Lời nói đầu TCVN 8139 : 2009 hoàn toàn tương đương với ISO 5554 : 1978; TCVN 8139 : 2009 Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F8 Thịt sản phẩm thịt biên soạn Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học Công nghệ công bố TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 8139 : 2009 Sản phẩm thoát - Xác định hàm lượng tinh bột (phương pháp chuẩn) Meat products - Determination of starch content (Reference method) Phạm vi áp dụng Tiêu chuẩn qui định phương pháp chuẩn để xác định hàm lượng tinh bột sản phẩm thịt Lĩnh vục áp dụng Tiêu chuẩn áp dụng cho sản phẩm không chứa chất bổ sung tinh bột sinh đường khử thuỷ phân Tài liệu viện dẫn Các tài liệu viện dẫn sau cần thiết cho việc áp dụng tiêu chuẩn Đối với tài liệu viện dẫn ghi năm công bố áp dụng phiên nêu Đối với tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố áp dụng phiên nhất, bao gồm sửa đổi, bổ sung (nếu có) ISO 3100, Thịt sản phẩm thịt – Lấy mẫu 1) Thuật ngữ, định nghĩa Trong tiêu chuẩn sử dụng thuật ngữ định nghĩa sau đây: Hàm lượng tinh bột sản phẩm thịt (starch content of meat products): Hàm lượng tinh bột xác định theo qui trình qui định tiêu chuẩn biểu thị theo phần trăm khối lượng ) ISO 3100 thay hai tiêu chuẩn ISO 3100-1: 1991 (đã biên soạn thành TCVN 48331 : 2002) ISO 3100-2: 1991 (đã biên soạn thành TCVN 4833-2: 2002) Hiện nay, ISO 3100-1: 1991 bị huỷ thay ISO 17604: 2003 (được biên soạn thành TCVN 7925: 2008 Vi sinh vật thực phẩm thức ăn chăn nuôi- Phương pháp lấy mẫu thâtn thịt tươI để phân tích vi sinh vật) Nguyên tác Đun nóng phần mẫu thử với dung dịch kali hydroxit etanol thành phần thịt hoà tan hết Gạn, rửa cặn lại etanol nóng, lọc, hoà tan axit clohydric thuỷ phân Xác định chuẩn độ glucoza tạo thành Thuốc thử Chỉ sử dụng thuốc thử đạt chất lượng tinh khiết phân tích Nước sử dụng phải nước cất nước có độ tinh khiết tương đương 6.1 Kali hydroxit, dung dịch etanol Hoà tan 50 g kali hydroxit 800 ml etanol 95 % (thể tích) pha loãng etanol đến 1000 ml 6.2 Etanol, 80 % (thể tích) 6.3 Axit clohydric, dung dịch 1,0 M (không chứa clorua) 6.4 Xanh bromotymol, dung dịch 10 g/1 etanol 95 % (thể tích) 6.5 Natri hydroxit, dung dịch 300 g/1 6.6 Dung dịch làm kết tủa proteln Dung dịch I Hoà tan nước 106 g kali hecxaxyanoferat (ll) ngậm ba phân tử nước [K4Fe(CN)6.H2O] đựng bình định mức vạch 1000 ml pha loãng đến vạch Dung dịch II Hoà tan 220 g kẽm axetat ngậm hai phân tử nước [Zn(CH 3COO)2H2O] nước đựng bình định mức vạch 1000 ml Thêm 30 ml axit axetic pha loãng nước đến vạch 6.7 Thuốc thử đồng Chuẩn bị dung dịch sau đây: a) 