Nghiên cứu biểu hiện gen Trehalase tái tổ hợp ở E.coli và xác định các tính chất của enzyme

Thông tin tài liệu

Ngày nay, công nghệ sinh học phân tử đã phát triển nhanh chóng, đạt được những thành tựu to lớn về lý thuyết và thực tiễn

Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở MỞ ĐẦU   !"#$!%&#'()* +,-  ./&01* 23 4/52! 4-  .4!/67 # 8*9:.4(; 8<=3 >/! ?@28A( B36#C$8*9:, . D2(E ?@28A*+? & C!(F*#$ !%#<<G?&5@28A @2$H/?IC$0( @28A .>/D 2#5!@2H<<G#28A!C  8C$<=(; 2@2. D2*$&.8A(JC$! .8A K.L! !.M ! <:.) / !. ;:! :N; 4.;:! :!23 ! . $<=4#"34 .>/4#". /O 5.2P/.AN  JQ#",.8A! :R2:8 <= !S#TD268#8<= ;:!:!:R2:<=?IC;:! :!4$ UD5!A+D5*&CH< <G(E #768?IC;:!:!:R2:<=? IC;:! :!VV&(W>/6H.F2 ,&7&@2+" 604 ( Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 1 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở F5#7#68?IC:R2:;:!:*U%S * 2XH*&I3( ;+!%< 6-$68K “Nghiên cứu biểu hiện gen Trehalase tái tổ hợp ở E.coli và xác định các tính chất của enzyme” L=6,$K Y(Z:;:!:[1E.coli( \(;#&:R2:( ](BH>^,:R2: _(`<=:R2:[;:! :( Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 2 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở PHẦN 1:TỔNG QUAN TÀI LIỆU I.1 Công nghệ DNA tái tổ hợp ab7<$!7 $*b70/?  68<$(;7*b7:X: *b7:#C$4!c,( A2Yde]f<!:#):<:!K*b7<$!*b7<g& *?A/&[H":V4*:,23DV > !2AA/?*?A?,234 #4:# A4!,DV(ab7:/PVA2Ydhh/ i2 *b76:j2$U#/&[: > :2"+ 2"(ab7:/ i2234*b 70/?!*b7Ek[!7:O:< :# :( Ek[!Ek +$i#7!< $*(lEkO4+ Ek, * !  >! *Ek[( 6P,Ek[/ i2234/" (;"&: 2:2=6#Ek?m#: n&# P+ .23! oR2:&(; $. m>/4#"#7/7 nEk: 2:&/jEk 0/QmEkn,2fk=(Ek[+* fk.I-,:R2: Om:#::: p<::<:Ekp !2::n(Ek#: !23!2< > :m&#72<X:!#*@n!2<;,#*@ Agrobacterrium tumefaciensm&#72<X:!&/ #7n !Fmretrovirus >andovirus*/&#72<X :!&/ 3#7n(Z"8!#7Ek[# 0 #72<X#/"&!C#72?IC m&C#&n?@22=6( Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 3 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở  .PQ23! :R2:&m.!:R2:V <^n Ek2=6# Ek#: mUP232 ,2#XI P*Ong65!6*&< 0 /Q1V<^i!:PV*(a&D? q 5[,#: #"23 >2342?Ek, : 2:2=6m/6?@2*2 24#:  *O#X#: [#"#2?Ek*[  >[n(;C??@2 q$3$ #"#72 <X#72C 2 .<<G&4!mC*4#"#*@ C&4#"&/ 3#7#7n(; $*U &/ #72#: 4(r0< !2</H:R2:& P #X23#H^IH 23:$*233^ 7/&*!2<[2C*?A ^1 #72ms2C*?A[Z:p! <:n6U #724#*/^5 C <X(Z"&: !<X^,:2=6  ><X:2=6m.!K02 2'<Hotu)kv::2/! ! :/! ! >#" <XEk >fkw :/! ! :/! !n > lJf( C <X#7292/" 26- <XV#72?IC? @22=6( ;C,Ek[!7$*b76 23:?/&C-,:/3: :2" /3:( JEk[/ i2/"0/?( p ;&Ekfkm!7:n p ; #: [m/ i2@/H#: <Xn p Z&#: [# &/ ,#<X( p )!: <c 3#/,: Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 4 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở  J &*b7<$/"&#/7( $?@2^?IC+##7[# #7/&[:m:!!2 <x:< 2wyLzn4T 470<V/N2:4/ >* 449< >C!?@2 * 8 $l :!-$#2k#PN; #I[ <'?ICm<'C6!8C&/ n#<' <= A4 >3#7[??@2 ^4/72^ !2* 6.#!#7 2 >3*$H ../V&3DN;6*b7< $T>! .# 5?0V#": <2"!6D"8*9:,.#w2.(J 82^#,yLz@24#" .T ,7*?A!$:*4m,l!2<#: n  7 #*@6,0m#^<= .3n .#3#7(JA2! i$*4<9# 4</<g&!2<=<#& 1 9<5#7*4#*/{!230 2"4#"(;00#7yLz!C #76{!C #<g&<,$!  #77D?62&2.N I.2 Đại cương về vi khuẩn E.coli ;: ' FS  l" mYdh]n|  ' tETmYdh}n  *@ Escherchia Coli   6  *     ! Bacterium Coli Comunis /5 .E.coli-1V,3m3#V4,3 n ^*1<<^"3 ,3#7m'FS l"Ydhen(;U!E.coli1*&!~e(]•~~(]•2 !]d(]•E.coli IC#413#7U#.*# Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 5 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở i&* #7&(t A#AH?$E.coli0! A 9(;: a:x2,E.coli.>#$& ): :6(; 4234: :#XD  #/ .#3#7( I.2.1 Đặc điểm hình thái E.coli!! *@57PVX!<3 *5/ 2/P2y22.g21 V1*^"#*@\p]LI€(_p€(}2(; 0 -#*@5V86!•*I&qP( I.2.2 Đặc tính nuôi cấy E.coli!#*@&*^*H*^Q<'C 1#^C1]h Jr^!h(\ph(_(;6 -#g 2.r‚~(~pe(€( L."HKE.coliC2.=$ !P>I42 62>52292 <^# 42Q2Q4( L.H.KC1]h J \_5*@ !X""!4* 42 .*^*@! * ?\p]22( L.o< K5*@!*2( L"))K62.\_C5*@ !2i >29:( L.oLZKE.coli*@!2^2:( L.L *:KE.coli5*@!29( L.Z!!wy::wK*@!,E.coli<)2 #( I.2.3.Đặc tính sinh hóa Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 6 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở J,E.coli$!62:02! .y! : y! :t :L !N E.coli!62:*0! .) :f2 : B!IF!y!I: ( J?8*K l?8< !mƒn?8Flm‚n?8Lfmƒn?8r\) mƒn 6„::mpny:!mpn( I.2.4 Sức đề kháng của E.coli E.coli/H6<13~~ J 23.}€ J ]€- mv!! #L!:Ydd~nm'#Sl"Ydh]n(JCQK kI:J! ,M 2 !6<E.coli ~-( I.3. Tình hình sản xuất và ứng dụng enzyme trên thế giới và Việt Nam I.3.1 Tình hình sản xuất và ứng dụng enzyme trên thế giới oR2:#X#QD*UI- ? 8I? 442**944 -#gI- ?8 &/ m n(Z1#7 :R2:(0/?#$:R2:!0 1688<=:R2: '( oR2:.<=: K*:R2: *96!2 $*7!  3,234:R2: … 6!-CQ 6 !: "2 24(r >:R2:*96!1< &@2*V&(oR2: 3+/C*† 0 D 4  ( F^<= :R2:  0 2     ? IC + Acitinoplanes"Zymomonas(;+#Hmn&3,P( E 7<=i6!:R2::R2:<Q :R2:&/&! 6!* ><=#  2=^*(rA2:R2:02?IC  023+C224#C22:DY‡]+#*@X!e•+ Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 7 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở 3#7_•+#7( F#7!i6!4C,:R2:#5 -43162.<<G*P $*X9&/HP$3 >$*A C Nr0,3$*D5[ :R2: 2!:R2: &/ ##7<'<0& / #7#3#7( rA2A2C&@2:R2:?IC=#=  #(A2Yde€6&"?IC~]€C  ::+#*@]~€C! 2!:]\€C α wk2!:h€C !  2::C?HY~€„)E( r6H.* ?Y\?IC:R2:^#" 6}€C!"(r?IC:R2:!"C!  #  <*mWLn#yZ <:&2}€•!:R2:6 H.(;&!LbY~• \‡]<=3H,&<Q ?ICi#.H? (A2Ydd]6H.Lb6=~€ „)E4#":\h„)E4#"! k2!:\]„)E 4#"!  2::Na ?~€! :R2:*/6 H.Lb(7&2Y\pY~•H.6=#"?@2 <(;ˆ4#!H.?IC,&=#=  "( W&.  /&# ! * ?]~€€! :R2: * ?#A2! ?IC6D2,&! :R2:k2!:l ::(t:N p k2! <:K?IC#"?!~C‡A2<=tp <2*9qEtI2m\~€CtI26A2n p k2! ! <:K?!YC‡A2?IC]€€€C! :+ /3‡A2( p y!  2::K    <=    ?  IC  I ! :  w  x :  _\• Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 8 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở m\(Y~€(€€€C‡A2n#I ! :px :~~•mY(_~€(€€€C‡A2n( lV!":R2:<=1283$3!  :R2:0CI- ?8,(a ?h€•&@2! :R2:,<=,0C6( J ::!:R2:<=$C<Q  D5=?ICx 2!22$2H?ICC@ 3<( ;&  & !:R2: 2  r</  k2!: J:!!! :l::N)<=$ &/&@28A -<?ICC#/3C( ; @2&@2:R2:<=#" _2=^^K pW$U*&2*&,6!(6!, @2!?@28i4+3#7# #75D$ [(E  V6!=3# &4/6 4! # &4/6 $**^7(J&4!2 [V6!#(; . &@2:R2:<=23=!CV&=(;  &/&./3/2†/N./[ k2!:/Q !:R2&,6!T4(; ?IC x 2 :R2:!: # :: <=&:R2: + 6!