Bộ giáo dục đào tạo Trờng đại học nông nghiệp hà nội -*** - đỗ học dân Sự biến động khả lây nhiễm ấu trùng sán ruột Haplorchis pumilio cá rô phi Oreochromis niloticus Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Huyờn ngnh : NUễI TRNG THY SN Mó s 60.62.70 : Ngi hng dn khoa hc: TS PHAN TH VN ThS BI NGC THANH hà nội - 2012 LI CAM OAN Tụi xin cam ủoan ủõy l cụng trỡnh nghiờn cu ca riờng tụi Cỏc s liu kt qu nờu lun l trung thc v cha tng ủc cụng b bt k cụng trỡnh no Tụi xin cam ủoan rng cỏc thụng tin trớch dn lun ủu ủc ch rừ ngun gc H Ni, thỏng nm 2012 Tỏc gi Hc Dõn Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip i LI CM N Tụi xin by t s bit n chõn thnh ủi vi s quan tõm giỳp ủ ca Khoa sau ủi hc, Ban Giỏm hiu trng i Hc Nụng Nghip H Ni, v Phũng Thụng tin Hp tỏc Quc t o to, Vin Nghiờn cu nuụi trng thy sn I ủó hng dn v to mi ủiu kin thun li ủ tụi hon thnh tt khúa hc Vi tm lũng chõn thnh nht, tụi xin gi li cm n sõu sc ti Tin s Phan Th Võn, ngi ủó ủnh hng cho tụi, tn tỡnh ch dn tụi sut quỏ trỡnh thc hin lun tt nghip Trõn trng cm n ủn Ths Bựi Ngc Thanh ủó ch bo v truyn ủt cho tụi nhng kin thc chuyờn mụn, nhng kinh nghim quý bỏu ủ hon thnh tt lun tt nghip Xin chõn thnh cm n Ban lónh ủo cựng ton th anh ch em Trung tõm nghiờn cu quan trc cnh bỏo mụi trng v phũng nga dch bnh khu vc Min Bc ủó giỳp ủ v to mi ủiu kin tt nht v c s vt cht phc v thớ nghim, cung cp cỏc ti liu cn thit ủ hon thnh lun theo ủỳng tin ủ S ủng vin, giỳp ủ ca bn bố v ủng nghip ủó khớch l tụi rt nhiu, tụi xin chõn thnh cm n s giỳp ủ quý bỏu ủú Cui cựng xin ghi nh n dng dc, sinh thnh ca b m v s ng h ca ngi thõn gia ủỡnh ủ cú ngy hụm Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip ii MC LC Li cam ủoan i Li cm nii Mc lciii Danh mc bng.v Danh mc hỡnh v PHN I M U PHN II TNG QUAN TI LIU 2.1 c ủim v vũng ủi sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ 2.1.1 c ủim hỡnh thỏi, cu to c th 2.1.2 Chu k phỏt trin ca sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ 2.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu trờn th gii 2.3 Tỡnh hỡnh nghiờn cu ti Vit Nam 2.4 Tỡnh hỡnh nghiờn cu v sỏn lỏ rut nh Haplorchis pumilio 14 PHN III I TNG, V PHNG PHP NGHIấN CU 16 3.1 i tng v vt liu nghiờn cu 16 3.2 Dng c, húa cht thớ nghim 17 3.2.1 Dng c thớ nghim 17 3.2.2 Húa cht thớ nghim 18 3.3 Phng phỏp nghiờn cu 18 3.3.1 B trớ thớ nghim 18 3.3.2 Phng phỏp ỏp dng 20 3.4 Phng phỏp x lý s liu 22 PHN IV KT QU NGHIấN CU V THO LUN 23 4.1 KT QU 23 4.1.1 Cng ủ nhim cercariae trờn c 23 4.1.2 Bin ủng metacercariae trờn cỏ sau gõy nhim 24 4.1.3 Metacercariae c ca cỏ sau gõy nhim 27 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip iii 4.1.4 Kh nng lõy nhim ca u trựng 28 4.2 THO LUN 30 PHN V KT LUN V XUT 34 5.1 Kt lun 34 5.2 xut nghiờn cu 34 TI LIU THAM KHO 35 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip iv DANH MC BNG Bng 1: Thớ nghim gõy nhim trờn chut 20 Bng 2: Kh nng thi cercariae t c nhim 23 DANH MC HèNH Hỡnh 1: Vũng ủi ca Sỏn lỏ rut nh thuc h Heterophydae Hỡnh 2: Cercariae v metacercariae (Skov v ctc, 2009) 15 Hỡnh i tng nghiờn cu 17 Hỡnh 4: Hỡnh thc gõy nhim u trựng sỏn cho cỏ rụ phi 19 Hỡnh Pleurolophocercous cercariae (A-B) ca H pumilio thu ủc t c M tuberculata (C-D) 24 Hỡnh 6: Bin ủng t l nhim metacercariae sau gõy nhim 25 Hỡnh Bin ủng cng ủ nhim metacercariae sau gõy nhim 26 Hỡnh 8: u trựng sỏn lỏ rut H pumilio gc võy ủuụi (ngụi sao) 27 Hỡnh u trựng sỏn lỏ rut H.pumilio phn ủu cỏ rụ phi (ngụi sao) 28 Hỡnh 10: Metacercariae H pumilio [sau gõy nhim (A-24 gi, C-7 ngy, D-30 ngy tui v