Các bước sản xuất enzyme Protease tái tổ hợp từ chủng Bacillus sp Việt Nam biết trên genbank có một số trình tự mã hóa cho protein của một số loài trong chi Bacillus.

18 1.6K 13
Các bước sản xuất enzyme Protease tái tổ hợp từ chủng Bacillus sp Việt Nam biết trên genbank có một số trình tự mã hóa cho protein của một số loài trong chi Bacillus.

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Ngày nay không ai có thể phủ nhận được tầm quan trọng của công nghệ sinh học đối với nền kinh tế quốc dân nước ta nói riêng và thế giới nói chung.

Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay không ai thể phủ nhận được tầm quan trọng của công nghệ sinh học đối với nền kinh tế quốc dân nước ta nói riêng và thế giới nói chung. Thế kỷ 21 được coi là thế kỷ của ngành công nghệ sinh học, được coi là thời điểm lịch sử con tầu vũ trụ mang tên “công nghệ sinh học” đã rời khỏi bệ phóng để bay đến tầm cao mới. Đối với Việt Nam, theo xếp hạng của Biotechnologi Atlas, công nghệ sinh học (CNSH) Việt Nam đứng ở nhóm giữa trong khu vực ASEAN nhưng vẫn lạc hậu so với các nước Singapore, Thái Lan trong việc ứng dụng nghiên cứu vào sản xuất, tạo ra các sản phẩm chủ lực… Rõ ràng, Việt Nam còn rất nhiều việc phải làm để đưa các kết quả nghiên cứu “vượt” ra ngoài phòng thí nghiệm. Việt Nam là nước nhiệt đới khí hậu nóng ẩm, rất thuận lợi cho sự phát triển của sinh vật và đây được coi là một kho tàng vô giá về nguồn gen trong tự nhiên và nguồn nguyên liệu để phát triển ngành công nghệ sinh học nước nhà. Công nghệ sinh học Việt Nam đang được coi là một hướng phát triển mũi nhọn của đất nước. Trong đó sự chú trọng đầu cho lĩnh vực công nghệ enzyme. Trong đó công nghệ enzyme tái tổ hợpmột hướng đi mới. rất nhiều loại enzyme tái tổ hợp đã được nghiên cứu để đưa vào ứng trong thực tiễn. Proteasemột trong những enzyme được ứng dụng rất nhiều trong mọi lĩnh vực, trong đó, đặc biệt là công nghiệp thực phẩm Protease đã những đóng góp rất to lớn trong việc phục vụ, nâng cao đời sống của con người. Vì vậy nhu cầu cải tiến tạo ra enzyme Protease tái tổ hợp mang những đặc tính ưu việt hơn rất được quan tâm. Xuất phát từ những thực tế trên, chúng tôi tiến hành nghiên cứu tìm hiểu “ Các bước sản xuất enzyme Protease tái tổ hợp từ chủng Bacillus sp Việt Nam biết trên genbank một số trình tự hóa cho protein của một số loài trong chi Bacillus. ”. SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 1 Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. Chương I. Tổng quan về enzyme Protease và vi khuẩn Bacillus. 1.1. Tổng quan về enzyme Protease [2] 1.1.1 Giới thiệu chung - Proteasecác enzyme xúc tác sự thủy phân liên kết peptit (CO-NH) trong phân tử proteincác chất tương tự. Nhiều Protease khả năng liên kết este và vận chuyển acid amin. Theo phân loại quốc tế các enzyme thuộc nhóm này chia thành 4 phân nhóm phụ: - Aminopeptidase: xúc tác sự thủy phân liên kết peptit ở đầu nitơ của mạch polypeptit - Cacboxypeptidase: xúc tác sự thủy phân liên kết peptit ở đầu cacbon của mạch polypeptit. Cả hai phân nhóm enzyme trên đều là các exo – peptidase. - Dipeptihydrolase: Xúc tác sự thủy phân các liên kết dipepit. - Proteinase: Xúc tác sự thủy phân các liên kết peptid nội mạch. Protease cần thiết cho các sinh vật sống, rất đa dạng về chức năng từ mức độ tế bào, quan đến thể nên được phân bố rất rộng rãi trên nhiều đối tượng từ vi sinh vật (vi khuẩn, nấm và virus) đến thực vật (đu đủ, dứa .) và động vật (gan, dạ dày bê .) [12]. Trong thể, các Protease đảm nhiệm nhiều chức nǎng sinh lý như: hoạt hóa zymogen, đông máu và phân hủy sợi fibrin của cục máu đông, giải phóng hormon và các peptid hoạt tính sinh học từ SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 2 Hình 1.1. Phản ứng thủy phân liên kết peptide Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. các tiền chất, vận chuyển protein qua màng .[8]. Ngoài ra, các Protease thể hoạt động như các yếu tố phát triển của cả tế bào ác tính và tế bào bình thường đó là tǎng sự phân chia tế bào, sinh tổng hợp ADN .[2]. So với Protease động vật và thực vật, Protease vi sinh vật những đặc điểm khác biệt. Trước hết hệ Protease vi sinh vật là một hệ thống rất phức tạp bao gồm nhiều enzyme rất giống nhau về cấu trúc, khối lượng và hình dạng phân tử nên rất khó tách ra dưới dạng tinh thể đồng nhất. Cũng do là phức hệ gồm nhiều enzyme khác nhau nên Protease vi sinh vật thường tính đặc hiệu rộng rãi cho sản phẩm thủy phân triệt để và đa dạng. 1.1.2 Đặc điểm và tính chất của Protease vi sinh vật [5] Các công trình nghiên cứu Protease vi sinh vật ngày càng nhiều. Các kết quả nghiên cứu cho thấy ngay cả các Protease của cùng một loài vi sinh vật cũng thể khác nhau về nhiều tính chất. Căn cứ vào chất phản ứng, pH hoạt động thích hợp,… các nhà khoa học đã phân loại các Protease vi sinh vật thành bốn nhóm như sau: P-xerin; P-thiol; P-kim loại; P-acid SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 3 Hình 1.3. Cấu trúc tinh thể của Tripsin (1 Protease xerin tiêu biểu) Hình 1.2. Cấu trúc không gian enzyme Protease Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. Một số tác giả khác chia Protease ra ba nhóm, dựa vào hoạt động pH của chúng bao gồm: Protease-acid; Protease trung tính; Protease kiềm. Trong bốn Protease kể trên, các Protease-xerin và Protease-thiol khả năng phân giải liên kết este và liên kết amide của các dẫn xuất acid của aa. Ngược lại các Protease kim loại, Protease acid thường không hoạt tính esterase của các dẫn suất của aa. Nhiều Protease ngoại bào của vi sinh vật đã được nghiên cứu tương đối kỹ về cấu tạo phân tử, một số tính chất hóa lý và chế tác dụng. Kết quả nghiên cứu cho thấy trọng lượng phân tử của các enzyme này tương đối bé, nhất là các P-xerin. Các P-xerin trọng lượng phân tử thấp vào khoảng 20.000 – 27.000 Dalton. Tuy nhiên, cũng một số P-xerin trọng lượng phân tử lớn hơn như các enzyme của Pelicillium cyoneo-fulvum (44.000), Asp, oryzae OUT 5038 (52.000). Trọng lượng phân tử của các Protease kim loại lớn hơn so với P-xerin (vào khoảng 33.800 - 48.400). Protease tiol và nhiều Protease-acid cũng trọng lượng phân tử vào khoảng 30.000-40.000 Dalton. thể tóm tắt những đặc tính của các nhóm Proteinase này ở bảng 1.1 Bảng 