LỜI MỞ ĐẦU Lysine chín loại amino acid mà thể người động vật tự tổng hợp được, 12 axit amin thiết yếu cần có bữa ăn hàng ngày Lysine thành phần nhiều loại protein, yếu tố quan trọng việc trì hệ miễn dịch, giúp tăng cường hấp thụ trì canxi, phát triển men tiêu hóa Tuy nhiên, thể tổng hợp Lysine qua đường thực phẩm lòng đỏ trứng gà, thịt, cá, loại đậu sữa tươi dạng thuốc Nhưng việc cung cấp Lysine qua đường thực phẩm dễ bị phá hủy trình đun nấu vậy, cách cung cấp Lysine hiệu sử dụng loại thực phẩm chế biến sẵn, có bổ sung Lysine với liều lượng thích hợp, vừa đủ cho nhu cầu thể Lysine tổng hợp từ công nghệ hóa học, tiếp công nghệ tách chiết phổ biến công nghệ lên men vi sinh vật công nghệ sản xuất lysine giới, lysine sản xuất quy mô công nghiệp nước Mỹ, Nhật Bản, Đông Âu Công nghệ lên men Lysine ngày mở rộng với hiệu suất trình lên men tương đối cao Tại Việt Nam, hàng năm lysine nhập vào với số lượng tương đối lớn Tuy nhiên công ty VeDan đưa vào sản xuất với quy mô công nghiệp, nghiên cứu Việt Nam dừng lại quy mô phòng thí nghiệm, giống vi sinh vật chưa đạt chuẩn Đề tài thực tế phòng nuôi cấy vi sinh vật công ty CPHH VeDan VietNam, nhằm giới thiệu quy trình công nghệ sản xuất Lysine phương pháp lên men quy mô phòng thí nghiệm Thí nghiệm trước làm tiền đề cho thí nghiệm sau, từ giúp tìm phương pháp điều kiện nuôi cấy tối ưu để áp dụng vào sản xuất quy mô công nghiệp, nhằm mang lại giá trị kinh tế cao TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY LYSINE 2.1 Khái niệm Lysine Hình 2.1.a – cấu trúc không gian L- Lysine Tên quốc tế: 2,6 – diminohexanoic acid Công thức hóa học : C6H14N2O2 Khối lượng phân tử gam : 146.188 g/mol Công thức cấu tạo : NH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH-COOH NH2 Lysine a-amino acid Là acid amin thuộc họ aspartat, có chứa nhóm (-NH2) nhóm (-COOH) Lysine tổng hợp qua đường trao đổi chất phân nhánh, qua đường có metionin, treonin, izoloxin tạo thành 2.2 Các phương pháp tổng hợp Lysine Phương pháp thủy phân Phương pháp tổng hợp hóa học Phương pháp kết hợp Phương pháp tổng hợp axit amin công nghệ vi sinh vật : Thu nhận axit amin dạng L Năng xuất cao Giá thành sản phẩm thấp Nguyên liệu sản xuất rẻ, dễ kiếm 2.3 Tổng quan phương pháp nuôi cấy Lysine 2.3.1 Giống vi sinh vật Trong nuôi cấy Lysine Người ta thường sử dụng chủng Corynebacterium glutacium vì: Có khả tổng hợp Lysine với mức độ cao nhất, người ta sử dụng vi khuẩn Corynebacterium glutamicum đột biến Sống môi trường chứa hàm lượng methionine cao threonine thấp Tương đối dể nuôi áp dụng vào công nghệ lên men quy mô công nghiệp Đặc điểm giống: Hình thái khuẩn lạc: tròn, trơn, bóng Màu sắc: vàng chanh 2.3.2 nguyên liệu môi trường nuôi cấy Rỉ đường ( mía củ cải đường), dung dịch đường thu sau trình thủy phân tinh bột sắn, bột ngô có hàm lượng đường khoảng 10-20% Đường rì đường bao