B- rng giỏc ming u trựng ủó hon thin v hỡnh thỏi), u trựng nhim t nhiờn (E), u trựng cú du hiu cht tun th 12 (F)] 29 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip v PHN I M U Nuụi trng thy sn (NTTS) hin l mt nhng ngnh sn xut thc phm phỏt trin nhanh nht th gii Cỏc nc Chõu ủó sn xut khong 90% sn lng nuụi thy sn trờn ton th gii õy l ngnh ủc xem l th mnh ca nhiu quc gia cú u th v din tớch mt nc, ủú cú Vit Nam Din tớch nuụi trng thy sn nc ta hin khong 887.700 ha, ủú din tớch nuụi thy sn nc ngt l 408.700 ha, sn lng cỏ nuụi nc ngt chim 60-70% tng sn lng thy sn ca c nc Sn phm t nuụi trng thy sn khụng ch l ngun cung cp protein quan trng cho th trng ni m cũn l ngun nguyờn liu di cho xut khu Chớnh vỡ vy, ủ an ton v sinh thc phm nuụi trng thy sn rt quan trng Ký sinh trựng cú ngun gc t thy sn lõy sang ngi gõy bnh sỏn lỏ gan v sỏn l rut trờn ngi l mt nhng tiờu ủỏnh giỏ cht lng ca sn phm thy sn c bit nhng nc cú truyn thng n nhiu mún n ch bin t cỏ bao gm cỏc mún nh gi, mm, khụ v mui Sỏn lỏ rut nh Haplorchis spp thuc h Heterophyidae thng ký sinh rut non ca ngi, gia sỳc v gia cm Sỏn lỏ rut ký sinh niờm mc rut v gõy ri lon tiờu húa Tỏc hi trc tip ca loi sỏn ny ủi vi ngi v ủng vt l khụng ln Nhng sỏn ký sinh, nú to cỏc vt loột l ca ngừ cho cỏc tỏc nhõn gõy bnh khỏc xõm nhp vo c th, ủc bit chỳng cú th gõy nhng tn thng ủn nóo b di chuyn ti nóo v ủ trng ủõy Hin cú khong 40 triu ngi trờn th gii ủang b nhim sỏn lỏ gan nh Clonorchis sinensis hay Opisthorchis viverrini v sỏn lỏ rut nh Haplorchis sp., Echinotosma sp, hoc Metagonimus sp (World Health Organization, 1995) Cỏ Rụ phi (Oreochromis niloticus) hin ủang l mt nhng ủi tng nuụi ch lc nhm cung cp thc phm cho ni cng nh xut Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip khu Vi sn lng nuụi ngy cng tng c v s lng v din tớch, vic nghiờn cu sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ cú ngha vụ cựng quan trng ủi vi an ton v sinh thc phm Vỡ vy chỳng tụi tin hnh ủ ti nghiờn cu: S bin ủng v kh nng lõy nhim ca u trựng sỏn lỏ rut Haplorchis pumilio trờn cỏ rụ phi Oreochromis niloticus MC TIấU V NI DUNG NGHIấN CU Mc tiờu nghiờn cu ỏnh giỏ s bin ủng v kh nng phỏt trin ca u trựng metacercariae ca sỏn lỏ rut Haplorchis pumilio trờn cỏ rụ phi Oreochromis niloticus nhm gúp phn ủ xut cỏc gii phỏp ủm bo an ton v sinh thc phm (ATVSTP) NTTS Ni dung nghiờn cu Nghiờn cu cng ủ u trựng cercariae c nh Nghiờn cu s bin ủng metacercariae H pumilio nhim trờn cỏ rụ phi O niloticus ủiu kin thớ nghim Nghiờn cu mụ bnh hc ca cỏ rụ phi sau gõy nhim Nghiờn cu kh nng cm nhim ca u trựng metarcerariae trờn chut bch Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip PHN II TNG QUAN TI LIU 2.1 c ủim v vũng ủi sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ 2.1.1 c ủim hỡnh thỏi, cu to c th Theo ti liu ca d ỏn FIBOZOPA, 2005 sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ Fishborne Zoonotic Trematodes (FZT) giai ủon trng thnh c th cú hỡnh trng hoc hỡnh lỏ ủi xng bờn hoc khụng ủi xng Vi mt s loi, c th cũn chia lm hai phn trc v sau, mt s ớt loi mt lng hi cao so vi thõn Kớch thc c th khong 0.5 x 2,0mm, cỏ th cú loi chiu di lờn ti 25mm nh sỏn lỏ gan nh C th trong, khụng mu, cỏ bit cú cỏ th cú mu ủ mu mỏu B mt trn, mt s ging loi trờn b mt cú gai hoc cỏc mu li Giỏc ming nh phớa trc c th, giỏc bng ln hn hoc tng ủng vi giỏc ming Lp ngoi cựng ca sỏn lỏ l lp nguyờn sinh cht, ri rỏc cú ging loi cú múc l c quan bỏm b sung, lp ny ủ chng li tỏc dng dch tiờu húa ca ký ch v hp th dinh dng Sau lp nguyờn sinh cht l lp c: c vũng, c dc, c xiờn H thng tiờu