1.1 Một số tính chất của Protease (P) vi sinh vật Nhóm Nguồn E Chất kìm hãm Đặc điểm TTHĐ pH tối thích P Xerin Bac.subtilis Bac.pumilus Str.griseus Str.fradiae Art hrobacter B22 Asp.oryzae Asp.flavus Asp.sojae E.coli DFP + Xerin Kiềm P-tiol Streplococcus Indoaxeta-mit -SH 7,5 SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 4 Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. Clostridium histoly-ticum Ps.cloromer- curbenzoat 7,0 P kim loại Bac.subtilus Bac.subtilus NRRL B3411 Bac. Subtilisamy Losaccarilicis Bac. Megaterium Psuedomonasaeruginoa Atreptomeces naraensis Asp. Oryzae Acremonium kiliense Clostridiumhisttolytium EDTA ++ 1,10octa- fenantrolin Kim loại hóa trị hai Trung tính P Acid Asp.niger Asp.Awamori Sailoi,penicillium Janthinellum Rhizopus chinensis Mucor pucillus Endothia parasilica Dizoaxetil Dlnorlox- inmetil este COOH Acid 1.1.3. Cấu trúc trung tâm hoạt động (TTHĐ) của Protease [5] Trong TTHĐ của Protease vi sinh vật ngoài gốc acid amin đặc trưng cho từng nhóm còn một số gốc acid amin khác. Các kết quả nghiên cứu chung về TTHĐ của một số Protease vi sinh vật cho phép rút ra một số nhận xét chung như sau: - TTHĐ của Protease đủ lớn và bao gồm một số gốc aa và trong một số trường hợp còn cả cofactơ kim loại. + Các Protease kim loại TTHĐ lớn hơn vào khoảng 21 0 A, thể phân biệt thành sáu phần dưới TTHĐ (subsite), mỗi phần dưới TTHĐ tương ứng với mỗi gốc aa trong phân tử chất. SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 5 Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. + Đối với các Protease acid, theo nhiều nghiên cứu cấu trúc TTHĐ của các tinh thể Protease acid của Phizopus chinenis và Endothia parasilica đã cho thấy phân tử các Protease này gồm hai hạt, giữa chúng khe hở vào khoảng 20 0 A. Khe hở này là phần xúc tác của các E, các gốc Asp-35 và Asp- 215 xếp đối diện nhau trong khe ấy. - Đối với các Protease không chứa cysteine, TTHĐ của chúng tính mềm dẻo hơn vì cấu trúc không gian của chúng không được giữ vững bởi các cầu disulphide. Mặc dù TTHĐ của các Protease vi sinh vật khác nhau nhưng các enzyme này đều xúc tác cho phản ứng thủy phân liên kết peptide theo cùng một chế chung như sau: Trong đó: E: enzyme, S: chất, enzyme - S: Phức chất enzym- chất, P 1 : Là sản phẩm đầu tiên của phản ứng, P 2 : Là sản phẩm thứ hai của phản ứng. 1.2. Nguồn thu nhận Protease [8] - Enzymeprotein được sinh vật tổng hợp trong tế bào và là chất tham gia xúc tác cho mọi phản ứng sinh học. Chính vì thế, mọi sinh vật đều được xem là nguồn thu nhận để sản xuất enzyme. Nhưng vẫn chủ yếu là ba nguồn chính: Động vật, thực vật và vi sinh vật. - Protease phân bố ở thực vật, động vật, vi sinh vật. Tuy nhiên nguồn enzyme ở vi sinh vật phong phú nhất, ở hầu hết các vi sinh vật như vi khuẩn, nấm mốc và xạ khuẩn… thể nói vi sinh vật là nguồn nguyên liệu thích hợp nhất để sản xuất enzyme ở quy mô lớn dùng trong công nghệ và đời sống [8]. SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 6 E + S enzyme – S enzyme – S + P 1 enzyme + P 2 Hình 1.4 chế xúc tác TTHĐ Enxyme Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. - Enzyme