Đang tải... (xem toàn văn)
Chitin và chitosan hiện nay được ứng dụng trong nhiều các lĩnh vực như nông nghiệp, xử lý nước thải và y dược… Quá trình sản xuất chitin cần trải qua hai quá trình khử khoáng và protein. Hiện nay, quá trình khử protein trong nguyên liệu chủ yếu sử dụng bazơ mạnh là NaOH để khử, phương pháp này có nhược điểm gây ô nhiễm môi trường vì vậy cần có biện pháp thay thế. Biện pháp thay thế hiện nay đã và đang nghiên cứu là sử dụng phương pháp sinh học, trong đó sử dụng enzyme protease được sử dụng. Bằng phương pháp sinh học sẽ giải quyết được vấn đề ô nhiễm môi trường. Enzyme protease thu từ nguồn là thực vật, động vật và vi sinh vật, trong đó vi sinh vật là nguồn thu enzyme nhanh và ổn định. Trong các visinh vật sinh enzyme protease thì Bacillus subtilis là một trong những chủng sinh protease mạnh và an toàn.
CẤU TRÚC LUẬN VĂN CHƯƠNG 1: MỞ ĐẦU (4 trang) CHƯƠNG 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU (22 trang) CHƯƠNG 3: NGUYÊN VẬT LIỆU, ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU (18 trang ) CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ – BIỆN LUẬN (13 trang) CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN – ĐỀ NGHỊ (1 trang) TÀI LIỆU THAM KHẢO (2 trang) PHỤ LỤC (2 trang) Luận văn trình bày 68 trang, luận văn có sử dụng 12 bảng 10 biểu đồ để trình bày kết nghiên cứu.Luận văn sử dụng 15 tài liệu tham khảo, có 10 tài liệu tiếng Việt tài liệu tham khảo từ internet NỘI DUNG LUẬN VĂN CHƯƠNG MỞ ĐẦU Đặt vấn đê 1.1 Chitin chitosan ứng dụng nhiều các lĩnh vực nông nghiệp, xử lý nước thải y dược… Quá trình sản xuất chitin cần trải qua hai quá trình khử khoáng protein Hiện nay, quá trình khử protein nguyên liệu chu yếu sử dụng bazơ mạnh NaOH để khử, phương pháp có nhược điểm gây ô nhiễm môi trường cần có biện pháp thay Biện pháp thay đa nghiên cứu sử dụng phương pháp sinh học, sử dụng enzyme protease sử dụng Bằng phương pháp sinh học sẽ giải vấn đề ô nhiễm môi trường Enzyme protease thu từ nguồn thực vật, động vật vi sinh vật, vi sinh vật nguồn thu enzyme nhanh ổn định Trong các visinh vật sinh enzyme protease Bacillus subtilis một những chung sinh protease mạnh an toàn Từ em tiến hành nghiên cứu đề tài “ Nghiên cứu thu nhận enzyme protease từ chủng Bacillus subtilis và ứng dụng khử protein nang mực quá trình sản xuất chitin” - Mục tiêu đê tài Xác định điều kiện nuôi Bacillus subtilis C7 để thu enzyme protease cao Xác định điều kiện khử protein nang mực quá trình sản xuất - chitin Nội dung nghiên cứu Kiểm tra tính thuần cua các chung Bacillus subtilis C7 Xác định điều kiện nuôi cấy Bacillus subtilis C7 để sinh enzyme protease cao 1.2 1.3 nhất Xác định môi trường nuôi cấy Xác định điều kiện nuôi cấy Thử nghiệm thay NaOH bằng enzyme protease để khử protein nang mực + + - quá trình sản xuất chitin Ý nghĩa đê tài Ý nghĩa khoa học: từ chung Bacillus subtilis C7 thương mại, xác định các điều 1.4 - kiện thích hợp nuôi cấy