Đang tải... (xem toàn văn)
BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học BÁO cáo CHUYỂN đề CÔNG NGHỆ SINH học
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO CHUYÊN ĐỀ - CNSH MÃ HỌC PHẦN: CS326 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN PGS.TS NGUYỄN VĂN THÀNH Nguyễn Anh Kiệt B1303675 Đỗ Thị Huỳnh Mai B1303679 Nguyễn Thị Trúc Mai B1303680 Nguyễn Thị Kiều Nga B1303685 Ngô Nhật Thành B1303847 Cần Thơ, 09/2015 CHUYÊN ĐỀ: Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề MỤC LỤC A ĐẶT VẤN ĐỀ: B PHƯƠNG PHÁP TIẾP CẬN VÀ PHẠM VI ĐỀ TÀI: C GIỚI THIỆU: D NỘI DUNG: I CÔNG NGHỆ SINH HỌC TẾ BÀO ĐỘNG VẬT Khái niệm .2 Lịch sử phát triển Các kỹ thuật 3.1 Nuôi cấy mô tế bào động vật 3.1.1 Khái niệm a Môi trường nuôi cấy Môi trường hóa chất Nhân tố sinh trưởng Các chất kháng sinh 3.1.2 Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào động vật a Nuôi cấy sơ cấp THU NHẬN MẪU VÀ XỬ LÝ SƠ BỘ TÁCH RỜI CÁC TẾ BÀO a Tách học b Tách Enzyme c Tách tế bào phương pháp khác 10 b Nuôi cấy thu nhận mô tế bào 11 Nuôi tế bào sơ cấp 11 Nuôi cấy phát triển mảnh mô sơ cấp 11 Cấy chuyền 12 c Sự sinh trưởng tế bào nuôi cấy 13 d Phương thức nuôi cấy .13 3.1.3 Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật 14 a Nuôi cấy tạo tế bào lai soma động vật 14 b.Nhân vô tính 18 c Kỹ thuật chuyển nhân 18 i Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề 3.1.4 Thành tựu 23 Ứng dụng lĩnh vực y tế 23 Cấy ghép mô, quan .23 Nuôi cấy tế bào mô hình thực nghiệm để khảo sát tác động hóa chất 28 Nuôi cấy tế bào để sản xuất chế phẩm sinh học 28 Nuôi cấy tế bào độc chất học 28 3.1.5 Các ưu điểm nuôi cấy tế bào động vật 29 3.1.6 Một số hạn chế nuôi cấy tế bào động vật .30 3.2 Chuyển gen _ Công nghệ gen 30 3.2.1 Khái niệm 30 3.2.2 Mục đích 31 3.2.3 Đối tượng chuyển gen 31 3.2.4 Các kỹ thuật chuyển gen .31 a Kỹ thuật điện xung .31 b Kỹ thuật vi tiêm 36 c Kỹ thuật chuyển gen nhờ liposome 40 d Chuyển gen cách sử dụng tế bào gốc phôi .42 e Chuyển gen trực tiếp vào tinh trùng kết hợp với thụ tinh in vitro 44 f Chuyển gen gián tiếp (Chuyển gen nhờ vector virus phage) 48 Vector transposon 49 Vector retrovirus 52 Vector adenovirus 59 Vector episome 62 3.2.4 Thành tựu 71 Chuột chuyển gen 71 Thỏ chuyển gen 73 Lợn chuyển gen 75 Cừu chuyển gen 76 Dê chuyển gen 76 Bò chuyển gen: 77 Gà chuyển gen 77 ii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Khỉ chuyển gen 82 Muỗi chuyển gen 84 Cá chuyển gen 89 3.2.5 Lợi ích hạn chế việc tạo động vật chuyển gen 98 Lợi ích 98 Hạn chế .98 3.2.6 Ý nghĩa, thuận lợi khó khăn chuyển gen tế bào động vật .98 Ý nghĩa 98 Thuận lợi .99 Khó khăn .99 Triển vọng công nghệ chuyển gen 99 3.3 Công nghệ tế bào gốc (sẽ nói rõ phần II) 99 II CÔNG NGHỆ TẾ BÀO GỐC 99 Khái niệm tế bào gốc 100 Đặc tính, chức tế bào gốc 100 2.1 Đặc tính 100 2.1.1 Tế bào gốc tế bào không chuyên dụng 100 2.1.2 Tế bào gốc phân chia tái tạo thời gian dài 101 2.1.3 Tế bào gốc biến đổi thành tế bào chuyên dụng 101 2.2 Chức 101 2.3 Phân loại 102 2.3.1 Phân loại theo nguồn gốc 102 a Tế bào gốc phôi (Embryonic stem cells) .102 b Tế bào gốc mầm phôi (Embryonic germ cells) .103 c Tế bào gốc thai (Foetal stem cells) .103 d Tế bào gốc trưởng thành (Adult stem cells/Somatic stem cells) 104 e Tế bào gốc khối u (Embryonic carcinomas cells) 104 2.3.2 Phân loại theo tiềm biệt hóa .105 a Tế bào gốc toàn (totipontent stem cells) 105 b Tế bào gốc vạn (pluripotent stem cells) .105 c Tế bào gốc đa (multipotent stem cells) 106 d Tế bào gốc đơn (mono/unipotential progenitor cells) 107 iii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề 2.5 Nuôi cấy biệt hóa tế bào gốc 107 2.5.1 Nuôi cấy tế bào gốc 107 a Điều kiện, môi trường nuôi cấy 107 Điều kiện nuôi cấy tế bào gốc .107 Môi trường nuôi cấy 108 b Nuôi cấy sơ cấp 108 c Nuôi cấy thứ cấp 109 2.5.2 Biệt hóa .110 a Biệt hóa hóa chất .110 b Biệt hóa chất .110 c Kích thích vật lí 111 d Chuyển gen 111 e Các gốc tự dạng oxygen họat động 111 f Đồng nuôi cấy với tế bào biệt hóa 111 2.6 Ứng dụng 111 2.6.1 Ghép tế bào gốc trị liệu (stem cell theraphy) 111 Ứng dụng tế bào gốc trưởng thành điều trị 112 Ứng dụng tế bào gốc phôi điều trị 112 2.6.2 Công nghệ mô (Tissue engineering) 113 2.6.3 Các ứng dụng tế bào gốc phôi không liên quan đến ghép 114 Liệu pháp tế bào gốc 115 3.1 Tế bào