Protease từ nguồn động vật và thực vật được loài người khai thác và ứng dụng hàng ngàn năm để sản xuất và phục vụ trong cuộc sống. Nhưng hiện nay lượng enzyme thu nhận từ thực vật và động vật được thay thế dần bằng enzyme vi sinh vật. enzyme thu nhận từ các nguồn này thường rất khó và hiệu quả kinh tế không cao. Nguồn enzyme từ vi sinh vật dần dần thay thế enzyme từ động vật và thực vật do hàng loạt những ưu điểm về sinh lý vi sinh vật và về kỹ thuật sản xuất được liệt kê như sau: + Vi sinh vật khả năng chuyển hóa một khối lượng chất lớn hơn khối lượng thể chúng hàng ngàn lần sau một ngày đêm. + Enzyme thu nhận từ vi sinh vật hoạt tính cao. + Tốc độ sinh sản của vi sinh vật mạnh, trong thời gian ngắn thể thu được lượng sinh khối vi sinh vật rất lớn, giúp trong một thời gian ngắn thu được một lượng enzyme nhiều hoặc lượng các sản phẩm trao đổi chất cao. + Một đặc điểm riêng của vi sinh vật đó là thể nhỏ bé nên việc vận hành, kiểm soát thiết bị lên men trong quá trình sản xuất đơn giản hơn rất nhiều. + Vi sinh vật là giới sinh vật thích hợp cho sản xuất theo quy mô công nghiệp: Trong sản xuất, quá trình sinh trưởng, phát triển và sinh tổng hợp enzyme của vi sinh vật hoàn toàn không phụ thuộc vào khí hậu bên ngoài. Trong khi đó, sản xuất enzyme từ nguồn thực vật và động vật không thể đưa vào quy mô công nghiệp được. + Nguồn nguyên liệu dùng sản xuất enzyme theo quy mô công nghiệp rẽ tiền và dễ kiếm, không chỉ ý nghĩa về mặt kinh tế còn ý nghĩa rất lớn về mặt môi trường sống. vi sinh vật không đòi hỏi quá khắc khe những yếu tố dinh dưỡng của môi trường, nhất là những vi sinh vật tổng hợp enzyne. Chính vì thế enzyme được sản xuất từ vi sinh vật thường rẻ tiền hơn enzyme từ các nguồn khác. SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 7 Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. + vi sinh vật thể sinh tổng hợp cùng một lúc nhiều loại enzyme khác nhau [5] 2.1 Tình hình nghiên cứu enzyme trong nước Hầu như mọi phản ứng hoá học trong thể sống đều cần phải vai trò xúc tác của enzyme - chất xúc tác sinh học. Chính vì vậy, các nghiên cứu về enzyme đã thu hút sự quan tâm của các cán bộ hoá sinh học, sinh học thực nghiệm và nhiều nhà nghiên cứu ở các lĩnh vực liên quan khác. Các nghiên cứu nhằm theo hướng tách, tinh sạch enzyme, tạo các chế phẩm độ sạch khác nhau, nghiên cứu cấu trúc, mối liên quan giữa cấu trúc và hoạt tính sinh học của enayme, khả năng ứng dụng enzyme trong thực tế [8]. Và gần đây nhất là những sáng tạo mới mẽ, mang tính ứng dụng lớn được sử dụng rộng rãi như: + Trần Quốc Hiền, Lê Văn Việt Mẫn, Trung tâm Công nghệ sau thu hoạch, Viện Nghiên cứu nuôi trồng thủy sản II, Trường Đại học Bách Khoa, Đại học Quốc gia Hồ Chí Minh đã “Nghiên cứu thu nhận chế phẩm Protease từ ruột cá Basa (pangasius bocourti)” thực hiện năm 2006. Nghiên cứu này khảo sát quá trình trích ly và tinh sạch enzyme Protease từ ruột cá Basa (Pangasius bocourti). Dịch chiết protease kiềm thu được từ ruột tổng hoạt tính cao nhất là 15,79UI/gCKNT (chất khô nội tạng) trong điều kiện chiết: tỷ lệ mẫu/dung môi 1/1(w/w); pH 9,5; nhiệt