BỘ Y TẾ BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI CẤP BỘ NGHIÊN CỨU PHÁT HIỆN BIẾN ĐỔI GEN TRONG UNG THƯ ĐẠI TRỰC TRÀNG CHỦ NHIỆM ĐỀ TÀI CƠ QUAN CHỦ TRÌ ĐỀ TÀI PGS.TS Nguyễn Nghiêm Luật 9209 Năm 2012 MỤC LỤC MỞ ĐẦU TỔNG QUAN 1.1 Đa polyp tuyến gia đình (FAP) 1.2 Cấu trúc chức gen APC 1.2.1 Cấu trúc gen APC protein APC 1.2.2 Các chức gen APC protein APC 11 1.3 Các kỹ thuật sinh học phân tử xác định đột biến gen APC 15 1.3.1 Kỹ thuật PCR 16 1.3.2 PCR đơn mồi 17 1.3.3 PCR đa mồi 17 1.3.4 PCR chép ngược 18 1.3.5 Real-time PCR 18 1.3.6 Kỹ thuật MLPA 19 1.3.7 Kỹ thuật giải trình tự gen 19 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 Đối tượng nghiên cứu 20 2.2 Dụng cụ, trang thiết bị hóa chất nghiên cứu 20 2.3 Phương pháp nghiên cứu……………………………………… 23 KẾT QUẢ 34 3.1 Các kết giải trình tự DNA exon 15 35 3.2 Kết xác định đột biến gen APC gia đình bệnh nhân …39 3.3 Kết phân tích gen APC thành viên 49 3.4 Kết phân tích gen APC nhóm đối chứng 50 BÀN LUẬN 52 4.1 Về kết xác định đột biến gen APC gia đình 52 4.2 Về kết phân tích gen APC thân nhân 58 4.3 Về kết phân tích gen APC nhóm đối chứng 59 KẾT LUẬN 60 KHUYẾN NGHỊ 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO CÁC PHỤ LỤC CÁC BÀI BÁO KHOA HỌC DANH SÁCH BỆNH NHÂN CÁC CHỮ VIẾT TẮT Acef Một yếu tố trao đổi guanin Rac, thuộc gia đình Rho GTPase AFAP Attenuated familial adenomatous polyposis: đa polyp tuyến gia đình thể nhẹ APC Adenomatous polyposis coli: đa polyp tuyến CHRPE Congenital hypertrophy of the retinal pigment epithelium: chứng phì đại bẩm sinh biểu mô sắc tố võng mạc CIN Chromosome instability: bất ổn định nhiễm sắc thể CLIP170 Một protein có chức làm ổn định vi ống tế bào CtBP C-terminal-binding protein: protein gắn C tận dAPC Drosophila APC: APC ruồi giấm DNA Desoxyribonucleic acid EB1 End binding 1: protein điều hòa khung tế bào cách gắn vào vi ống kiểm sốt sinh sơi chúng EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid EphB Một gen đích đường tín hiệu Wnt FAP Familial adenomatous polyposis: đa polyp tuyến gia đình GEF Guanine nucleotide exchange factor: yếu tố trao đổi guanin Rac, thuộc gia đình Rho GTPase GSK3β Glycogen synthase kinase 3-beta IQGAP1 IQ-motif-containing GTPase activation protein 1: protein hoạt hóa GTPase chứa IQ LEF Lymphoid enhancer factor: yếu tố tăng cường lympho MCR Mutation cluster region: vùng bó đột biến MLPA Multiplex ligation-dependent probe amplification mRNA Messenger ribonucleic acid: ribonucleic acid thông tin MYC Tên gen đích đường tín hiệu Wnt PCR Polymerase Chain Reaction RT-PCR Revers transcriptase-PCR Rac1 Một protein gia đình Rho GTPase TCF T-cell factor: yếu tố tế bào T MỞ ĐẦU Ung thư đại trực tràng (colorectal cancer), gồm khối ung thư đại tràng, trực tràng ruột thừa Ung thư đại trực tràng gây nên khoảng 655.000 người chết giới năm nên cho bệnh lý ác tính phổ biến Trong số người bị ung thư, số người bị ung thư đại trực tràng đứng thứ ba Mỹ, đứng thứ hai Canada Tây Âu, đứng trung bình nước Đông Âu nước công nghiệp Tỷ lệ mắc ung thư đại trực tràng thấp Châu Phi, Châu Á phần Mỹ La tinh Tỷ lệ mắc ung thư đại trực tràng nam nhiều nữ Ở Việt Nam, tỷ lệ mắc ung thư đại trực tràng 7,5/100.000 dân, đứng hàng thứ hai giới sau ung thư phế quản, dày, gan vú; nam giới, ung thư đại trực tràng đứng hàng thứ hai sau ung thư phổi [1, 3, 4, 5] Hầu hết ung thư đại trực tràng có liên quan đến yếu tố ngoại sinh, số di truyền [2, 4, 6, 7] Ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình ung thư bắt nguồn từ bệnh đa polyp tuyến gia đình (familial adenomatous polyposis: FAP) [24, 64, 74, 75], bệnh di truyền trội với hàng trăm, hàng ngàn polyp đại trực tràng Các polyp ban đầu lành tính sau trở thành ác tính khơng điều trị Bệnh sinh ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình cho đột biến gen APC (adenomatous polyposis coli), gen áp chế ung thư đa chức (multi-functionality tumor suppressor gene) [31, 36, 44] Tuy chiếm tỷ lệ khoảng 1% ung thư đại trực tràng nói chung ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình có ý nghĩa quan trọng bệnh có khả di truyền cao [24, 27, 36] Tuy nhiên, Việt Nam chưa có đề tài nghiên cứu đột biến gen ung thư đại trực tràng công bố Vì vậy, để đánh giá nguy ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình người thân gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình (FAP) để có biện pháp theo dõi sử lý sớm trước ung thư xuất hiện, thực đề tài “Nghiên cứu phát biến đổi gen ung thư đại trực tràng”, tập trung vào nghiên cứu đột biến dòng mầm gen APC bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình” nhằm mục tiêu sau đây: Phát đột biến exon 15 gen APC bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình Đánh giá đột biến exon 15 gen APC người thân gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình TỔNG QUAN Ung thư đại trực tràng bệnh lý ác tính phổ biến (đứng thứ ba Mỹ) Hơn 95% ung thư đại trực tràng ung thư biểu mô tuyến (adenocarcinoma) Các bệnh lý ác tính cịn lại bao gồm carcinoid, lymphoma sarcoma, … Tỷ lệ mắc ung thư đại trực tràng đứng thứ hai Canada, Tây Âu Tỷ lệ mắc trung bình Đơng Âu nước cơng nghiệp Tỷ lệ mắc thấp Châu Phi, Châu Á phần Mỹ La tinh Nam mắc nhiều nữ Tại Việt nam tỷ lệ mắc ung thư đại trực tràng theo tuổi 7,5/100.000 dân, đứng hàng thứ hai giới, sau ung thư phế quản, dày, gan, vú [ 9] Một điều quan trọng hầu hết ung thư đại trực tràng (93%) xuất phát từ polyp tuyến đại tràng Thời gian chuyển từ polyp lành tính sang ác tính trung bình khoảng 3-5 năm Đối với người bị ung thư đại trực tràng, nam giới có tỷ lệ mắc bệnh cao nữ giới Độ tuổi bị ung thư đại trực tràng phổ biến 70-80 Hầu hết ung thư đại trực tràng có liên quan đến yếu tố ngoại sinh, số di truyền Ung thư đại tràng xích ma trực tràng chiếm 50% trường hợp ung thư đại trực tràng Ung thư đại tràng xuống có tỉ lệ thấp [3, 8] Về nguyên nhân, 85% ung thư đai trực tràng yếu tố ngẫu nhiên, khoảng 15% có tính chất gia đình, đa polyp tuyến gia đình (familial adenomatous polyposis: FAP) chiếm tỷ lệ khoảng 1% [24] Tỷ lệ mắc FAP Hoa Kỳ 1/ 5000 Nhật 1/17.000 dân [52] Ung thư đại trực tràng số bệnh lý ác tính có tiên lượng tốt Khoảng 50% bệnh nhân bị ung thư đại trực tràng phẫu thuật triệt Bệnh sàng lọc phát sớm điều trị có hiệu 1.1.