gốc điều trị bện thần kinh 115 3.1.1 Cấy ghép tế bào gốc hay tế bào thần kinh 116 3.1.2 Kích hoạt tế bào gốc nội sinh .116 3.2 Liệu pháp tế bào gốc bệnh tim mạch 116 3.2.1 Huy động tế bào gốc 116 3.2.2 Cấy ghép tế bào gốc vào tim .117 3.3 Liệu pháp tế bào gốc điều trị bệnh tiểu đường .117 3.3.1 Cấy ghép tế bào gốc 117 3.3.2 Ghép tế bào tiết insulin biệt hóa từ tế bào gốc trước 118 3.4 Tái tạo biểu mô da 118 Một số nghiên cứu tế bào gốc .118 iv Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề 4.1 Tế bào gốc phôi biệt hóa thành loại tế bào gốc tim 118 4.2 Chuyển đổi thành công tế bào gốc thành tế bào phổi 119 4.3 Liệu pháp tế bào gốc điều trị bệnh đái tháo đường type 121 4.4 Biến tế bào gốc thành tế bào gan, tụy tạng 122 4.5 Tạo thủy tinh thể từ tế bào gốc 123 4.6 Tạo tế bào gốc từ màng dây rốn 124 4.7 Tạo tinh trùng từ tế bào gốc tủy xương 125 4.8 Thử nghiệm phương pháp điều trị ung thư phổi nhờ tế bào gốc 126 Các thành tựu ứng dụng tế bào gốc tiêu biểu 126 5.1 Tế bào gốc chữa khỏi bệnh thiếu máu hồng cầu hình liềm 127 5.2 Ghép tế bào gốc điều trị bệnh tiểu đường 128 5.3 Tạo tế bào gan từ mỡ da 129 5.4 Tế bào gốc phôi điều trị bệnh Parkinson 130 5.5 Điều trị thoái hóa khớp gối 131 5.6 Tế bào gốc ứng dụng thẩm mỹ 132 III LIỆU PHÁP GEN 133 Khái niệm 133 1.1 Liệu pháp gen 133 1.2 Gen liệu pháp ( therapeutic gene) 134 Nguyên tắc điều trị liệu pháp gen 135 Phân loại liệu pháp gen .135 3.1 Liệu pháp gen soma 135 3.2 Liệu pháp gen tế bào mầm 135 Các kỹ thuật liệu pháp gen 136 4.1 Cơ sở liệu pháp gen 136 4.2 Các bước liệu pháp gen 137 4.3 Phương pháp Kỹ thuật chuyển gen liệu pháp 138 Nguyên lý liệu pháp gen .140 5.1 Tách dòng gen liệu pháp 140 5.2 Các loại vecto thường sử dụng liệu pháp gen 140 5.2.1 Các vecto liệu pháp có chất virus 141 a Vector Adenovirus: .142 v Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề b Vectơ retrovirus .144 c Vector Adeno-Associated Virus (AAV) 146 d Vector Herpes Simplex Virus (HSV) 148 5.2.2 Các vector chất virus 149 a Liposomes .149 b Các polymer cation .150 c Cấy trực tiếp 151 d Liệu pháp tế bào gốc .151 e Biến đổi biểu gen 151 Oligonucleotide .152 Ribozyme .153 Promoter 154 Ứng dụng liệu pháp gen chữa số bệnh 154 6.1 Các lĩnh vực ứng dụng chủ yếu liệu pháp gen 154 6.1.1 Trong điều trị bệnh rối loạn di truyền .154 a Điều trị chữa bệnh rối loạn di truyền locus đơn gen 154 b Điều trị chữa bệnh rối loạn di truyền locus đa gen .154 6.1.2 Trong chữa bệnh nhiễm trùng 154 6.2 Một số xu hướng chữa bệnh liệu pháp gen 155 6.2.1 Thay gen liệu pháp vào vị trí gen hỏng 155 6.2.2 Tăng cường hỗ trợ hoạt động gen 155 6.2.3 Sửa chữa gen 155 6.2.4 Ức chế tế bào đích 156 6.2.5 Tiêu diệt tế bào đích 156 6.3 Những thành tựu đáng quan tâm 156 6.3.1 Ứng dụng liệu pháp gen chữa trị HIV/AIDS .156 6.3.2 Liệu pháp gen điều trị ung thư .159 a Ung thư .159 b Liệu pháp gen điều trị ung thư 159 6.3.3 Ứng dụng liệu pháp gen điều trị bệnh Parkinson 161 6.4 Triển vọng liệu pháp gen tương lai 162 E KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 163 vi Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề KẾT LUẬN 163 KIẾN NGHỊ 163 F TÀI LIỆU THAM KHẢO 164 vii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề CÔNG NGHỆ SINH HỌC TẾ BÀO ĐỘNG VẬT TẾ BÀO GỐC, LIỆU PHÁP GEN A ĐẶT VẤN ĐỀ: Thế kỷ 21 kỷ CNSH, xâm nhập vào lĩnh vực đời sống Với tiến vượt bật khoa học ngày nay, ngày có nhiều sản phẩm cải tiến phục vụ cho sống ứng dụng từ công nghệ sinh học Điều thấy qua kết nghiên cứu công bố nước giới Trong vòng 30 năm qua, chứng kiến thành tựu đáng kinh ngạc sinh học công nghệ sinh học nghiên cứu lẫn nghiên cứu ứng dụng Sự thành công sinh học công nghệ sinh học nằm chỗ tạo sản phẩm chuyên sinh – y – nông nghiệp – công nghệ sinh học với đủ cấp độ quy mô Vấn đề nuôi cấy tế bào nói chung nuôi cấy tế bào động vật nói riêng với phương pháp chuyển gen ngày dư luận giới quan tâm hết mức nhiều phương diện khác nhau, lợi ích lẫn tác hại vô to lớn mà người ta chưa lường hết Bên cạnh đó, tế bào gốc lĩnh vực nghiên cứu mẻ Việt Nam giới công nghệ tế bào gốc xuất cách nửa thập kỷ Những nghiên cứu tế bào gốc chủ yếu phục vụ cho y tế nhằm tái tạo thay đổi mô thể người bệnh nhờ vào công nghệ tế bào gốc Công nghệ tế bào gốc áp dụng cho thể sống chi phí nghiên cứu, phân lập nuôi cấy đắt nên sử dụng hạn