gồm: 25-40% sacaroza, 15-25% đường khử( glucoza fructoza), 3-5% đường không lên men giống vi khuẩn tham gia tổng hợp Lysine có khả đồng hóa glucose, fructose, maltose, pentose, rafinose Nguồn nitơ: Dùng loại muối chứa NH4+ như: NH4CL, NH4OH, (NH4)2SO4, NH4HPO4 hay khí NH3 urue làm nguồn cung cấp Nitơ Trong nuôi cấy công nghiệp thường sử dụng NH3 dạnh lỏng khí Có thể sử dụng urue, sử dụng urue cần quan tâm tới nồng độ ban đầu khả chịu đựng loại sinh vật khác Muối khoáng: Muối khoáng sử dụng nhiều dạng muối photpho Nồng độ thích hợp 0.008-0.02mg/l, sản xuất người ta phải bổ xung thêm MgSO4.7H2O với hàm lượng 0.03-0.5% Vitamin: Biotin, Nicotinic, pantothenic acid, thiamine HCL… 2.4 Cơ chế tổng hợp Lysine Dextrose … Piruvat Oxalatetat β-Aspartat-photphat Aspactat-β-sinial dehyd Lysine Hình 2.4.a Methionin Homogerium Treonin Từ sơ đồ 2.4.a ta nhận thấy, muốn vi khuẩn tạo nhiều L-Lysine tiến hóa phải theo nhánh α Ở sử dụng chủng đột biến Enzylme homoserin dehydrogenase, không tạo thành tronin methionin Kết L-Lysine tổng hợp THỰC NGHIỆM NUÔI CẤY LYSINE CÔNG TY CPHH VEDAN VIETNAM 3.1 Mục đích thí nghiệm nuôi cấy Thí nghiệm thực môt loại vi sinh vật đột biến, nhằm kiểm tra điều kiện nuôi cấy tối ưu để áp dụng vào quy mô nuôi cấy công nghiệp hiệu Lấy thí nghiệm trước làm tiền đề cho thí nghiệm sau Trong trình nuôi cấy, môi trường dinh dưỡng thay đổi điều kiện khác tuân theo yêu cấu kỹ thuật Vì so sánh môi trường nuôi cấy phát triển tối ưu cho vi sinh vật mang lại giá trị kinh tế cao Từ xây dựng biểu đồ sinh trưỡng điều kiện khác 3.2 nguyên liệu sử dụng Dextrose tỉ lệ 2.5%Sucrose Rỉ đường : mol thai, mol viet nam, Indo… bao gồm 25 – 40% sacaroza, 15-25% đường khử ( glucoza fructoza), 3-5% đường không lên men Nguồn nitơ: NH3, (NH4)2SO4 Muối khoáng: dạng muối photpho, MgSO4.7H2O Vitamin: biotin, nicotinic, pantothenic acid, thiamine HCL, Ca pantothenate Nước siêu 3.3 dụng cụ hóa chất a Dụng cụ Bồn nuôi cấy 5l Máy đo OD Nồi autoclave Nồi gia nhiệt Bếp Bình tam giác Máy đo ph Máy khuấy từ Pipet Cân điện tử Máy lắc Máy ly tâm… b Hóa chất sử dụng Na2HPO4 KH2PO4 Acid Citric MgSO4.7H2O FeSO4.7H2O CuSO4.7H2O H3PO4 ZnSO4.7H2O (NH)2SO4 HCL 1N H2SO4 30% Dịch A: CUSO4, KIO3, C4H4KNaO6, Na3PO4 Dịch B: KI, K2C2O4 Dịch C: H2SO4 97% Dịch D: Na2S2O3 Chất phá bọt: dầu phộng 3.4 Sơ đồ khối quy trình sản xuất thuyết minh quy trình 3.4.1 Sơ đồ khối quy trình sản xuất L- Lysine ( hình 3.4.a) 3.4.2 Thuyết minh quy trình 3.4.2.1 chuẩn bị bồn không Cấu tạo chung chức bồn không: • • • • • Thân bồn Ống dẫn OL: ống dẫn chất phá bọt Ống dẫn đường FD: dẫn môi trường dinh dưỡng để bổ xung qua trình nuôi cấy Vách khuấy ( vách cản dòng): có tác dụng đánh rối môi trường nuôi cấy Ống gió: gồm van chiều thiết bị lọc gió, không khí thổi vào NH3 Trong trình nuôi cấy nhằm cung cấp oxi nitơ cho trình lên men hiếu khí, đồng thời