Đa polyp tuyến gia đình (FAP): Đa polyp tuyến gia đình bệnh di truyền trội có đặc điểm phát triển hàng trăm đến hàng nghìn u tuyến đại tràng trực tràng Tỷ lệ mắc FAP Hoa Kỳ 1/ 5000 Nhật 1/17.000 dân [52], Châu Âu tỷ lệ mắc 1/11.300- 37.600 dân FAP phân bố hai giới Ở Việt Nam chưa có thống kê cụ thể FAP Nguyên nhân bệnh FAP có đột biến gen APC, loại gen ức chế khối u, có vai trị ức chế hình thành khối u sinh đại tràng Độ tuổi xuất triệu chứng FAP 16 Bệnh nhân chẩn đoán FAP độ tuổi trung bình 36 Hầu hết bệnh nhân FAP phát triển thành ung thư không chẩn đoán điều trị kịp giai đoạn sớm bệnh [75] Trên giới, 85% ung thư đai trực tràng ngẫu nhiên, khoảng 15% có tính chất gia đình FAP chiếm tỷ lệ khoảng 1% [24] Hình Hình ảnh đa polyp tuyến gia đình đại trực tràng Bệnh polyp gia đình (FAP), yếu tố di truyền thể rõ: tần số truyền bệnh cho gia đình đến 50% Biểu lâm sàng FAP thường phân lẫn máu, phân lỏng, đau bụng, xuất polyp, loại có cuống thấp, gần hậu mơn bị lịi Tuy nhiên, có trường hợp bệnh nhân hồn tồn khơng thấy triệu chứng lâm sàng có polyp đại trực tràng Vì vậy, phải ý trường hợp có tiền sử gia đình, đặc biệt nam giới tuổi 45 FAP chẩn đốn cách tìm hồng cầu (soi phân kính hiển vi) hemoglobin phân (xét nghiệm Weber Meyer), siêu âm qua nội soi đại trực tràng, siêu âm bụng, chụp x quang, chụp cắt lớp vi tính, định lượng kháng nguyên ung thư phôi huyết tương CEA (carcinoembryonic antigen), sử dụng kỹ thuật sinh học phân tử (xác định đột biến gen APC), 1.2.Cấu trúc chức gen APC Gen APC (adenomatous polyposis coli gene) gen ức chế khối u đa chức năng, gồm 8972 cặp base (bp) nằm nhiễm sắc thể 5q21 Sản phẩm gen APC protein gồm 2.843 gốc acid amin, có khả gắn với nhiều loại protein khác β-catechin, actin, CtBP, Asef, IQGAP1, EB1 với nhiều vi cấu trúc hình ống Các đột biến dịng mầm gen APC gây bệnh đa polyp tuyến gia đình (Familial adenomatous polyposis: FAP) với đặc điểm có hàng trăm đến hàng nghìn polyp đại trực tràng (Groden cộng 1991 [29], Kinzler cộng sự, 1991 [43]) Các đột biến gen APC tìm thấy khoảng 60-80% ung thư biểu mô đại-trực tràng ung thư đại-trực tràng thể ngẫu nhiên (Powel cộng sự, 1992 [61] Các nghiên cứu di truyền sử dụng chuột bị gây đột biến tế bào ung thư nuôi cấy chứng minh đột biến gen APC liên quan đến trình ung thư hóa ruột Gen APC có vai trị ngăn chặn đường tín hiệu Wnt kinh điển - đường cần thiết cho hình thành khối u, protein APC cịn có vai trị phát triển định nội môi (homeostasis) nhiều loại tế bào, tế bào biểu mô tế bào lympho Các nghiên cứu cho thấy gen APC có vai trị số q trình khác tế bào trình gắn kết di cư tế bào, cấu tạo mạng lưới actin vi ống, tạo thoi vô cực phân chia nhiễm sắc thể Sự rối loạn trình đột biến gen APC nguyên nhân khởi phát phát triển ung thư đại trực tràng 1.2.1 Cấu trúc gen APC protein APC Gen APC nằm vùng 5q21 nhiễm sắc thể thứ Việc xác định bệnh nhân bị đa polyp tuyến gia đình (FAP) đại trực tràng gắn liền với chậm phát triển tâm thần bất thường khác đầu mối để xác định vị trí APC, người ta thấy có xóa đoạn nhiễm sắc thể 5q21 (Kinzler cộng sự, 1991 [43]) Phân tích liên quan gia đình với FAP dẫn đến việc lập đồ gen gen APC nhiễm sắc thể 5q21 Sau đó, gen APC người ta dịng hố, nhận biết xác định đặc tính (Bodmer cộng sự, 1987 [23], van Es cộng sự, 2001 [73]) Gen APC dạng phổ biến gồm 8972 cặp base nitơ (bp) trải dài 21 exon mã hóa cho protein gồm 2.843 acid amin Exon 10A nằm phần cuối exon 10, đối tượng thay bổ sung 18 acid amin protein APC chép Exon 15 chiếm 75% chuỗi mã hóa (coding sequence) gen APC đối tượng hay gặp đột biến dòng mầm (germline mutations) đột biến dòng thân (somatic mutations) Gen adenomatous polyposis coli (APC) gen áp chế khối u quan trọng Các đột biến gen APC tìm thấy khơng phần lớn ung thư đại tràng mà số ung thư khác, ví dụ ung thư gan Các đột biến dòng mầm gen APC thường dẫn đến bệnh đa polyp tuyến gia đình (familial adenomatous polyposis: FAP), đặc trưng hàng trăm đến hàng ngàn khối u (polyps) đại tràng (Groden cộng sự, 1991 [29]) Các đột biến gen APC phát khoảng 60% ung thư đại tràng thể đa polyp tuyến gia đình ung thư đại tràng thể ngẫu nhiên (sporadic carcinomas) (Powell cộng sự, 1992 [61]) Các nghiên cứu di truyền sử dụng mơ hình chuột nhắt đột biến chứng minh đột biến gen APC có vai trị bệnh sinh khối u đường ruột (intestinal tumorigenesis) Các đột biến đồng hợp tử (homzygous APC mutations) gen APC chuột nhắt dẫn đến chết phôi xóa có điều kiện (conditional deletion) gen chuột nhắt trưởng thành phá vỡ định nội môi (homeostasis) không ruột mà cịn mơ khác Những chứng chứng tỏ gen APC cần thiết cho phát triển định nội môi tế bào bất hoạt tạo điều kiện cho hình thành khối u (tumorigenesis) Sản phẩm gen APC protein có tên protein APC, với 2.843 gốc acid amin, có khối lượng phân tử 312 kDa, gồm nhiều vùng (domains) liên kết với protein khác, protein β-catenin, axin, CtBP, Asefs, IQGAP1, EB1 vi ống (microtubules), thực nhiều chức khác nhau, nhằm ức chế khối u (Hình 2) Vùng Armadillo Vùng lặp lại 15 acid amin Vùng lặp lại 20 acid amin Vùng Vùng gắn EB1 Vùng gắn axin Số codon Hình 2: Cấu trúc protein APC Protein APC gồm vùng chức là: vùng Armadillo, vùng lặp lại 15 aa, vùng lặp lại 20 aa, vùng bản, vùng gắn EB1 vùng gắn axin (Fearnhead NS cộng [26]) Các nghiên cứu sử dụng chuột nhắt đột biến tế bào ni cấy chứng minh protein APC có vai trị ngăn chặn tín hiệu Wnt kinh điển - đường cần thiết cho hình thành khối u (tumorigenesis), protein APC có vai trị phát triển định nội môi (homeostasis) nhiều loại tế bào, chẳng hạn tế bào biểu mô tế bào lympho Các nghiên cứu sâu protein APC cịn đóng vai trị số qúa trình tế bào Các trình bao gồm kết dính di trú tế bào, tổ chức mạng lưới actin vi ống, hình thành trục (spindle) phân chia nhiễm sắc thể Sự điều hịa q trình gây tác protein APC với β-catenin (vốn coi cần thiết cho hoạt động ức chế khối u protein APC) bị tác dụng Nếu protein APC chức năng, nồng độ β-catenin tăng bào tương, vào nhân nơi chúng gắn với yếu tố chép tế bào T (T-cell factor: TCF) yếu tố tăng cường bạch huyết (enhancer lymphoid factor: LEF) yếu tố chép (Barker N Clevers H, 2006 [19]) gen đích đường tín hiệu Wnt hoạt hóa khả chép gây nên kiểm soát tăng sinh tế bào gây khối u đường ruột Điều chứng minh mơ hình chuột thực nghiệm gây bệnh khối u đường ruột Vùng lặp lại 15 20 acid amin protein APC liên quan đến số trình khác phân ly thể nhiễm sắc, ức chế chết tế bào theo chương trình Như vậy, vùng lặp lại 15 20 acid amin protein APC đóng vai trị quan trọng chế bệnh sinh bệnh đa polyp tuyến gia đình nguy tiến triển thành ung thư Các đột biến gen APC gia đình bệnh nhân ung thư ĐTT thể FAP nghiên cứu phần lớn xảy vùng lặp lại 15, 20 acid amin protein APC kết tạo mã kết thúc sớm (stop codon) dẫn đến cắt đoạn ngắn protein làm protein APC bị chức [ Các kết góp phần chứng minh cho sở lý thuyết vai trò đột biến gen APC chế bệnh sinh bệnh đa polyp tuyến gia đình trình sinh ung thư 4.2 Về kết phân tích gen APC thân nhân bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể FAP: Như phần kết quả, số thành viên mang gen APC đột biến 15/25 người, chiếm tỷ lệ (60%) 10 người không mang gen APC đột biến, chiếm tỷ lệ 40% (Bảng 3.4) Điều có nghĩa khơng phải tất người gia đình người bị ung thư đại trực tràng thể FAP mang gen APC đột biến Sự di truyền gen đột biến thực tế phụ thuộc vào gen bô mẹ Hiện chưa gặp trường hợp bố lẫn mẹ mang gen đột biến gen APC chưa tìm tài liệu mô tả tỷ lệ đột 58 biến gen APC thành viên gia đình có bố mẹ bị ung thư đại trực tràng thể FAP Về tỷ lệ thành viên gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến mang gen đột biến biểu bệnh FAP, có 3/15 (20%) thành viên gia đình có biểu FAP, cịn lại 12/15 (80%) thành viên 15 gia đình bệnh nhân ung thư ĐTT thể FAP có mang gen APC đột biến chưa biểu bệnh FAP thời điểm lấy mẫu 4.3 Về kết phân tích gen APC nhóm đối chứng Phân tích đột biến gen APC 15 người khỏe mạnh không mắc bệnh lý đại trực tràng cho thấy, không đột biến phát Như vậy, thấy đột biến gen APC đặc điểm điển hình bệnh đa polyp tuyến gia đình (FAP), đặc biệt bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình 59 KẾT LUẬN Nghiên cứu đột biến dòng mầm exon 15 gen APC 22 bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình (FAP), 25 người thân 15 gia đình bệnh nhân 15 người khỏe mạnh kỹ thuật giải trình tự trực tiếp DNA, rút kết luận sau: Ở bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình: - Đã phát đột biến gen APC 19/22 (86,36%) bệnh nhân ung thư ĐTT thể FAP - Các đột biến dịch khung (cài xóa từ đến nucleotid) loại đột biến phổ biến nhất, chiếm 86%, lại đột biến thay (1 nucleotid) Các đột biến dịch khung thay nucleotid dẫn đến mã kết thúc (stop codon), làm cho sinh tổng hợp protein APC sớm bị dừng lại, protein APC bị cắt đoạn ngắn, chức ức chế khối u bị giảm Kết cho thấy vai trò đột biến gen APC chế bệnh sinh bệnh ung thư ĐTT thể FAP - Vùng tập trung đột biến gen APC từ codon 1001-1400, chiếm 89,40%, vùng codon 656 – 1000, số đột biến chiếm 10,60% - Không phát đột biến gen APC người khỏe mạnh đối chứng Đột biến exon 15 gen APC thành viên có quan hệ huyết thống với bệnh nhân mang gen đột biến - Có lặp lại giống vị trí kiểu đột biến gen APC thành viên gia đình - 15/25 (60%) thành viên 15 gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể FAP có mang gen APC đột biến, có 3/15 (20%) người thân mang gen đột biến biểu bệnh đa polyp tuyến gia đình (FAP) Như vậy, đột biến gen APC có khả di truyền gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình 60 KHUYẾN NGHỊ Đề nghị Bộ Y tế cho phép tiến hành xác định đột biến exon 15 gen APC (vùng liên quan nhiều đến ung thư đại trực tràng thể FAP: từ codon 1000 đến 1400) bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể FAP thành viên có quan hệ huyết thống gia đình họ để phát sớm nguy có biện pháp phịng ngừa trước ung thư xuất 61 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT Nguyễn Bá Đức (2000), Hóa chất điều trị bệnh ung thư, NXB Y học, Hà nội: 87-94 Hiệp Hội quốc tế chống ung thư (1995), Cẩm nang ung bướu học lâm sàng tập I, II, xuất lần thứ 6, NXB Y học, Hà Nội, tr.177-181: 475- 493 Nguyễn Văn