chế số mô số bệnh nhân có khả tài với mục đích thực nghiệm Từ tiến nghiên cứu người ta thấy nhiệm vụ hàng đầu công nghệ sinh học gỉai vấn đề bệnh hiểm nghèo di truyền Và liệu pháp gen kỹ thuật cao CNSH có nghĩa quan trọng nhiệm vụ Nhằm tìm hiều bổ sung kiến thức vấn đề nhóm tiền hành làm đề tài “ CNSH tế bào động vật, liệu pháp gen, tế bào gốc” hướng dẫn PGS TS Nguyễn Văn Thành Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề B PHƯƠNG PHÁP TIẾP CẬN VÀ PHẠM VI ĐỀ TÀI: Đây đề tài tương đối rộng kỹ thuật ngày đại, phạm vi đối tương nghiên cứu lại lớn Nhưng trình độ khả nhóm có hạn nên phạm vi nghiên cứu tế bào động vật với số kỹ thuật thành tựu Để thực đề tài sưu tằm thông tin internet, sách, giáo trình, báo…và so sánh qua lại đề tài để đảm bảo tính xác vad tổng quát C GIỚI THIỆU: CNSH tế bào động vật tổ hợp tất thao tác kỹ thuật nhằm tạo quan, phận hòan chỉnh, hay động vật từ hay số tế bào ban đầu Kỹ thuật có khác với đối tượng khác Tế bào gốc tế bào có khả phân chia vô hạn định có khả sinh sản tạo tế bào khác có chức chuyên biệt cấy vào tế bào khác CNSH tế bào gốc sử dụng tế bào gốc để tạo sản phẩm phục phụ đời sống, đặc biệt y học đại Liệu pháp gen phương pháp đưa gen lành vào thể thay cho gen bệnh hay đưa gen cần thiết thay cho gen hư hỏng để đạt mục tiêu cuả liệu pháp Phương pháp sử dụng nhiều y học có ứng dụng cao D NỘI DUNG: I CÔNG NGHỆ SINH HỌC TẾ BÀO ĐỘNG VẬT Khái niệm Công nghệ sinh học tế bào động vật ngành khoa học nghiên cứu qui trình ứng dụng phương pháp nuối cấy tế bào động vật để tạo quan hay thể hoàn chỉnh Lịch sử phát triển Năm 1907, Harrison người nuôi cấy thành công mảnh mô phôi ếch dịch dịch bạch huyết với kỹ thuật “giọt treo” (Hanging drop).Năm 1923, Carel hoàn thiện kỹ thuật nuôi cấy tế bào bình thủy tinh (in vitro), để tuyệt trùng tạo điều kiện cho tế bào phát triển tốt Nhưng phải chờ đến năm 1960, hoàn thiện môi trường nuôi cấy nhân tạo kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật phát triển mạnh ứng dụng vào nhiều ngành công nghệ sinh học Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Hình 11 Sơ đồ hoạt động vector liposome DNA tích điện âm Tính “béo” cao tích điện âm màng tế bào người màng nhân ngăn cản di chuyển tự vào tế bào DNA Liposome mang điện tích dương, lớp vỏ ưa lipid Do tích điện đối dấu, DNA liposome dễ dàng gắn chặt với nhau, tạo nên phức hợp ưa lipid liposomeDNA Tính hoà tan chất lipid cho phép vận chuyển qua màng tế bào màng nhân, dễ dàng đưa DNA vào nhân tế bào Liposome phân tử không độc, dễ dàng sản xuất với số lượng lớn, khiến chúng trở thành vector hiệu ứng dụng thương mại Sự xâm nhập protein vector ngăn cản đáp ứng miễn dịch vật chủ chúng không bị nguy hiểm hay bị tiêu diệt enzym (endonucleases) nội bào So với tất vector chất virus, chuyển gen liposome có tiềm ứng dụng lớn thời điểm b Các polymer cation Các polymer cation chuỗi phức hợp tích điện dương Khi trộn với DNA, chúng tạo thành phức hợp có tính chất DNA kết tụ thành dạng mà dễ dàng vào nhân Lĩnh vực nghiên cứu cách mạng nhanh chóng phân tử không độc có tính hiệu chuyển gen tới tế bào đích 150 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề c Cấy trực tiếp Sự cấy DNA trần hay DNA tự ví dụ khác chuyển gen chất virus Trong kỹ thuật này, DNA trần cấy trực tiếp tới khối u mô Phương pháp điều trị làm giảm trực tiếp sản xuất protein quan trọng cho liệu pháp trị bệnh (ví dụ protein khối u) gây đáp ứng miễn dịch giúp ngăn ngừa bệnh Kỹ thuật ứng dụng cho xương điều trị bệnh thoái hoá (như bệnh loạn dưỡng cơ), ngăn cản bệnh gan virus (như bệnh viêm gan), bệnh tim (như bệnh lỗi sung huyết tim) Ngoài ra, nghiên cứu động vật thành công điều trị ung thư u ác tính u bướu Trong giá thấp tính dễ thiết kế làm thu hút hơn, có số nhược điểm Đầu tiên, quản lý hệ thống vật chất di truyền vấn đề nguyên nhân gây phân huỷ enzym nội bào nhanh chóng bị dẹp bỏ (clearance) gan thận Hiệu biểu di truyền khó nhận thấy Hơn nữa, số trường hợp không trì biểu gen, DNA lạ (foreign DNA) gây đáp ứng miễn dịch mạnh d Liệu pháp tế bào gốc Chuyển tế bào gốc kỹ thuật tạo tranh cãi lớn khoa học, trị tôn giáo Vì vậy, việc nghiên cứu chúng hạn chế diễn quy mô phòng thí nghiệm Các tế bào gốc tế bào thể người Chúng tế bào hoàn toàn giống phát triển thành tế bào người Các tế bào tách khỏi thể, tinh chế