độ 35oC; thời gian chiết 10 phút. [14]. + Tối ưu một số điều kiện nuôi cấy chủng vi sinh vật biển Acinetobacter sp. QN6 sinh tổng hợp Prơtease được thực hiện của Quyền Đình Thi, Trần Thị Quỳnh Anh, Nguyễn Thị Thảo (2007), viện CNSH đã chứng minh các điều kiện thuận lợi nhằm nuôi cấy với hiệu suất cao nhất đối với chủng vi sinh vật biển Acinetobacter sp. QN6 sinh tổng hợp Prơtease [15]. + Phan Thị Bích Trâm, Dương Thị Hương Giang, Hà Thanh Toàn, Phạm Thị Ánh Hồng, Đại học Cần Thơ, Trường ĐHKH Tự nhiên, ĐH Quốc Gia TP Hồ Chí Minh đã tiến hành “Tinh sạch và khảo sát đặc điểm của các SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 8 Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. Serine Protease từ Trùn Quế” ( 2007). Bước đầu khảo sát hệ enzyme Protease từ trùn quế (Perionyx excavatus) cho thấy phần lớn các protease trong dịch chiết enzyme thô thể tinh sạch bộ bằng tủa phân đoạn với ammonium sulfat nồng độ trong khoảng 30-80%. Nhiệt độ và pH tối ưu cho enzyme thô hoạt động trên chất casein là 55 0 C và pH trong khoảng kiềm 10 -12. [16], [7]. + “Nghiên cứu ứng dụng Protease bacillus subtilis trong sản xuất bột đạm thủy phân từ cá Mối”, Vũ Ngọc Bội, trường Đại học thủy sản Nha Trang. Qua nghiên cứu cho thấy protease B. subtilis thể thủy phân mạnh mẽ thịt cá mối và hoàn toàn thể sử dụng enzyme này trong sản xuất bột đạm thủy phân. Khi bổ sung protease B. subtilis với nồng độ enzyme 0,3% vào hỗn hợp thịt cá mối và thủy phân ở 50 0 C. + Nghiên cứu ứng dụng Protease trong sản xuất Bia, thực hiện trong các năm 1993-1994, Thực hiện: TS.Trương Thị Hòacác công tác viên Viện Công nghiệp thực phẩm. Protease của Aps. oryzae được dùng để thủy phân protein trong hạt ngũ cốc, tạo điều kiện xử lý bia tốt hơn. [1] 2.2. Vấn đề sản xuất enzyme Protease trên thế giới Trong các Protease, các enzyme của hệ tiêu hóa được nghiên cứu sớm hơn cả. Năm 1857, Corvisart tách được tripxin từ dịch tụy, đó là Protease đầu tiên nhận được ở dạng chế phẩm. Năm 1861 Brucke cũng đã tách được Pepxin từ dịch dạ dày Chó ở dạng tương đối tinh khiết. Ngoài các enzyme của hệ tiêu hóa, người ta cũng đã quan sát đầu tiên về các Protease trong máu [10]. Các Protease thực vật được phát hiện muộn hơn. Năm 1879 Wurtz được xem là người đầu tiên tách được Protease thực vật. Đến nay người ta đã nghiên cứu được khá đầy đủ về cấu trúc phân tử của nhiều Protease như: papain, tripxin, kimotripxin, subtilizin… [10]. Các Protease của vi sinh vật mới được chú ý nghiên cứu nhiều từ năm 1950, mặc dù từ năm 1918- 1919 Waksman đã phát hiện được khả năng phân SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 9 Công nghệ enzyme. GV: ThS. Trịnh Đình Khá. giải Protein của Xạ khuẩn. Trong hơn 10 năm nay số công trình nghiên cứu Protease vi sinh vật tăng lên đáng kể nhiều hơn các Protease của động và thực vật. Những kết quả đạt được trong lĩnh vực này đã góp phần mở rộng quy mô sản xuất chees pha enzyme và ứng dụng enzyme trong thực tế [10]. Trong CNTP, người ta sử dụng Protease để sản xuất phomat từ sửa (Mohanty et al.,1999), xản xuất bánh từ bột mì (Hozova et al., 2003) hay chế