giúp ổn định PH cho môi trường nuôi cấy Khí cung cấp vào phải vi sinh vật tạp chất khác Hình 3.4.a – sơ đồ cấu tạo bồn nuôi cấy L-Lysine Máy làm mát Máy sấy gió Bình NH3 gas Van tổng Đồng hồ đo áp suất van dẫn khí NH3 vào thiết bị điều khiển máy điều khiển hệ thống phân tích CO2 van điều chỉnh lưu lượng khí 10 đồng hồ đo áp suất 11 van thải 12 Ống dẫn khí thải 13 Thiết bị ngưng tụ 14 Motor 15 Ống tiếp môi trường 16 Đường ống dẫn nước vào 17 Đường ống dẫn nước 18 Đường ống dẫn khí vào bồn lên men 19 Lọc 20 Van chiều 21 Ống lấy mẫu 22 Trục khuấy 23 Cánh khuấy 24 Điện cực PH 25 Nhiệt kế 26 Tấm chắn 27 Ống chứa nước tiêu độc 28 Ống dẫn nước vào 29 Bồn lên men 30 Thiết bị làm mát 31 Ống dẫn nước 32 Đường ống FD 33 PUMP 34 Đường ống tiếp giống • Ống tiếp giống • Ống lấy mẫu kiểm tra • Ống cắm điện cực: giúp nhận biết PH • Ông đo nhiệt độ bồn nuôi cấy • Cánh khuấy: Thực trình khuấy đảo nhằm:  Làm tăng khả tiếp xúc chất dinh dưỡng tế bào vi sinh vật, từ làm tăng khả trao đổi chất khả tiếp xúc nhiều trao đổi chất mạnh  Trong tiến hành trao đổi chất, chất sau đồng hóa dị hóa tạo lớp quanh tế bào Khi cánh khuấy hoạt động, lớp bao quanh bị phá bỏ mức độ xâm nhập cùa chất dinh dưỡng vào tế bào mạnh  Lên men điều kiện hiếu khí, cánh khuấy làm tăng khả hòa tan oxy, khí lại lâu dòng chuyển động môi trường vậy, khả hòa tan oxy từ bọt khí cao  Cánh khuấy làm tăng khả tách khí CO2, H2S, NH3… sinh từ trình trao đổi chất, làm giảm ảnh hưởng xấu laọi khí đến vi sinh vật  Cánh khuấy làm tăng nhanh trình sản xuất giống, tác động học mà tế bào dễ dàng tách sống độc lập • Ống dẫn khí CO2: giúp kiểm soát tạo thành CO2 trình nuôi cấy lượng vi sinh vật cao CO2 thải nhiều • Ống dẫn • Màn hình máy tính: hiển thị thong số kỹ thuật bồn lên men, giúp kiểm soát môi trường nuôi cấy theo yêu cầu kỹ thuật 3.4.2.2 Sát trùng bồn không • Bồn không lắp ráp với ống dẫn silicon sát trùng 1210C +/-20C, 1kg/cm2 thời gian sát trùng từ 30-60 phút Tùy theo yêu cầu thực nghiệm • Trong trình sát trùng, tất van khóa ống dẫn silicon thiết bị phải mở để nóng di chuyển toàn thiết bị tiệt trùng triệt để 3.4.2.3 Điều chế môi trường Môi trường nuôi cấy gồm chất dinh dưỡng pha chế nhân tạo nhằm đáp ứng cho nhu cầu sinh trưởng, phát triển sinh vật Gồm hai loại môi trường: Môi trường nuôi dưỡng môi trường đường FD bổ xung nuôi cấy.Cân hòa tan nguyên liệu môi trường: Môi trường nuôi dưỡng sản xuất lysine có thành phần: Dextrose 2.5%, (NH4)2SO4, NH3, KH2PO4, MgSO4.7H2O, FeSO4.7H2O, CuSO4.7H2O, ZnSO4.7H2O, Na2HPO4.12H2O, biotin, bổ sung thêm khoáng chất , trì PH = 7.0 NH3 khí Môi trường điều chế thay nguyên liệu theo yêu cầu thực nghiệm hiệu chỉnh PH từ 6.8 – 7.2 theo đặc tính loại giống Môi trường FD:  NH4)2SO4 hòa tan  Đường hòa tan  Các loại vitamin  SA (NH4)2SO4 hòa tan sát trùng 121+/-20C, 1kg/cm 2, thời gian 25 phút( tùy thuộc vào