chung Bacillus subtilis C7 có hoạt tính enzyme protease cao Từ thu nhận enzyme protease để khử protein nang mực nhằm thay NaOH để giảm thiểu chi phí sản xuất chitin Biết hiểu rõ các thao tác kỹ thuật - quá trình làm đề tài Ý nghĩa thực tiễn: Thu nhận chế phẩm enzyme từ chung Bacillus subtilis C7 tiến hành thay NaOH sản xuất chitin nhằm giảm giá thành giảm thiểu ô nhiễm môi trường CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan vê enzyme 2.2 Tổng quan vê enzyme protease 2.3 Tổng quan vê Bacillus subtilis 2.4 Tổng quan vê chitin 2.5 Tổng quan vê phế liệu nang mực CHƯƠNG NGUYÊN VẬT LIỆU - ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Nguyên liệu và đối tượng - - Đối tượng nghiên cứu: chung Bacillus subtilis C7 ( cung cấp bởi viện CNSH - Trường Đại học Nha Trang) Vật liệu : Nang mực khô ( Kiên Giang) Môi trường sử dụng Môi trường kiểm tra tính thuần chung Bacillus subtilis TSA (Trypticase soya agar Tryptone 1,5%, Peptone 0,3%, NaCl 0,5%, Agar 1,5%, nước cất vừa đu 1000ml) hấp khử trùng ở 121oC, thời gian 15 phút - Môi trường khảo sát điều kiện nuôi cấy : TSB ( Trypticase soya Broth Tryptone 1,7%, Peptone 0,3%, NaCl 0,5%, KH 2PO4 0,25%, Glucose 0,25%, Nước cất vừa đu 1000ml) hấp khử trùng ở 121oC, thời gian 15 phút 3.2 Phương pháp nghiên cứu 3.2.1 Bố trí thí nghiệm tổng quát 3.2.2 Phương pháp nghiên cứu vi sinh 3.2.3 Bố trí thí nghiệm 3.2.3.1 Kiểm tra tính khiết 3.2.3.2 Khảo sát môi trường nuôi cấy 3.2.3.3 Khảo sát nồng độ glucose vào môi trường nuôi cấy 3.2.3.4 Khảo sát bổ sung peptone vào môi trường nuôi cấy 3.2.3.5 Khảo sát bổ sung khoáng vào môi trường nuôi cấy 3.2.3.6 Khảo sát thời gian nuôi cấy 3.2.3.7 Khảo sát pH nuôi cấy 3.2.3.8 Khảo sát nhiệt độ nuôi cấy 3.2.3.9 Khảo sát nhiệt độ hoạt động của enzyme protease từ Bacillus sutilis C7 3.2.3.10 Khảo sát pH hoạt động thích hợp enzyme protease từ Bacillus sutilis C7 3.2.3.11 Khảo sát tỷ lệ và thời gian thủy phân protein Nang mực enzyme protease chủng Bacillus subtilis C7 Phương pháp phân tích và xử lý số liệu Xác định hoạt tính enzyme theo phương pháp Anson Xác định đạm acid amin theo phương pháp chuẩn độ Formol Phương pháp định lượng protein phản ứng Biuret 3.3 - Các thí nghiệm lặp lại ba lần xử lý thống kê bằng phần mềm SPSS (viết tắt cua Statistical Package for the Social Sciences) CHƯƠNG KẾT QUẢ - BIỆN LUẬN 4.1 Kiểm tra tính khiết Sau cấy ria thạch đĩa môi trường TSA u 24 giờ nhiệt độ 37 oC kiểm tra khuẩn lạc Trên môi trường TSA khuẩn lạc đồng nhất, không tạp nhiễm vi sinh vật khác Nhuộm gram Bacillus subtilis bắt màu gram + sự xuất vi khuẩn tạp nhiễm Kết luận ống giống thuần khiết Tiến hành thí nghiệm 4.2 Khảo sát môi trường nuôi cấy 4.2.1 Khảo sát loại môi trường nuôi cấy Tiến hành cấy chung Bacillus subtilis C7 vào môi trường TSB, TSB + Casein 0,25%, TSB + (CaCl2, MgSO4, KH2PO4 0,25%) Thu enzyme xác định hoạt độ enzyme bằng phương pháp Anson Kết thể qua sơ đồ hình 4.2.1 Hình 4.2.1 Hoạt độ enzyme