Hiếu (2007), Ung thư đại tràng, Chẩn đoán điều trị bệnh ung thư, NXB Y học, Hà Nội: 223 - 236 Phạm Đức Huấn (2006), Ung thư đại tràng, Bệnh học ngoại khoa, tập I (sau đại học) NXB Y học, Hà Nội: 249 - 258 Tạ Long (1992), Ung thư đại tràng, Bài giảng bệnh học nội khoa sau đại học tập II, Học viện Quân Y, Hà Nội: 75 - 81 Hoàng Gia Lợi (1995), Các khối u ruột non đại tràng, Bài giảng bệnh học nội tiêu hoá, Học viện Quân Y, Hà Nội: 215 - 225 Lê Đình Roanh (2001), Bệnh học khối u, NXB y học, Hà Nội Nguyễn Khánh Trạch, Lê Tuyết Anh, Phạm Thị Bình, Mai Minh Huệ, …(2008), Nội soi tiêu hoá, NXB y học, Hà Nội: 128 – 152 Đỗ Đức Vân (2006), Polyp đại tràng, Triệu chứng học ngoại khoa, NXB y học, Hà Nội: 187-191 10 Hồ Huỳnh Thùy Dương (1998), Các phương pháp lai phân tử, Sinh học phân tử, NXB Giáo dục: 149-162 11 Võ Thị Hương Lan (2002), ADN tái tổ hợp, Sinh học phân tử, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội: 139-170 12 Lê Đình Lương (2001), “Chọn lọc, sàng lọc phân tích thể tái tổ hợp”, Nguyên lý kỹ thuật di truyền, NXBKhoa học kỹ thuật: 118-130 13 Khất Hữu Thanh (2006), “Một số phương pháp sử dụng kỹ thuật gen”, Cơ sở di truyền phân tử kỹ thuật gen, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật: 137-64 14 Phạm Hùng Vân (2009), “Real-time PCR- Các vấn đề bản”, PCR realtime PCR – Các vấn đề áp dụng thường gặp, Nhà xuất Y học: 34-59 TIẾNG ANH 15 Ahmed, Y., Nouri, A and Wieschaus, E (2002) Drosophila Apc1 and Apc2 regulate Wingless transduction throughout development Development 129, 1751-1762 16 Akiyama, T and Kawasaki, Y (2006) Wnt signalling and the actin cytoskeleton Oncogene 25, 7538-7544 17 Andrzej Plawski, Ryard Slomski (2008) APC gene mutations causing familial adenomatous polyposis in Polish patients J Appl Genet 49 (4): 407414 18 Aoki K, Aoki M, Sugai M, Harada N, Miyoshi H, Tsukamoto T, Mizoshita T, Tatematsu M, Seno H, Chiba T et al (2007) Chromosomal instability by -catenin/TCF transcription in APC or -catenin mutant cells Oncogene 26: 3511-3520 19 Barker N and Clevers H (2006) Mining the Wnt pathway for cancer therapeutics Nat Rev Drug Discov 5: 997-1014 20 Beroud C and Soussi T (1996) APC gene: database of germline and somatic mutations in human tumors and cell lines Nucleic Acids Res; 24: 121-124 21 Bienz M (2002) The subcellular destinations of APC proteins Nat Rev Mol Cell Biol 3: 328-338 22 Bienz M and Hamada F (2004) Adenomatous polyposis coli proteins and cell adhesion Curr Opin Cell Biol 16: 528-535 23 Bodmer WF et al (1987) Localization of the gene for familial adenomatous polyposis on chromosome Nature, 328: 614–616 24 Bülow S, Berk T, Neale K The history of Familial Adenomatous Polyposis Fam Cancer 2006, : 213-220 25 Dikovskaya D, Schiffmann D, Newton I P, Oakley A, Kroboth K, Jamieson T J, Meniel V, Clarke A, Sansom O and Nathke I S (2007) Loss of APC induces polyploidy as a result of a combination of defects in mitosis and apoptosis J Cell Biol 176: 183-195 26 Fearnhead NS, Britton MP and Bodmer WF (2001) The ABC of APC Human Molecular Genetics; 10 (7): 721-733 27 Friedl W, Caspari R, Sengteller M, Uhlhaas S, Lamberti C, Jungck M, Kadmon M, Wolf M, Fahnenstich J, Gebert J, Möslein G, Mangold E, Propping P (2001) Can APC mutation analysis contribute to therapeutic decisions in familial adenomatous polyposis? Experience from 680 FAP families Gut; 48(4): 515-521 28 Glass D A, Bialek P, Ahn J D, Starbuck M, Patel, M S, Clevers H, Taketo M M, Long F, McMahon A P, Lang R A et al (2005) Canonical Wnt signaling in differentiated osteoblasts controls osteoclast differentiation Dev Cell 8: 751-764 29 Groden J, Thliveris A, Samowitz W, Carlson M, Gelbert L, Albertsen H, Joslyn G, Stevens J, Spirio L, Robertson M et al (1991) Identification and characterization of the familial adenomatous polyposis coli gene Cell 66: 589-600 30 Hamada F and Bienz M (2002) A Drosophila APC tumour suppressor homologue functions in cellular adhesion Nat Cell Biol; 4: 208-213 31 Hamada F and Bienz M (2004) The APC tumor suppressor binds to Cterminal binding protein to divert nuclear -catenin from TCF Dev Cell 7: 677-685 32 Hamada F, Murata Y, Nishida A, Fujita F, Tomoyasu Y, Nakamura M, Toyoshima K, Tabata T, Ueno N and Akiyama T (1999) Identification and characterization of E-APC, a novel Drosophila homologue of the tumour suppressor APC Genes Cells 4, 465-474 33 Harada N, Tamai Y, Ishikawa T, Sauer B, Takaku K, Oshima M and Taketo M M (1999) Intestinal polyposis in mice with a dominant stable mutation of the -catenin gene EMBO J 18: 5931-5942 34 Hayden M A, Akong K and Peifer M (2007) Novel roles for APC family members and Wingless/Wnt signaling during Drosophila brain development Dev Biol 305: 358-376 35 Henderson B R and Fagotto F (2002) The ins and outs of APC and -catenin nuclear transport EMBO Rep 3: 834-839 36 Jian Q S, Wei J C, Lei F (2010) APC gene mutations in Chinese familial adenomatous polyposis patients World J Gastroenterol; 16 (12): 1522-1526 37 Joncourt F, Neuhaus B, Foegen KJ, Kleinle S, Steiner B, Gallati S (2004), “Rapid Identification of Female Carriers of DMD/BMD by Quantitative Real-Time PCR”, Human Mutation, 23: 385-391 38 Kelly J Smith, Karen A (2003) The APC gene product in normal and tumorcells Proc Natl , 90: 2846-2850 39 Koolman J (2005), DNA sequencing, Color Atlas of Biochemistry, 2nd ed: 260-262 40 Kawasaki Y, Sato R and Akiyama T (2003) Mutated APC and Asef are involved in the