: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus và Vibrio parahaemolyticus ở 5 nồng độ: 8 µg/ml, 16 µg/ml, 32 µg/ml, 64 µg/ml và 128 µg/ml bằng phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch Kết quả khảo sát cho thấy,... hexane Các hợp chất không tan trong hexane Ly trích trong chloroform Các hợp chất tan trong chloroform Các hợp chất không tan trong chloroform Ly trích trong ethyl acetate Các hợp chất tan trong ethyl acetate Các hợp chất không tan trong ethyl acetate Cô quay + thu hồi dung môi Cao hexane 3.4.3 Cao chloroform Cao ethyl acetate Phƣơng pháp khảo sát khả năng kháng khuẩn của các cao thân ly trích đƣợc từ cây ... chit cao ca b phn r, thõn v lỏ c mc Trng lng mu ti (g) Trng lng cao (g) Hiu sut (%) Cao r 2.000 40 Cao thõn 12.000 85 0,7 Cao lỏ 10.000 90 0,9 Tờn cao Trong s cỏc loi cao methanol, cao methanol. .. khỏng E coli cao methanol thõn c sp xp theo chiu tng dn nng A: Cao methanol thõn c mc nng àg/ml B: Cao methanol thõn c mc nng 16 àg/ml C: Cao methanol thõn c mc nng 32 àg/ml D: Cao methanol. .. àl 500 àl 500 àl 500 àl Cao c mc 500 àl methanol ng 500 àl methanol ng 500 àl methanol 900 àl methanol ng 500 àl methanol 900 àl methanol ng 900 àl 1000 àl methanol methanol ng ng ng ng