yêu cầu thực nghiệm)  Vitamin đuợc bơm trực tiếp vào môi trường nuôi dưỡng, bình SA làm nguội Ở đây, vitamin bơm vào bình SA qua thiết bị lọc  Biotin: có vai trò quan trọng trình nuôi cấy biotin có tác dụng kích thích sinh trưởng tích lũy L-Lysine Khi đủ biotin, sinh vật sinh trưỡng vừa phải, diễn biến lên men L-Lysine tạo nhiều thừa biotin, vi khuẩn sinh trưỡng mạnh mẽ, tiêu hao đường sinh L-Lysine Lượng biotin bổ sung vào để thích hợp cho tạo thành Lysine tùy thuộc vào chủng giống ứng với 1000ml là: 0.023grs 3.4.2.4 sát trùng môi trường Môi trường nuôi dưỡng sau điều chế, tiến hành hiệu chỉnh PH đạt 6,8 – 7,2 Sát trùng 121+/-20C, 1kg/cm2, 25 phút Tùy theo yêu cầu thực nghiệm Trong trình sát trùng môi trường, van khóa bồn phải đóng, không CHUẨN BỊ men, BỒN KHÔNG để môi trường trào khỏi bình lên dễ gây tạp nhiễm SÁT TRÙNG BỒN KHÔNG CHUẨN BỊ MÔI TRƯỜNG FD ĐIỀU CHẾ MÔI TRƯỜNG GIỐNG SÁT TRÙNG MÔI TRƯỜNG ĐƯỜNG FD LÊN MEN Hình 3.4.b – Quy trình nuôi cấy L-Lysine B.O 3.4.2.5 Giống tiếp giống Giống phân lập, chọn lọc nhân giống cấp ống nghiệm, nhân giống cấp bình tam giác chứa dịch nuôi cấy Lắc giống cấp bình tam giác từ 13-16h ( tùy loai giống) Tiếp giống: Tất thông số kỹ thuật bồn nuôi cấy phải đạt yêu cầu: gió, áp suất, nhiệt độ, PH… Giống tiếp từ bình tam giác vào bồn nuôi cấy bơm lưu lượng Tiến hành cấy tạp khuẩn từ giống cấp 1, cấp trước ( trước tiếp giống) dịch lên men sau tiếp giống Nếu môi trường dinh dưỡng nuôi cấy tạp khuẩn, dịch cấy vào có phát khuẩn lac Chứng tỏ giống nhiễm tạp khuẩn 3.4.2.6 Lên men 3.4.2.6.1 Điều kiện lên men Nhiệt độ trình lên men trì từ 32-340C PH : 6.8 – 7.2 Quá trình lên men thực thiết bị có cánh khuấy, thổi khí liên tục vi sinh vật nuôi cấy môi trường dịch thể, chúng phát triển theo chiều đứng cột môi trường vậy, phải thực yêu cầu khuấy đảo sục khí Sau giống tiếp vào, tiến hành nuôi cấy từ 68-72 Quá trình lên men, khuấy đảo liên tục bồn lên men có tượng xâm thực( va đập dịch lên men vào thiết bị kim loại), trình sinh khí vi sinh vật xuất nhiều bọt khí có khuynh hướng trào khỏi bồn lẹn men, dễ gây tạp nhiễm vậy, cần kiểm soát lượng bọt tìm cách phá hủy chúng Ngoài ra, bọt khí cản trở tiếp xúc tế bào với môi trường dinh dưỡng L-Lysine cấu thành từ phân tử C, H,O,N vậy, môi trừng nuôi cấy phải đáp ứng đủ yếu tố cần thiết để hình thành cấu trúc vi sinh vật  Phân tích kiểm tra: Trong trình lên men, môi trừờng nuôi cấy có thay đổi phản ứng xảy làm thay đổi môi trường vậy, phải kiểm tra theo định kì thông số như: T/S, OD, MV, PH… từ 1- giờ/ lần PH: loại vi sinh vật thích nghi với môi trường nuôi cấy trình lên men, vi sinh vật tạo sản phẩm trao đổi chất có tính acid hay kiềm, khiến PH môi trường không thích hợp với môi trường sống Vì vậy, cần phải thường xuyên theo dõi điều chỉnh PH suốt trình nuôi cấy Vi khuẩn Corynebacterium glutamicum sinh trưởng tối