phòng thí nghiệm, làm thành dạng tế bào đặc hiệu khác sau tế bào đưa trở lại vật chủ e Biến đổi biểu gen Sự biểu gen người bị biến đổi trực tiếp cách sử dụng công cụ phân tử có khả xuyên qua tế bào, gắn tới gen đích chúng điều hoà gen sản xuất protein Có số công cụ dẫn đây: 151 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Oligonucleotide Oligonucleotide đoạn DNA ngắn sử dụng để kìm hãm trình dịch mã gen Mạch đối (antisense) đoạn gen biết tạo thành Khi mang tới tế bào, đoạn DNA cuộn xoắn với RNA đặc hiệu ngăn cản sản xuất protein từ RNA Hình 12 Quá trình hoạt động Olygonucleotide Công nghệ mạch đối hữu dụng nghiên cứu ứng dụng thương mại không thành công Điều thời gian sống ngắn oligomucleotide khác phân phối đặc hiệu Hiện tại, có dược phẩm oligonucleotide chấp nhận FDA, dùng để điều trị nhiễm cytomegalovirus võng mạc Dự án gen người hoàn thành làm sống lại mối quan tâm lĩnh vực với kỹ thuật phân phối làm liệu pháp oligomucleotide có hiệu 152 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Ribozyme Hình 13 Cấu trúc Ribozyme Ribozyme chuỗi RNA ngắn (30-50 nucleotide) thiết kế đặc biệt, có hoạt tính xúc tác (chúng gây phản ứng hoá học) Ribozyme gắn với đoạn RNA đặc hiệu tách chúng khỏi RNA, ngăn cản trình sản xuất protein Các ribozyme dường có hiệu 12 đến 24 tiếng Đây lĩnh vực nghiên cứu với ứng dụng bệnh ung thư bệnh thoái hoá thần kinh (neuro-degenerative) Thông tin từ dự án gen người đem lại ứng dụng có giá trị cho công nghệ cách nhanh chóng Hình 14 Quá trình hoạt động Ribozyme 153 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Promoter Promoter đoạn DNA điều khiển biểu gen không bị phiên mã Tất vector liệu pháp gen sử dụng promoter virus để điều khiển biểu gen chuyển Việc thiết kế sử dụng đặc hiệu mô làm promoter trở thành lĩnh vực nghiên cứu quan trọng, cho phép hoạt hoá gen chuyển mô dự kiến Ví dụ, vector sử dụng promoter cho kháng nguyên đặc hiệu tiền liệt tuyến sử dụng thử nghiệm y học chống ung thư tiền liệt tuyến Vector đích số lớn tế bào, gen chuyển hoạt hoá tế bào bình thường sản xuất kháng nguyên đặc hiệu tiền liệt tuyến Ứng dụng liệu pháp gen chữa số bệnh 6.1 Các lĩnh vực ứng dụng chủ yếu liệu pháp gen 6.1.1 Trong điều trị bệnh rối loạn di truyền a Điều trị chữa bệnh rối loạn di truyền locus đơn gen Trong tế bào, số gen đơn bị hỏng hay cấu trúc bình thường ( rối loạn chức gen), gây nên bệnh di truyền Bệnh tật trường hợp gây tử vong giai đoạn sớm không chữa trị, để lại di chứng di truyền 100% cho hệ sau Một số loại bệnh điển hình: Bệnh thiếu hụt miễn dịch tổ hợp trầm trọng Bệnh thiếu máu hồng cầu liềm Bệnh máu khó đông Bệnh xơ nang viêm phổi cấp Bệnh giảm trí nhớ Parkinson Bệnh run rẩy Gaucher Bệnh rối loạn cholesterol gia đình Bệnh rối loạn mãn tính chức hạt b Điều trị chữa bệnh rối loạn di truyền locus đa gen Một số loại bệnh nhiều gen thuộc locus khác quy định, tùy theo mức độ chức hay nhiều gen (alelle) mà mức độ biểu bệnh khác Những bệnh trường hợp di truyền 100% cho hệ sau Các bệnh điển hình như: Bệnh tim bẩm sinh Bệnh ung thư Bệnh tiểu đường Bệnh nghiện rượu Bệnh tâm thần phân liệt Hành vi tội phạm gen 6.1.2 Trong chữa bệnh nhiễm trùng Là bệnh virus, vi khuẩn gây nên, có nhiều loại bệnh hiểm nghèo bệnh ung thư, lao, HIV… gây thiệt hại to lớn kinh tế, sức 154 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề khỏe người liệu pháp gen phương pháp chữa bệnh có hiệu cao, nhiều bệnh nhân mắc bệnh nguy hiểm ung thư gan, lao, viêm gan B… chữa trị thành công liệu pháp gen tương lai, khả điều trị bệnh truyền nhiễm liệu pháp gen ngày nhiều với hiệu chất lượng cao 6.2 Một số xu hướng chữa bệnh liệu pháp gen 6.2.1 Thay gen liệu pháp vào vị trí gen hỏng Nhiều bệnh gây nên gen đột biến, dẫn đến rối loạn chức gen gây thay đổi cấu trúc protein tạo nên trạng thái bệnh lý Chiến lược thay gen áp dụng số trường hợp điển hình như: Thay gen mã hóa “nhân tố VIII” điều trị bệnh máu khó đông Thay gen mã hóa Anpha-1-anti-trypsin chữa bệnh thiếu hụt Anpha-1anti-trypsin Thay gen mã hóa enzyme glucocerebrosid bệnh Gaucher Thay gen mã hóa enzyme ADA chữa khỏi bệnh thiếu hụt miễn dịch trầm trọng 6.2.2 Tăng cường hỗ trợ hoạt động gen Điều trị loại bệnh theo xu hướng tăng cường hổ trợ hoạt động gen áp dụng trường hợp Gen bị chức năng, dẫn đến tế bào hoạt động không bình thường tạo