ở các môi trường Từ kết nghiên cứu cho thấy loại môi trường có ảnh hưởng đến khả sinh tổng hợp enzyme hoạt độ enzyme Enzyme protease có hoạt độ cao nhất ở môi trường TSB + Khoáng 0,25% Ở môi trường TSB môi trường TSB + Casein 0,5% , hoạt độ enzyme protease thấp môi trường TSB + Khoáng 0,25% Theo nhiều nghiên cứu, các ion Ca2+, Mg2+, K+ có ảnh hưởng tới hoạt độ enzyme protease Khi bổ sung các ion khoáng vào môi trường làm tăng hoạt độ enzyme protease Môi trường TSB + Casein 0,5%, nguyên nhân hoạt độ enzyme không cao nồng độ casein cao tạo áp suất thẩm thấu lớn gay ức chế sinh sinh trưởng cua vi khuẩn dẫn đến hoạt độ enzyme thu thấp Vì ta chọn môi trường TSB + Khoáng (CaCl 2, MgSO4, KH2PO4 0,25% ) để khảo sát các yếu tố 4.2.2 Khảo sát nồng độ peptone bổ sung Tiến hành cấy chung Bacillus subtilis C7 vào môi trường có bổ sung peptone nồng độ từ 0,25% - 1,5% Thu enzyme xác định hoạt độ enzyme bằng phương pháp Anson Kết thể qua sơ đồ hình 4.2.2 Hình 4.2.2 Khảo sát ảnh hưởng cua nồng độ peptone đến hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Từ nghiên cứu cho thấy, nồng độ peptone bổ sung có ảnh hưởng đến hoạt độ enzyme protease cua chung Bacillus subtilis C7 Ở nồng độ 0,5% hoạt độ enzyme đạt giá trị cao nhất 65,1 ± 1,596*10-3UI/ml, tăng nồng độ peptone lên hoạt độ enzyme giảm, thấp nhất ở nồng độ 1,25% hoạt độ 57,29 ± 1,769*103 UI/ml Vậy ta chọn nồng độ peptone 0,5% để thực các nghiên cứu sau 4.2.3 Khảo sát nồng độ glucose bổ sung Tiến hành cấy chung Bacillus subtilis C7 vào môi trường có bổ sung glucose nồng độ từ 0,25% - 2% Thu enzyme xác định hoạt độ enzyme bằng phương pháp Anson Kết thể qua sơ đồ hình 4.2.3 Hình 4.2.3 Khảo sát ảnh hưởng cua nồng độ glucose đến hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Kết nghiên cứu cho thấy, nồng độ glucose bổ sung vảo môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng tới sự phát triển cua Bacillus subtilis C7 hoạt độ enzyme protease Hoạt độ cua enzyme tăng tăng nồng độ glucose từ 0,25% 0,75%, tiếp tục tăng nồng độ glucose đến 1,25% hoạt độ enzyme giảm Ở nồng độ 1,5% hoạt độ enzyme đạt giá trị cao nhất 73,937 ± 3,81*10-3UI/ml Khi tiếp tục tăng nồng độ glucose, hoạt độ enzyme giảm nhanh xuống thấp nhất ở nồng độ 2% 43,571 ± 2,78*10-3UI/ml Như tăng nồng độ glucose quá cao sẽ làm tăng áp suất thẩm thấu làm giảm khả sinh trưởng phát triển cua vi khuẩn ảnh hưởng tới hoạt độ enzyme Ở nồng độ thấp, glucose không đu đáp ứng nhu cầu cua vi khuẩn nên hoạt tính enzyme thu thấp Vậy ta chọn nồng độ glucose 1,5% để thực các nghiên cứu sau 4.2.4 Khảo sát nồng độ khoáng bổ sung Tiến hành bổ sung môi trường ba loại khoáng, nuôi cấy thu enzyme ở nhiệt độ phòng, pH =7, thời gian 24 giờ, chế độ lắc 160 vòng/ phút Sau thời gian nuôi cấy, thu dịch môi trường xác định hoạt độ enzyme Kết thể Hình 4.2.4 Hình 4.2.4 Khảo sát ảnh hưởng cua khoáng đến hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Từ kết nghiên cứu cho thấy, bổ sung khoáng vào môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng tới hoạt độ enzyme thu Khi tăng CaCl2 từ 0,25 – 0,75% hoạt độ enzyme thu tắng theo đạt cao nhất 66 *10-3 UI/ml Khi bổ sung thêm MgSO4 hoạt độ enzyme sự khác biệt giữa mức 0,25 0,75%, ở mức 0,5% hoạt độ enzyme thu thấp hai nồng độ lại Khi bổ sung KH2PO4 nguồn cung cấp kali cũng chất đệm giúp ổn định pH môi trường nuôi cấy Hoạt độ enzyme thu đạt giá trị cao nhất 76,5*10-3 UI/ml ở nồng độ 0,5% Từ các kết trên, ta chọn nồng độ CaCl2 bổ sung 0,75%, MgSO4 0,25%, KH2PO4 0,5% để thu enzyme có hoạt tính cao nhất tiến hành các thí nghiệm sau 4.3 Khảo sát điêu kiện nuôi cấy 4.3.1 Khảo sát thời gian nuôi cấy Ta tiến hành nuôi cấy với các điều kiện đa chọn ở trên, nuôi cấy lắc 160 vòng/phút Tiến hành đo hoạt độ enzyme ở các mức thời gian 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ Kết thể qua Hình 4.3.1 Hình 4.3.1 Khảo sát ảnh hưởng cua thời gian nuôi cấy tới hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Từ kết nghiên cứu cho thấy, thời gian nuôi cấy có ảnh hưởng tới hoạt độ enzyme protease thu Ở mức thời gian 24 – 48 giờ dinh dưỡng nhiều, vi khuẩn sinh trưởng mạnh tang sinh khối Khi tang thời gian nuôi cấy, dinh dưỡng moi trường giảm dần vi khuẩn sinh trưởng chậm enzyme thu hoạt độ thấp Vì ta chọn mức thời gian nuôi cấy 48 giờ để tiến hảnh nghiên cứu sau 4.3.2 Khảo sát pH môi trường nuôi cấy Tiến hành nuôi cấy môi trường đa điều chỉnh pH từ – theo phương pháp nuôi cấy chìm Dịch nuôi cấy sau 24 giờ đem xác định hoạt độ enzyme bằng phương pháp Anson Kết thể hình 4.3.2 : Hình 4.3.2 Khảo sát ảnh hưởng cua pH nuôi cấy tới hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Kết nghiên cứu cho thấy Bacillus subtilis C7 có pH sinh trưởng tương đối rộng từ -9 Khi thay đổi pH hoạt độ enzyme không thay đổi nhiều Hoạt độ enzyme protease đạt giá trị cao nhất tại pH 7,5 , ở giá trị pH – hoạt độ enzyme thay đổi không nhiều Khi pH tăng lên , hoạt độ enzyme có xu hướng giảm dần đạt giá trị thấp nhất 50,33*10-3UI/ml Vì ta chọn giá trị pH = 7,5 để tiến hành các thí nghiệm sau 4.3.3 Khảo sát nhiệt độ nuôi cấy Ta tiến hành nuôi cấy ở các điều kiện đa nghiên cứu ở trên, thời gian 24 giờ, chế độ, ở nhiệt độ phòng Kết nghiên cứu thể Hình 4.3.3 Hình 4.3.3 Ảnh hưởng cua nhiệt độ nuôi cấy tới hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Từ kết nghiên cứu cho thấy Bacillus subtilis C7 sinh trưởng phát triển mạnh ở nhiệt độ 37oC giống các chung Bacillus khác Khi nhiệt độ tăng lên 50oC, hoạt độ enzyme giảm dần nhiệt độ tang cao giảm khả sinh trưởng phát triển vi khuẩn làm giảm hoạt độ enzyme thu Hoạt độ enzyme đạt giá trị thấp nhất ở nhiệt độ 30oC Vì ta chọn chế độ nhiệt 37 oC để nuôi cấy chung Bacillus subtilis C7 để thu enzyme có hoạt tính cao 4.4 Khảo sát điêu kiện thủy phân 4.4 Khảo sát điêu kiện thủy phân protein nang mực 4.4.1 Khảo sát nhiệt độ hoạt động của enzyme protease Sau nuôi cấy, ta thu