Đang tải... (xem toàn văn)
Phòng trừ sinh học là một trong những chiến lược quan trọng để phòng trừ bệnh có nguồn gốc từ đất. Trong đó, nhóm vi khuẩn vùng rễ kích thích tăng trưởng (plant growth promoting rhizobacteria = PGPR), nhất là nhóm vi khuẩn phát huỳnh quang Pseudomonas fluorescens, vi khuẩn Bacillus subtilis…được chú ý khai thác và có nhiều ứng dụng trong sản suất (Nelson, 2004). Vì vậy đề tài: “ Đánh giá khả năng kích thích tăng trưởng cây ớt và khả năng đối kháng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum, nấm Fusarium oxysporrum của một số chủng PGPR trong điều kiện phòng thí nghiệm”, là việc làm cần thiết.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN BẢO VỆ THỰC VẬT HUỲNH THỊ NGỌC HÂN ĐỀ TÀI “ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KÍCH THÍCH TĂNG TRƯỞNG CÂY ỚT VÀ ĐỐI KHÁNG VỚI VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM GÂY BỆNH HÉO XANH VÀ NẤM FUSARIUM OXYSPORUM GÂY BỆNH HÉO RŨ CỦA MỘT SỐ CHỦNG VI KHUẨN VÙNG RỄ TRONG ĐIỀU KIỆN PHÒNG THÍ NGHIỆM.” LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KỸ SƯ NÔNG HỌC Tháng 05/2008 ĐẶT VẤN ĐỀ Ớt cay (Capsicum frutescens L., thuộc họ Cà Solanaceae) loại rau gia vị gần thiếu bửa ăn ngày gia đình Việt Nam, với tiềm xuất nay, ớt loại ý phát triển nhiều nơi ĐBSCL Tuy nhiên việc canh tác ớt thường gặp nhiều khó khăn, nguyên nhân bệnh héo xanh vi khuẩn Ralstonia solanacearum bệnh héo rũ nấm Fusarium oxysporum gây hại, làm ảnh hưởng đến phẩm chất, suất hiệu canh tác Bệnh vi khuẩn R solanacearum loại bệnh hại quan trọng cho nhiều loại trồng vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới vùng có khí hậu ấm áp giới (Brabury, 1986), Việt nam vùng phân bố (CMI, 1977) Bên cạnh đó, bệnh nấm Fusarium oxysporum tác nhân gây hại nghiêm trọng cho loài trồng cạn: ớt, cà chua, khoai tây, thuốc lá…Bệnh xảy nơi đất ẩm sử dụng nguồn phân hữu chưa hoai mục (Mai Văn Quyền, ctv., 1995) Việc phòng trị chúng thường khó khăn vi khuẩn, nấm có phạm vi ký sinh hoại sinh nên lưu tồn hữu hiệu đất (Đỗ Tấn Dũng, 2001) Từ xưa đến nay, người trồng rau dựa vào thuốc hóa học với liều lượng cao để phòng trừ, hiệu mang lại thường không mong muốn, việc luân canh trồng khác họ, chọn giống kháng, sử dụng gốc ghép tốn nhiều chi phí không áp dụng rộng rãi Phòng trừ sinh học chiến lược quan trọng để phòng trừ bệnh có nguồn gốc từ đất Trong đó, nhóm vi khuẩn vùng rễ kích thích tăng trưởng (plant growth - promoting rhizobacteria = PGPR), nhóm vi khuẩn phát huỳnh quang Pseudomonas fluorescens, vi khuẩn Bacillus subtilis…được ý khai thác có nhiều ứng dụng sản suất (Nelson, 2004) Vì đề tài: “ Đánh giá khả kích thích tăng trưởng ớt khả đối kháng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum, nấm Fusarium oxysporrum số chủng PGPR điều kiện phòng thí nghiệm”, việc làm cần thiết CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 1.1 ĐẶC TÍNH THỰC VẬT CỦA CÂY ỚT Tên tiếng Anh: Pepper Tên khoa học: Capsicum frutescens L thuộc họ cà solanaceae Cây ớt niên điều kiện tối hảo định ớt nhiều năm Một số đặc điểm ớt có liên quan đến số vi sinh vật đất ghi nhận sau: 1.1.1 Rễ Ban đầu ớt có rễ cọc phát triển mạnh với nhiều rễ phụ Do việc cấy chuyển rễ cọc đứt hệ rễ chùm khoẻ phát triển, nhiều lầm tưởng ớt có hệ rễ chùm (Mai Phương Anh, 1997) Nhờ đặc tính rễ phân nhánh mạnh phát triển thành rễ chùm rễ phân bố vùng đất cày (Trần Thị Ba ctv., 1999) 1.1.2 Thân Ớt thân bụi có hai mầm, có phần gốc thân hoá gỗ, dọc theo chiều dài thân có - cạnh Thân thường mọc thẳng, gặp dạng (giống) thân bò, nhiều cành, cao trung bình 0,5 - 1,5m Thân có lông không lông, kích thước tán thay đổi theo kiện canh tác, giống 1.1.3 Giống Ớt có nhiều loài, dạng ớt địa phương khắp miền đất nước số giống ớt hoá trồng xuất tươi nghiền bột Củng có số giống trồng phổ biến miền trung Sừng Bò, Chìa Vôi ĐBSCL có giống Sừng trâu, Chỉ Thiên Viện nghiên cứu Nông Nghiệp Hà Nội công bố sưu tập với 117 giống nội địa (1987), điều chứng minh nguồn gốc giống ớt phong phú, đa dạng chưa biết đến nước ta Ngày qua trình lai tạo có số giống ớt lai F1 tỏ thích nghi với việc đa canh tác Đồng Bằng Sông Cửu Long (ĐBSCL) giống ớt cay số 20 Giống trồng sản xuất phần lớn giống lai F1 Hầu hết giống nhập từ nước Đài Loan, Trung Quốc, Ấn Độ 1.2 MỘT SỐ BỆNH HẠI QUAN TRỌNG TRÊN ỚT Theo Trần Thị Ba ctv (1999), ớt có số loại sâu bệnh hại quan trọng sau: Bệnh héo vi khuẩn (Bacterial wilt) vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây Vi khuẩn gây hại mạnh điều kiện nhiệt độ ẩm độ cao Vi khuẩn có ký chủ rộng rãi 25 họ thực vật, có nhiều loại trồng như: ớt, cà chua, khoai tây, thuốc lá, cà tím, đậu phộng, chuối, đậu nành , thiệt hại vi khuẩn gây tính toán Thường bị héo chết nhanh không kịp vàng gọi bệnh héo xanh (tươi), hệ thống mạch dẫn hoá nâu phát triển rễ bất định dọc theo thân gia tăng bệnh