húa ca sỏn lỏ truyn qua cỏ cú ming, hu, thc qun, rut i b phn ming chớnh gia giỏc hỳt trc Hu t bo c v tuyn th cu to thnh Thc qun hp ngn, rut chia lm hai nhỏnh hai bờn c th v bt kớn tn cựng Mt s ging ca loi cú hu mụn H thng sinh dc lng tớnh, ủc cỏi trờn cựng mt c th C quan sinh dc ủc thng cú 1-2 tinh hon ri ủ ng dn tinh nh hng v trc, chung thnh ng phúng tinh v tn cựng c quan giao phi trc giỏc bng C quan sinh dc cỏi cú mt bung trng, ng dn trng ủ vo khoang gi l ootýp, t khoang ootýp ủi l t cung un khỳc chy ủn l sinh dc cỏi cnh l sinh dc ủc tuyn sinh dc Tuyn noón hong hai bờn c th ủ vo hai nhỏnh nh sau ủú hp thnh bu ri dn ủn khoang Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip ootýp ủ lm v, khoang ootýp cú tỳi nhn tinh Th melit cú dng hỡnh trũn gm nhiu t bo quanh ootýp Tinh trựng t huyt sinh dc theo t cung ngc lờn khoang ootýp gp trng t bung trng tin hnh th tinh Trng ủó th tinh ủc tuyn noón hong bao quanh to thnh lp trng Sau ủú, trng theo t cung lờn l sinh dc ri ngoi H thng bi tit l nguyờn ủn thn gm 1-2 ủụi ng bi tit chy dc hai bờn c th Hai ng bi tit cựng ủ vo bng ủỏi ri ủ ngoi qua l bi tit H thng thn kinh gm mt ủụi hch nóo nm trờn hu, ủụi dõy thn kinh, dõy thn kinh lng, dõy thn kinh hu (FIBOZOPA Laboratory manual, 2005) 2.1.2 Chu k phỏt trin ca sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ Sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ tin hnh giao phi trờn cựng mt c th, ủ trng, trng cú kớch thc rt nh nhng s lng trng ln T trng ủ phỏt trin thnh c th trng thnh phi tri qua mt quỏ trỡnh phỏt dc phc nhiu ký ch vi nhiu giai ủon phỏt trin c th: Hỡnh 1: Vũng ủi ca Sỏn lỏ rut nh thuc h Heterophydae Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip S hon thin v hỡnh thỏi, cu trỳc cng nh chc nng ca u trựng cng cn cú thi gian Mc dự, mt s u trựng ủó nhanh chúng hỡnh thnh bo nang hon chnh sau 24 gi nhng cũn ủim mt ca u trựng cercariae (hỡnh 10 - A), ủn ngy th (Hỡnh 10 - C) mc dự ủó phỏt trin hn v cu trỳc nhng giỏc bng cha rừ, ủc bit l vũng rng - ủi vi cỏc loi Haplorchis sp, nu cha quan sỏt ủc vũng rng trờn giỏc bng thỡ cha th ủnh loi ủc loi Hỡnh 10 - B, D l metacercariae phõn lp ủc 30 ngy tui sau gõy nhim v vũng rng ni rừ trờn giỏc bng - cú th núi u trựng giai ủon ny ủó hon thin ủy ủ v cu trựng v chc nng - cú th lõy nhim cho ký ch cui cựng 4.2 THO LUN S lng pleurolophocercous cercariae thi sau thi gian gi v gi l khụng cú s khỏc bit ủỏng k c Melanoides tuberculata nhim u trựng ủiu kin t nhiờn, quỏ trỡnh phỏt trin ca u trựng qua mt s giai ủon, ủn giai ủon cercariae thỡ u trựng ny t ủng thoỏt c Mi trng sỏn qua quỏ trỡnh phỏt trin ny cú th to hng nghỡn u trựng cercariae Mi giai ủon m u trựng cercariae thoỏt ra, cercariae thng cú ngun gc t mt trng ban ủu Hn na, c dng tớnh ủc la chn thớ nghim ủó ủc thu v gi phũng thớ nghim mt thi gian, thi gian ny u trựng cercariae ch cũn ch c hi ủ thoỏt nờn c ủc th li nc thỡ cercariae s nhanh chúng thi ngoi m khụng cn mt nhiu thi gian Bn nng tỡm gp ký ch trung gian v nng lng hn ch nờn u trựng cercariae cn thoỏt sau phỏt trin hon thin ủ tỡm c hi gõy nhim cho cỏ Hin tng thoỏt ủng lot õu trựng cercariae thi gian ngn cng cú th ủc gii thớch rng, vi s lng ln u trựng thỡ c hi gp ủc ký ch trung gian s ln hn Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 30 Kt qu cng ủ u trựng cercariae thi t c cng l c s ủ thit k thớ nghim gõy nhim cho cỏ rụ phi Thi gian la chn ủ phi nhim cỏ rụ phi vi c nhim b gõy nhim l gi, thi gian ny ủm bo ủ v s lng v thi gian ủ u trựng cú th nhim cho cỏ ủng thi cng ủm bo cỏ thớ nghim khụng phi chu stress