/H# Q( p;28<=$C ?IC/ /D:x 2"4N :: O?^!,/# ^A[H,13C(k2!::::2:!!!:  $* #&#!"D?(l ::^!2 2$2<• *!:?31,/3 #3X,/D:( p;AH6!6(oR2:2# # Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 9 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở <?@27+6!6(), :R2: .23! &@2:R2: O $ ?@2KC!2>C02C C N#? >^,:R2:#$^>#^H!01? IC&@2:R2:2"^2.#>0( pJ?C!?@2K:R2:<=! /9 C6?1IC"^C?2D,@2(J& @2:R2:X O 0#H2P?@2!:  ?ICx 2!: ?IC( ; @2 ::<Q!22$2H /2†:R2<H#Hd,&!2 +<< /X<=?ICx 2+,!22$2H( oR2: @2,&<=?IC ./3(WV6.<=:R2: αpk2!:# βp k2!:?IC27+/3?@28<:I! :# 2! :<Q$ /*‰ (y! :?IC .αpk2!:#βpk2!:6! :<Q @2 23CU# * ?€(e!V.*^#5#7 <Q,& <( A2Ydh€.?ICM :#I ! wx : ! .3CY(h]!V #".*^  0$( A2Ydde[!.6=6&"!Y€C5 6Lb6=_(\CM :m/ i2?I ! wx :n7! e€€(€€€Co„!\CJ<]€€€€€CWŠ\€€€€€C "!~€€€€€C( )@2&@2:R2:<=  <@2&&/&8A-(W> #<=:R2:,##7 "?  Khoa Công Nghệ Sinh Học Vũ Thị Hằng - 0604 10 [...]... nhỏ và nhiều enzyme đặc hiệu được dùng để cắt, nối gen trong kỹ thuật gen, nghiên cứu phân tử protein (endonuclease), sử dụng enzym Urease để định lượng ure trong nước tiểu… Cho đến nay, người ta vẫn cho rằng 99% khả năng ứng dụng của enzyme vẫn ở dạng tiềm năng Trên cơ sở nghiên cứu cơ bản về cấu trúc phân tử và cơ chế sinh tổng hợp enzyme đã mở ra triển vọng của ngành enzyme học: - Tổng hợp enzyme. .. phân tử Ngoài việc nghiên cứu enzyme trong y học lâm sàng và trong điều trị học, người ta còn nghiên cứu sự phát triển của enzyme trong cơ thể từ giai đoạn bào thai cho đến lúc già Bởi vậy ngày nay enzyme học còn đóng vai trò quan trọng trong di truyền học phân tử, trong nghiên cứu quá trình tiến hóa của các giống nòi và trong nhiều lĩnh vực khác Ngoài các enzyme thuộc nhóm trên, enzyme khác được sản... khuẩn Hầu hết các enzyme Trehalase tách biệt với các vi khuẩn có độ pH từ 6.5 đến 7.5 Enzyme Trehalase của Mycobacterium là một màng protein bị ràng buộc Tế bào chất Trehalase của Escherichiacoli K12 được kích thích bở sự tăng cao trong nồng độ thẩm thấu Sự thủy phân của Trehalose thành glucose diễn ra trong bào chất, và sau đó glucose được chuyển vào các tế bào vi khuẩn Một tế bào chất Trehalase khác... Trehalose, bởi đường Trehalose có tác dụng là cơ chất tốt cho sự phát triển của các vi sinh vật có lợi Chính sự có mặt và đóng góp vai trò tích cực trên người ta đã nói rằng đường Trehalose có khả năng kháng khuẩn (antibiotic) I.5.2.5 Tính an toàn của Trehalose Để khẳng định tính an toàn của Trehalose đối với cơ thể sống đã có nhiều nghiên cứu về tế bào và gen của động thực vật ăn Trehalose Các nghiên cứu. .. tổng hợp hóa học đã lần lượt được thay thế bằng các quá trình enzyme nhờ những ưu điểm của nó Ví dụ việc sản xuất Pinicillin bán tổng hợp nhờ enzyme penicillin acylase để sản xuất hai dẫn xuất ban đầu 6- APA và 7 – ADCA, từ đó tổng hợp lên kháng sinh thế hệ II, III, IV, V Cùng với sự phát triển của kỹ thuật gen và lai tạo tế bào, người ta đã sản xuất được những chất mà cơ thể sống chỉ có thể tổng hợp. .. tái chế I.3.2 Tình hình sản xuất và ứng dụng enzyme ở Việt Nam Việc nghiên cứu và ứng dụng enzyme ở Việt Nam chỉ mới được tập trung chú ý trong vài thập kỷ trở lại đây Cho đến nay Việt Nam chưa có một enzyme nào được sản xuất ở quy mô công nghiệp mà mới chỉ dừng lại ở quy mô nhỏ, phạm vi phòng thí nghiệm của các trường đại học, các viện nghiên cứu Enzyme pepsin từ dạ dày bò (Trường Đại Học Bách khoa... tạo: các chất có hoạt tính tương tự enzyme có thể tổng hợp bằng con đường nhân tạo thiết kế và tổng hợp các chất gắn rất Khoa Công Nghệ Sinh Học 12 Vũ Thị Hằng - 0604 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở đơn giản xong việc thiết kế trung tâm xúc tác rất khó khăn Đến nay, một vài enzyme nhân tạo được sử dụng thành công như acid polyglutamic có hoạt tính tương tự như estsrase - Biến đổi cấu trúc enzyme: ... Tất cả các thao tác đều làm trong box cấy vô trùng, các dụng cụ đều được hấp khử trùng ở 121oC trong 20 phút II.2.2 Tách DNA plasmid DNA tái tổ hợp sau khi được biến nạp vào chủng DH5 alpha sẽ nhân lên thành nhiều bản sao cùng với quá trình sinh trưởng của vi khuẩn Sau đó vector tái tổ hợp được tách chiết ra khỏi DNA genom vi khuẩn bằng cách xử lý với NaOH, SDS Trong điều kiện này, DNA genom của vi... đổi định hướng cấu trúc enzyme, biến đổi hoạt tính, hiệu suất… người ta sử dụng công nghệ protein để cải biến trung tâm hoạt động của enzyme mục đích làm cho có hoạt tính cao hơn hoặc enzyme có hoạt tính mới - Enzyme sử dụng trong phân tích, chuẩn đoán, điều trị - Bảo vệ môi trường: sử dụng enzyme để xử lý chất thải, tái tạo vật liệu hay sử dụng vật liệu tái chế I.3.2 Tình hình sản xuất và ứng dụng enzyme. .. trường và các viện khác như trường đại học Bách Khoa Hà Nội, trường đại học Nông Nghiệp, Viện đại học Mở Hà Nội, viện nghiên cứu thực phẩm thành phố Hồ Chí Minh cũng bắt đầu có những nghiên cứu thăm dò trong lĩnh vực nghiên cứu và sản xuất loại đường chức năng này Tuy nhiên các nghiên cứu mới chỉ ở quy mô phòng thí nghiệm Khoa Công Nghệ Sinh Học 25 Vũ Thị Hằng - 0604 Khóa luận tốt nghiệp Viện Đại Học Mở

Ngày đăng: 22/04/2013, 17:19

Xem thêm: Nghiên cứu biểu hiện gen Trehalase tái tổ hợp ở E.coli và xác định các tính chất của enzyme, Nghiên cứu biểu hiện gen Trehalase tái tổ hợp ở E.coli và xác định các tính chất của enzyme, Công nghệ DNA tái tổ hợp, Đặc điểm hình thái Đặc tính ni cấy Sức đề kháng của E.coli, Trehalase trong vi khuẩn Trehalase trong thực vật Trehalase trong nấm men, Vai trò thúc đẩy q trình hấp thụ canxi của Trehalose Ảnh hưởng của Trehalose đến hệ vi sinh vật trong khoang miệng, Ứng dụng của Trehalose Tình hình nghiên cứu và sản xuất Trehalose trên thế giới, Plasmid: Hóa chất Máy móc và thiết bị, Tách DNA plasmid, Xác định DNA biểu hiện ở E.coli trên gel Agarose Phương pháp phá vỡ tế bào