dịch enzyme tiến hành khảo sát nhiệt độ hoạt độ hoạt động tối ưu cho en zyme protease cua chung Bacillus subtilis C7 Chọn nhiệt độ thích hợp cho enzyme protease hoạt động tốt nhất 10 Hình 4.3.3 Ảnh hưởng cua nhiệt độ nuôi cấy tới hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Từ kết nghiên cứu cho thấy, nhiệt độ có ảnh hưởng đến hoạt động cua enzyme Khi tăng nhiệt độ từ 30 – 45oC, lượng Nitơ giải phóng tăng chứng tỏ độ hoạt động cua enzyme tăng Khi nhiệt độ tăng lên tới 50 oC, độ hoạt động cua enzyme bắt đầu giảm.Vì ta chọn chế độ nhiệt 45 oC để enzyme protease cua chung Bacillus subtilis C7 hoạt động tốt nhất 4.4.2 Khảo sát pH Hoạt động của enzyme protease pH một những yếu tố ảnh hưởng tới sự hoạt động cua enzyme Ta tiến hành thu enzyme protease, đem thuy phân với chất casein ở pH từ - 10 xác định lượng acid amin bằng chuẩn độ formol Kết biểu qua sơ đồ hìn 4.4.2 Hình 4.4.2 Khảo sát pH hoạt động cua enzyme protease cua chung Bacillus subtilis C7 Từ kết nghiên cứu cho thấy, pH có ảnh hưởng đến độ hoạt động cua enzyme protease cua Bacillus subtilis C7 Ở pH =7 lượng nitơ giải phóng nhiếu nhất 9,47μg, chứng tỏ ở pH = enzyme protease cua Bacillus subtilis C7 hoạt động mạnh nhất Khi tăng giá trị pH lên 8,9,10 hoạt độ cua enzyme giảm dần thấp nhất ở pH 10 Vì ta chọn pH = để enzyme protease cua Bacillus subtilis C7 hoạt động tốt nhất 4.4.3 Khảo sát tỷ lệ enzyme và thời gian thủy phân Tiến hành khảo sát bốn tỷ lệ enzyme bốn mức thời gian, xác định lượng protwin lại mẫu nang mực,chọn chế độ thuy phân thích hợp Kết thể qua hình 4.4.3 Hình 4.4.3 Khảo sát thời gian tỷ lệ enzyme để thuy phân protein nang mực bằng enzyme protease từ Bacillus subtilis C7 11 Hình 4.4.4 Hiệu suất khử protein nang mực bằng enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Từ kết nghiên cứu cho thấy tăng thời gian khử protein nang mực lượng protein lại giảm dần theo các mức thời gian hiệu suất khử protein tăng Tuy nhiên ở các mức từ 24 – 42 giờ lượng giảm không đáng kể Khi tang tỷ lệ enzyme, khả khử protein tăng theo hiệu suất tăng theo Ở mức thời gian 24 giờ, khả khử protein đạt cao nhất ở mức 40/1 khác biệt nhiều so với mức 30/1 Khi kéo dài thời gian thuy phân lượng protein giảm không đáng kể ta chọn thời gian thuy phân 24 giờ tỷ lệ enzyme/ nang mực 30/1 để khư protein nang mực 12 CHƯƠNG KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Sau thời gian nghiên cứu để tài bước đầu đạt những kết sau: - Xác định điều kiện nuôi thu enzyme protease từ Bacillus subtilis C7 + Nồng độ peptone bổ sung nồng độ 0,5% + Nồng độ glucose bổ sung nồng độ 1,5% + Khoáng bổ sung CaCl2 0,75%, MgSO4 0,25%, KH2PO4 0,5% + Thời gian nuôi cấy 48 giờ + pH nuôi cấy 7,5 Nhiệt độ nuôi cấy 37oC - Xác định điều kiện hoạt động cua enzyme protease từ Bacillus subtilis C7 + Nhiệt độ thuy phân 45oC + Độ pH thuy phân + Tỷ lệ khử enzyme/nang mực 30/1 thời gian thuy phân 24h 5.2 Kiến nghi + - Tăng thời gian khảo sát nuôi cấy lên 48 giờ - Tinh sạch chế phẩm enzyme protease - Kết hợp phương pháp sinh học hóa học khử protein nang mực - Tiến hành sản xuất chitin từ nang mực bằng phương pháp sinh học 13 [...]