ưu PH từ 6.8 – 7.2 Vì trình nuôi cấy, môi trường có ảnh hưởng nhiều tới suất Lysine Thực nghiệm trình bày theo biểu đồ sau: Lượng lysine(g/l) 6,5 7,2 8,0 pH Hình 3.4.c - ảnh hưởng pH môi trường lên men đến suất lysine Lưu ý: việc kiểm tra PH phải tiến hành sau lấy mẫu, kéo dài thời gian kết kiểm tra không xác Nhiệt độ: nhiệt độ yếu tố quan trọng ảnh hưởng tới phát triển vi sinh vật hiệu trình lên men Mỗi loại vi sinh vật thích ứng với nhiệt độ khác ( nhiệt độ từ 32 – 340C) Trong trình lên men có tỏa nhiệt mạnh, nên nhiệt độ thiết bị lên men thường có xu hướng gia tăng vượt ngưỡng nhiệt độ thích hợp hoạt động sống vi sinh vật Vì vậy, phải thường xuyên theo dõi điều chỉnh nhiệt độ thích hợp cho trình lên men ( 32 – 340C) Để đạt nhiệt độ thích hợp cho trình lên men Bồn lên men trang bị hệ thống làm nóng làm nguội nước chảy quanh đáy bồn dạng ống ruột gà làm nguội Qua khảo sát thực tế mức nhiệt độ, kết xây dựng theo biểu đồ sau: Lượng Lysine (g/l) 20 25 30 35 40 t(oC) Hình 3.4.d - ảnh hưởng nhiệt độ môi trường lên men đến suất Lysine Từ nghiên cứu lý thuyết đến thực nghiệm ta thấy, nhiệt độ môi trường từ 30 – 400C lượng lysine sinh cao hơn, đặc biệt nhiệt độ từ 32 – 340C Vì sản xuất thí nghiệm chọn nhiệt độ ( 32 – 340C) Phân tích T/S: Mục đích: kiểm tra hàm lượng đường điều chỉnh phù hợp Hóa chất sử dụng: dịch A, dịch B, dịch C,dịch D Tiến hành: lấy mẫu từ bồn nuôi cấy Hút 10ml dịch mẫu cần phân tích Hút 1ml 2ml H2SO4 30% ( tùy thuộc vào độ tuổi mẫu): Mẫu thử đạt 20 – 40 tuổi dùng 1ml H2SO4 30% Mẫu thử đạt 40 – 72 tuổi dùng 2ml H2SO4 30% Cho vào ống nghiệm định mức PH=1 tới 30ml Tiến hành gia nhiệt 30 phut để thủy phân hoàn toàn hàm lượng đường dịch mẫu sau gia nhiệt, tiến hành làm nguội điều chỉnh PH mẫu đạt từ 6,5 – 7,3 Định mức tới 100 ml nước siêu Cho vào bình tam giác (250 ml ) 20 ml dịch A Hút 2ml 5ml dịch mẫu ( T/S lần kiểm tra trước từ 3.00 trở lên hút 2ml, 3.00 hút 5ml), cho vào dịch A, đun sôi bếp phút làm nguội Thêm vào 10ml dịch B, 10ml dịch C Tiến hành chuẩn độ dịch D tới đổi màu, thêm giọt thị vào tiếp tục chuẩn tới đổi màu hoàn toàn Dựa vào thể tích dịch D, xác định T/S theo công thức: %TS = ( Vo – V1)xFx1.449 x 0.2 Hoặc %TS = ( Vo – V1)xFx1.449 x 0.5 Vo: số ml chuẩn mẫu trắng V1: số ml chuẩn mẫu thử F: hệ số dung dịch D Đo MV: xác định vi sinh vật sinh lhối vi sinh vật dạng thô Tiến hành: theo MV lần kiểm tra trước mẫu kiểm tra mà tiến hành đo MV Nếu MV lần kiểm tra trước cao dịch đặc, khó nhận biết tiến hành pha loãng mẫu hút 10 ml dịch mẫu , ly tâm 10 phút ( 3000 vòng/ phút) Đo OD: xác định độ đục mẫu, từ xác định mật độ vi sinh vật có dịch mẫu Hút 1ml dịch mẫu, định mức tới 100ml đo mẫu máy đo quang bước sóng 660nm 3.4.2.7 B.O Quá trình nuôi cấy kết thúc khoảng thời gian 68 – 72 Thời gian kết thúc trình nuôi cấy dựa vào : Dựa vào đường cong sinh trưỡng nuôi cấy