quỏ lõu T l cỏ rụ phi nhim u trựng sỏn lỏ rut nh H pumilio l rt cao ln lt l 100 v 93,33% nghim thc v tun th kim tra iu ny chng t cỏ rụ phi giai ủon hng l rt nhy cm vi pleurolophocercous cercariae ca H pumilio Thanh v ctv (2008) cng cho rng cỏ rụ phi c giai ủon hng v ging ln ủu nhy cm vi phng phỏp phi nhim nc, tng t nh nghiờn cu ny iu tra trờn cỏ nhim t nhiờn giai ủon hng v ging ca cỏc ủi tng thuc h cỏ chộp, Phan Th Võn v ctv (2010) cú nhn xột: cỏc ủim sn xut cỏ hng cỏ ging l ủim núng v sỏn lỏ lõy truyn qua cỏ bi t l v cng ủ nhim giai ủon ny khỏ cao T l v cng ủ nhim nghiờn cu ny cú xu hng gim dn theo thi gian Sau 15 tun, t l nhim ủó gim t 93,33 v 100% xung cũn v 20% Cng ủ gim t 4,2 v 7,8 xung cũn v 0,2 u trựng/cỏ T l nhim nghim thc mc dự gim nhng mc khỏ cao 20%, nhiờn cng ủ nhim l rt thp (0,2 u trựng/cỏ) Kt qu nghiờn cu ny chng minh rng ủó cú s tng tỏc - phn ng gia ký ch v ký sinh trựng S tng tỏc ny ủó cú th l nguyờn nhõn chớnh dn ủn s bin mt ca 97,5-100% s u trựng ban ủu nhim vo cỏ sau 15 tun nuụi ủiu kin thớ nghim Trỏi ngc vi kt qu nghiờn cu ny, Nng v ctv (2010) thớ nghim gõy nhim pleurolophocercous vi cỏ Nga Denio rerio li cho rng cng ủ v t l nhim u trựng lỏ khụng thay ủi sau 10 tun nuụi thớ nghim S khỏc bit ny cú th l ký ch, nghiờn cu ca chỳng tụi s dng cỏ rụ phi, nghiờn cu trờn s dng cỏ Nga i vi u trựng sỏn lỏ gan nh Clonorchis sinensis cỏ, tỏc gi cho rng u trựng ny cú th tn Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 31 ti cỏ chộp ti 1,5 nm (Rhee, J.K v ctv., 1984) iu ny cú th khng ủnh cỏ rụ phi cú sc ủ khỏng tt hn nờn ủõy khụng phi l ký ch phự hp vi H pumilio Chi v ctv (2008) ủiu tra t l v cng ủ nhim u trựng sỏn lỏ trờn mt s loi cỏ nuụi ti Ngh An ủú cú cỏ rụ phi T l nhim trung bỡnh (6 loi thuc h cỏ chộp v loi cỏ rụ phi) l 44,6%, ủú cỏ rụ phi cú t l nhim thp nht 12,5% iu ny khng ủnh thờm cỏ rụ phi cú kh nng ủ khỏng tt vi sỏn lỏ truyn lõy qua cỏ Cỏ rụ phi khụng phi l ký ch thớch hp ca H pumilio Vy ủiu gỡ ủó xy ni ti ký ch v u trựng? Kt qu nghiờn cu mụ bnh hc trờn cỏ gõy nhim nhõn to giai ủon sm - tun th nht cho thy mt s u trựng cha hon thin bo nang v ủó cú s tng sinh t bo biu mụ xung quang v trớ u trựng c ng õy ch l giai ủon sm nhng cú th ủú s l nguyờn nhõn dn ủn s ủo thi ca u trựng giai ủon sau ny lm s lng u trựng gim dn theo thi gian Hin tng xut hin cỏc t bo viờm ti nhng v trớ mụ m u trựng H pumilio c ng v hoi t mt phn hay hu ht cu trỳc mụ bờn bo nang sỏn cỏ cng ủó ủc mụ t bi Bựi Ngc Thanh v ctv (2008) Tỏc gi cho rng ủõy l kt qu ca s tng tỏc gia vt ch v ký sinh trựng Phõn lp u trựng bng phng phỏp tiờu c t cỏ gõy nhim chỳng tụi cng phỏt hin nhiu u trựng ủó b cht vi s xut hin cỏc hoi t bờn u trựng Hỡnh thỏi khỏc hn vi nhng u trựng cũn sng, khụng phõn bit ủc cỏc hỡnh thỏi c quan chớnh nh giỏc ming, giỏc bng v tỳi bi tit Nghiờn cu ca chỳng tụi cng ch rng, u trựng H pumilio 13 ngy tui cha cú kh nng lõy nhim cho ký ch cui cựng Nghiờn cu gõy nhim u trựng thu ủc t cỏ t nhiờn cho chut, Kay v ctv (2008) tin hnh th nghim vi liu lng khỏc 10, 20, 30 v 40 u trựng/chut Kt qu cho thy s lng u trựng thu ủc tng lờn theo liu gõy nhim Liu ti u 40 u trựng/ chut cú s lng sỏn trng thnh thu ủc trung Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 32 bỡnh l 9,9 sỏn/chut vo ngy th sau gõy nhim, cũn vi kt qu nghiờn cu ca chỳng tụi thỡ vi Liu 40 u trựng sỏn/chut cú s lng sỏn trng thnh thu ủc trung bỡnh l 2,6 sỏn/chut, vi t l nhim l 57,1% Cn phi lu ý l nghiờn cu ca tỏc gi núi trờn, u trựng thu ủc t cỏ t nhiờn ủc la chn t mt s lng ln u trựng nờn cht lng u trựng cú th s tt hn