25 g đồng (ll) sulphat ngậm năm phân tử nước (CuSO 45H2O) 100 ml nước; b) 144 g natri cacbonat (Na2CO3) 300 ml đền 400 ml nước 50 o C c) 50 g axit xitric ngậm phân tử nước (C 6H6O7.H2O) 50 ml nước Thêm từ từ cẩn thận dung dịch c) vào dung dịch b) khuấy Tiếp tục khuấy ngừng bay cacbon dioxit Thêm dung dịch a) vào hỗn hợp khuấy Để nguội đến nhiệt độ phòng, chuyển hết sang bệnh định mức vạch 1000 ml, pha loãng đến vạch lọc sau 24 h Hỗn hợp sau pha loãng phần dung dịch với 49 phần nước đun sôi để nguội, phải có pH = 10,0 ± 0,1 6.8 Dung dịch thị tinh bột Cho hỗn hợp 10 g tinh bột hoà tan, 10 mg thuỷ ngân (ll) iodua (làm chất bảo quản) 30 ml nước vào lít nước sôi Tiếp tục đun sôi để nguội 6.9 Natri thiosulfat, dung dịch chuẩn khoảng 0,1 N 6.9.1 Chuẩn bị Hoà tan 25 g natri thiosulfat ngậm năm phân tử nước (Na 2S2O5H2O), 1000 ml nước vừa đun sôi, để nguội thêm 0,2 g natri cacbonat ngậm mười phân tử nước (Na 2CO310H2O) Để yên dung dịch ngày trước chuẩn hoá 6.9.2 Chuẩn hoá Cân 150,0 mg kali iođat khô, hoà tan 25 ml nước thêm g kali iođua, 10 ml dung dịch axit clohydric (6.3) Chuẩn độ dung dịch thiosulfat khuấy liên tục Thêm ml dung dịch thị tinh bột (6.8) dung dịch có màu vàng nhạt tiếp tục chuẩn độ mắt màu xanh Nồng độ đương lượng T dung dịch natri thiosulfat tính từ công thức: m khối lượng kali iođat, tính miligam (mg); V thể tích dung dịch natri thiosulfat bổ sung vào dung dịch kali iođat, tính mililit (ml); phân tử lượng tương đối kali iođat 6.10 Kall iođua, dung dịch 100 g/1 Hoà tan 10 g ka li iođua nước thêm nứớc đến 100 ml Bảo quản dung dịch lọ thuỷ tinh màu nâu sẫm 6.11 Axit clohydric, dung dịch 25 % (khối lượng) (không chứa clo) Pha loãng 100 ml axit clohydric đậm đặc không chứa clo (ρ20 1,19 g/ml) 60 ml nước Thiết bị dụng cụ Sử dụng thiết bị, dụng cụ phòng thử nghiệm thông thường, trừ có quy định khác cụ thể sau: 7.1 Máy xay thịt cơ, cỡ phòng thử nghiệm, có gắn đục lỗ, đường kính lỗ không mm 7.2 Nồi cách thuỷ 7.3 Giấy lọc gấp nếp, đường kính 15 cm, không chứa tinh bột 7.4 Tấm amiăng, có lỗ tròn, gắn với bình nón (7.5) 7.5 Bình nón, dung tích 250 ml đến 300 ml, có cổ mài có nắp đậy thuỷ tinh 7.6 bình ngưng, làm lạnh không khí, có khớp nồi hình côn gắn với bình nón (7.5) 7.7 Hạt trợ sôi (ví dụ viên đá bọt bị thuỷ tinh) 7.8 Buret, dung tích 50 ml, phù hợp với loại A TCVN 7149 : 2007 (ISO 385 : 2005) 7.9 Máy đo pH Lấy mẫu 8.1 Tấm 200 g mẫu đại diện Xem ISO 3100 8.2 Bảo quản mẫu, cần, cho không bị giảm chất lượng thay đổi thành phần Cách tiến hành 9.1 Chuẩn bị mẫu thử Dùng máy xay thịt (7.1 ) xay mẫu hai lần trộn để thu mẫu