vi sinh vật thiết lập thí nghiệm Dựa vào kết phân tích TS, MV, OD lần phân tích cuối để xác định thời điểm B.O Thu nhận sản phẩm, tiến hành lấy mẫu phân tích kiểm tra PH, TS, OD, MV Tùy thuộc vào nhu cầu nuôi cấy mà sản phẩm sấy khô, tinh chế , phục vụ nhu cầu sản xuất khác khử trùng xả bỏ Lượng tế bào Pha cân Pha lũy thừa Pha tiềm ẩn pha suy vong 68h 72h thời gian Hình 3.4.e – đường cong sinh trưỡng nuôi cấy vi sinh Thời điểm thu nhận sản phẩm giai đoạn cuối pha lũy thừa đầu pha cân Tuy nhiên, nên B.O thời điểm cuối pha lũy thừa pha cân ( tỉ lệ vi sinh vật sinh với tỉ lệ sinh vật chết), số lượng vi sinh vật chết gây ảnh hưởng tới chất lượng sản phẩm SẢN PHẨM Sản phẩm Lysine ứng dụng để bổ sung cho thức ăn gia súc, phần ăn phổ biến thị trường bổ sung vào thực phẩm chức sữa pedia plus, siro unikids … ra, sản phẩm Lysine bổ sung vào thể dạng thuốc Các sản phẩm ứng dụng sử dụng Lysine : Hình 4.a – Sản phẩm ứng dụng Sản Lysine phẩm tiếp công ty VeDan VietNam L-Lysine dạng thô Sau thu trình lên men trực nhận sản phẩm L-Lysine thô, tùy vào nhu cầu thực tế mà L-Lysine sấy khô, chuyển qua tinh chế phân xưởng tinh chế Lysine Tuy nhiên, điều kiện nước ta, vấn đề xử lý chất thải sản phẩm phụ sau tinh chế gặp khó khăn nên VeDan dừng nhà máy tinh chế Lysine, sản phẩm L-Lysine thô sản suất chủ yếu ứng dụng sản xuất thức ăn chăn nuôi gia súc KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Tiến hành thí nghiệm điều kiện môi trường bổ sung dinh dưỡng khác nhau, lấy thí nghiệm trước làm tiền đề cho thí nghiệm sau Từ xây dựng môi trường nuôi cấy tối ưu kinh tế Chủng vi sinh vật sử dụng nuôi cấy chủng Corynebacterium glutamicum đột biến Có khả tổng hợp lysine với mức độ cao Hàm lượng đường môi trường dinh dưỡng môi trường bổ sung dinh dưỡng ảnh hưởng nhiều tới suất nuôi cấy Khảo sát môi trường nuôi cấy thực nghiệm tiêu pH, nhiệt độ, áp suất, nồng độ ( tùy theo yêu cầu thực nghiệm môi trường nuôi cấy) Nhận thấy môi trường lên men tối ưu : pH 6,8 – 7,2 ; pH trì trình nuôi cấy 7,0 ; nhiệt độ 32 – 340C Môi trường FD bổ sung tốt sản phẩm đạt chất lượng cao đường Dextrose so với loại rĩ đường khác Tất yếu tố ảnh hưởng tới suất trình nuôi cấy Trong suốt trình lên men, phải đảm bảo môi trường không nhiễm tạp khuẩn Thường xuyên theo dõi kiểm tra theo định kì Khi môi trường nuôi cấy nhiễm tạp khuẩn vi sinh vật không sinh trưỡng phải tiến hành B.O 5.2 Kiến nghị Do thời gian thực tập công ty có hạn, không cho phép tìm hiểu sâu số liệu thực tế công ty Vì số liệu nêu mang tính khái quát chung yêu cầu quy trình lên men sản xuất L - Lysine Tuy nhiên qua thực nghiệm công ty, đề nghị số vấn đề quy trình nuôi cấy : Nhu cầu thị trường ngày cao, sản phẩm Lysine phải đa dạng hóa mục đích sử dụng chất lượng sản phẩm Trong trình nuôi cấy quy mô phòng thí nghiệm, việc nhiễm tạp khuẩn bồn nuôi cấy lên men thường xảy Trong trường hợp đó, bồn nuôi cấy sát trùng xả bỏ Tuy nhiên, nuôi cấy quy mô phòng thí nghiệm, trường hợp nhiễm tạp khuẩn quy mô nuôi cấy công nghiệp thiệt hại lớn : Nên tập trung phân tích nguyên nhân dẫn tới việc nhiễm tạp khuẩn Do thao tác người, thiết bị, nguyên vật liệu hay yếu tố môi trường tác động.v.v từ tìm cách khắc phục Phân tích giống tạp khuẩn bị nhiễm, có môi trường hay từ bên đưa vào Phân tích môi trường dinh dưỡng loại tạp khuẩn tìm cách ức chế sinh trưỡng phát triển nó… Tại hai phòng cấy vi sinh xưởng thực nghiệm, nên thiết kế hệ thống quạt gió cửa vào Khuyến khích nhân viên tham gia cải tiến khu vực làm việc mình, bắt đầu cải tiến từ chi tiết nhỏ : xếp dụng cụ, vị trí đặt dụng cụ thí nghiệm … nhằm giúp nhân viên thao tác thuận tiện dễ dàng Trong suốt thời gian làm việc công ty, tất nhân viên thao tác thục công việc Tuy nhiên điều dẫn tới việc nhân viên thao tác công việc không theo trình tự Chính điều mà dẫn tới chất lượng sản phẩm Vì vậy, cần có quy định bắt buộc thao tác công việc văn [...]... sản phẩm SẢN PHẨM Sản phẩm Lysine được ứng dụng để bổ sung cho thức ăn gia súc, khẩu phần ăn và phổ biến nhất trên thị trường hiện nay là bổ sung vào các thực phẩm chức năng như sữa pedia plus, siro unikids … ngoài ra, sản phẩm Lysine còn được bổ sung vào cơ thể dưới dạng thuốc Các sản phẩm ứng dụng sử dụng Lysine : Hình 4.a – Sản phẩm ứng dụng Sản Lysine phẩm tiếp tại công ty VeDan VietNam là L -Lysine. .. cho phép tìm hiểu sâu về các số liệu thực tế tại công ty Vì vậy các số liệu nêu trên đều mang tính khái quát chung về yêu cầu của một quy trình lên men sản xuất L - Lysine Tuy nhiên qua thực nghiệm tại công ty, tôi đề nghị một số vấn đề trong quy trình nuôi cấy : Nhu cầu trên thị trường ngày càng cao, vì vậy sản phẩm Lysine phải được đa dạng hóa về mục đích sử dụng và chất lượng sản phẩm Trong quá... men trực nhận sản phẩm L -Lysine thô, có thể tùy vào nhu cầu thực tế mà L -Lysine được sấy khô, hoặc chuyển qua tinh chế tại phân xưởng tinh chế Lysine Tuy nhiên, do điều kiện hiện tại ở nước ta, nhất là vấn đề xử lý chất thải và sản phẩm phụ sau tinh chế gặp khó khăn nên hiện tại VeDan đã dừng nhà máy tinh chế Lysine, các sản phẩm L -Lysine thô sản suất hiện tại chủ yếu được ứng dụng trong sản xuất thức... nghiệm về các chỉ tiêu pH, nhiệt độ, áp suất, nồng độ ( tùy theo yêu cầu thực nghiệm môi trường nuôi cấy) Nhận thấy môi trường lên men tối ưu nhất : pH 6,8 – 7,2 ; pH duy trì trong quá trình nuôi cấy là 7,0 ; nhiệt độ 32 – 340C Môi trường FD bổ sung tốt và sản phẩm đạt chất lượng cao là đường Dextrose so với các loại rĩ đường khác Tất cả các yếu tố đều ảnh hưởng tới năng suất của quá trình nuôi cấy Trong. .. nhân viên thao tác thuận tiện và dễ dàng nhất Trong suốt thời gian làm việc tại công ty, tất cả nhân viên hầu như thao tác rất thuần thục trong công việc