Cắt ngang thân bệnh dịch nhớt tiết từ bó mach nhúng mặt cắt vào nước vài phút, dòng vi khuẩn màu trắng sữa tuôn chảy từ mặt cắt Bệnh không gây đốm trái Vi khuẩn đất (Soil - borne pathogen) khó phòng trừ Phương pháp hữu hiệu trồng giống kháng nhiên vi khuẩn có nhiều dòng gây hại nên khả kháng giống thay đổi theo điều kiện môi trường Bệnh héo Fusarium nấm Fusarium oxysporum f.sp lycopersici Lá bị bệnh trở nên vàng, héo từ từ, triệu chứng héo bên hay nhánh Bó mạch hoá nâu đậm, hệ thống rễ bị nhiễm không thối rữa Hai dòng sinh lý (race 2) nấm phân biệt tuỳ theo cách gây hại Phương pháp sử dụng giống kháng phương pháp phòng trừ có ý nghĩa thực tiễn Bệnh thối nấm Rhizoctonia solani công cổ thân làm gốc thân teo lại, thối đen Bệnh gây hại vườn ươm đồng (30 ngày sau cấy) Bệnh đen trái nấm Colletotrichum sp có loài Colletotrichum tìm thấy ớt C gllesporiodes, C capsici (2 loài quan trọng nhất), C acertatum C coccodes Vết bệnh có kích thước - cm gây hại chủ yếu trái làm thương phẩm Ở ĐBSCL tháng 7, 8, dương lịch Nấm bệnh tồn lâu đất, hạt bệnh Tuy nhiên, bệnh khó phòng trị mùa mưa bệnh xuất trễ trái chín Hiện biện pháp dung giống kháng ớt hiểm để trồng mùa mưa kinh tế Bệnh mốc sương nấm Phytophthora infestans Mont Nấm gây bệnh tất phận Ban đầu bệnh thường xuất lá, sau lan khắp toàn thối nhũn, gặp thời tiết nắng bệnh chuyển thành khô giòn gẫy Hoa bị bệnh chuyển thành màu nâu rụng Bệnh thường xuất ban đêm có nhiều sương Bệnh virus ớt giống cà chua có khoảng 35 loài virus gây hại cà tìm thấy (Green Kim 1998, Martelli; Quacquarelli, 1983), có bệnh quan trọng sau: TMV (Tomato mosaic virus) có nhiều dạng gây hại cà chua làm thiệt hại suất 20 - 30% đến 50% Bệnh làm màu lá, làm xanh vàng loan lỗ (mosaic), méo mó (leaf distortion) hay nhăn nheo (leaf punckering) Giống kháng mang gen Tm1, Tm2 bán rộng rãi thị trường CMV (Cucumber mosaic virus) truyền chủ yếu rầy Aphis gossypii Myzus persicae Triệu chứng nhận diện CMV làm phiến nhỏ sợi (fern leaf) CMV có nhiều dòng gây bệnh khác CMV RNAL, 2, 3, CMV - S (South African strain) Nhiều loại khác ghi nhận gây hại cà chua TSWV (Tomato spotted wilt virus) làm nghẽn mạch, hoại tử thân trái, gây héo chết TYDV (Tomato Yellow dwarf virus), làm vảnh vặn vẹo Hiện dùng giống kháng, nhổ bỏ bệnh diệt tác nhân truyền bệnh để ngừa virus Bệnh chết nhanh (Choanephora Blight) bệnh nấm Choanephora cucurbitarum gây Bệnh xuất đoạn phân cành xâm nhập phá huỷ mô tế bào bên lan dần lên phần thân gây triệu chứng chết nhánh 1.3 BỆNH HÉO XANH DO VI KHUẨN Do loài vi khuẩn Pseudomonas solanacearum Smith hay Ralstonia solanacearum Smith, 1896, Yabuuchi ctv (1996), (trích Nguyễn Văn Viên, Đỗ Tấn Dũng, 2003) Đây nhóm bệnh có tính phổ biến cục giới hạn vùng ký chủ, vùng khí hậu, địa lý đất đai Trong có loài ưa nóng phổ biến chủ yếu vùng nhiệt đới, nhiệt đới Pseudomonas solanacearum gây héo xanh ớt, cà chua, loại trồng cạn khác (Lê Lương Tề Vũ Triệu Mân, 1999) 1.3.1 Triệu chứng & chẩn đoán Bệnh héo xanh ớt cà chua xuất hiện, gây hại giai đoạn vườn ươm giai đoạn ruộng trồng sản xuất, bệnh thường phát sinh gây hại nặng lớn giai đoạn hình thành trái non - già thu hoạch (Nguyễn Văn Viên ctv., 2003) Bệnh héo xanh vi khuẩn hại họ cà, họ đậu , xâm hại chủ yếu hệ thống mạch dẫn thân rễ, cành, phá huỷ bít tắc bó mạch dẫn trở thành nâu, đen gây cản trở vận chuyển nước, chất dinh dưỡng làm héo rũ nhanh chóng số lá, cành sau toàn héo rũ chết khô (Lê Lương Tề - Vũ Triệu Mân, 1999) Theo Phạm Hoàng Oanh (2001), bệnh héo xanh ớt xảy rải rác từng nhóm ruộng Triệu chứng già bên bị héo nhẹ, non bị héo trước, sau ngày héo không vàng Nguyễn Văn Viên Đỗ Tấn Dũng (2003), quan sát bị nhiễm bệnh phần gốc sát mặt đất vỏ thân sù sì, nét đặc trưng bệnh héo xanh vi khuẩn Nếu bệnh phát chậm có nhiều rễ bất định xuất thân gần gốc Chẻ thân phần gốc gần rễ ta thấy mạch nhựa biến thành màu xám đất đến nâu, nên nhúng phần bị cắt vào nước ta thấy dòng vi khuẩn tuôn có màu trắng sữa Đây phương pháp chẩn đoán nhanh bệnh héo xanh vi khuẩn gây Theo Lê Lương Tề ctv (1999), bệnh nặng trồng độc canh ớt với loài trồng cạn ký chủ bệnh đất cát nhẹ có nhiễm nhiều tuyến trùng 1.3.2 Phân loại hình thái đặc điểm khuẩn lạc Vi khuẩn có hình que, đầu tròn, ngắn, có - chiên mao đỉnh đầu Trên môi trường nhân tạo, khuẩn lạc có màu trắng kem, thời gian sau có màu nâu đỏ, kích thước 0,4 - 0,8 m (Lê Lương Tề, 2002) Loài vi khuẩn Pseudomonas solanacearum phân hoá thành nhiều races biovars khác tuỳ theo loài ký chủ, vùng địa lý đặc điểm sinh thái, tính độc gây bệnh Cho đến dựa sở phân loại khác để phân loại chúng: Các pathovars, races (chủng, nhóm nòi) phân định sở phổ ký chủ chúng vùng địa lý phân bố (Buddenhagen, 1962) Race 1: có phổ ký chủ rộng, họ cà, họ đậu (ớt, cà chua, khoai tây, lạc ) phân bố vùng đất thấp, nhiệt đới cận nhiệt đối (Biovar1, 4) Race 2: gây bệnh