nên protein bệnh lý Các hoạt động phiên mã dịch mã làm dư thừa mức sản phẩm bình thường gen, gây biểu bệnh lý Xu hướng sử dụng điều trị bệnh rối loạn chức gen đơn Một số bệnh điển hình điều trị bệnh xơ nang, bệnh máu khó đông,… 6.2.3 Sửa chữa gen Khi phát bệnh lý gen bị đột biến nucleotide, áp dụng biện pháp sữa chữa gen nhằm khôi phục lại hoạt động gen trở lại bình thường Nhưng sử dụng điều trị xu hướng khó khăn lớn phương pháp in vivo ex vivo khó đưa gen vào vị trí đột biến, vị trí gen bị sai lệch 155 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề 6.2.4 Ức chế tế bào đích Hướng điều trị ức chế hoạt động tế bào đích, cách cắt bỏ mRNA, ức chế hoạt động gen mRNA Có thể sư dụng số biện pháp như: Sử dụng ribozym đề cắt bỏ sữa chữa mRNA Sử dụng vector oligonucleotide để hình thành xoắn ba DNA nhằm ức chế tái gen ức chế trinh phiên mã gen 6.2.5 Tiêu diệt tế bào đích Là biện pháp có hiệu cao tế bào ung thư, tế bào khối u Trong tiêu diệt tế bào đích bị bệnh, viral vector mang gen liệu pháp chủ yếu gen mã hóa cytokine độc tố Tiêu diệt tế bào đích, cần phải lựa chọn vector liệu pháp kỹ thuật chuyển gen liệu pháp vào tế bào đích thích hợp để gen liệu pháp đưa vào tế bào đích, khối u ung thư Muốn hiệu tiêu diệt tế bào đích cao, gen liệu pháp phải có khả biểu mạnh, thời gian tồn biểu gen liệu pháp cần đủ dài mức độ định, đủ để tiêu diệt tế bào đích 6.3 Những thành tựu đáng quan tâm 6.3.1 Ứng dụng liệu pháp gen chữa trị HIV/AIDS Hình 15 Mô hình cấu tạo HIV 156 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề HIV/AIDS bệnh hệ miễn dịch, gây bị nhiễm virus suy giảm miễn dịch người (HIV) Hệ gen HIV có kích thước khoảng 10kb có gen chủ yếu gag, pol, env Sau xâm nhiễm vào tế bào người, hệ gen HIV gắn hòa nhập vào hệ gen người tạo nên dạng tiền HIV vô số tế bào lympho T tế bào miễn dịch khác, gây suy giảm miễn dịch người mắc phải Trong điều kiện định, dạng tiền virus HIV tạo virus HIV mới, xâm nhiễm vào nhiều tế bào khác tế bào lympho T, đại thực bào, bạch cầu, tế bào thần kinh…gây suy giảm nhanh chống hệ miễn dịch người.Từ biểu triệu chứng bệnh AIDS theo nguồn bệnh nhiễm trùng khác Hình 16 Cấu trúc gen virus HIV Trong nhiều năm qua, nhà khoa học nghiên cứu thí nghiệm nhiều biện pháp phòng chống điều trị HIV/AIDS Để hạn chế nhiễm HIV/AIDS toàn giới, người ta nghiên cứu điều chế nhiều loại kháng sinh starudine, lamirudine, azathioprin…để điều trị HIV/AIDS, kéo dài sống cho người nhiễm HIV Có nhiều loại thuốc điều trị HIV/AIDS hiệu HIV có đột biến thích ứng Hướng nghiên cứu điều trị AIDS sử dụng liệu pháp gen Xu hướng chủ yếu liệu pháp gen điều trị nhiễm HIV/AIDS: 157 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Chuyển gen liệu pháp nhằm hạn chế khả xâm nhiễm nhân HIV Kích thích gen thể để tăng cường miễn dịch chống phát triển HIV Sử dụng gen Suicide biến đổi làm cho tế bào nhiễm HIV tự chết Tạo vaccine phòng chống HIV công nghệ di truyền Một số liệu pháp gen điều trị HIV/AIDS là: Phòng chống HIV cách ức chế hoạt động gen HIV, làm biến đổi gen HIV: Thiết kế vector mang gen liệu pháp đưa vào tế bào, thể người bị nhiễm HIV nhằm phục hồi hệ thống miễn dịch lại không gây phản ứng bất lợi cho người bệnh Các vector liệu pháp sử dụng để phòng chống HIV/AIDS andenovirus, AAV,lyposom…Vector AAV gắn gen gen liệu pháp nhằm hạn chế chép, nhân HIV Vector adenovirus có gắn hai gen HIV bị biến đổi gen gag,tpa số gen adenovirus bị biến đổi Khi đưa vector vào tế bào lây nhiễm HIV khả lây nhiễm HIV giảm Bên cạnh có số vector liệu pháp khác ribozym,…đang thử nghiệm nhằm hạn chế xâm nhiễm, khả chép, nhân HIV Phòng chống HIV tăng cường miễn dịch tế bào: Là sử dụng gen đột biến Rev10, sử dụng gen tự tử gen độc tố (toxic gene) Sử dụng vector oligonucleotide mang gen Rev10 chuyển vào lympho TCD4 kiềm hãm xâm nhiễm HIV Sử dụng gen tự sát gen độc tố đưa vào tế bào bị xâm nhiễm HIV liệu pháp gen để phòng chống HIV Gen tự sát đưa vào tế bào bị HIV xâm nhiễm làm ức chế hoạt động enzyme chép DNA polymerase tế bào, làm cho chép DNA bị gián đoạn, tế bào co lại chết Do HIV khả xâm nhiễm sang tế bào khác Việc sử dụng gen độc tố thử nghiệm ban đầu chưa có kết cao 158 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề 6.3.2 Liệu pháp gen điều trị ung thư a Ung thư Ung thư nhóm bệnh liên quan đến việc phân chia tế