biến các sản phẩm giàu protein từ đậu tương (Ghazi et al., 2003; Ma et al., 2004); trong công nghiệp thuộc da, Protease được dùng để thủy phân một số thành phần phi collagen của da và loại bỏ các protein phi fibrin như albumin, globulin (Gupta, Rammani, 2006); trong chất tẩy rửa, Proteasemột trong những thành phần quan trọng của tất cả các loại chất tẩy rửa, từ các chất tẩy rửa dùng trong gia đình đến những chất làm sạch kính hoặc răng giả, kem đánh răng (Rao et al., 1998). Trong những năm gần đây, giá trị thương mại của các enzyme công nghiệp trên toàn thế giới đạt khoảng 1 tỷ USD, trong đó chủ yếu là các enzyme thủy phân (75%), và Protease là một trong ba nhóm enzyme lớn nhất sử dụng trong công nghiệp (60%) (Rao et al., 1998) [13]. Từ năm 1950 trở lại đây trên thế giới hàng loạt Protease động vật, thực vật và vi sinh vật được tách chiết nghiên cứu. Thời gian gần đây các nhà khoa học trên thế giới tập trung nghiên cứu về Protease vi sinh vật và đã đạt nhiều thành tựu to lớn về lĩnh vực này (Protease từ vi sinh vật chiếm tới 40% tổng doanh thu của enzyme toàn thế giới (Godfrey west, 1996) [13]). Hiện nay, số lượng các enzyme được sản xuất hàng năm trên thế giới, ở các nước phát triển nhất là châu Âu, Mỹ và Nhật Bản vào khoảng 300.000 tấn với doanh thu từ sản xuất enzyme ước tính vào khoảng 500 triệu USD. Trong đó khoảng 600 tấn Protease tinh khiết được sản xuất từ vi sinh vật bao gồm khoảng 500 tấn từ vi khuẩn và 100 tấn từ nấm mốc. Những nước công nghệ sản xuất và ứng dụng Protease tiên tiến trên thế giới là: Đan Mạch, Nhật Bản, Mỹ, Anh, Pháp, Hà Lan, Trung Quốc, Đức, Áo. Các nước này đã đầu thích đáng cho công tác nghiên cứu, sản xuất và ứng dụng Protease từ VSV. SV: Vũ Xuân Tạo K5 Công nghệ sinh học. 10 [...]... vật, từ cây thuốc [11] Chương II Quá trình sản xuất enzyme Protease tái tổ hợp từ chủng Bacillus sp Việt Nam SV: Vũ Xuân Tạo 12 K5 Công nghệ sinh học Công nghệ enzyme GV: ThS Trịnh Đình Khá Sau đây là các bước trong quá trình sản xuất enzyme Protease tái tổ hợp từ chủng Bacillus sp Việt Nam biết trên genbank một số trình tự hóa cho protein của một số loài trong chi Bacillus (Tham khảo và tổng hợp. .. điểm phân loại để xem xét loài Bacillus ta chọn được từ bước trên bằng cách so sánh trình tự gen của nó với với trình tự gen hóa protein enzyme của các loài trong chi Bacillus trình tự gen đã công bố trên genbank - Xác định các trình tự gen bảo thủ - Từ trình tự này trên genebank thiết kế mồi để tổng hợp đoạn ADN hóa cho protease Hai đầu 5' của mồi bổ sung vị trí của 2 enzyme cắt giới hạn để... và tổng hợp từ các nguồn tài liệu: [3][20]) Bước 1 Phân lập khảo sát & chọn lọc chủng Bacillus cho hoạt tính enzyme Protease tốt nhất Công đoạn này mất tương đối nhiều thời gian Từ một số loài trong chi Bacillus tiến hành các biện pháp chọn lọc thử hoạt tính, xác định các tham số đặc trưng để chọn ra loài cho hoạt tính enzyme Protease cao nhất Bước 2: Xác định gen hóa cho protein enzyme Protease -... protein [9] Các chủng vi khuẩn khả năng tổng hợp mạnh ProteaseBacillus subtilis, B.mesentericus, B.thermorpoteoliticus và một số giống thuộc chi Clostridium Trong đó, B.subtilis S5 khả năng tổng hợp Protease mạnh nhất Các vi khuẩn thường tổng hợp các Protease hoạt động thích hợp ở vùng pH trung tính và kiềm yếu.