chuối (tam bội) Heliconia, phân bố vùng nhiệt đới châu Mỹ, Châu Á (Biovar 2) Race 3: chủ yếu hại khoai tây (ớt, cà chua) phân bố chủ yếu vùng nhiệt độ thấp vùng đất núi cao nhiệt đới, cận nhiệt đới (Biovar 2) Race4: hại gừng (Philippin) (Biovar 4) Race 5: hại dâu tằm (Trung Quốc) (Biovar 5) Các biovar phân định sở đặc tính sinh hoá (oxy hoá nguồn hydrate carbon gồm loại đường lactose, maltose, cellobiose loại rượu mannitol, dulcitol, sorbitol (Hayward, 1964) xác định có biovars vùng giới biovar 1, 2, 3, (Lê Lương Tề Vũ Triệu Mân, 1999) Theo Đoàn Thị Thanh ctv (2005), dùng PCR định nhanh tác nhân gây bệnh héo xanh vi khuẩn mô bệnh nhiễm bệnh Kết hợp với sử dụng phân tích sinh hoá xác định vùng ĐBSCL phổ biến gây hại ớt, cà chua dòng sinh học dòng sinh học 4, Race vi khuẩn Ralstonia solanacearum Smith Sự đa dang tính gây bệnh Khi phân lập chủng vi khuẩn từ ớt, cà chua, khoai tây, lạc, thuốc , cà nhiễm bệnh héo xanh thể tính độc khả gây bệnh khác loài ký chủ Tuy nhiên chủng vi khuẩn thể tính gây bệnh khác lây nhiễm loài ký chủ (Đỗ Tấn Dũng, 2002) Dựa kết nghiên cứu trường Đại Học Nông Nghiệp I – Hà Nội, viện nghiên cứu ăn quả, viện di truyền Nông Nghiệp, viện kỹ thuật nông nghiệp Việt Nam mười năm qua cho thấy quần thể ký sinh vi khuẩn gây bệnh héo xanh đồng Sông Hồng số tỉnh Miền Bắc Việt Nam bao gồm dòng sinh học 1, dòng sinh học dòng sinh học thuộc Race (theo hệ thống phân chủng (Hayward, 1964) phổ biến chiếm ưu dòng sinh học với dòng có tính độc cao vùng dòng BN.1 sử dụng để nghiên cứu lây nhiễm nhân tạo đánh giá giống kháng tập đoàn ớt, cà chua nước nhập nội từ trung tâm rau châu Á (AVRDC) (Lê Lương Tề, 2002; trích Trần Trọng Cần, 2007) 1.3.3 Đặc điểm sinh học sinh thái học Phạm Văn Kim (1999), nhiệt độ thích hợp cho vi khuẩn phát triển 26 30 0C, nhiệt độ tối thiểu 18 oC, tối đa 37 oC, nhiệt độ làm vi khuẩn chết 52 o C 10 phút Đỗ Tấn Dũng (2004), bệnh phát triển gây hại điều kiện khí hậu: gió, bão nhiều, bệnh thường phát sinh thiệt hại nặng chân đất cát, đất thịt nhẹ, đất bị nhiễm bệnh… Theo Tạ Thu Cúc (2002), bệnh thích hợp phạm vi pH tương đối rộng, độ pH phù hợp cho bệnh phát triển 6,9 - 7,2 Vi khuẩn gây bệnh giữ lại mô tế bào bị bệnh đến tháng, hạt số ngày đất 14 tháng Vi khuẩn sống lâu đất ẩm chóng chết đất khô Chúng phát triển nhiệt độ cao cà ẩm, sau xâm nhập vào mô bào qua chỗ bị thương Bệnh phát triển mạnh 35oC thấp 15 oC cao 42 oC (Đặng Thái Thuận, Võ Văn Đực, 1980) 1.3.4 Sự xâm nhiễm, phát sinh bệnh, khả lây lan lưu tồn mầm bệnh Theo Phạm Văn Kim (2000), héo vi khuẩn Ralstonia solanacearum xâm nhiễm gây hại theo cách: Có thể chất nhầy bên vi khuẩn (các polysaccharid có phân tử to làm tăng độ nhờn nước muối khoáng rễ hấp thu, từ làm giảm đáng kể lượng nước muối khoáng cung cấp cho làm cho héo chết) Ngoài chất nhờn phân tử to nên không lọt qua lỗ sàng mạch mộc, bị giữ lại nghẽn mạch mộc, từ nước muối khoáng không di chuyển lên phía cung cấp đầy đủ cho phần cây, bị héo chết thiếu nước Sau xâm nhiễm vào vi khuẩn lan riêng theo bó mạch sinh sản phát triển, sản sinh men, độc tố dẫn đến phá hủy tế bào tắc nghẽn mạch dẫn đến cản trở mạch dẫn nước, chất dinh dưỡng nhựa gây héo nhanh chết… Nghiên cứu mặt sinh học phân tử cho thấy tính gây bệnh dòng vi khuẩn có độc tính Pseudomonas solanacearum định gen độc hrp Những vi khuẩn xâm nhiễm vào rễ, thân, cuống qua vết thương giới nhổ đem trồng, côn trùng tuyến trùng tạo ra, chăm sóc vun trồng… Vi khuẩn xâm nhập vào qua lỗ hở tự nhiên, qua bì khổng (khoai tây) Sau xâm nhập vào rễ lan tới mạch dẫn xylem, sinh sản phát triển Sản sinh men pectinaza cellulaza để phân hủy mô, sinh độc tố dạng exopolysaccarit (EPS) lipopolysaccaritb (LPS) bít tắc mạch dẫn cản trở vận chuyển nước nhựa cây, dẫn tới héo nhanh chóng EPS tổng hợp nhờ có nhóm gen eps.A, eps.B OPS (Cook, Secqueira, 1991) Dựa nghiên cứu Đỗ Tấn Dũng (2004), phương pháp lây nhiễm bệnh héo xanh vi khuẩn hại ớt, cà chua điều kiện nhân tạo phương pháp tiêm vào nách tạo vết thương rễ cho tỷ lệ bệnh cao so với phương pháp nhúng rễ nhiễm hạt giống ớt, cà chua kháng nhiễm héo xanh vi khuẩn Mặt khác, vi khuẩn gây bệnh loài ký sinh đa thực với nhiều chủng nòi khác nhau, phân bố rộng, xâm nhiễm gây hại hệ thống bó mạch, mạch dẫn, truyền lan đồng ruộng nhiều đường khác (Nguyễn Văn Viên, Đỗ Tấn Dũng, 2003) Bệnh héo xanh vi khuẩn lan truyền đồng ruộng từ sang khác, từ ổ dịch sang vùng khác nhiều đường như: nước, mưa, không khí, hạt giống… Ngoài lây qua kỷ thuật chăm sóc người dân (Nguyễn Văn Viên, 2003; Phạm Văn Kim, 1999) Héo xanh vi khuẩn Pseudomonas solanacearum có khả tồn lâu dài đất, tàn dư thực vật, vật liệu giống nhiễm bệnh phổ biến ký chủ phụ thuộc họ cà, đậu, bầu bí… Nguồn bệnh chủ yếu đất, tàn dư, hạt giống (Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề, 1998) Tuy nhiên nguồn bệnh tồn nhiều dạng khác nhau, vi khuẩn tồn lâu dài đất, tài dư bệnh, giống nhiễm bệnh (hạt, giống…) ký chủ phụ (Phạm Văn Kim, 1999) 1.3.5 Biện pháp phòng bệnh héo xanh ớt Bón phân đầy đủ cân đối N - P - K, vôi bột nhằm hạn chế nguồn bệnh cải tạo đất, cần nhổ bỏ héo xanh sớm, giảm bớt nguồn bệnh lan truyền (Vũ Triệu Mân Lê Lương Tề, 1998) 10 Bảng 3.6 Bán kính vòng vô khuẩn số chủng PGPR với vi khuẩn Ralstonia đợt STT Chủng vi khuẩn Tbt1.18.1et Tbt1.6.4tf T4.6t P41.1t Tbt2.1.1et Tbt1.12.7et P41.11.1.2 Tbt1.17.1e P4.10.7t 10 Tbt1.18.5et 11 Tbt1.18.5.1et 12 Tbt1.17.1.1e 13 Tbt1.12.7.1et 14 P4.10.18t 15 P24.1tf 16 P4.6.2t 17 Tbt1.1.18.2t 18 Tbt1.18.2t 19 Tbt1.18.6etf 20 P4.8.5.1t 21 Tbt1.18.6.1et 22 T4.6.1 23 Tbt1.9.5e 24 Tbt1.17.1e 25 Tbt2.1.2t 26 Tbt9e 27 Tbt1.9.5.1e 28 Tbt1.18.7et 29 P4.8.5.2t 30 Tbt1.17.2 31 DC CV(%) Ý nghĩa F NSKT 0,6 a 0,3 c-f 0,4 b-d 0,0 g 0,3 b-d 0,3 c-e 0,0 g 0,3 c-e 0,2 c- f 0,3 bc 0,0 g 0,2 f 0,3 c-e 0,0 g 0,3 b-d 0,2 d-f 0,6 a 0,2 d-f 0,2 d-f 0,2 ef 0,5 ab 0,1 f 0,1 f 0,0 g 0,2 d-f 0,0 g 0,2 d-f 0,0 g 0,3 d-f 0,3 c-f 0,0 g 8.34 ** NSKT 1,7 a 0,5 d-g 0,5 d-g 0,0 h 0,4 d-g 0,3 e-g 0,2 e-g 0,4 d-g 0,3 d-g 1,1 b 0,3 f-g 0,4 d-g 0,5 d-g 0,2 g 0,5 d-g 0,3 fg 1,1 b 0,3 e-g 0,6 c-f 0,3 fg 0,9 bc 0,3 e-g 0,3 e-g 0,2 g 0,4 d-g 0,6 c-e 0,3 e-g 0,3 e-g 0,7 cd 0,5 d-g 0,0 h 10,66 ** 2,0 0,6 0,5 0,0 0,5 0,4 0,4 0,5 0,4 1,7 0,6 0,6 0,7 0,4 0,8 0,5 1,4 0,5 0,8 0,4 1,1 0,4 0,4 0,4 0,6 0,7 0,5 0,9 1,1 0,9 0,0 NSKT a d-i e-i j g-i f-i h-i f-i g-i ab e-i d-i d-i f-i d-h f-i bc f-i d-h i c-e g-i g-i g-i f-i d-i f-i d-g cd d-f j 11,95 ** NSKT 2,1 a 0,7 c-f 0,6 c-f 0,3 F 0,5 ef 0,5 ef 0,5 ef 0,5 ef 0,4 ef 1,9 a 0,7 c-f 0,7 c-f 0,7 c-f 0,4 ef 0,8 b-f 0,5 ef 1,4 b 0,6 d-f 0,9 b-e 0,4 f 1,2 bc 0,5 ef 0,4 ef 0,4 ef 0,6 ef 0,8 b-e 0,5 ef 0,9 b-e 0,9 b-e 1,1 b-d 0,0 g 13,17 ** Trung bình 1,6 a 0,5 d-g 0,5 d-g 0,1 j 0,4 e-h 0,4 e-h 0,3 j 0,4 e-h 0,3 e-h 1,3 ab 0,4 hi 0,5 e-h 0,5 d-f 0,3 i 0,6 d-f 0,4 e-h 1,1 a-c 0,4 e-h 0,6 de 0,3 e-i 0,9 b-d 0,3 e-h 0,3 e-h 0,3 i 0,4 e-h 0,5 f-i 0,4 e-h 0,5 g-i 0,7 c-e 0,7 c-e 0,0 k 27,41 ** Ghi chú: - Trong cột, số trung bình nghiệm thức theo sau (các) chữ giống không khác biệt có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 1% theo phép thử DMRT - **: Khác biệt có ý nghĩa thống kê 1% - Số liệu chuyển sang can(x+0.5) dối với bán kính vô khuẩn phân tích thống kê 3.2.1 Đợt Với 10 chủng vi khuẩn: kết thí nghiệm trình bày bảng 3.7 cho thấy chủng vi khuẩn biểu đối kháng chậm đợt vào thời điểm 48 sau thử Tương tự đợt chủng vi khuẩn ngày biểu 39 đối kháng mạnh thời gian quan sát lâu Điều thể rõ qua bán kính vòng vô khuẩn hoàn toàn khác biệt thống kê so với đối chứng mức ý nghĩa 1% Tuy nhiên có chủng: T13.3f, P4.1, T1.12.7.1et, T18.3, T2.7t biểu sớm có bán kính vòng vô khuẩn cao 48 sau thử (0,5 – 0,8) cm trì khả đối kháng bền, cao so với chủng lại đến 10 NSKT (1,7 – 1,9 cm) Bảng Bán kính vùng ức chế vi khuẩn gây bệnh với vi khuẩn Ralstonia đợt Chủng vi khuẩn T1.12.7.1et T13.4 T1.12f P4.1 T13.3f T4.6t T2.7t 11.1.4f 11.1.4fa T18.3 DC CV(%) Ý nghĩa F NSKT NSKT NSKT 0,8 a 1,0 a 1,2 ab 0,4 a 0,5 a 0,6 b 0,3 a 0,5 a 0,6 ab 0,6 a 0,8 a 1,1 ab 0,5 a 1,1 a 1,3 a 0,4 a 0,5 a 0,5 b 0,3 a 0,6 a 1,0 ab 0,4 a 0,5 a 0,8 ab 0,4 a 0,6 a 0,7 ab 0,5 a 0,7 a 1,0 ab 0,0 b 0,0 b 0,0 c 38,00 ** NSKT 10 NSKT Trung bình 1,5 ab 1,8 ab 1,3 a 0,9 b 1,1 c 0,7 d 0,9 ab 1,2 a-c 0,7 b-d 1,3 ab 1,7 a-c 1,1 a 1,8 a 1,9 a 1,3 a 0,7 ab 0,8 bc 0,6 cd 1,4 ab 1,5 a-c 1,0 a-c 1,0 ab 1,1 a-c 0,7 a-c 1,1 ab 1,2 a-c 0,8 a-c 1,3 ab 1,4 a-c 1,0 ab 0,0 c 0,0 0,0 d e 27,90 26,40 21,59 21,26 28,53 ** ** ** ** ** Ghi chú: - Trong cột, số trung bình nghiệm thức theo sau (các) chữ giống không khác biệt có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 1% theo phép thử DMRT - **: Khác biệt có ý nghĩa thống kê 1% - Số liệu chuyển sang log(x+10) bán kính vô khuẩn phân tích thống kê 3.3 Thí nghiệm 3: Đánh giá khả đối kháng chủng vi khuẩn PGPR với nấm Fusarium oxysporum đĩa petri môi trường PDAP Thí nghiệm tiến hành thử đối kháng với 44 chủng vi khuẩn phân lập từ vùng rễ ớt, cà chua….dùng để đối kháng với nấm Fusarium oxysporum môi trường PDAP chia thành đợt thử nghiệm sau: 40 3.3.1 Thí nghiệm đợt Thực với 16 chủng vi khuẩn kết khảo sát bảng 3.8 ngày sau thử có chủng: P41.1t, Tbt1.17.1.1e, T4.6.3t, Tbt1.18.1et, Tbt1.17.1e, P4.10.7t, Tbt1.18.2t, Tbt1.18.5et, Tbt1.18.5.1et biểu đối kháng hòan toàn khác biệt thống kê so với đối chứng mức ý nghĩa 1% Ở thời điểm có chủng: Tbt1.17.1.1e, P41.1t, Tbt1.18.1et có hiệu suất đối kháng là: 35,7%, 22,8%, 19% mạnh với nấm Fusarium oxysporum với bán kính vành khăn vô khuẩn từ 0,2 - 0,6 cm Vào ngày sau thử (NSKT) có chủng: P41.1t, Tbt1.18.5et có bán kính vành khăn vô khuẩn (0,7, 0,2cm) tiếp tục trì đến 10 NSKT (0.7, 0.4 cm), có bán kính vành khăn vô khuẩn ngày tăng ức chế phát triển nấm chủng: T4.6t, P4.10.7t, Tbt1.18.5.1et, Tbt1.17.1.1e có bán kính vành khăn vô khuẩn giảm dần chứng tỏ không khả đối kháng hay biểu đối kháng yếu Nhìn chung trung bình lần khảo sát khác biệt có ý nghĩa thống kê 1%, có chủng: Tbt1.17.1.1e, P41.1t với bán kính vành khăn vô khuẩn cao bền lần lược là: 0,4 – 0,7 cm thể rõ qua hiệu suất đối kháng cao (46,7%, 49,6%) cho thấy chủng có đối kháng mạnh Tóm lại qua kết cho thấy hiệu suất đối kháng chủng vi khuẩn gia tăng cao theo ngày quan sát có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Vào thời điểm 10 NSKT có chủng: P41.1t, Tbt1.17.1.1e, Tbt1.18.1t, Tbt1.18.2t, Tbt1.17.1e, Tbt1.18.5et có hiệu suất đối kháng 67,7%, 57,9%, 57,8%, 56,7% 53,8%, 52,4% ngững chủng có triển vọng áp dụng vào sản xuất tới Như khả đối kháng trì khả đối kháng chủng khác biểu nhiều mức độ khác Có chủng đối kháng lúc đầu yếu sau lại đối kháng bền 10 NSKT (P41.1t) 41 Bảng Khả đối kháng số chủng vi khuẩn PGPR nấm Fusarium đợt Bán kính vành khăn vô khuẩn (cm) Chủng vi khuẩn NSKT NSKT 10 NSKT Tbt1.18.1et T4.6.3t P41.1t Tbt2.1.1et Tbt1.12.7et P41.11.2 Tbt1.17.1e P4.10.7t Tbt1.18.5et Tbt1.18.5.1et Tbt1.17.1.1e Tbt1.12.7.1et P4.10.18t P24.1tf P4.6.2t Tbt1.18.2t DC CV(%) Ý nghĩa F 0,2 0,4 0,6 0,0 0,0 0,0 0,2 0,2 0,1 0,2 0,6 0,0 0,0 0,0 0,0 0,2 0,0 6,94 ** c b a d d d bc bc c bc a d d d d bc e 0,1 c 0,1 cd 0,7 a 0,0 e 0,0 e 0,0 e 0,1 c 0,1 c 0,1 c 0,0 de 0,4 b 0,0 de 0,0 de 0,0 de 0,0 de 0,1 c 0,0 f 4,89 ** 0,1 0,0 0,7 0,0 0,0 0,0 0,2 0,0 0,2 0,0 0,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,2 0,0 5,08 c d a d d d b d b d b d d d d b e Trung bình 0,1 0,1 0,7 0,0 0,0 0,0 0,2 0,1 0,1 0,1 0,4 0,0 0,0 0,0 0,0 0,2 0,0 NSKT Hiệu suất đối kháng (%) NSKT 10 NSKT Trung bình 7,15 b 19,0 d 3,6 ab 22,8 cd 3,0 d 1,2 d 0,6 b 13,6 bc 12,2 bc 12,2 bc 11,0 a 35,7 cd 2,9 d 0,5 cd 2,3 d 0,5 b 17,3 d 0,0 49,10 a 46,0 bc 18,0 a 58,3 c-e 2,3 b-e 5,4 c-e 3,6 a 44,4 a 43,1 a 45,0 b 18,6 a 46,4 13,6 b-d de 0,7 de 0,7 b-d 9,5 a 39,7 e 0,0 34,35 57,8 ab 25,2 cd 67,7 a e 1,1 e 1,1 12,1 de 53,8 ab 44,9 ab 52,4 ab 7,4 de 57,9 ab 21,3 cd e 1,2 9,2 de 34,0 bc 56,7 ab e 0,0 36,32 ** ** ** ** cd cd a f f f c cd c de b ef f f ef c g ** ab 40,9 cd 15,6 a 49,6 de 2,1 c-e 2,6 c-e 5,4 ab 37,3 b 33,4 ab 36,6 c 12,3 ab 46,7 cd 12,6 e 0,8 c-e 4,1 cd 14,7 ab 37,9 e 0,0 51,13 ** Ghi chú: - Trong cột, số trung bình nghiệm thức theo sau (các) chữ giống không khác biệt có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 1% theo phép thử DMRT - **: Khác biệt có ý nghĩa thống kê 1% - Số liệu chuyển sang can(x+0.5 42 3.3.2 Thí nghiệm đợt Kết khảo sát bảng 3.9 cho biết vào NSKT có chủng: T18.3, Tbt1.17.2, Tbt9e, Tbt9e.18.6.1et, T13.3f, P4.1, T4.6.1, 11.1.4fa, Tbt2.1.2t biểu đối kháng với bán kính vành khăn vô khuẩn từ 0,1 - 0,4 cm thể hiệu suất đối kháng cao 30% có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% Những ngày sau: 8, 10 NSKT khả đối kháng chủng vi khuẩn giảm dần qua bán kính vành khăn vô khuẩn 0,1 - 0,2 cm chủng: T18.3, P4.1, Tbt1.17.2, Tbt9e , T4.6.1, Tbt1.18.6.1et với hiệu suất đối kháng mức độ khác nhau: 50,3%, 67,1%, 68,6%, 49,6%,60,9%, 61,2% có khác biệt thống kê 1% Như khả đối kháng chủng vi khuẩn với nấm Fusarium oxysporum có khác biệt trì đối kháng đến 10 NSKT thể qua bảng 3.9 43 Bảng 3.9 Khả đối kháng số chủng vi khuẩn PGPR nấm Fusarium đợt Bán kính vành khăn vô khuẩn (cm) Chủng vi 10 khuẩn NSKT 8NSKT NSKT a Tbt1.18.6.1et 0,3 0,2 a 0,1 ab T4.6.1 0,3 a-c 0,1 ab 0,1 a-c Tbt2.1.2t 0,1 cd 0,0 c 0,0 d Tbt9e 0,3 ab 0,1 a-c 0,1 a-c d Tbt1.9.5.1e 0,0 0,0 c 0,0 d Tbt1.18.7et1 0,0 cd 0,0 bc 0,0 cd a Tbt1.17.2 0,3 0,0 c 0,2 a P4.1 0,2 a-c 0,1 ab 0,1 b-d T13.3f 0,2 a-c 0,1 ab 0,0 cd T4.6t 0,0 cd 0,0 c 0,0 d d 11.1.4f 0,0 0,0 c 0,0 d 11.1.4fa 0,1 b-d 0,0 bc 0,0 d a T18.3 0,4 0,1 ab 0,1 b-d e DC 0,0 0,0 d 0,0 e 8,40 7,15 5,95 CV(%) Ý nghĩa F ** ** ** Trung bình a 0,19 a 0,14 c 0,02 a 0,14 c 0,00 c 0,02 a 0,17 a 0,13 0,10 ab c 0,01 c 0,00 0,03 bc a 0,17 d 0,00 8,84 ** NSKT 39,5 ab 41,5 ab 36,7 ab 23,6 bc c 8,7 c 9,4 39,6 ab a 47,2 43,1 ab 22,4 bc c 14,6 c 15,5 33,3 ab d 0,0 27,49 ** Hiệu suất đối kháng (%) 10 8NSKT NSKT Trung bình a ab 50,6 61,2 a 50,4 a ab 50,3 60,9 a 50,9 ab a a-c 45,8 55,4 46,0 b c 29,5 49,6 a 34,3 c e 6,6 10,3 b 8,6 c e 9,8 6,7 b 8,6 a ab 58,0 68,6 a 55,4 a a 58,3 67,1 a 57,6 a ab 54,3 65,1 a 54,1 c 38,1 ab 49,5 a 36,7 c de 13,4 14,3 b 14,1 b d 27,2 12,2 b 18,3 bc 42,9 ab 50,3 a 42,2 d f 0,0 0,0 c 0,0 22,97 23,01 26,56 ** ** ** Ghi chú: - Trong cột, số trung bình nghiệm thức theo sau (các) chữ giống không khác biệt có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 1% theo phép thử DMRT - **: Khác biệt có ý nghĩa thống kê 1% - ns: khác biệt ý nghĩa so với đối chứng phân tích thống kê mức ý nghĩa 5% - Số liệu chuyển sang can(x+0.5) dối với bán kính vô khuẩn phân tích thống kê 44 3.3.3 Thí nghiệm đợt