Nghiờn cu ny cho thy rng u trựng 13 ngy tui cha cú kh nng lõy nhim cho ký chỳ cui cựng Kt qu ny phự hp vi kt lun ca (Umadevi v Madhavi, 2006) nghiờn cu v vũng ủi ca H pumilio n Tỏc gi ny cho rng u trựng H pumilio ch cú th lõy nhim giai ủon sau 15 ngy tui Trong nghiờn cu khỏc, gõy nhim pleurolophocercous cho cỏ chộp v quan sỏt hỡnh thỏi ca u trựng sau thi gian gõy nhim Tỏc gi nghiờn cu li cho rng u trựng phõn lp 21 ngy tui cha phỏt trin ủy ủ v hỡnh thỏi (A.S Boerlage v ctv., 2011) Ngoi cng cú mt nghiờn cu v s phỏt trin ca u trựng sỏn lỏ gan nh C sinensis trờn cỏ trm c u trựng cercariae nhim vo cỏ hng nhit ủ nh hn 25oC thỡ cú 51,6% metacercariae phỏt trin cỏ sau 10 ngy, 84,6% metacercariae phỏt trin cỏ sau 20 ngy, 98,3% metacercariae phỏt trin cỏ sau 30 ngy, 99,4% metacercariae phỏt trin sau 40 ngy Cũn nhit ủ thp hn 15oC cú 75,6% metacercariae phỏt trin nhng thi gian phi kộo di ủn 50 ngy v phi mt ủn 60 ngy ủ 99,7% metacercariae cú th phỏt trin cỏ (Xu BK, 1979) Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 33 PHN V KT LUN V XUT 5.1 Kt lun Trong ủiu kin thớ nghim, u trựng sỏn lỏ rut nh H.pumilio cú th tn ti cỏ rụ phi ớt nht ủn 15 tun Cng ủ v t l nhim u trựng H pumilio trờn cỏ rụ phi gim dn, vũng 15 tun s lng u trựng cỏ gim 97 - 100% v s cỏ b nhim u trựng cng gim 80 - 100% u trựng sỏn lỏ rut nh H.pumilio 13 ngy tui cha cú kh nng gõy nhim cho vt ch cui cựng 5.2 xut nghiờn cu M rng nghiờn cu gõy nhim tng t vi cỏc ủi tng nuụi khỏc ủc bit l cỏc loi thuc h cỏ chộp ủ lm rừ tớnh ủc hiu v loi ký ch ca sỏn lỏ truyn qua cỏ Tip tc nghiờn cu ủ xỏc ủnh ủc khong thi gian u trựng cú kh nng lõy nhim cho ký ch cui cựng Nghiờn cu hin ti cho thy u trựng H pumilio cũn tn ti cỏ sau 15 tun, ủõy l mi nguy ủi vi an ton v sinh thc phm Vỡ vy cn phi cú nhng nghiờn cu cỏc gii phỏp lm bt hot metacercariae cỏc sn phm thy sn cha cú bin phỏp can thip hiu qu NTTS Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 34 TI LIU THAM KHO Ti liu ting Vit Bỏo cỏo kt qu ủiu tra sỏn lỏ truyn qua cỏ trờn ngi ti Ngh An, An Giang 2004 - 2005, Nam nh 2005 (Fibozopa) Nguyn Vn v Nguyn Th Hp v cs (2007) Nghiờn cu sỏn lỏ truyn qua cỏ ti h Thanh Trỡ, H Ni v h V Xuyờn, Thnh ph Nam nh Tp Y hc thnh ph H Chớ Minh, nm 2007, 11, s Trng Th Hoa, Nguyn Ngc Phc (2009), Nghiờn cu mc ủ nhim u trựng sỏn lỏ song ch (metacercariae) trờn cỏ chộp v cỏ trm c giai ủon cỏ ging ng nuụi ti Tha Thiờn Hu Tp khoa hc, i hc khoa hc Hu, s 55, 2009 Nguyn Mnh Hựng, Nguyn Vit Khuờ, Jesper Clausen, K Darwin Murell, Phan Th Võn, Anders Dalsgaard, ng Tt Th, Henry Madsen (2008) Mt ủ c nhim u trựng sỏn lỏ rut nh - nhõn t d bỏo s lõy nhim cỏ cỏc ao ng ging Bc Vit Nam Bn tin d ỏn " Ký sinh trựng gõy bnh cú ngun gc thy sn ti Vit Nam" s 10 H Ký (1968) Khu h ký sinh trựng cỏ nc ngt Bc Vit Nam v mt s phng phỏp phũng tr Lun ỏn Phú tin s sinh hc Phm Th Nng (2010) Nghiờn cu s tn ti ca u trựng sỏn lỏ rut Haplorchis pumilio giai ủon metacercariae trờn cỏ nga Danio rerio Lun thc s Nụng nghip Trng i hc Nụng nghip H Ni Bựi Quang T (2001) Nghiờn cu ký sinh trựng cỏ nc ngt ng bng sụng Cu Long v cỏc gii phỏp phũng tr chỳng Lun tin s sinh hc, Trng i hc khoa hc t nhiờn, H Ni Bựi Quang T (2006) Bnh hc thy sn, Vin nghiờn cu nuụi trng thy sn Bựi Ngc Thanh, Anders Dalsgaard, Hetron Hweemba Munangandu, Oystein Evensen (2008) Gõy nhim thc nghim v ủỏp ng dch Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 35 ca cỏ rụ phi Oreochromis niloticus vi u trựng metacercariae sỏn lỏ rut nh Haplorchis pumilio Lun thc s ti Oslo, Na Uy 10 Nguyn Th Thanh (2007) Nghiờn cu mc ủ nhim u trựng sỏn lỏ song ch (metacercariae) trờn cỏ Mố trng, cỏ Trm c, cỏ Roohu giai ủon cỏ ging ng nuụi ti Ninh Bỡnh Lun thc s Nụng nghip Trng i hc Nụng nghip H Ni 11 inh Th Thy, Per Kania, Kurt Buchmann Hin trng u trựng sỏn nhim trờn cỏ Tra (Pangasianodon hy-pophthalmus) nuụi ti Vit Nam: Mi liờn quan ca v, cỏch qun lý ao v giai ủon ca vt ch Xut bn trờn Aquaculture 302 (2010) Trang 19 - 25 12 Phan Th Võn, Annette Kjaer Ersboll, Anders Dalsgaard, Darwin Murrell v Nguyn Th Hng (2010) Nghiờn cu ký sinh trựng cú ngun gc t cỏ (FZP) trờn cỏ nc ngt ti Bc Vit Nam Fish Borne Zoonotic Parasites in Vietnam Ti liu nc ngoi 13 Andrew Mitchell (2005) Centrocestiasis: a serious gill trematode problem in cultured and wild fishes Fish disease, 356 - 398 14 Andrew Mitchell, Andrew Goodwin, Thomas Brandt, Melissa Salmon (2002) Experimental infection of an Exotic Heterophyd trematode, Centrocestus formosanus in Aquaculture Fishes Disease of Aquaculture, (12), 123 - 127 15 Annette S Boerlage, Elisabeth A.M Graat, Johan A Verreth, Mart C.M de Jong (2011), Effect of fish size on transmission of fish-borne trematodes (Heterophyidae) to common carps (Cyprinus carpio) and implications for intervention Aquaculture 321, 179-184 16 Chai JY, Darwin Murrell K, Lymbery AJ Fish-borne parasitic zoonoses: status and issues Int J Parasitol 2005; 35: 1233-1254 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 36 17 Chai JY, Lee SH (1990) Intestinal trematode of human in Korea: Metagonimus, Heterophyid and Echinostomes Korean J Parasitol; 28: 103 - 112 18 Chai JY, Lee SH Food borne intestinal trematode infection in the Republic of Korea Parasitol Int 2002; 51: 129 - 154 19 FIBOZOPA Laboratory manual (2005) Identification of Zoonotic Metacercariae from fish Ti liu ca d ỏn FIBOZPA 20 Helle Kay, K Darwin Marrell, Axel Kornerup Hansen, Nguyen Thi Thu Trang, Nguyen Manh Hung and Anders Dalsgaard Optimization of an experimental model for the recovery of adult haplochis pumili 2008 21 Jakob Skov, Per W Kania, Anders Dalsgaard, Thomas R Jorgensen, Kurt Buchmann (2008) Life cycle stages of heterophyid trematodes in Vietnamese freshwatershes traced by molecular and morphometric methods Published in Veteri - nary Parasitology magazine 22 Komiya Y, Suzuki N O (1963) Biology of Clonorchis sinensis, study of parasitology in Japan, Vol 3; 113 - 158 23 Komiya, K (1965) Metacercariaein Japan and adjacent Territories Progress of Medical y in Japan, Volume II, Published by Meguro Parasitological Museum, Tokyo, p: 14 - 20 24 Laboratorio (1999) The Introduction and Dispersal of Centrocestus formosanus Journal of wildlife diseases, 24 (2), 230 - 250 25 Muto M (1918) On the first intermediate host of Clonorchis sinensis Chuo - Igakkai - Zassi P: 49 - 53 26 Pham Cu Thien, Anders Dalsgaard, Bui Ngoc Thanh, Annette Olsen & K Darwin Murrell (2007) Prevalence of fishborne zoonotic parasites in important cultured fish species in the Mekong Delta, Vietnam National Center for Biotechnology Information, U.S National Library of Medicine, 2007 Oct; 101(5): 1277 - 1284 Epub 2007 Jul Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 37 27 Rhee, J.K., Lee, S.B and Ahn, B.Z (1984) The wormicidal substances of freshwater fishes on Clonorchis sinensis V Purification and chemical characterization of clonorchicidal substance from epidermal mucus of Cyprinus carpio Korean J Parasitol 22, 127-134 28 Shin DS (1964) An epidemiological studied of Clonorchis sinensis along the Hyung San River district Chonghap Med, p: 79 - 95 29 Skov J., Kania