Tuy nhiên điều đó dẫn tới việc các nhân viên sẽ thao tác trong công việc không theo đúng trình tự Chính vì điều này mà dẫn tới chất lượng của sản phẩm Vì vậy, cần có một quy định bắt buộc về thao tác trong công việc bằng văn bản ... nuôi gia súc KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận Tiến hành thí nghiệm trong điều kiện môi trường bổ sung dinh dưỡng khác nhau, lấy thí nghiệm trước làm tiền đề cho thí nghiệm sau Từ đó xây dựng môi trường nuôi cấy tối ưu nhất và kinh tế nhất Chủng vi sinh vật sử dụng trong nuôi cấy là chủng Corynebacterium glutamicum đột biến Có khả năng tổng hợp lysine với mức độ cao nhất Hàm lượng đường trong môi trường... thường xảy ra Trong trường hợp đó, bồn nuôi cấy sẽ được sát trùng và xả bỏ Tuy nhiên, đó là nuôi cấy ở quy mô phòng thí nghiệm, nếu trường hợp nhiễm tạp khuẩn ở quy mô nuôi cấy công nghiệp thì thiệt hại rất lớn vì vậy : Nên tập trung phân tích những nguyên nhân dẫn tới việc nhiễm tạp khuẩn Do thao tác của con người, thiết bị, nguyên vật liệu hay các yếu tố về môi trường tác động.v.v từ đó tìm cách khắc... tâm trong 10 phút ( 3000 vòng/ phút) Đo OD: xác định độ đục của mẫu, từ đó xác định mật độ vi sinh vật có trong dịch mẫu Hút 1ml dịch mẫu, định mức tới 100ml và đo mẫu bằng máy đo quang ở bước sóng 660nm 3.4.2.7 B.O Quá trình nuôi cấy kết thúc trong khoảng thời gian 68 – 72 giờ Thời gian kết thúc quá trình nuôi cấy dựa vào : Dựa vào đường cong sinh trưỡng nuôi cấy vi sinh vật đã được thiết lập trong các. ..Lượng Lysine (g/l) 20 25 30 35 40 t(oC) Hình 3.4.d - ảnh hưởng nhiệt độ môi trường lên men đến năng suất Lysine Từ nghiên cứu lý thuyết đến thực nghiệm ta thấy, nhiệt độ môi trường từ 30 – 400C lượng lysine sinh ra cao hơn, đặc biệt ở nhiệt độ từ 32 – 340C Vì vậy trong sản xuất và thí nghiệm chúng ta chọn nhiệt độ này ( 32 – 340C) Phân... tác của con người, thiết bị, nguyên vật liệu hay các yếu tố về môi trường tác động.v.v từ đó tìm cách khắc phục Phân tích giống tạp khuẩn bị nhiễm, có trong môi trường hay từ bên ngoài đưa vào Phân tích môi trường dinh dưỡng của loại tạp khuẩn đó và tìm cách ức chế sự sinh trưỡng và phát triển của nó… Tại hai phòng cấy vi sinh của xưởng thực nghiệm, nên thiết kế hệ thống quạt gió tại cửa vào Khuyến khích ... dạng thuốc Các sản phẩm ứng dụng sử dụng Lysine : Hình 4.a – Sản phẩm ứng dụng Sản Lysine phẩm tiếp công ty VeDan VietNam L -Lysine dạng thô Sau thu trình lên men trực nhận sản phẩm L -Lysine thô,... lượng sản phẩm SẢN PHẨM Sản phẩm Lysine ứng dụng để bổ sung cho thức ăn gia súc, phần ăn phổ biến thị trường bổ sung vào thực phẩm chức sữa pedia plus, siro unikids … ra, sản phẩm Lysine bổ sung... ngày cao, sản phẩm Lysine phải đa dạng hóa mục đích sử dụng chất lượng sản phẩm Trong trình nuôi cấy quy mô phòng thí nghiệm, việc nhiễm tạp khuẩn bồn nuôi cấy lên men thường xảy Trong trường