Được tiến hành thử với 15 chủng vi khuẩn qua NSKT khảo sát có 13 chủng ví dụ như: P5.5t2, P4.6t4 , P1.4t2, P5.1et3, P4.1t có biểu đối kháng với bán kính vành khăn vô khuẩn 0,1 - 0,3 cm khác biệt thống kê so với đối chứng mức ý nghĩa 5% Ở thời gian sau: 8, 10 NSKT chủng vi khuẩn không biểu đối kháng dẫn đến không khác biệt thống kê Riêng chủng P3.2t4 trì khả đối kháng cao với hiệu suất đối kháng 66,1% sau 10 NSKT có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% thể qua bảng 3.10 45 Bảng 3.10 khả đối kháng số chủng vi khuẩn PGPR nấm Fusarium đợt Bán kính vành khăn vô khuẩn (cm) 10 Chủng vi khuẩn NSKT NSKT NSKT P3.2t4 0,2 a 0,2 a 0,2 a P2et1 0,1 ab 0,0 b 0,0 b P1et2 0,1 ab 0,0 b 0,0 b P4.3t 0,1 ab 0,0 b 0,0 b P2.6t1 0,1 ab 0,0 b 0,0 b P1.5t1 0,0 b 0,0 b 0,0 b P5.2t1 0,2 a 0,0 b 0,0 b P5.1t3 0,1 ab 0,0 b 0,0 b P5.6t2 0,2 a 0,0 b 0,0 b P1.1t1 0,0 b 0,0 b 0,0 b P4.1t 0,2 a 0,0 b 0,0 b P5.1et3 0,2 ab 0,0 b 0,0 b P1.4t2 0,2 ab 0,0 b 0,0 b P4.6t4 0,2 a 0,0 b 0,0 b P5.5t2 0,3 a 0,0 b 0,0 b DC 0,0 c 0,0 c 0,0 c CV(%) 8,35 10,00 10,00 Ý nghĩa F ** ** ** Hiệu suất đối kháng (%) Trung bình 0,18 a 0,04 b 0,04 b 0,04 b 0,04 b 0,00 b 0,07 b 0,03 b 0,08 b 0,00 b 0,07 b 0,05 b 0,05 b 0,06 b 0,08 b 0,00 c 8,47 ** NSKT 35,5 a 20,5 ab 15,7 bc 9,2 b-d 9,1 b-d 3,2 de 9,5 b-d 7,0 b-d 6,1 b-d 3,4 c-e 5,3 c-e 7,2 b-d 14,5 b-d 9,0 b-d 5,6 b-d 0,0 e 50,47 ** NSKT 51,1 a 23,8 b 11,8 c 1,3 e-g 2,7 d-g 0,8 e-g 0,8 e-g 0,8 e-g 3,3 d-g 2,4 d-g 13,3 cd 8,3 c-f 8,6 c-e 2,7 d-g 0,7 fg 0,0 g 49,38 ** 10 NSKT 66,1 a 12,1 bc 4,6 cd 4,1 cd 4,6 cd 2,9 c-e 1,2 de 1,2 de 1,3 de 3,7 c-e 9,2 b-d 13,7 bc 17,0 b 10,8 bc 4,9 cd 0,0 e 44,58 ** Trung bình 50,9 a 18,8 b 10,7 cd 4,9 ef 5,5 d-f 2,3 f 3,8 ef 3,0 ef 3,6 ef 3,2 ef 9,3 c-e 9,7 c-e 13,4 bc 7,5 c-f 3,7 ef 0,0 g 51,42 ** Ghi chú: - Trong cột, số trung bình nghiệm thức theo sau (các) chữ giống không khác biệt có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 1% theo phép thử DMRT - **: Khác biệt có ý nghĩa thống kê 1% - ns: khác biệt không ý nghĩa so với đối chứng phân tích thống kê mức ý nghĩa 5% - Số liệu chuyển sang can(x+0.5) dối với bán kính vô khuẩn phân tích thống kê 46 Dựa đợt thử nghiệm rút kết luận chủng vi khuẩn vùng rễ có khả đối kháng cao với nấm Fusarium oxysprum vào ngày đầu giảm dần theo thời gian quan sát thể rõ qua bán kính vành khăn vô khuẩn Như qua 44 chủng khảo sát đợt có 13 chủng: Tbt1.18.2t, Tbt1.17.1.1e, Tbt1.18.5et, Tbt1.17.1e, P41.1t, Tbt1.18.1et, T18.3, P4.1, Tbt1.17.2, Tbt9e, T4.6.1, Tbt1.18.6.1et, P3.2t4 có khả đối kháng cao bền với nấm Fusarium qua 10 NSKT Bên cạnh có chủng vi khuẩn biểu vựợt trội (P44.1t) với hiệu suất đối kháng cao 67,7% Vì nói khả đối kháng vi khuẩn phụ thuộc nhiều chế nhiều mức độ khác nên việc khảo sát chế đối kháng chúng có ý nghĩa việc tìm hiểu sâu chất tính đối kháng ứng dụng chúng hiệu tương lai Mọtt chế đối kháng vi khuẩn nấm có liên quan đến khả tạo chitinase vi khuẩn (Nguyễn Ngọc Dũng ctv., 2003) Tóm lại thí nghiệm khảo sát 10 NSKT đánh giá chung có bán kính vành khăn vô khuẩn mạnh, hiệu suất đối kháng cao dựa thang đánh giá có khác biệt sau: Bacon (2002) - : Không đối kháng hay vùng vi khuẩn gây bệnh bị ức chế +: Đối kháng yếu (bán kính vành khăn vùng vi khuẩn gây bệnh bị ức chế - mm +++: Đối kháng mạnh (bán kính vành khăn ức chế > – 18 mm) ++++: Đối kháng mạnh (bán kính vành khăn ức chế > 18 mm) C: Ức chế tiếp xúc trực tiếp (không có vùng ức chế làm chết khuẩn ty nấm bệnh tiếp xúc) C*: Ức chế mạnh tiếp xúc trực tiếp Noveriza (2004) -: Không đối kháng +: Đối kháng yếu hay hiệu suất đối kháng (HSĐK < 50 % ) ++: Đối kháng trung bình (HSĐK 51 – 60 % ) +++: Đối kháng mạnh (HSĐK 61 – 75 %) 47 ++++: Đối kháng mạnh (HSĐK > 75 %) Như có chủng vùng vi khuẩn ức chế, HSĐK: P4.10.8t Chủng: T4.6.2t, T4.10.7t, T4.6.3t, P24.1tf, Tbt1.12.7et, Tbt1.18.5et, P41.11.1.2, t, T4.6t, 11.1.4fa, 11.1.4f, Tbt1.18.7et1, Tbt1.9.5.1e, P5.5t2, P4.6t4, P1.4t2, P5.1et3, P4.1t, P1.1t1, P5.6t2, P5.1t3, P5.2t1, P1.5t1, P2.6t1, P4.3t, P1et2, P2et1 vùng vi khuẩn ức chế, HSĐK thấp Chủng: T13.3f HSĐK 65.1% Điều giải thích vi khuẩn có tính chất mọc lan nên không thấy vùng ức chế lan đụng sợi nấm tiết chất kháng nấm dẫn đến có hiệu suất đối kháng từ thấp tới cao tùy vào khả chủng vi khuẩn Chủng: Tbt1.18.2t, Tbt1.17.1.1e, Tbt1.18.5et, Tbt1.17.1e, Tbt118.1e, T18.3 có bán kính vành khăn vô khuẩn thấp, HSĐK trung bình Chủng: P4.1, Tbt1.17.2, T4.6.1, Tbt1.18.6.1et, P3.2t4 có bán kính vành khăn vô khuẩn thấp mà HSĐK cao Chủng: P41.1t có bán kính trung bình, HSĐK cao Qua cho thấy chủng vi khuẩn không mọc lan, tiết chất chống lại nấm theo chế Vì nhìn thấy bán kính vành khăn vô khuẩn rõ rệt 3.3.4 Thí nghiệm 4: Đánh giá khả tiết chitinase số chủng vi khuẩn vùng rễ (PGPR) Các chủng vi khuẩn đối kháng với vi khuẩn Ralstonia nấm Fusarium theo nhiều chế khác nhau, chế tiết