P.W., Dalsgaard A., Jorgensen T.R., Buchmann K (2009) Life cycle stages of heterophyid trematodes in Vietnamese freshwater fishes traced by molecular and morphometric methods Vet Parasitol 160:66-75 DOI: S0304-4017(08)00615-8 [pii] 30 Tran Thi Kim Chi, Dalsgaard A, Turnbull JF, Pham Anh Tuan, Murrell KD Pre-valence of zoonotic trematodes in fish from a Vietnamese fish farming community J Parasitol 2008; 94: 423-428 31 Umadevi K., Madhavi R (2006) The life cycle of Haplorchis pumilio (Trematoda: Heterophyidae) from the Indian region J Helminthol 80:32732 DOI: S0022149X06000473 [pii] 32 V Wiwanitkit, et al (2001) Survival of Heterophyid metacercariae in uncooked Thai fish dishes Annal of Tropical Medicine, Parasitology, Vol 95, No 7, p: 725 - 727 33 World Health Organization (1995) Control of Foodborne Trematode Infection Report of a WHO study Group 34 Xu BK Clonorchiasis sinensis Proceeding on Presentations at a training course in Guang Xi Institute of Parasitic Disease 1979 35 Yu Sen - Hai and Xu Long Qi Intestinal trematoda infections in China Report: Asian Parasitology Vol Food - borne Helminthiasis in Asia The federation of Asian Parasitologists P: 61 - 78 Ti liu t Internet (http://www.graphpad.com/quickcalcs/contingency1.cfm) (http://www.graphpad.com/quickcalcs/t-test1.cfm) Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 38 PH LC Bng S lng metacercariae trờn mu cỏ b nhim thc (NT1) NT NT NT NT NT NT NT NT NT1 NT 18-07 25-07 11-08 25-08 10-09 20-09 26-09 4-10 1-10 19-07 2 0 0 0 2 0 11 0 10 11 0 11 0 0 1 1 16 0 2 0 0 28 1 1 12 4 1 0 0 19 0 0 0 0 16 16 2 0 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 39 Bng S lng metacercariae trờn mu cỏ b nhim thc (NT2) NT2 NT2 NT2 NT2 NT2 NT2 NT2 NT2 NT2 NT2 18-07 25-07 11-08 15-08 10-09 20-09 26-09 4-10 11-10 19-07 1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 4 1 0 0 0 0 15 0 0 1 1 0 0 0 2 1 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 17 0 0 Trng i hc Nụng nghip H Ni Lun thc s khoa hc nụng nghip 40 Bng Kt qu so sỏnh cng ủ u trựng sỏn gia nhim thc ca tun th so vi tun th Group Group One Group Two Mean 7.8 1.67 SD 7.71 1.88 SEM 1.99 0.48 N 15 15 P= 0,0057 < 0,05 Bng Kt qu so sỏnh cng ủ u trựng sỏn gia nhim thc ca tun th v tun th Group Group One Group Two Mean 4,27 0,88 SD 5,04 1,31 SEM 1,30 0,33 N 15,00 16,00 P = 0,0144 [...]... hiện tượng sự tăng sinh tế bào biểu mô quanh vị trí ấu trùng sán ðây có thể giải thích là do sự ñáp ứng miễn dịch tự nhiên cá ñối với ấu trùng sán 4.1.4 Khả năng lây nhiễm của ấu trùng Ấu trùng sán lá ruột H pumilio thu ñược từ cá gây nhiễm nhân tạo sau 12 giờ, 1 ngày, 2 ngày, 3 ngày, 5 ngày, 7 ngày, 9 ngày và 13 ngày ñã ñược gây nhiễm cho chuột Kết quả gây nhiễm với ấu trùng H pumilio ở tất cả các ngày... nhiễm ấu trùng sán lá ruột và tỷ lệ hay cường ñộ nhiễm ấu trùng metacercariae ở cá Mặc dù tỷ lệ và cường ñộ nhiễm ở cá cao hơn ốc nhiễm trong ao, không thu ñược ốc có nhiễm ấu trùng trong ao, nhưng rõ ràng sự lây nhiễm vẫn rất cao khi không tìm thấy ốc bị nhiễm ấu trùng Có thể sẽ cần những nỗ lực nghiêm khắc hơn ñể kiểm tra ấu trùng có trong ốc tại những ao này hoặc xác ñịnh tại sao một lượng lớn ấu trùng. .. BK và ctv (1979), sự lây nhiễm của sán Clonorchis sinensis vào các ký chủ trung gian chịu sự tác ñộng của nhiệt ñộ Bởi vì, khi nhiệt ñộ thấp hơn 10oC thì ấu trùng cercariae không thể xâm nhập vào giai ñoạn cá hương của cá trắm cỏ, khoảng nhiệt ñộ thích hợp cho sự lây nhiễm sán vào cá là từ 20 - 30oC và thích hợp nhất là 25oC Bằng thực nghiệm ở các ngưỡng nhiệt ñộ khác nhau, các tác giả ñã cho thấy: Ấu. .. cứu mô học Nhận ñịnh rằng, giai ñoạn sớm sau khi nhiễm vào cá, ấu trùng sẽ có sự biến ñổi, phát triển và có sự tương tác nhất ñịnh với ký chủ cá Kết quả cắt mô ñã phát hiện ñược ấu trùng khi xâm nhập vào cá ñã hình thành bào nang - metacercariae ở một số cơ quan Quan sát thấy ấu trùng chủ yếu ở gốc vây ñuôi và phần ñầu cá Hình 8: Ấu trùng sán lá ruột H pumilio ở gốc vây ñuôi (ngôi sao) Trường ðại học... kích cỡ cá, và có chế ñộ thay nước sạch (giếng khoan) hàng ngày Mỗi nghiệm thức, 15 cá thể ñược thu vào các tuần thứ 2, 3, 6, 8, 10, 11, 12, 13, 14 và 15 sau gây nhiễm ñể kiểm tra ấu trùng nhiễm trên cá nhằm ñánh giá sự biến ñộng về tỷ lệ và cường ñộ nhiễm Mỗi nghiệm thức, 2-5 cá thể ñược thu vào các ngày 1, 2, 3, 4, 5, 6 và 7 sau gây nhiễm, cố ñịnh trong formalin 10% ñể nghiên cứu sự phát triển của metacercaria... taichui, Haplorchis yokogawai, Centrocestus fomosanus và Echinostoma japonicus, trong ñó tỷ lệ nhiễm metacercariae của H pumilio cao nhất, lên tới 42,06% (Fibozopa, 2005) Nghiên cứu của Nguyễn Mạnh Hùng và ctv (2009) nhằm xác ñịnh mối liên hệ giữa sự nhiễm ấu trùng sán lá ruột ở trong ốc và cá ở các ao cá giống ñã cho thấy: Cá bột không bị nhiễm FZT Không có quan hệ rõ ràng giữa mật ñộ của các loài ốc nhiễm. .. …………………… 27 Hình 9 Ấu trùng sán lá ruột H .pumilio ở phần ñầu cá rô phi (ngôi sao) Có thể nói một số ấu trùng chưa hoàn toàn hình thành bào nang trong tuần ñầu tiên sau gây nhiễm Quan sát tiêu bản mô có thể thấy thành bào nang chưa hoàn thiện một cách ñầy ñủ, vẫn thấy sự ñan xen cấu trúc mô giữa ấu trùng và một phần biểu mô ký chủ (hình 8 và hình 9) Ngoài ra sự tương tác giữa ký chủ và ấu trùng cũng ñược... pumilio Vào thời ñiểm thu hoạch (sau 7 tháng) cả 4 loài cá nuôi chủ yếu trên ñều ñược xét nghiệm ñều nhiễm ấu trùng sán lá ruột nhỏ Thành phần loài của ấu trùng thu ñược là Haplorchis pumilio và Centrocestus formosanus ở hồ Thanh Trì; Haplorchis pumilio và Haplorchis taichui ở hồ Vị Xuyên (Nguyễn Văn ðề, Nguyễn Thị Hợp và ctv, 2007) Cũng vào thời gian ñó, qua nghiên cứu tại Ninh Bình trên 3 loài cá nuôi... tuberculata và sự hiện diện của nang kén giống sán lá ruột nhỏ (thuộc hai loài H pumilio và H taichui) cũng như Procerovum sp trên mô cá nuôi (cá mè trắng, cá trôi Ấn và cá rô ñồng) Các ñặc ñiểm hình thái không ñủ ñể chứng minh mối liên hệ giữa ấu trùng cercariae với nang kén Việc áp dụng kỹ thuật phân tử bằng phản ứng PCR và giải mã trình tự hệ gen sử dụng thu nhận gen ITS 2 (DNA ribosome) ñối với ấu trùng. .. lệ nhiễm metacercariae từ 40 - 60% (Bùi Quang Tề, 2006) Nguyễn Văn ðề, Nguyễn Thị Hợp và ctv (2007) khi xét nghiệm 4 loài cá chủ yếu (cá mè, cá chép, cá trắm, cá rô phi) nuôi tại hồ Thanh Trì (Hà Nội) và hồ Vị Xuyên (Nam ðịnh) cho thấy, vào thời ñiểm lúc mới nuôi, cả 2 hồ ñều chỉ tìm thấy cá chép nhiễm ấu trùng sán lá ruột nhỏ với tỷ lệ thấp Ấu trùng ở cả 2 ñiểm ñều ñược xác ñịnh là Haplorchis pumilio ... nhỏ H .pumilio tồn cá rô phi ñến 15 tuần Cường ñộ tỷ lệ nhiễm ấu trùng H pumilio cá rô phi giảm dần, vòng 15 tuần số lượng ấu trùng cá giảm 97 - 100% số cá bị nhiễm ấu trùng giảm 80 - 100% Ấu trùng. .. thuộc họ cá chép loài cá rô phi) 44,6%, ñó cá rô phi có tỷ lệ nhiễm thấp 12,5% ðiều khẳng ñịnh thêm cá rô phi có khả ñề kháng tốt với sán truyền lây qua cá Cá rô phi ký chủ thích hợp H pumilio. .. cứu sán truyền lây qua cá có nghĩa vô quan trọng ñối với an toàn vệ sinh thực phẩm Vì tiến hành ñề tài nghiên cứu: Sự biến ñộng khả lây nhiễm ấu trùng sán ruột Haplorchis pumilio cá rô phi Oreochromis