đồng Bảo quản mẫu đồng vật chứa kín khí, đậy nắp vật chứa bảo quản cho không làm giảm chất lượng thay đổi thành phần mẫu Phân tích mẫu sớm tốt, vòng 24 h sau đồng hóa 9.2 Phần mẫu thử Cân khoảng 25 g mẫu thử (9.1), xác đến 0,1 g, cho vào cốc có mỏ 500 ml 600 ml Nếu khối lượng tinh bột phần mẫu thử dự đoán lớn lơn g, giảm khối lượng phần mẫu thử cho phù hợp 9.3 Tách tinh bột Cho 300 ml dung dịch ka li hydroxit etanol nóng (6.1) vào phẫn mẫu thử liên tục khuấy đũa thuỷ tinh đậy cốc có mỏ mặt kính đồng hồ Đun nồi cách thuỷ (7.2) h, khuấy Gạn dung dịch qua giấy lọc (7.3) dùng etanol nóng (6.2) rửa lượng tinh bột giấy lọc với hỗ trợ đũa thủy tinh có đầu bọc cao su Giữ giấy lọc ướt Chú thích Trong số trường hợp, cho ly tâm tốt lọc 9.4 Thuỷ phân Dùng đũa thủy tinh để tách chất kết tủa giấy lọc Khoét lỗ giấy lọc rửa tinh bột qua lỗ 100 ml dung dịch axit clohydric nóng (6.3) cho vào cốc có mỏ 250 ml Đậy cốc có mỏ mặt kính đồng hồ ngâm cốc vào nồi cách thuỷ sôi 2,5 h, dùng đũa thuỷ tinh để khuấy dung dịch Làm nguội dung dịch trung hoà cách nhỏ giọt dung dịch natri hydroxit (6.5), tiến hành cẩn thận cho pH không 6,5; kiểm tra độ pH máy đo pH (7.9) Chuyển hết hỗn hợp vào bình định mức 200 ml, rửa nước, thêm ml Dung dịch I (6.6) sau trộn thêm ml Dung dịch II (6.6), pha loãng đến vạch Trộn lọc qua giấy lọc gấp nếp (7.3) Ngay trước dùng pipet lấy phần dịch lỏng sử dụng cho giai đoạn tiếp theo, kiểm hoá dịch lọc làm chuyển sang xanh bromotylmol (6.4) cách thêm giọt dung dịch natri hydroxit (6.5) 9.5 Xác đ ịnh glucoza Nếu chưa biết hàm lượng tinh bột xắp xỉ mẫu, tiến hành phân tích sơ đ ể ước tính Pha loảng phần dịch lỏng (V2) dịch lọc (9.4) nước đến thể tích biết (V3) cho 25 ml dung dịch pha loãng chứa từ 40 mg đến 50 mg glucoza trường hợp 60 mg glucoza Trộn dùng pipet lấy 25,0 ml dịch pha loãng cho vào bình nón (7.5) Dùng pipet lấy 25,0 ml thuốc thử đồng (6.7) cho vào bình thêm vài hạt trợ sôi (7.7) Chú thích Về bản, tổng thể tích dịch lỏng giai đoạn 50.0 ml Lắp bình ngưng (7.6) vào bình Cho bình cầu bình ngưng lên lưới kim loại phủ amiăng (7.4) Đun dịch lỏng đến sôi bếp ga khoảng tiếp tục đun sôi nhẹ 10 Sau làm nguội nhanh đến nhiệt độ phòng Lấy bình ngưng thêm 30 ml dung dịch ka li iođua (6.10) thêm tiếp nhanh tốt 25 ml dung dịch axit clohydric (6.11) Đậy bình tiến hành chuẩn độ Chuẩn độ iot giải phóng dung dịch natri thiosulfat chuẩn (6.9) Khi dung dịch có màu vàng nhạt, thêm khoảng ml dung dịch thị tinh bột (6.8) tiếp tục chuẩn độ màu xanh biến 9.6 Xác định mầu trắng Tiến hành xác định mầu trắng theo quy trình 9.5, dùng 25,0 