enzyme chitinase để phân giải chitin – thành phần cấu tạo vách tế bào nấm bệnh (Nguyễn Ngọc Dũng ctv., 2003) Thí nghiệm tiến hành với 10 chủng vi khuẩn vùng rễ kết thấy có chủng: T13.4, T13.3f, T2.7t, 11.1.4f, P4.8.5t, T4.6t biểu khả tiết chitinase môi trường chitin agar Trong có chủng: P4.8.5t, 11.1.4f có bán kính vòng phân giải chitin rộng qua NSKT: 12.7, 12.8 mm có khác biệt thống kê mức ý nghĩa 1% so với đối chứng bảng 3.10 Như vây chủng chiếm tỷ lệ 60% số chủng khảo sát có khả đối kháng mạnh trì khả đối kháng cao qua thời điểm, có chủng T13.3f có bán kính 48 vòng phân giải (8.2 mm) thấp so với chủng lại có khả đối kháng mạnh trình bày qua bảng 3.10 Do đó, chế đối kháng chủng bao gồm khả tiết chitinase hợp chất có khả đối kháng nấm khác (Lemesa, 2006) Bảng 3.11 Bán kính vòng phân giải chitin Chủng Vi khuẩn STT Bán kính vòng phân giải chitin (mm) 2NSKTN 4NSKTN T13.4 7,0 T13.3f 7,7 ab T4.6t 8,3 ab 10,3 ab T2.7t 7,7 ab 9,5 ab 11.1.4f 8,4 ab 10,5 a 12,7 P4.8.5t 9,4 a 10,3 ab Đối chứng 0,0 CV (%) Ý nghĩa F b 6NSKTN 8,2 ab 8,0 c 0,0 b c Trung bình 10,0 ab 8,4 b 8,0 b 12,8 a 10,5 a 11,3 ab 9,5 ab a 10,5 a 11,2 ab 10,3 a 8,2 0,0 b c 0,0 c 8,23 7,08 7,40 9,93 ** ** ** ** Ghi chú: - Trong cột, số trung bình nghiệm thức theo sau (các) chữ giống không khác biệt có ý nghĩa thống kê mức ý nghĩa 1% theo phép thử DMRT - **: Khác biệt có ý nghĩa thống kê 1% Chủng: T4.6t, P4.8.5t phân lập từ mẫu qua xử lý nhiệt (90oC 15 phút) vây kết luận chúng thuộc chi Bacillus Kết phù hợp với Pheban (1997), báo cao vi khuẩn Bacillus cereus strain 65 có khả tạo enzyme chitinase có khối lượng phân tử 36kDa, enzyme chitinase giúp phân giải diacetylchitodibose (trích Nguyễn Thị Thu Nga, 2003) Mặt khác chủng 11.1.4f thuộc nhóm phát huỳnh quang có khả tạo chitinase cao (12,7 mm) Tuy nhiên theo Phạm Văn Kim (2000), vách tế bào nấm gồm nhiều thành phần: glucan, chitin, protein Vi khuẩn đối kháng có khả tiết enzyme có khả phân hủy thành phần glucan hay chitin thành phần protein (proteolytic) vách tế bào nấm gây bệnh 49 Nói tóm lại bán kính vòng phân giải chitin tăng dần theo thời gian quan sát, mức độ phân giải chitin phụ thuộc vào chủng vi khuẩn mà biểu sớm hay muộn Ngoài ra, theo Nelson (2004), chủng vi khuẩn đối kháng với nấm bệnh theo nhiều chế khác sản xuất siderophores, tổng hợp chất trao đổi chống lại nấm chất kháng sinh, enzymes thủy phân vách tế bào nấm (chitinases, glucanases), HCN, giúp ngăn chặn phát triển nấm bệnh, cạnh tranh với mầm bệnh thức ăn chỗ rễ Bảng 3.12 Mối quan hệ vi khuẩn Ralstonia, nấm Fusarium tiết chitinase Chủng vi khuẩn 11.1.4f T2.7t T4.6t T13.3f T13.4 T1.12.7t T1.12f P4.1 11.1.4fa Đối kháng vi khuẩn Đối kháng nấm Phân giải chitin ++ +++ ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ + +++ +++ +++ ++ +++ - + + + ++ + Ghi chú: -: Không đối kháng, không tiết chitinase +: Đối kháng, tiết chitinase yếu ++: Đối kháng, tiết chitinase trung bình +++: Đối kháng, tiết chitinase mạnh 50 Bán kính vành khăn vô khuẩn Vùng định vị Hình 1: Sự đinh vị rễ Hình 2: Bán kính vùng vi khuẩn gây bệnh bị ức chế Hình 3: Bán kính vành khăn vô khuẩn Hình 4: Bán kính vòng phân giải chitin 51 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Vậy có 40 chủng vi khuẩn có khả định vị ớt với nhiều mức độ khác nhau, có 19 chủng có khả định vị cao (+++) chiếm 47,5 % Có 18 chủng vi khuẩn có khả định vị trung bình (++) chiếm 45 % có chủng: P5.5.2t, P3.4.4t, P2.3t có khả định vị thấp (+) chiếm 7.5 % có chủng P2.3t có khả kích thích tăng trưởng rễ mầm vượt trội khả định vị vùng rễ thấp Có chủng: Tbt1.17.2, Tbt1.18.6.1et, Tbt1.18.2t, Tbt1.18.5et, Tbt1.18.1et, T13.3f, P4.1, T1.12.7.1et có khả đối kháng mạnh với vi khuẩn Ralstonia solanacearum với bán kính vòng vô khuẩn rộng từ 1,1 - 2,1 cm thời gian - 10 ngày khảo sát Tuy nhiên chủng: Tbt1.17.2, Tbt1.18.6.1et, Tbt1.18.2t, Tbt1.18.5et, Tbt1.18.1et có khả kích thích tăng trưởng cao Khả đối kháng với nấm Fusarium có 13 chủng vi khuẩn Tbt1.18.2t, Tbt1.17.1.1e, Tbt1.18.5et, Tbt1.17.1e, P41.1t, Tbt1.18.1et, T18.3, P4.1, Tbt1.17.2, Tbt9e, T4.6.1, Tbt1.18.6.1et, P3.2t4 trì khả đối kháng có hệ số đối kháng 50% với nấm Fusarium oxysporum thời điểm 10 NSKT Chủng P41.1t có khả đối kháng cao với hiệu suất đối kháng 67,7% Tuy nhiên, không biểu khả phân giải chitin nên đối kháng theo chế không liên quan đến enzyme chitinase Ngoài có chủng T4.6t, 11.1.4f có khả phân giải chitinase cao với bán kính vòng phân giải 12,8 - 12,7 (mm) NSKT Trong chủng T4.6t biểu đối kháng sớm tốt vi khuẩn Ralstonia solanacearum 52 4.2 Đề nghị Khảo sát khả kích thích tính kháng bệnh héo xanh vi khuẩn Ralstonia solanacearum, bệnh héo rũ nấm Fusarium oxysporum khả đối kháng số chủng vi khuẩn vùng rễ có khả định vị vùng rễ kích thích tăng trưởng có hiệu điều kiện nhà lưới đồng Tìm hiểu thêm chế kích thích tăng trưởng, đối kháng với vi khuẩn nấm cho chủng vi khuẩn có triển vọng 53 [...]