bào cách vô tổ chức tế bào có khả xâm lấn mô khác cách phát triển trực tiếp vào mô lân cận di chuyển đến nơi xa (di căn) Nguyên nhân gây ung thư sai hỏng DNA, tạo nên đột biến gen thiết yếu điều khiển trình phân bào chế quan trọng khác Một nhiều đột biến tích lũy lại gây tăng sinh không kiểm soát tạo thành khối u Khối u khối mô bất thường, ác tính, lành tính không ung thư Chỉ khối u ác tính xâm lấn mô khác di Ung thư gây nhiểu triệu chứng khác phụ thuộc vào vị trí, đặc điểm khả di khối u Chuẩn đoán ung thư thường đòi hỏi phải sinh thiết quan sát kính hiển vi Các phương pháp điều trị bệnh ung thư phẫu thuật, hóa trị liệu, xạ trị b Liệu pháp gen điều trị ung thư Từ năm 1989 đến năm 2006, có 500 nghiên cứu lâm sàn liệu pháp gen thực hiện, có 70% để chữa ung thư Một số kỹ thuật liệu pháp gen tập trung nghiên cứu, là: Thay gen bị thiếu bị thay đổi gen khỏe mạnh Một gen tập trung phát triển p53 p53 có chất protein nằm điều hòa chu kỳ tế bào Khi có tổn thương DNA, p53 làm 159 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề ngưng chu trình tế bào DNA bị tổn thương sửa chữa làm cho tế bào chết theo lập trình Với đặc tính trên, p53 coi gen có khả ức chế khối ung thư tốt nhất, song với phần lớn bệnh ung thư người, gen p53 bị đột biến làm bị thiếu thay đổi, dẫn đến khả chống lại ung thư Các nhà khoa học nghiên cứu việc tạo gen p53 hoàn toàn khỏe mạnh đưa chúng vào thể người bệnh nhằm điều trị ung thư Gencidine sản phẩm liệu pháp gen cấp phép, Trung Quốc (2003), adenovirus tái tổ hợp, chứa gen p53 Gendicine sản xuất nhờ tế bào SBN, dòng tế bào nguồn gốc từ tế bào thận phôi người Quá trình nuôi cấy bề mặt sử dụng hệ thống nồi nuôi cấy có đĩa, sau phát triển thêm trình nuôi cấy kiểu cột nhồi cho suất cao Ngoài ra, kỹ thuật nuôi cấy chìm theo lô với môi trường không huyết ứng dụng Tăng cường đáp ứng miễn dịch bệnh nhân ung thư: Liệu pháp gen sử dụng nhằm kích thích khả tự nhiên thể chống lại tế bào ung thư Năm 2011, có bước đột phá lớn việc tạo tế bào bạch cầu lympho T riêng biệt nhằm tăng đề kháng bệnh nhân chống lại mầm bệnh CD-19 ung thư máu Các tế bào lympho T mẫu máu lấy từ bệnh nhân đưa vào loại gen kích thích tế bào sản xuất loại protein thụ thể tế bào T (TCR – T-cell receptor), sau đưa ngược trở lại thể Bên thể, lympho T kích thích sản xuất TCR, tăng khả nhận diện phức hợp MHC tế bào trình diện kháng nguyên (APC), qua nhận công tế bào u Các tế bào T có khả ghi nhớ tiếp tục ngăn phân tử ung thư xuất trở lại Sử dụng gen “tự sát” (suicide gene): Các gen tự sát đưa vào tế bào tự làm hủy hoại tế bào thông qua chết theo lập trình (apoptosis) Những tiền chất thuốc (dạng bất hoạt thuốc độc) đưa vào thể, sau chúng hoạt hóa gen tự sát dẫn đến phá hủy tế bào ung thư Phương pháp sử dụng điều trị bệnh u não nhằm ngăn ngừa tái phát cách đưa gen tự sát Thymidine kinase virus 160 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề herpes simplex type I (HSV-1-TK) vào não bệnh nhân phẫu thuật, phối hợp với Ganciclovir Một số phương pháp khác: Đưa gen vào tế bào ung thư làm chúng nhạy cảm với hóa trị, xạ trị, Tách tế bào mầm tạo máu khỏe mạnh khỏi thể đưa gen vào tế bào giúp chúng tăng khả kháng cự lại với tác dụng phụ loại thuốc kháng ung thư, sau đưa trở lại vào thể bênh nhân 6.3.3 Ứng dụng liệu pháp gen điều trị bệnh Parkinson Bệnh Parkinson bệnh rối loạn thoái hóa hệ thần kinh trung ương làm suy yếu khả vận động, lời nói chức khác Đặc điểm bệnh cứng cơ, run, tư bất thường, chuyển động chậm chạp trường hợp bệnh nặng người bệnh số chức vận động vật lý Thông thường liên quan đến hình thành sản xuất dopamine tế bào thần kinh dopaminergic não Hình 17 Nguyên nhân gây bệnh Parkinson thiếu hụt Dopamin Các thử nghiệm liệu pháp gen điều trị bệnh Parkinson cho kết đáng khích lệ mang lại hy vọng cho hàng triệu người giới Thông tin đăng tải tạp chí Lancet Anh ngày 10/01/2014 Liệu pháp mang tên ProSavin, cấp phép thử nghiệm người sau thực khỉ phòng thí nghiệm 161 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Liệu pháp nhằm cải thiện tình trạng thiếu dopamine-một chất dẫn truyền thần kinh giúp não kiểm soát chuyển động phối hợp vận động Đầu tiên, nhà khoa học đưa ba loại gen có tác dụng mã hóa có tác dụng kích thích tế bào não sản xuất dopamine vào virus (loại lentivirus) làm suy yếu Sau đó, bác sỹ cấy