ml nước thay cho 25,0 ml dịch lọc pha loãng 10 Biểu thị kết 10.1 Tính toán công thức Tính chênh lệch thể tích ghi lại hai lần chuẩn độ, biểu thị mililit dung dịch natri thiosulfat xác đến 0.1 N, theo công thức: 10 T x (Vo – V1) T nồng độ đương lượng dung dịch natri thiosulfat chuồn (xem 6.9.2); Vo thể tích dung dịch natri thiosulfat chuẩn (6.9) cần cho phép xác định mẫu trắng (9.6), tính mililit (ml); V1 thể tích dung dịch natri thiosulfat chuẩn (6.9) cần cho dịch pha loãng (9.5) Tính mililit (ml) Tính hàm lượng tinh bột, biểu thị phần trăm khối lượng, theo công thức: V2 tích phần dich lọc chưa pha loảng (xem 9.5), tính bắng mililit (ml); V3 thể tích phần dịch lọc pha loãng (xem 9.5), tính mililit (ml): mo khối lượng phẫn mẫu thử (9.2), tính gam (g); mi khối lượng glucoza xác định từ công thức 10 T x (Vo – V1) cách đối chiếu Bảng Hình 1, tính miligam (mg); 0,9 hệ số chuyển đổi khối lượng glucoza m tương ứng với khối lượng tinh bột Lấy kết xác đến 0,1 % 10.2 Độ chụm 10.2.1 Độ lặp lại Chênh lệch kết hai lần xác định tiến hành đồng thời liên tục nhanh người phân tích không vượt 0,2 g tinh bột 100 g mẫu 10.2.2 Độ tái lập Chênh lệch kết hai lần xác định tiến hành hai phòng thử nghiệm mẫu thử không vượt 0,3 g tinh bột 100 g mẫu 11 Báo cáo thử nghiệm Báo cáo thử nghiệm cần rõ phương pháp sử dụng kết thu Bảo cáo thử nghiệm cần đề cập đến chi tiết thao tác không quy định tiêu chuẩn này, xem tuỳ ý với tình bất thường ảnh hưởng đến kết quả; Báo cáo thử nghiệm phải bao gồm thông tin cần thiết để nhận biết đầy đủ mẫu Phụ lục A (Qui định) Bảng – Chuyển đôI mililit dung dịch natri thiosulfat 0,1 N sang miligam glucoza 10 T x (Vo – V1) Số mililit dung dịch natri 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 Khối lượng glucoza tương ứng m1 ∆ m1 Mg Mg 2,4 2,4 4,8 2,4 7,2 2,5 9,7 2,5 12,2 2,5 14,7 2,5 17,2 2,6 19,8 2,6 22,4 2,6 25,0 2,6 27,6 2,7 30,3 2,7 33,0 2,7 35,7 2,8 38,5 2,8 41,3 2,9 44,2 2,9 47,1 2,9 5,0 30 53,0 3,0 56,0 3,1 59,1 3,1 62,2 ... với khối lượng tinh bột Lấy kết xác đến 0,1 % 10.2 Độ chụm 10.2.1 Độ lặp lại Chênh lệch kết hai lần xác định tiến hành đồng thời liên tục nhanh người phân tích không vượt 0,2 g tinh bột 100 g... dung dịch có màu vàng nhạt, thêm khoảng ml dung dịch thị tinh bột (6.8) tiếp tục chuẩn độ màu xanh biến 9.6 Xác định mầu trắng Tiến hành xác định mầu trắng theo quy trình 9.5, dùng 25,0 ml nước thay... nóng (6.2) rửa lượng tinh bột giấy lọc với hỗ trợ đũa thủy tinh có đầu bọc cao su Giữ giấy lọc ướt Chú thích Trong số trường hợp, cho ly tâm tốt lọc 9.4 Thuỷ phân Dùng đũa thủy tinh để tách chất