... biệt so với lần đánh giá trước 24 2.5 Thí nghiệm 3: Đánh giá khả năng đối kháng của vi khuẩn đối với nấm Fusarium oxysporum, trong đĩa petri trên môi trường PDAP ● Mục đích - Khảo sát và đánh giá khả năng đối kháng, duy trì khả năng đối kháng của các chủng vi khuẩn vùng rễ đối với nấm Fusarium spp gây bệnh héo rũ ● Chuẩn bị - Những chủng vi khuẩn được nhân 36 giờ trên môi trường King’ B lỏng - Nấm Fusarium. .. 3.1 Thí nghiệm 1: khảo sát khả năng định vị trên vùng rễ và kích thích tăng trưởng cây ớt của một số chủng vi khuẩn vùng rễ (PGPR) Đánh giá khả năng định vị và kích thích tăng trưởng của 40 chủng vi khuẩn vùng rễ đã qua xử lý nhiệt, được thử nghiệm thành 4 đợt khác nhau mỗi đợt là 10 chủng vi khuẩn vùng rễ theo phương pháp ngâm hạt trong huyền phù vi khuẩn 24 giờ, sau đó gieo trong ống nghiệm có chứa... cao thân) vào 3 ngày sau khi gieo (NSKG) và sau mỗi 3 ngày cho đến 15 NSKG - Khả năng định vị trên rễ: Không (-), Thấp (+), Trung bình (++), Cao (+++) 2.4 Thí nghiệm 2: Đánh giá khả năng đối kháng của vi khuẩn đối với vi khuẩn Ralstonia solanacearum, trong đĩa petri ● Mục đích - Đánh giá khả năng đối kháng của các chủng vi khuẩn vùng rễ đối với vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh ● Chuẩn... thiết với nhau Cũng giống như Cao Ngọc Điệp (2003), vi khuẩn vùng rễ kích thích tăng trưởng thực vật tiêu biểu cho nhóm vi sinh vật đất cư trú trong đất vùng rễ có quan hệ với cây - ký 29 chủ bên cạnh đó nhiều vi sinh vật có khả năng ngăn chặn hay khống chế vi sinh vật có hại 3.1.2 Đánh giá khả năng kích thích tăng trưởng của một số chủng vi khuẩn PGPR Kết quả khảo sát khả năng kích thích tăng trưởng của. .. bệnh 2.3 Thí nghiệm 1: khảo sát khả năng định vị trên rễ và kích thích tăng trưởng của một số chủng vi khuẩn (PGPR) ● Mục đích - Bước đầu tìm ra các chủng vi khuẩn có khả năng kích thích tăng trưởng và định vị ở vùng rễ ● Chuẩn bị - Các chủng vi khuẩn nhân lại 36 giờ trong môi trường King’B lỏng - Hạt ớt giống: sừng vàng TN243 của công ty Trang Nông, hạt được khử trùng bề mặt với Ca(ClO)2 1% trong 30... khuẩn lạc nấm Fusarium ở nghiệm thức có vi khuẩn và đối chứng để tính hiệu suất đối kháng BKKLđc - Vi khuẩn BKKLvk AE% = x 100 Nấm BKKLđc Hình 1: Phương pháp trắc nghệm khả năng đối kháng của vi khẩn đối với nấm 25 2.6 Thí nghiệm 4: Đánh giá khả năng tiết chitinase của các chủng vi khuẩn ● Mục đích Khảo sát cơ chế đối kháng của PGPR đối với nấm Fusarium oxysporum ● Tiến hành Thí nghiệm được lặp lại 4... do vi khuẩn không định vị ở vùng rễ của cây trồng sau khi cây được chủng vào hạt trước khi gieo hay đem chủng vào đất vùng rễ Dựa vào kết quả của thí nghiệm trên, thì cho thấy mức độ định vị và khả năng kích thích tăng trưởng của các chủng vi khuẩn có mối quan hệ tỷ lệ thuận với nhau, tuy nhiên có một số chủng xảy ra ngược lại Cũng có những chủng vi khuẩn có mức độ định vị cao (+++) nhưng không có khả. .. không có khả năng kích thích tăng trưởng Ví dụ như: P4.9.3ef, P4.9.1ef, P4.9.4ef…, thậm chí cũng có những chủng định vị thấp (+) nhưng có khả năng kích thích tăng trưởng tốt( P2.3t) Kết quả này phù hợp với Phạm Vi t Cường và ctv (2003), cho rằng khả năng tổng hợp IAA phụ thuộc vào từng chủng vi khuẩn Chính vì vậy mà mức độ định vị và khả năng kích thích tăng trưởng của các chủng vi khuẩn khi khảo sát có... cây của vi khuẩn là giai đoạn quan trọng trong sự tương tác giữa vi khuẩn vùng rễ có lợi cho cây trồng (Benizri, 2001) Thực tế cho thấy vi c khảo sát khả năng định vị vùng rễ của một số chủng vi khuẩn nhằm khẳng định chủng vi khuẩn nào đó có phải là vi khuẩn vùng rễ hay không Ngoài ra còn có nhiều nghiên cứu cho thấy trong quá trình sử dụng vi khuẩn vùng rễ để bảo vệ cây trồng đã bị thất bại một trong. .. khuẩn vùng rễ Vi khuẩn vùng rễ kích thích tăng trưởng thực vật (plant Growth Promoting Rhizobacteria – PGPR) đại diện cho những loài vi khuẩn vùng rễ sống trong, trên hay xung quanh mô cây, mà khi liên kết với cây ký chủ dẫn đến kết quả là kích thích tăng trưởng của cây bằng bhiều cơ chế phức tạp khác nhau Theo Nguyễn Ngọc Dũng và ctv., (2003), đưa ra giả thuyết và cơ chế đoois kháng nấm gây bệnh của ... kháng vi khuẩn vi khuẩn Ralstonia solanacearum, đĩa petri ● Mục đích - Đánh giá khả đối kháng chủng vi khuẩn vùng rễ vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh héo xanh ● Chuẩn bị - Các chủng vi khuẩn. .. sâu bệnh hại quan trọng sau: Bệnh héo vi khuẩn (Bacterial wilt) vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây Vi khuẩn gây hại mạnh điều kiện nhiệt độ ẩm độ cao Vi khuẩn có ký chủ rộng rãi 25 họ thực vật,... rễ vi khuẩn giai đoạn quan trọng tương tác vi khuẩn vùng rễ có lợi cho trồng (Benizri, 2001) Thực tế cho thấy vi c khảo sát khả định vị vùng rễ số chủng vi khuẩn nhằm khẳng định chủng vi khuẩn