loại virus vào khu vực não cần thiết bệnh nhân, nơi loại virus thâm nhập thúc đẩy tế bào não tiếp tục sản xuất dopamine Kết cho thấy bệnh nhân điều trị ProSavin có phối hợp cân vận động tốt hơn, giảm rung, co cứng cải thiện hành vi nói Hình 18 Liệu pháp gen chữa trị bệnh Parkinson Sau 12 tháng trị liệu, triệu chứng vận động tiếp tục cải thiện tất bệnh nhân, đặc biệt người sử dụng liều gen cấy cao Liệu pháp chứng minh an toàn với bệnh nhân Tuy nhiên, theo nhà khoa học Jon Stoessl thuộc Đại học British Columbia Vancouver, Canada, liệu pháp không chữa trị vấn đề không thuộc thần kinh vận động bệnh Parkinson gây 6.4 Triển vọng liệu pháp gen tương lai Trên giới, liệu pháp gen nước tiên tiến thực nghiên cứu, điều trị cho nhiều bệnh nhân mắc bệnh hiểm nghèo bệnh 162 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề suy giảm miễn dịch tổ hợp trầm trọng, điều trị ung thư, thiếu máu hình liềm, hạn chế HIV/AIDS Ở Việt Nam, có số nghiên cứu điều trị bệnh ung thư liệu pháp nghiên cứu sản xuât interferon, interleukin để điều trị ung thư Một số sở nghiên cứu sản xuất vaccine viêm gan tái tổ hợp để phòng chống bệnh viêm gan E KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN: Kỹ thuật nuôi cấy tế bào động vật đời hòan thiện sau kỹ thuật khác Lí tính toàn động vật khó biểu động vật trưởng thành Mặc dù vậy, mở nhiều nhiều hướng ứng dụng quan trọng cho người như: nhân vô tính, tạo quan mới, trị bệnh nan y… Công nghệ sinh học tế bào gốc kỹ thuật phát triển nhanh tương đối hòan thiện Tạo nhiều hy vọng tương lai nhiều thành tựu với việc sử dụng triệt để tế bào gốc như: cuống rốn, phôi, tế bào thần kinh…điều trị số bệnh hiểm nghèo HIV-AIDS, ung thư… Hiện có nhiều phương pháp chuyển gen đích vào tế bào mầm nhằm thu hiệu liệu pháp Tuy nhhiên cần nghiên cứu rõ tác động phụ vào vật liệu di truyền.Nếu khắc phục vấn đề liệu pháp gen phương pháp có tiềm quan trọng việc điều trị bệnh người KIẾN NGHỊ: Nhà nước cần đầu tư cho công tác nghiên cứu khoa học công nghệ tế bào, trang bị sở hạ tầng đại, phù hợp Mở thêm ngành học hỏi trường Đại học, Cao đẳng để đào tạo đội ngũ cán lành nghề lĩnh vực phát triển đầy tiềm Bên cạnh phát triển cần ý đến vấn đề đạo đức, đặc biệt nhân vô tính động vật Sự hiểu biết nhóm hạng chế kảh tìm thông tin hạn hẹp nên thông tin có nhiều thiếu sót mong nhận đóng góp ý kiến từ người 163 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề F TÀI LIỆU THAM KHẢO: Ngô Đắc Chứng – Sinh sản phát triển cá thể động vật – NXB ĐH Huế, 2007 Trần Quốc Dung _ Các vector sử dụng để chuyển gen động vật, link: http://voer.edu.vn/m/cac-vector-su-dung-de-chuyen-gen-o-dong-vat/cd165a38 Trần Quốc Dung _ Các phương pháp chuyển gen, link: http://voer.edu.vn/m/cac-phuong-phap-chuyen-gen/993889db TS Nguyễn Văn Duy_ Các phương pháp chuyển gen động vật, năm 2013, link: http://doc.edu.vn/tai-lieu/de-tai-cac-phuong-phap-chuyen-gene-o-dong- vat-52408/ Trịnh Đình Đạt: Công nghệ sinh học – Tập 4: Công nghệ di truyền 2008 PGS TS Nguyễn Như Hiền – Công nghệ sinh học, tập 1: Sinh học phân tử tế bào, Cơ sở khoa học công nghệ sinh học – NXB Giáo dục, 2007 Phạm Thành Hổ, 2005 Nhập môn Công nghệ sinh học Nxb Giáo dục Nguyễn Hoàng Lộc - Công nghệ tế bào – NXB ĐH Huế, 2006 Phan Kim Ngọc, Phạm Văn Phúc - Công nghệ sinh học người động vật – NXB Giáo dục, 2007 TS Nguyễn Hữu Thanh, Liệu pháp gen: Nguyên lý ứng dụng NXB Khoa học kỹ thuật, 2005 PGS.TS Cao Văn Thu, “Vi sinh vật học”, NXB Giáo Dục 2008 GS TS Vũ Văn Vụ, PGS TS Nguyễn Mộng Hùng - Công nghệ sinh học, tập 2: CNSH tế bào – NXB Giáo dục, 2006 Jim Wilson – 29/04/2001 – Người dịch: Nguyễn Tấn Anh: Liệu pháp gen Báo cáo: http://www.sinhhoc.edu.vn/web/index.php/seminar/Y-hoc/Lieu-phapgen-dieu-tri-HIV/ Luận văn: Công nghệ chuyển gen, 6/11/2013, link: http://luanvan.co/luanvan/cong-nghe-chuyen-gen-40727/ V.v 164 [...]... kháng sinh: Các chất kháng sinh như penecilin, steptomicin hoặc amphotericin B thường được dùng để chống nhiểm khuẩn cho mẻ cấy.tuy nhiên, các chất kháng sinh thường độc vì phải dùng với liều lượng thích hợp và kết hợp với qui trình tiệt trùng chu đáo 4 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Thành phần môi trường eagle (1959) (Môi trường nuôi cấy) 5 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo. .. vật không chỉ được phục vụ cho nghiên cứu về di truyền học, tế bào học, sinh lý học, phân loại học, … mà còn phục vụ cho công nghệ tế bào 17 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề b.Nhân bản vô tính Nhân bản vô tính là một quá trình tạo ra một tập hợp các cơ thể giống hệt nhau về mắc di truyền và giống bố (hoặc mẹ) ban đầu bằng phương thức sinh sản vô tính Nhân bản vô tính dựa trên các nguyên... Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề thành thai và sinh sản như bình thường Kỹ thuật tạo ra cừu Dolly có tỉ lệ thành công 1/277 * Kỹ thuật Honolulu : Kỹ thuật này được Teruhiko Wakayama và Ryuzo Yanagimachi ở đại học tống họp Hawai giới thiệu năm 1998 Kỹ thuật của Honolulu hiệu quả hơn nhiều (thành công 3 lần trong mỗi 100 lần thực hiện) so với kỹ thuật của Roslin (thành công 1 lần trong... thành công ở bò, cừu,… từ nhân lấy ở giai đoạn phôi Trước năm 1992, các nhà khoa học cho rằng, đối với động vật có vú chỉ có thể 19 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề nhân bản vô tính thành công với nhân lấy từ giai đoạn phôi, còn đối với nhân của tế bào soma trưởng thành thì không thể thực hiện được vì tính biệt hóa của chúng là không thể đảo ngược Tuy nhiên, sự kiện tháng 2/1997, khi báo. .. công của nhân bản vô tính bằng cấy nhân được thực hiện ở ếch, bằng cách sử dụng nhân của các tế bào soma lấy ở giai đoạn phôi Năm 1952, lần đầu tiên, hai nhà khoa học tai Philadelphia là R Briggs và T King đã nhân bản vô tính con 18 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề nòng nọc bằng kỹ thuạt chuyển cấy nhân từ tế bào phôi nang ếch Từ những năm 1960, J Gordon đã nhân bản vô tính thành công. .. chứng kiến, người ta có thể thấy rằng khoa học và y học đã bắt đầu một kỷ nguyên mới với một gương mặt mới trong đó nhân tố có thể làm thay đổi toàn bộ gương mặt ấy chính là những nhà sinh học tế bào Chỉ với vài ba tế bào gốc và những ống nghiệm, họ có thể tạo ra những "phiên bản" của sự sống giống y như nguyên bản 24 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề "Chúng tôi sẽ có đủ khả năng tái tạo... ở phần nào đó trong xoang bụng ngoài ống dẫn trứng là đã được chương trình hóa trong bộ gen 15 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề của sinh vật Trong nuôi cấy in vitro, để thực hiện được sự thụ tinh giữa tinh trùng và trứng thì tinh trùng phải được xử lý để làm thay đổi tính chất sinh lý, được gọi là khả năng hóa (capacitation), nhưng khi sử dụng virut Sendai để kích thích thì không cần... nhiễm) có thể loại bỏ các tế bào nhiễm bằng cơ học hay enzyme khi tách mô hay bằng cách duy trì các điều kiện chon lọc dương tính cho sự sống sót của một kiểu tế bào quan tâm cần thu nhận 6 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Thu nhận mẫu mô Cắt nhỏ (Chọn lọc mẩu mô quan tâm, cắt bỏ phần mô chết) Cắt nhỏ (Mảnh nhỏ để nuôi) Tách tế bào bằng cơ học (Nghiền, ép) Nuôi mẫu mô sơ cấp Tách tế bào... tế bào 7 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề THU NHẬN MẪU VÀ XỬ LÝ SƠ BỘ: Mẫu thu nhận có thể bao gồm bất kỳ ở mô nào của cơ thể Tại nơi thu nhận, mẫu cần được làm sạch (rửa và sát trùng bằng cồn) rồi đưa vào bảo quản trong dung dịch DPBS rồi chuyển nhanh về phòng thí nghiệm Tùy loại mẫu mô cũng như thời gian cần thiết đưa về phòng thí nghiệm, để có kế hoạch vận chuyển chúng trong điều... lâu liền Đây là biện pháp đơn giản, rẻ tiền hơn rất nhiều so với phương pháp nói trên Để có được thành công này, các bác sĩ đã tiến hành nuôi cấy trên 17 mẫu da lấy từ người tình nguyện và 7 mẫu da lấy từ bệnh nhân bỏng BS Hân cho biết, sau khi vệ 26 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề sinh vùng cho da, lấy 3 - 4cm2 da toàn lớp, da này đã được bảo quản trong môi trường huyết thanh, sau ... PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề KẾT LUẬN 163 KIẾN NGHỊ 163 F TÀI LIỆU THAM KHẢO 164 vii Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề CÔNG NGHỆ... trùng chu đáo Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề Thành phần môi trường eagle (1959) (Môi trường nuôi cấy) Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề 3.1.2 Kỹ thuật nuôi cấy... phục vụ cho nghiên cứu di truyền học, tế bào học, sinh lý học, phân loại học, … mà phục vụ cho công nghệ tế bào 17 Viện NC & PT Công nghệ Sinh học Báo cáo chuyên đề b.Nhân vô tính Nhân vô tính trình