... gian thu y phân Tiến hành khảo sát bốn tỷ lệ enzyme và bốn mức thời gian, xác định lượng protwin còn lại trong mẫu nang mực, chọn chế độ thuy phân thích hợp Kết quả thể hiện qua hình 4.4.3 Hình 4.4.3 Khảo sát thời gian và tỷ lệ enzyme để thuy phân protein nang mực bằng enzyme protease từ Bacillus subtilis C7 11 Hình 4.4.4 Hiệu suất khử protein nang mực bằng enzyme protease chung Bacillus. .. động cua enzyme protease từ Bacillus subtilis C7 + Nhiệt độ thuy phân là 45oC + Độ pH thuy phân là 7 + Tỷ lệ khử enzyme/ nang mực là 30/1 và thời gian thuy phân là 24h 5.2 Kiến nghi + - Tăng thời gian khảo sát nuôi cấy lên 48 giờ - Tinh sạch chế phẩm enzyme protease - Kết hợp phương pháp sinh học và hóa học trong khử protein nang mực - Tiến hành sản xuất chitin từ nang mực bằng... mức 30/1 Khi kéo dài thời gian thuy phân thì lượng protein giảm không đáng kể vì vậy ta chọn thời gian thuy phân 24 giờ và tỷ lệ enzyme/ nang mực là 30/1 để khư protein nang mực 12 CHƯƠNG 5 KẾT LUẬN ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Sau thời gian nghiên cứu để tài bước đầu đạt được những kết quả sau: - Xác định điều kiện nuôi thu enzyme protease từ Bacillus subtilis C7 + Nồng độ peptone bổ... cua enzyme protease cua Bacillus subtilis C7 Ở pH =7 lượng nitơ giải phóng nhiếu nhất 9,47μg, chứng tỏ ở pH = 7 enzyme protease cua Bacillus subtilis C7 hoạt động mạnh nhất Khi tăng giá trị pH lên 8,9,10 thì hoạt độ cua enzyme giảm dần và thấp nhất ở pH 9 và 10 Vì vậy ta chọn pH = 7 để enzyme protease cua Bacillus subtilis C7 hoạt động tốt nhất 4.4.3 Khảo sát tỷ lệ enzyme và. .. Hoạt động của enzyme protease pH là một trong những yếu tố ảnh hưởng tới sự hoạt động cua enzyme Ta tiến hành thu enzyme protease, đem thuy phân với cơ chất casein ở pH từ 6 - 10 và xác định lượng acid amin bằng chuẩn độ formol Kết quả biểu hiện qua sơ đồ hìn 4.4.2 Hình 4.4.2 Khảo sát pH hoạt động cua enzyme protease cua chung Bacillus subtilis C7 Từ kết quả nghiên cứu cho thấy,... hoạt độ enzyme protease chung Bacillus subtilis C7 Từ kết quả nghiên cứu cho thấy, nhiệt độ có ảnh hưởng đến hoạt động cua enzyme Khi tăng nhiệt độ từ 30 – 45oC, lượng Nitơ giải phóng tăng chứng tỏ độ hoạt động cua enzyme tăng Khi nhiệt độ tăng lên tới 50 oC, độ hoạt động cua enzyme bắt đầu giảm.Vì vậy ta chọn chế độ nhiệt 45 oC để enzyme protease cua chung Bacillus subtilis C7... protease chung Bacillus subtilis C7 Từ kết quả nghiên cứu cho thấy khi tăng thời gian khử protein nang mực thì lượng protein còn lại giảm dần theo các mức thời gian và hiệu suất khử protein tăng Tuy nhiên ở các mức từ 24 – 42 giờ thì lượng giảm không đáng kể Khi tang tỷ lệ enzyme, khả năng khử protein tăng theo và hiệu suất tăng theo Ở mức thời gian 24 giờ, khả năng khử protein đạt cao