migration of colorectal tumour cells Nat Cell Biol 5: 211215 41 Kemler R (1993) From cadherins to catenins: cytoplasmic protein interactions and regulation of cell adhesion Trends Genet 9: 317-321 42 Kielman M F, Rindapaa M, Gaspar C, van Poppel N, Breukel C, van Leeuwen S, Taketo M M, Roberts S, Smits R and Fodde R (2002) Apc modulates embryonic stem-cell differentiation by controlling the dosage of -catenin signaling Nat Genet 32: 594-605 43 Kinzler K W et al (1991) Identification of FAP locus genes from chromosome 5q21 Science, 253: 661–665 44 Knudsen AL, Bisgaard ML, Bülow S: Attenuated familial adenomatous polyposis (AFAP) A review of the literature Fam Cancer 2003, : 43-55 45 Kroboth K, Newton I P, Kita K, Dikovskaya D, Zumbrunn J, WatermanStorer C M and Nathke I S (2007) Lack of adenomatous polyposis coli protein correlates with a decrease in cell migration and overall changes in microtubule stability Mol Biol Cell; 18: 910-918 46 Lee HH, Morse SA, Olsvik O (1997), “Nucleic acid amplification technologies: application to disease diagnosis”, Eaton Publishing: 49-60 47 Louie R K, Bahmanyar S, Siemers K A, Votin V, Chang P, Stearns T, Nelson W J and Barth A I (2004) Adenomatous polyposis coli and EB1 localize in close proximity of the mother centriole and EB1 is a functional component of centrosomes J Cell Sci; 117: 1117-1128 48 Mahmoud N N, Boolbol S K, Bilinski R T, Martucci C, Chadburn A and Bertagnolli M M (1997) Apc gene mutation is associated with a dominantnegative effect upon intestinal cell migration Cancer Res; 57: 5045-5050 49 Marrtjie N, Elsa B, Frederik J H (2007) Genotyp-phenotype corelations in 19 Dutch cases with APC gene deletions and a literature review Eur J hum Genet; 15 (10) : 1034-1042 50 McPherson MJ, Hames BD, Taylor GR (1995) Optimizing PCR, PCR 2- A practical approach, Oxford University Press: 1-22 51 Miyashiro I, Senda T, Matsumine A, Baeg G H, Kuroda T, Shimano T, Miura S, Noda T, Kobayashi S, Monden M et al (1995) Subcellular localization of the APC protein: immunoelectron microscopic study of the association of the APC protein with catenin Oncogene; 11: 89-96 52 Miyoshi Y, Ando H, Nagase H, Nishisho I, Horii A, Miki Y, Mori T, Utsunomiya J, Baba S, Petersen G (1992) Germ-line mutations of the APC gene in 53 familial adenomatous polyposis patients Proc Natl Acad Sci U S A; 89(10): 4452–4456 53 Moisio A, Jurvinen H, Peltomaki P (2002) Genetic and clinical characterisation of familial adenomatous polyposis: a population based study, Gut 50 (6): 845-850 54 Morin P J, Vogelstein B and Kinzler K W (1996) Apoptosis and APC in colorectal tumorigenesis Proc Natl Acad Sci USA; 93: 7950-7954 55 Morrison E E, Wardleworth B N, Askham J M, Markham A F and Meredith D M (1998) EB1, a protein which interacts with the APC tumour suppressor, is associated with the microtubule cytoskeleton throughout the cell cycle Oncogene; 17: 3471-3477 56 Moseley J B, Bartolini F, Okada K, Wen Y, Gundersen G G and Goode B L (2007) Regulated binding of Adenomatous polyposis coli protein to actin J Bio Chem 282: 12661-12668 57 Munemitsu S, Souza B, Muller O, Albert I, Rubinfeld B and Polakis P (1994) The APC gene product associates with microtubules in vivo and promotes their assembly in vitro Cancer Res; 54: 3676-3681 58 Nakamura M, Zhou X Z and Lu K P (2001) Critical role for the EB1 and APC interaction in the regulation of microtubule polymerization Curr Biol; 11: 1062-1067 59 Nathke I (2006) Cytoskeleton out of the cupboard: colon cancer and cytoskeletal changes induced by loss of APC Nat Rev Cancer; 6: 967-974 60 Noritake J, Watanabe T, Sato K, Wang S and Kaibuchi K (2005) IQGAP1: a key regulator of adhesion and migration J Cell Sci; 118: 2085-2092 61 Powell S M, Zilz N, Beazer-Barclay Y, Bryan T M, Hamilton S R, Thibodeau S N, Vogelstein B and Kinzler K W (1992) APC mutations occur early during colorectal tumorigenesis Nature; 359: 235-237 62 Reece RJ (2004) Polymerase chain reaction Analysis of Genes and Genomes, John Wiley & Sons Ltd: 153-182 63 Rowley PT (2004) Screening for an inherited susceptibility to colorectal cancer Genet Test ; : 421-430 64 Sieber OM, Lamlum H, Crabtree MD (2002) Whole gene APC deletions cause classical familial adenomatous polyposis but not attenuated polyposis or “multiple” colorectal adenomas, Proc Natl; 99 (95): 2954-2958 65 Schouten JP, McElgunn CJ, Waaijer R, Zwijnenburg D, Diepvens F, Pals G (2002) Relative quantification of 40 nucleic acid sequences by multiplex ligation-dependent probe amplification Nucleic Acids Res; 30 (12): 57 66 Sellner LN, Taylor GR (2004), “MLPA and MAPH: New Techniques for Detection of Gene Deletions”, Human Mutation, 23: 413-9 67 Shee Ping Chen, Shih Tzu, Shu Wen Jao (2006) Single nucleotid polymorphisms of the APC gene and colorectal cancer risk: a case control study in Taiwan BMC Cancer; 6: 83-89 68 Sorscher DH (1997) DNA amplification techniques Molecular Diagnostics, Humana Press: 98-101 69 Su L K, Burrell M, Hill D E, Gyuris J, Brent R, Wiltshire R, Trent J, Vogelstein B and Kinzler K W (1995) APC binds to the novel protein EB1 Cancer Res; 55: 2972-2977 70 Taketo M M (2006) Wnt signaling and gastrointestinal tumorigenesis in mouse models Oncogene 25: 7522-7530 71 Tighe A, Johnson V L and Taylor S S (2004) Truncating APC mutations have dominant effects on proliferation, spindle checkpoint control, survival and chromosome stability J Cell Sci; 117: 6339-6353 72 Turcot J, Després JP, St Pierre F Malignant tumors of the central nervous system associated with familial polyposis of the colon: report of two cases Dis Colon Rectum 1959, 2: 465-468 73 van Es J H, Giles R H and Clevers H C (2001) The many faces of the tumor suppressor gene APC Exp Cell Res; 264: 126-134 74 Vander Lujit RB, Khan RM, Vasen HF (1997) Molecular Analysis of the APC gene in 105 Dutch kindreds with familial adenomatous polyposis: 67 germline mutations indentified by DGGE, PTT and Sothern analysis; (1): 7-16 75 Wallis YL, Morton DG, McKeown CM and Macdonald Molecular analysis of APC gene in 205 families: extended genotype-phenotype correlations in FAP and evidence for the role of APC amino acid changes in colorectal cance predispoition J Med Genet 1999; 36: 14-20 76 Watanabe T, Wang S, Noritake J, Sato K, Fukata M, Takefuji M, Nakagawa M, Izumi N, Akiyama T and Kaibuchi K (2004) Interaction with IQGAP1 links APC to Rac1, Cdc42, and actin filaments during cell polarization and migration Dev Cell; 7: 871-883 PHỤ LỤC 1: mRNA CỦA GEN APC GenBank: M74088.1 Vùng đề tài khảo sát phần gạch dưới: từ codon 653 (bp 1967) đến codon 1601 (bp 4803), vùng hotspot vùng in đậm: từ codon 998 (bp 2994) đến codon 1467 (bp 4401) Human APC gene mRNA, complete cds LOCUS DEFINITION ACCESSION VERSION KEYWORDS SOURCE HUMFAPAPC 8972 bp mRNA Human APC gene mRNA, complete cds M74088 M74088.1 GI:182396 Homo sapiens (human) linear PRI 09-DEC-1993 ORIGIN 61 121 181 241 301 361 421 481 541 601 661 721 781 841 901 961 1021 1081 1141 1201 1261 1321 1381 1441 1501 1561 1621 1681 1741 1801 1861 1921 1981 2041 2101 2161 2221 2281 2341 gtccaagggt gcactgaaga acaaaactgg attgaagatg cttaacttag tcttatggaa atgggttcat gaagaacttg aaagactggt actgaaaatt caaatcagag cagcgaagaa ttacagtccc catgatgctg ggtaatggtc agtagcacac gtgtattcat ctagctatgt ctcctcatcc ggcagtaaag cctgatgaca gcttactgtg aaaaatccaa aaactttcat attgcagaat attacactaa aacaaggcta tctgaaagtg gcagatgtaa tgtgctttag ttgtcagcac tttttggttg ggaggtggga atcctaagag acaatagtca caggaagcat cacaaaatga gcgaagtaca aggaaacaaa aatatagaca agccaaggat tggagaactc aaactgaggc aagctatggc atagcagtaa gccgggaagg ttccaagaag agaaagagag attacgctca tttccttaca ttgcgatgga tagccagaat aagcaacaga agcggcagaa agggttcaac actctgcacc tgttgtcaat ctagctccca agcttttaca aggctcgggc agagaggcag aaacctgttg tgccagctcc ttgatgaaga tattgcaagt gacgatatgc cgctatgctc aagacttaca atagtaaaaa aagttaaaaa attgcactga gcactcttac tattacggaa agaacaactg gtaatgcatg tatgggacat ttgctatggg aggatgccaa aagccctaga atttaagtcc ggctgcagct aaatcttcga atctaatatg ttcttctgga tttccctgga atctgtatca agggtttgta gtcattgctt acttcagaat aacagatatg agaacaacta tcagcaaatc agcagagagg tgaaggtcaa tacacgaatg tcgaaggctg gcttggtact agacagctgt tggcaatgac cagggccagt gcgtgaaatc ggagtggcag tgttgaacat gcatagacat ggactgtgaa tggaatggct tatgaaaggc gcaggttatt gacgttgcga ggaatcaacc gaataaagct ttaccggagc tgtgtccagc tctacaaact tggaactttg gggggcagtt aagtgctgca tattatgtct agcagaatta caaggcatct tcatatgatc caagagctag aaggaagtac cagattgatt gtaaaactgc agccgttctg aatggaagca cttgctgatc ctcactaaaa accagaaggc ggtacctgcc gaaaaggaca tcatctcaga ggagtgggag gaccatgaaa acaagtcatc catgataagg atatccatgc aaagactctg gcagcactcc cgagtccttc gaagctcatg cagatctgtc gcaatgaatg atgtacgggc ttgacaaact tgcatgagag gcaagtgttt gaagttggaa ctcaaaagcg gatatatgtg cagacaaaca ttgatagcta ttattacaac tggaatctct agcatgctca gctttaagga cctggctcaa gatgctcagc catcgtagta agttgttaaa aagataattc ttaaacaact tattagagcg ggtcaaaaat gagagtgcag gagaaagtac ttgacaaaga gaatagatag aattggaata aggatatgga tacttcgtat acaagcatga aaatcaacat cagccagtgt tgggaaccaa atgatatgtc gacagtctgg tattgttggg acaacatcat atcttttgga aaccaggcat ctgctgtgtg aactaggggg ttactaatga tgacttttgg cacttgtggc tgaggaattt gtgtgaaagc tattgagtgc ctgtagatgg ctttagccat caaatgagga acttaaaatc cagcaagaaa agaacctcat atctcatggc gcttgccatc acttatcaga agcagagaca gcaagttgag caatcatctt acaaggaagt tcttaaagag gtccctccgt tcctgttcct tggatattta agaaaaggaa tcttccttta tgaagcaagg aaaacgagca acgacagctt aaccggctca ggcaacttct tttgagttct ggtggaaatg gcgaactttg atgtcttcct aaattcccgg tcactcacag acagatacgc ggaccaggac tgttctaatg actacaggcc ccactacagt agatgtagcc ccaactaaaa gtcttggcga attgatggaa cttatggaat tgcacttgca tattgaaagt ccacaggcaa tcatagtttg tcctaaagac tcattcaaag aaataggcct tcttcatgtt aacttttgac caagcaaagt 2401 2461 2521 2581 2641 2701 2761 2821 2881 2941 3001 3061 3121 3181 3241 3301 3361 3421 3481 3541 3601 3661 3721 3781 3841 3901 3961 4021 4081 4141 4201 4261 4321 4381 4441 4501 4561 4621 4681 4741 4801 4861 4921 4981 5041 5101 5161 5221 5281 5341 5401 5461 5521 5581 5641 5701 5761 5821 5881 ctctatggtg aatactggca tcttcatcaa gaacgcggaa aagcgaggtt tcagccattc gtgacagatg tacaatttca gaatacaaga aaaagaggtc tgcagttatg gatgataatg cagttgaact ataatagaag tatcctgttt cagcaggaat gtgggttcta tatgaagatg gaagaagaga cagcctattg ttttcattct agtgagaata tctgcacaga aaccaagaaa agttcattat gaagcagatt tcagctgaag agcagactgc tcttcaggag cactatgttc agttttgaga agtggcatta agaagtaaaa aataaagcac gcagttcaga agtactccag tttatacaga aatgaaacag aaaactattg ctagaagaat gcccagactg tacaaacttc ggggatgata acatctctaa gttagaggag agaagtacag gacaataaag gggaaaagtc gcgtcgtctt ccagtaaaac tcaaaaaata aatttgaaaa agaggaagtt tgtttttcac tccagggaaa accagccaca aagcagccaa cagtcatcca gctattgaaa attatgtttt acatgactgt gaggaagctt ttggtctagg tgcagatctc atacctctca agagaaatgc ctaagtcgga gatcttcaaa aaatgaaacc gtcaataccc atggagaact ctggaaggca atgaaataaa atactgagag gtgtttctcc atcatggaat ataagcctac gaccaacaaa attatagttt caaagagttc cgtccacacc gtagaagtgg caatacagac catctttgtc ctgctaatac atcctgtgag agggttctag cgaaatctcc aggagacccc gtcgttcgat taagccccag cacctccacc ctactgctga gggtccaggt atggattttc aagatgtgga aatcagagca attctgaaaa gtattatttc cttcaaaatt taccatcaca tgccacgggt gtgatctaac gagcacagtc atgaggctca cagaggaagg acaagccttt ctgcacccaa ctataccaca atttaaatgc ataattccaa ttgcttttga gaaatgattc aggctgaatt cagaactaac taaatcgagg aagacatacc atactccagt tgacaccaat cctttcacca agatagttct caactaccat caccactgca ggaagacaga acttagaaga aaattcaaat tgatagttta ctcgattgaa agccgaccta agatacacca aagtccttca acaaagtgag cactgatgat atacaggtca taatcaaaat caattatagt ttatagcata aaaatatgcc atctggacaa ttcatctaat tcagcctcaa ttattgtgta atcagctgaa cctgcaaata cgaagttcca tttatcttca ctccaaaagt actcatgttt tgccagctcc tgatcttcca acctcctcaa aaagagagag tcttccagat ttgttcatcc attaagaata gcctaaagaa ggacctatta tgccatgcca acctccacct aaacaggttg gtattgtgtt aatcgaatcc aggtgaattt aggaggaaaa tgatattctt ccgtgtgaaa caaaaatcag aaatactgaa tgagagagtt ggacttcaat ttcacctcat tttgagttct aagaaaggca ctccaaccaa tcagcctaaa agacagaggg ttgcttttct cgacatgatg tatttgaata cgttctgaaa ccagcaacag gcccagattg agttctgggt agctctgctg aggacatgtt aatagtgtca tcctattctg gcccataaaa ataaattata cagaatgaaa caaagacaat aaacacctca cggggagcca gtaagccagt gaacgttact aaatataatg acagatattc agcagtaaaa gccaagaggc aaggctgcca gaagatactc gatgaaatag gcagaaataa gcagtgtcac gaatcagcca ggtgctcaga agcagatgta gttcagagtg gatagccctg acagctcaaa agtggaccta gctgatactt agcctgagtg atgcctccag tcaaatgaaa gatgattcag acaaagtcat gtggcaagga caaccccaaa gaagggacac cctccaaatg gaaaaacgag acctcatctg gcagaatgca aagataatgg ttagatggta tataggacac ttctcagaca gataagctcc cattacacgc ctagattttg aaagaaaata caatcagcta cccatacttc gcagcaactg cataattcct ataataggtc ctacagtgtt aagatagaag aaaatccagg ccaaagtcat ctaccactga cccatacaca ctatgcctta gtagtagtga aagatgatga tacatagtgc gtcttaaata gatgggcaag caaggaatca agttccaacc atggttcaga ctttgtgtca ctgaagaaga aagagaaacg cttcatcaca ccgaacatat agaatcagct cttgcaaagt caatatgttt gatgtaatca aagaaaagat agcaccctag ggcacaaagc cacccaaaag cttctgtcag aaccatgcag gacaaaccat ccaagcgaga agcaagctgc tattacattt ctctgagcct ttcaggaaaa accaagagaa atgatgatga cacgtaaagc aaccaagtca agcatgttag ctataaactt agttagctgc ataccattcc taaccatacc ttaattctgc accaggtcca agaaaaagaa gtgtaagaaa acaaagattc caaataatga ctattgaagg atgatgatga aggaatcaga ataagacaca agaaacaatc atgaaaagtt ctctgagttc agacaatttt acccagctcc tttggagaga aacttcttca ggaagaagtg attacattgt ttcaaacact tgccaaatta tggttatggt aagtaagttt aaatcatatg ttcagatgag acccaaacac aagtacaact acattttgga aacaaatcga agaagatgac acagcatgaa tcatgtggat gaaacagtca gtcttcaagc ccatccaagt ttcttctatt ttcaagatgt gacgacacag tggaactagg aaccaaatcc tgttgaattt tccacctgaa ttcacttgat tggaatggta gccaccaagc agtacctaaa agtaaatgct tgccacggaa cgatgagcca tgacaatggg agaggcagaa tattgaaata aaaaaagcca gctgcctgtg ttttacaccg ttccacagct tggagaagga tacagaaggc tgaattggat tatgcccaaa gcaagcatct accaacttca aaatgcagac aaagaaacag agatagagtc aactccttac tgttgacctt ggctaaagtt agctattgca cacttttccc acagaatttt tctcagtgac 5941 6001 6061 6121 6181 6241 6301 6361 6421 6481 6541 6601 6661 6721 6781 6841 6901 6961 7021 7081 7141 7201 7261 7321 7381 7441 7501 7561 7621 7681 7741 7801 7861 7921 7981 8041 8101 8161 8221 8281 8341 8401 8461 8521 8581 8641 8701 8761 8821 8881 8941 attgaccaag tcacagggag gaagataccc gaagatgacc agactcaagg gatctgacac gattcagaaa ttacatcaag atcctttccc gaagaaaaac acattggaaa tataaaagtt cagccccttc ggagttcgaa actccagcct aagccatctg tcaagtaaag caaccattaa ggaataagtc tcaactaagt caacagaacc gagtctgcct gaactttcta cctgtattag aaattggagg actaggtccc acacattcgt atagagtata agtccttcta tcatcatccc tctgcttcat atttcaggaa ataaaagaaa acaaatggtg gaggatgttt cccacaggta aaagattcaa accgtgggtt ggaactgaga tctatagtgg gggactgttg gcagatagca aagcgagatt tctgggtctt tatgttaatt aaattttgta tagtatactt atagtaaagc ccaacttcct tatattgctg attggtattt aaaacaacaa aaccaagtaa cagtttgttt tgttgcagga gtgataatga ttgatttgaa attttgattg ctgctgctgc tgaaatcagg cctttacaag ctaaaaagat tgattactgg aagcaaacat atagctcctc ccaaaagccc tgaaatcaga caccttctag gtagacctat ctcctaacaa cctcaggttc ttaccaaaca ccaaaggact gaatgtcttc tacgccagtc aatctgcttc aggcacaaac ctgttcaggc atgatggaag gacttccaat ttcctcgagt cagaatccag ccaaacaaag atgaattttc ctgaatcaaa gggtgagaat atactccccc aagataatca tggaaaatcg taaaaccagg aacgtacccc ctgccagagt cttcagctcg ccaaaactga accttgtgac acaactgcta aataggtttg tgtcttcact caagtatgtt ttaattattg ttatcaatca atgcaaaaaa taaagaaaat acctcaagca ctcaagaaac atgtataagc aaaacatagt agatatacag gaaagctatt tgcatgttta aatctctctg taataaaggc agaatctgaa aaaagttcga gccttcaatc aagtacaagt tagtgaaggt attaagccct atcaggatct acagtctcct attatctcaa tggaaaaatg aacaggttta aaatcagatg aactaaatca aactttcatc atttgaatct tccagtttta tggtggatgg accagcaaag caataggtca aagcacttgg tgaaaaagca taaagaaaac tcccacaaat gactctaatt tgaggactgt ggtgattgac ggcaaaacaa cctgaactcc acaaaataat attcagttct gactcctttt gccatctcag cagcacagaa atctgtttaa tatagacatt attcttgtta ggtcttattt tgtacagtat cttgtcttaa tttctagatt aaatgttttt gaacctatca tcaggctatg agttctctca tccgcaatgc cccagaaata agaccagatt caggaaggtg tctagacaag ggatcaccat ccacgaattc agtaaaggaa tctaattcag tctcgaggca cctgtttcta caaacagcca gttgccaggc agagattcga ggccgaaact cttccaagga tcatatacat tccaagaatg aataatggta agtggaagtg aaagaagctc ctttctccat agtccttccc cgaaaactcc cgccatgata ggaacctgga agaagaactg aaaagtgagg caagtatccg agtacttctc tatcaaatgg cccattaaca agtgtttcag aatgtgggta