[2] Các Protease trung tính của vi khuẩn hoạt động ở khoảng pH hẹp (pH 58) và khả... nhận Protease từ vi sinh vật cũng như những ứng dụng của nó là một đề tài mang tính thời đại, cấp thiết trong tình hình Việt Nam đang hội nhập mạnh mẽ với nền kinh tế thế giới Với thời gian hạn và sự hiểu biết hạn hẹp của sinh viên năm thứ 4 ngành công nghệ sinh học, em chỉ trình bày được một phần khía cạnh của các kỹ thuật trong sản xuất Protease tái tổ hợp Mong sự góp ý của thầy các bạn Một. .. được chứa đầy đủ và chính xác trình tự hóa cho enzyme quan tâm là Protease Bước 4: Biến nạp vào tế bào chủ - Biến nạp vector vào chủng vi khuẩn định biểu hiện Hiện nay thể biểu hiện bằng E.coli (ngoài ra thể là Bacillusprotease nguồn gốc từ bacillus nên biểu hiện trong bacillus sẽ giảm thiểu trường hợp cuộn gập sai.) - Đối với tế bào vi khuẩn thường sử dụng Cacl2 và sốc nhiệt 42 o trong. .. thu sản phẩm enzyme Protease tái tổ hợp Sử dụng các phương pháp lên men: lên men bề mặt hay lên men chìm Bước 7: Tách chi t tinh sạch thu chế phẩm enzyme Protease tái tổ hợp - Tiến hành chi t dịch enzyme bằn dung môi thích hợp và tiến hành ở nhiệt độ thấp - thể bổ sung thêm 1 số chất bổ trợ SV: Vũ Xuân Tạo 14 K5 Công nghệ sinh học Công nghệ enzyme GV: ThS Trịnh Đình Khá - Để chi t được dịch enzyme. .. nghệ enzyme GV: ThS Trịnh Đình Khá Chính vì thế nhịp độ sản xuất Protease ở quy mô công nghiệp tại các nước phát triển hàng năm tăng vào khoảng 5%- 10% Ngày nay người ta thể sản xuất các enzyme cố định trên các chất mang không tan cho phép thể tái sử dụng enzyme nhiều lần Vì vậy việc ứng dụng Protease ngày càng gia tăng[7],[6] 3 Tổng quan về nguồn thu nhận từ vi khuẩn bacillus Lượng Protease sản. .. Tách chi t nhận hệ gen của vi khuẩn Bacillus ta chọn - Tiến hành nhân gen cần quan tâm bằng PCR bằng cách sử dụng cặp mồi đã thiết kế ở trên - Sử dụng enzyme cắt giới hạn để cắt thu đoạn gen mong muốn - Tinh sạch ADN và tiến hành đọc trình tự gen - So sánh trình tự gen với trình tự gen đã biết trên genbank Khi trình đã thu dc gen mong muốn (trình tự gen tương đồng) tiến hành bước 3 Bước 3: Tạo vector tái. .. phục vụ cho cuộc sống con người Hiện nay, việc tìm ra các enzyme mới và nâng hoạt lực của các enzyme cũ đang mang lại nhiều lợi ích trong sản xuất và đời sống Nhờ đó, chất lượng cuộc sống của con người ngày càng được tăng cao Công nghệ enzyme ở nước ta hiện còn rất mới mẽ, đang trong giai đoạn hưởng ứng và ngày hoàn thiện dần lĩnh vực này trong tương lai Do vậy việc đi sâu và tìm hiểu enzyme Protease, . Protease tái tổ hợp từ chủng Bacillus sp Việt Nam biết trên genbank có một số trình tự mã hóa cho protein của một số loài trong chi Bacillus. (Tham khảo và tổng. Protease tái tổ hợp từ chủng Bacillus sp Việt Nam biết trên genbank có một số trình tự mã hóa cho protein của một số loài trong chi Bacillus. ”. SV: Vũ

Ngày đăng: 23/04/2013, 09:34

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan