NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT s ố TÁC DỤNG SINH HỌC CỦA CAO ĐẶC BÀI THUỐC KỲ PHỤ THEO HƯỚNG CẢI THIỆN TUẦN HOÀN NÃO Pham Thái Hà Văn\ Phạm Thanh Tùng^, Bùi Thị Duyên^ HDKH: Bùi Hồng Cường^ Trần Việt Hùng^ ‘B ộ môn Dược học cổ truyền - Trưỏng Đại học Dược Hà Nội ^Trường Đại học Dược Hà Nội, ^Viện Kiểm nghiệm Thuốc Trung ương Từ khoá: thuốc, cao đặc, hoàng kỳ, kỳ phụ, phụ tử, tuần hoàn não Tóm tắt Bài thuốc kỳ phụ xuất xứ từ cổ phương gồm phụ tử hoàng kỳ Cao đặc kỳ phụ, điều chế từ phụ tử (Aconitum carmichaeli Debx.) hoàng kỳ (Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge., Hedysarum poỉybotrys Hand.- Mazz.) theo tỷ lệ 1:4, có chứa nhỏm chất alcaloid, saponin, flavonoid, Polysaccharid, đường khử acid amin Alcaloid toàn phần cao đặc kỳ phụ có hàm lượng 0,087% phổ hấp thụ tử ngoại đặc trưng cực đại hấp thụ bước sóng 231 nm 274 nm Cao đặc kỳ phụ làm tăng lim lượng máu động mạch cảnh mèo liều truyền tĩnh mạch 1,8 g/kg 3,6 g/kg thể trọng, tác dụng tăng tuần hoàn não tương đương 40 mg Tanakan/kg thể trọng mèo liều 84 g dược liệu/kg thể trọng theo đường uổng, cao đặc kỳ phụ không gãy chết chuột nhắt Đặt vấn đề Bài thuốc Kỳ phụ có xuất xứ từ cổ phưong gồm phụ tử hoàng kỳ, phụ tử bổ hoả, hồi dưoTig cứu nghịch; hoàng k>' bổ khí, thăng dương khí [5, 7, ], Nghiên cứu dược lý đại chứng minh phụ tử hoàng kỳ có tác dụng cường tim, giãn mạch ngoại vi, tác dụng khác phụ tử chống viêm, giảm đau; hoàng kỳ tăng cường miễn dịch sức đề kháng thể, hạ đường huyết [1, 7] Nhiều nghiên cứu giới công bố tác dụng tăng cường miễn dịch, bảo vệ tim [6 , 9] phương thuốc kỳ phụ Tuy nhiên chưa có công bố sử dụng phương thuổc kỳ phụ theo hướng cải thiện tuần hoàn não, ứng dụng điều trị thiểu tuần hoàn não - bệnh lý có chế bệnh sinh thiếu máu nuôi não Vì vậy, thực đề tài với mục tiêu: Nghiên cứu thành phần hóa học cao đặc kỳ phụ thử nghiệm số tác dụng sinh học cao đặc kỳ phụ theo hưcmg cải thiện tuần hoàn não Nguyên liệu phưoTig pháp nghiên cứu Nguyên liệu Hoàng kỳ {Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge., Hedysarum polyboírys Hand.-Mazz., họ Đậu - Fabaceae), phụ tử {Aconitum carmichaeli Debx., họ Hoàng liên - Ranunculaceae) Công ty c ổ phần Phùng Gia Phương, phố Trung Kính, Hà Nội cung cấp Cao đặc kỳ phụ điều chế từ dược liệu phụ tử hoàng kỳ theo tỷ lệ 1:4 Bộ môn Dược học cổ truyền - Trường Đại học Dược Hà Nội Tỷ lệ cao thuốc thu so với dược liệu 40,51%, độ ẩm 18,59% Chất đối chiếu, thuốc đối chiếu: Aconitin 95,6% (Xi'an BoSheng Biological Technology Co., Ltd - Trung Quốc), Tanakan 40mg (Ipsen) Hóa chất, dung môi: tiêu chuẩn phân tích Động vật: Chuột nhắt trắng chủng Swiss, chủng, hai giống, tuần tuổi, nặng - 2 gam/con Viện Vệ sinh dịch tễ Trung ương cung cấp Mèo trưởng thành, hai giống, khoẻ mạnh, cân nặng - 2,2 kg/con Động vật thí nghiệm nuôi điều kiện đầy đủ thức ăn nước uống phòng thí nghiệm, Khoa Dược lý - Sinh hoá, Viện Dược liệu từ - ngày trước nghiên cứu suốt thời gian nghiên cứu Phương pháp nghiên cứu - Định tỉnh: + Định tính phản ứng hoả học Định tính số nhóm chất hữu phản ứng hoá học [4], + Định tỉnh phổ hấp thụ tử ngoại' Phân tích alcaloid phụ tử cao thuốc phương pháp quét phổ hấp thụ tử ngoại theo Dược điển Trung Quốc 2005 [8 ], + Định tinh aconitin: Bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng theo Dược điển Việt Nam IV [2] - Định lượng- Định lưọrng alcaloid toàn phần phương pháp acid - base theo Dược điển Việt Nam IV [2], - Thử tác dụng dược lý: + Thử độc tính cấp: Chuột nhắt trắng hai giống, nhịn đói 16 uống nước đầy đủ, chia ngẫu nhiên thành lô, lô con, uống cao kỳ phụ với liều tăng dần để xác định liều cao không gây chết chuột Chuột theo dõi tình trạng chung suổt ngày tỷ lệ chết 72 lô sau uống thuốc Xác định LD 50 theo phương pháp Litchfield-Wilconxon [3], + Thử tác dụng động mạch cảnh mèo: Nguyên tắc\ Đo trực tiếp lưu lượng máu qua động mạch cảnh mèo gây mê So sánh lưu lượng máu qua động mạch cảnh trước sau truyền thuốc Nếu lưu lượng máu sau truyền thuốc lớn lưu lượng máu trước truyền thuốc tức thuốc có tác dụng tăng tuần hoàn động mạch cảnh Chỉ tiêu theo dõi' Lưu lượng máu qua động mạch cảnh thời điểm phút, theo dõi liên tục từ lúc trước truyền đến sau truyền thuốc Chỉ tiêu đánh giá: So sánh lưu lượng máu qua động mạch cảnh (ml/ph) trước bơm thuốc sau bơm thuốc qua đường tĩnh mạch Xác định kết quả: Tính tỷ lệ (%) tăng lưu lượng máu chảy qua động mạch cảnh sau truyền thuốc so với trước truyền theo công thức: X = 100*(Vs - Vt)A^t Trong đó: Vo lưu lượng trước truyền Vt lưu lượng lớn sau truyền X tỷ lệ % tăng lưu lượng máu não sau truyền thuốc so với trước truyền thuốc Thuốc có tác dụng Vs > Vt (p < 0,05) - Xử lý số liệu: Số liệu xử lý phần mềm Microsoft Excel 2000 Kết thí nghiệm biểu thị trị số trung bình cộng/trừ sai số chuẩn: = X ± SE Các thử nghiệm dược lý: Kiểm định khác biệt hai giá trị trung bình test T - Student, khác biệt có ý nghĩa thống kê p < 0,05 Kết Định tính số nhóm chất ừong cao đặc kỳ phụ Định tỉnh phản ứng hỏa học (bảng ỉ) STT Nhóm chất Alcaloid Flavonoid Saponin Tanin Coumarin Phản ÚTig định tính Kết Phản ứng với thuốc thử Mayer + Phản ÚTig với thuôc thử Bouchardat + Phản ứng với thuốc thử Dragendorff + Phản ứng cyanidin + Phản ứng với kiềm + Hiện tượng tạo bọt + Phản ứng với dung dịch FeCla 5% + Phản ứng vói gelatin 1% - Phản ứng mở - đóng vòng lacton - Quan sát huỳnh quang Đánh giá Có Có Có Không có Không có Acid amin Phản ứng với thuốc thử Ninhydrin + Đường khử Phàn ứng với thuôc thử Fehling + Có Polysaccharid Phản ứng với thuốc thử Lugol + Có Có (-) : Phản ứng âm tính (+): Phản ứng dương tỉnh Nhận xẻv Trong cao đặc kỳ phụ có nhóm chất alcaloid, flavonoid, saponin, acid amin, đường khử polysaccharid Định tính phổ hấp thụ tử ngoại Phổ tử ngoại alcaloid cao đặc kỳ phụ, phụ tử ưình bày hình ’T " ; > í,r - K '- ■* S A ■ B Hình Phổ hấp thụ tò ngoại alcaloid phụ tử, cao đặc kỳ phụ (A (phụ tử), B (cao đặc kỳ phụ)) Nhận xét: Phổ tử ngoại alcaloid phụ tử có cực đại hấp thụ bước sóng 231 nm, cao đặc kỳ phụ có cực đại hấp thụ bước sóng 231 nm 274 nm Định tính aconỉtin (hình 2) a s tra n g Cbuân Cm PT Hình Sắc kí đồ alcaloid cao đặc kỳ phụ, phụ tử Chuân (aconitin), Cao (cao đặc kỳ phụ), PT (phụ tử) Nhận xét: Trên sắc kí đồ alcaloid cao đặc kỳ phụ có vết, có vết màu da cam Rf = 0,3 tương đương với phụ tử, vết tương đương với aconitin Định lư Ợ ỉtg a l c a l o i d to n p h ầ n o n g c a o đ ặ c k ỳ p h ụ Hàm lượng alcaloid toàn phần cao đặc kỳ phụ 0,087%, tương đưcmg với 0,87 mg/g Thử tác dụng dược lý - Độc tính cấp (bảng 2) Bảng Độc tính cấp cao đặc kỳ phụ số lô Liều uống (g dưọc liệu/ kg thể trọng) Số chuột ỉô 84 10 số chuột chết Nhận xét\ Đã cho chuột uông thuôc liêu tương đương 84 g dược liệu/kg thể trọng liều tối đa cho chuột nhắt uống mà chuột khỏe mạnh, hoạt động ăn uống, tiết bình thường Không xác định LD50 thuốc nghiên cứu - Tác dụng động mạch cảnh mèo (bảng 3) Bảng Lưu lưọng máu (ml/phút) tỷ lệ (%) tăng lưu lượng máu qua động mạch cảnh mèo sau truyền trước truyền thuốc STT Lô thử n Lưu Iưọng máu qua động Tỷ lệ(% ) mạch cảnh mèo (ml/phút) tăng Trưóc truyền Sau truyền lưu lưọTig máu p KPV 1- 1,8 gdl/kg 12,2 ± ,7 15 ± ,4 24,1 ± ,7 p ... liệu/kg) tác dụng mạnh liều nhỏ - tác dụng phụ thuộc liều thử Bàn luận Thành phần hóa học Phụ tử nghiên cứu: thành phần hoá học rõ ràng, thành phần hoạt chất chủ yếu alcaloid, phổ từ ngoại phụ tử sống... hoàn não Kết nghiên cứu phù hợp với ý tưởng nghiên cửu hướng tới chế phẩm cải thiện tuần hoàn não Dự báo: kỳ phụ tăng tuần hoàn toàn thân tác dụng cường tim, giãn mạch máu Và cần có thêm nghiên cứu. .. 0,087 % tác dụng sinh học cao đặc kỳ phụ Đánh giá độc tính cấp chuột nhắt trắng theo đường uống đến liều tương đưong 84 g dược liệu/kg thể ứọng, cao đặc kỳ phụ không gây chết chuột Cao đặc kỳ phụ