tttattcagg cctgtccctg agcagctcaa aattacaacc atcccaactc tccagtggaa aagagaggaa ttgtttcaaa gagggttttt tgggaggcac gttttacatg aataatgaac ataaactgac gt aagagactga ctcctaaatc gttctcttag caaaaaagaa tgggtggcat cagaacatgg caaattccat cttcgtctga ttcatcttac taaaaccagg tcaaaggagg aaatttcagg ggacaatgat aaaaaggccc ccacttctcc agacatccca ccccttcaag caatttcccc catcatcccc ctccaggtag ccagtagtat atggagccaa aatctgatag caagcccaac catctagacc ttcctgatat cacctaatct ttgcacggtc aacgtgagca gaagttcatc atgaaaaaca caaaaggaac agaccgtttc cacctgctgt atcctagatc aaaaggcaaa atggcagtgt tggatgcccc tatcagagac gcaaacacag caagccctag cagtgaataa cccaaagtcc gaatgaaact tgaaacttta gttctggaag tcttgatggt tatttaaagt actacagata taaacttaca gccccctgac atttcatgtt tattgactct aaagccttca attaggtgaa tctatcccct agtaagtagt ttcagattcc acctgatcaa ggagaaaagt aaaaaaagtt ccaaatgaaa tcatattcca accccttaag tagaggagcc aataggtggg acctgcccag tggtagaaat tagtactgct acagatgagc tccaagaagt taaaaaggta atcagaaaga cttaagaaga agcttctccc gtctctatcc cagtcccact tcattctgaa cagcaaacat ttcaattctt tgtgaactct atggagaaaa ctcaggtgct ttctaaaaca tggaagatct tccaaacatt tcccatgcgt tgaccaaaaa taatgaaagt ttcacctagt gaaaagcagc caacacaaag taagcgccat aagaaaattc aaagactgaa ccatatttga taggaaaaaa agcacccatc gaaaatatga tcagggaaaa PHỤ LỤC 2: PROTEIN APC >AAA03586.1 Trình tự protein APC với 2843 acid amin – sản phẩm gen APC Phần gạch phần đề tài khảo sát (từ codon 653 đến codon 1601) phần in đậm phần hotspot (từ codon 998 đến codon 1467) MAAASYDQLL KQVEALKMEN SNLRQELEDN SNHLTKLETE ASNMKEVLKQ LQGSIEDEAM 61 ASSGQIDLLE RLKELNLDSS NFPGVKLRSK MSLRSYGSRE GSVSSRSGEC SPVPMGSFPR 121 RGFVNGSRES TGYLEELEKE RSLLLADLDK EEKEKDWYYA QLQNLTKRID SLPLTENFSL 181 QTDMTRRQLE YEARQIRVAM EEQLGTCQDM EKRAQRRIAR IQQIEKDILR IRQLLQSQAT 241 EAERSSQNKH ETGSHDAERQ NEGQGVGEIN MATSGNGQGS TTRMDHETAS VLSSSSTHSA 301 PRRLTSHLGT KVEMVYSLLS MLGTHDKDDM SRTLLAMSSS QDSCISMRQS GCLPLLIQLL 361 HGNDKDSVLL GNSRGSKEAR ARASAALHNI IHSQPDDKRG RREIRVLHLL EQIRAYCETC 421 WEWQEAHEPG MDQDKNPMPA PVEHQICPAV CVLMKLSFDE EHRHAMNELG GLQAIAELLQ 481 VDCEMYGLTN DHYSITLRRY AGMALTNLTF GDVANKATLC SMKGCMRALV AQLKSESEDL 541 QQVIASVLRN LSWRADVNSK KTLREVGSVK ALMECALEVK KESTLKSVLS ALWNLSAHCT 601 ENKADICAVD GALAFLVGTL TYRSQTNTLA IIESGGGILR NVSSLIATNE DHRQILRENN 661 CLQTLLQHLK SHSLTIVSNA CGTLWNLSAR NPKDQEALWD MGAVSMLKNL IHSKHKMIAM 721 GSAAALRNLM ANRPAKYKDA NIMSPGSSLP SLHVRKQKAL EAELDAQHLS ETFDNIDNLS 781 PKASHRSKQR HKQSLYGDYV FDTNRHDDNR SDNFNTGNMT VLSPYLNTTV LPSSSSSRGS 841 LDSSRSEKDR SLERERGIGL GNYHPATENP GTSSKRGLQI STTAAQIAKV MEEVSAIHTS 901 QEDRSSGSTT ELHCVTDERN ALRRSSAAHT HSNTYNFTKS ENSNRTCSMP YAKLEYKRSS 961 NDSLNSVSSS DGYGKRGQMK PSIESYSEDD ESKFCSYGQY PADLAHKIHS ANHMDDNDGE 1021 LDTPINYSLK YSDEQLNSGR QSPSQNERWA RPKHIIEDEI KQSEQRQSRN QSTTYPVYTE 1081 STDDKHLKFQ PHFGQQECVS PYRSRGANGS ETNRVGSNHG INQNVSQSLC QEDDYEDDKP 1141 TNYSERYSEE EQHEEEERPT NYSIKYNEEK RHVDQPIDYS LKYATDIPSS QKQSFSFSKS 1201 SSGQSSKTEH MSSSSENTST PSSNAKRQNQ LHPSSAQSRS GQPQKAATCK VSSINQETIQ 1261 TYCVEDTPIC FSRCSSLSSL SSAEDEIGCN QTTQEADSAN TLQIAEIKEK IGTRSAEDPV 1321 SEVPAVSQHP RTKSSRLQGS SLSSESARHK AVEFSSGAKS PSKSGAQTPK SPPEHYVQET 1381 PLMFSRCTSV SSLDSFESRS IASSVQSEPC SGMVSGIISP SDLPDSPGQT MPPSRSKTPP 1441 PPPQTAQTKR EVPKNKAPTA EKRESGPKQA AVNAAVQRVQ VLPDADTLLH FATESTPDGF 1501 SCSSSLSALS LDEPFIQKDV ELRIMPPVQE NDNGNETESE QPKESNENQE KEAEKTIDSE 1561 KDLLDDSDDD DIEILEECII SAMPTKSSRK AKKPAQTASK LPPPVARKPS QLPVYKLLPS 1621 QNRLQPQKHV SFTPGDDMPR VYCVEGTPIN FSTATSLSDL TIESPPNELA AGEGVRGGAQ 1681 SGEFEKRDTI PTEGRSTDEA QGGKTSSVTI PELDDNKAEE GDILAECINS AMPKGKSHKP 1741 FRVKKIMDQV QQASASSSAP NKNQLDGKKK KPTSPVKPIP QNTEYRTRVR KNADSKNNLN 1801 AERVFSDNKD SKKQNLKNNS KDFNDKLPNN EDRVRGSFAF DSPHHYTPIE GTPYCFSRND 1861 SLSSLDFDDD DVDLSREKAE LRKAKENKES EAKVTSHTEL TSNQQSANKT QAIAKQPINR 1921 GQPKPILQKQ STFPQSSKDI PDRGAATDEK LQNFAIENTP VCFSHNSSLS SLSDIDQENN 1981 NKENEPIKET EPPDSQGEPS KPQASGYAPK SFHVEDTPVC FSRNSSLSSL SIDSEDDLLQ 2041 ECISSAMPKK KKPSRLKGDN EKHSPRNMGG ILGEDLTLDL KDIQRPDSEH GLSPDSENFD 2101 WKAIQEGANS IVSSLHQAAA AACLSRQASS DSDSILSLKS GISLGSPFHL TPDQEEKPFT 2161 SNKGPRILKP GEKSTLETKK IESESKGIKG GKKVYKSLIT GKVRSNSEIS GQMKQPLQAN 2221 MPSISRGRTM IHIPGVRNSS SSTSPVSKKG PPLKTPASKS PSEGQTATTS PRGAKPSVKS 2281 ELSPVARQTS QIGGSSKAPS RSGSRDSTPS RPAQQPLSRP IQSPGRNSIS PGRNGISPPN 2341 KLSQLPRTSS PSTASTKSSG SGKMSYTSPG RQMSQQNLTK QTGLSKNASS IPRSESASKG 2401 LNQMNNGNGA NKKVELSRMS STKSSGSESD RSERPVLVRQ STFIKEAPSP TLRRKLEESA 2461 SFESLSPSSR PASPTRSQAQ TPVLSPSLPD MSLSTHSSVQ AGGWRKLPPN LSPTIEYNDG 2521 RPAKRHDIAR SHSESPSRLP INRSGTWKRE HSKHSSSLPR VSTWRRTGSS SSILSASSES 2581 SEKAKSEDEK HVNSISGTKQ SKENQVSAKG TWRKIKENEF SPTNSTSQTV SSGATNGAES 2641 KTLIYQMAPA VSKTEDVWVR IEDCPINNPR SGRSPTGNTP PVIDSVSEKA NPNIKDSKDN 2701 QAKQNVGNGS VPMRTVGLEN RLNSFIQVDA PDQKGTEIKP GQNNPVPVSE TNESSIVERT 2761 PFSSSSSSKH SSPSGTVAAR VTPFNYNPSP RKSSADSTSA RPSQIPTPVN NNTKKRDSKT 2821 DSTESSGTQS PKRHSGSYLV TSV ... lý sớm trước ung thư xuất hiện, thực đề tài ? ?Nghiên cứu phát biến đổi gen ung thư đại trực tràng? ??, tập trung vào nghiên cứu đột biến dòng mầm gen APC bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể đa polyp... phổ biến 70-80 Hầu hết ung thư đại trực tràng có liên quan đến yếu tố ngoại sinh, số di truyền Ung thư đại tràng xích ma trực tràng chiếm 50% trường hợp ung thư đại trực tràng Ung thư đại tràng. .. đề tài nghiên cứu đột biến gen ung thư đại trực tràng cơng bố Vì vậy, để đánh giá nguy ung thư đại trực tràng thể đa polyp tuyến gia đình người thân gia đình bệnh nhân ung thư đại trực tràng thể