Đang tải... (xem toàn văn)
NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢI ĐỘC TRÊN CHUỘT CỦA CHẾ PHẨM TỪ NGUỒN GÔC THIÊN NHIÊN
ĐẠI HỌC QUỐC GIA THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN KHOA SINH HỌC NGUYỄN THỊ HOÀI THƯƠNG NGHIÊN CỨU TÁC DỤNG GIẢI ĐỘC TRÊN CHUỘT CỦA CHẾ PHẨM TỪ NGUỒN GỐC THIÊN NHIÊN KHÓA LUẬN CỬ NHÂN KHOA HỌC NGÀNH SINH HỌC CHUYÊN NGÀNH SINH HỌC ĐỘNG VẬT NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN PHƯƠNG DUNG THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH Năm 2006 LỜI CẢM ƠN năm đại học trôi qua, mốc quan trọng đánh dấu bước trưởng thành sinh viên giai đoạn thực đề tài tốt nghiệp Trong giai đoạn này, chuỗi kiến thức trang bị tảng để nghiên cứu, niềm say mê yêu thích khoa học động lực để tìm tòi sáng tạo công việc Và đặc biệt động viên, hỗ trợ thầy cô, bạn bè, gia đình niềm tin thực thành công đề tài, hoàn thành khoá học tự tin bước vào đời Trong suốt trình thực đề tài, xin chân thành cám ơn thầy Đào Đại Cường, cô Nguyễn Phương Dung, thầy Phan Kim Ngọc, thầy Sinh, thầy Lónh tận tình hướng dẫn, bảo Cảm ơn cộng tác hỗ trợ thầy Tùng, thầy Nhãn, chị Mai Anh, chị Nhi, bạn Bích Mai, cảm ơn tất bạn bè phòng Sinh lý Động vật, anh em văn phòng Đoàn động viên hỗ trợ hoàn thành đề tài Sinh viên thực Nguyễn Thị Hòai Thương MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH ẢNH DANH MỤC BẢNG BIỂU Đặt vấn đề Chương 1: Tổng quan Gan 1.1 Đại cương 1.2 Vị trí cấu taïo 1.3 Chức 1.3.1 Chuyển hóa chất 1.3.1.1 Chuyển hóa glucid 1.3.1.2 Chuyển hóa lipid 1.3.1.3 Chuyển hóa protein 1.3.2 Khử độc 1.3.2.1 Cơ chế khử độc thải trừ 1.3.2.2 Cơ chế biến đổi hóa học 1.3.3 Taïo maät 1.3.3.1 Acid maät 1.3.3.2 Muối mật 10 1.3.3.3 Sắc tố mật 10 1.3.4 Tuần hòan 10 1.3.4.1 Dự trữ máu 10 1.3.4.2 Chức đệm 11 1.3.4.3 Chức lọc máu 11 Caùc bệnh viêm gan 11 2.1 Vieâm gan virus 11 2.1.1 Cơ chế gây viêm gan virus 12 2.1.2 Các loại viêm gan virus 12 2.1.2.1 Vieâm gan A 12 2.1.2.2 Vieâm gan B 13 2.1.2.3 Vieâm gan C 14 2.1.2.4 Vieâm gan D 14 2.1.2.5 Vieâm gan E 14 2.2 Vieâm gan thuốc chất độc 15 2.2.1 Vieâm gan sử dụng thuốc paracetamol 16 2.2.2 Vieâm gan aflatoxin 17 2.2.3 Vieâm gan rượu etylic 17 2.2.4 Vieâm gan amanitin vaø phalloidin 18 2.2.5 Vieâm gan CCl4 18 2.2.5.1 Hóa tính 18 2.2.5.2 Công dụng 18 2.2.5.3 nh hưởng CCl4 lên gan 19 Moät số thuốc sản phẩm có nguồn gốc thiên nhiên có tác dụng bảo vệ gan 19 3.1 Tây dược 19 3.2 Đông dược 19 3.3 Sản phẩm thiên nhieân 20 3.4 Giới thiệu taûo Spirullina 22 3.4.1 Phân loại 23 3.4.2 Hình dạng 23 3.4.3 Đặc điểm sinh học 23 3.4.4 Thành phần hóa học 24 3.4.5 Ứng dụng tảo Spirullina 25 3.4.6 Tác dụng tảo Sirullina mô hình viêm gan chuột nhiễm độc gan CCl4 25 3.5 Giới thiệu diệp hạ châu 25 3.5.1 Phaân loaïi 25 3.5.2 Hình dạng 26 3.5.3 Phân bố 26 3.5.4 Thu haùi chế biến 26 3.5.5 Tính vò 26 3.5.6 Coâng duïng 26 3.5.7 Phương thuốc diệp hạ châu việc chữa trị viêm gan 27 3.6 Giới thiệu xuyên tâm liên 27 3.6.1 Phân loại 27 3.6.2 Hình dạng 27 3.6.3 Phân bố 28 3.6.4 Thu hái chế biến 28 3.6.5 Tính vị 28 3.6.6 Thành phần hóa học 28 3.6.7 Công dụng 28 3.6.8 Bài thuốc xuyên tâm liên việc chữa trị viêm gan 29 Các mô hình viêm gan thực nghiệm 29 4.1 Cách tạo mô hình 29 4.2 Gây mô hình viêm gan baèng CCl4 30 Chương 2: Vật liệu phương pháp 31 Duïng cuï 31 Hóa chất 31 Vật liệu 32 Đối tượng 32 Phương pháp nghiên cứu 32 5.1 Tiến trình 32 5.2 Phương pháp lấy huyết 34 5.3 Phương pháp đếm số lượng hồng cầu 34 5.3.1 Đại cương 34 5.3.2 Nguyên tắc 34 5.3.3 Dụng cụ phương tiện 34 5.3.4 Kết 35 5.4 Phương pháp đếm số lượng hồng cầu 35 5.4.1 Đại cương 35 5.4.2 Nguyên tắc 35 5.4.3 Dụng cụ phương tiện 35 5.4.4 Kết 36 5.5 Phương pháp định lượng hemoglobin 36 5.5.1 Đại cương 36 5.5.2 Nguyên tắc 36 5.5.3 Dụng cụ phương tiện 36 5.5.4 Kết 36 5.6 Phương pháp định lượng hemoticrit 37 5.6.1 Đại cương 37 5.6.2 Nguyên tắc 37 5.6.3 Dụng cụ phương tiện 37 5.6.4 Kết 37 5.7 Phương pháp định lượng thời gian chảy máu 37 5.7.1 Đại cương 37 5.7.2 Nguyên tắc 37 5.7.3 Dụng cụ phương tiện 38 5.7.4 Kết 38 5.8 Phương pháp định lượng thời gian chảy máu 38 5.8.1 Đại cương 38 5.8.2 Nguyên tắc 38 5.8.3 Duïng cụ phương tiện 38 5.8.4 Keát quaû 38 5.9 Phương pháp đo lượng enzyme GOT 38 5.9.1 Đại cương 38 5.9.2 Thuoác thử 38 5.9.2.1 Thuốc thử 38 5.9.2.2 Thuốc thử 39 5.9.3 Bệnh phẩm 39 5.9.4 Xét nghiệm 39 5.9.5 Kết 39 5.10 Phương pháp đo lượng enzyme GPT 39 5.10.1 Đại cương 39 5.10.2 Thuốc thử 39 5.10.2.1 Thuốc thử 39 5.10.2.2 Thuoác thử 39 5.10.3 Bệnh phẩm 39 5.10.4 Xét nghiệm 40 5.10.5 Kết 40 5.11 Phương pháp đo protein 40 5.11.1 Đại cương 40 5.11.2 Thuốc thử 40 5.11.2.1 Thuốc thử 40 5.11.2.2 Huyết chuẩn có nồng độ protein 40 5.11.3 Beänh phaåm 40 5.11.4 Xét nghiệm 40 5.11.5 Kết 41 5.12 Phương pháp đo lượng glucose 41 5.12.1 Đại cương 41 5.12.2 Thuốc thử 41 5.12.2.1 Thuốc thử 41 5.12.2.2 Huyết chuẩn có nồng độ glucose 41 5.12.3 Beänh phaåm 41 5.12.4 Xét nghiệm 42 5.12.5 Kết 42 5.13 Phương pháp đo lượng ure 42 5.13.1 Đại cương 42 5.13.2 Thuốc thử 42 5.13.2.1 Thuốc thử 42 5.13.2.2 Thuốc thử 42 5.13.2.3 Huyết chuẩn có nồng độ ure 43 5.13.3 Beänh phaåm 43 5.13.4 Xét nghiệm 43 5.13.5 Kết 43 Chương 3: Kết 44 Tác dụng điều trị nhiễm độc gan 44 Tác dụng dự phòng điều trị nhiễm độc gan 46 Tác dụng dự phòng nhiễm độc gan 48 Tác dụng lợi tiểu 50 nh hưởng thuốc nghiên cứu sử dụng dài ngày trọng lượng, trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt 52 Bàn luận 54 6.1 Tác dụng giải độc CCl4 54 6.2 Tác dụng lợi tiểu 55 6.3 nh hưởng thuốc nghiên cứu sử dụng dài ngày trọng lượng, trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt 55 Chương 4: Kết luận kiến nghị 56 Kết luận 56 Kieán nghò 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AHCC Active hexose correlated compounds GOT Glutamic oxaloacetic transaminase GPT Glutamic pyruvic transaminase LDH Lactat dehydrogenase OCT Ornithin carbanyl transferase ARN (RNA) Acid ribonucleic ADN (DNA) Acid dehydroxynucleic SNMC Stronger Neomino – phagen C GU Giriola umbreallta TNHH Trách nhiệm hữu haïn SGOT Serum glutamic oxaloacetic transaminase SGPT Serum glutamic pyruvic transaminase NADH Nicotinamide adenine dinucleotide AAP Amino – - antipyrine BL Bệnh lý BT Bình thường ĐT Điều trị DP Dự phòng DP+ĐT Dự phòng điều trị DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình ảnh Trang Hình 1: Cơ quan gan máy quan Hình 2: Sự hydroxyl hóa hexobarbital Hình 3: Quá trình oxy hóa alcol etylic Hình 4: Phản ứng Cloral bị khử oxy thành tricloroethanol Hình 5: Sự methyl hóa acid guanidoacetic thành creatin Hình 6: Phản ứng liên hợp với sulfonic phenol Hình 7: Acid cholanic Hình 8: Acid glycocholic acid taurocholic Hình 9: Biliburin diglucuronat 10 Hình 10: Aspergillus flavus 17 Hình 11: Amanita phalloides 11 Hình 12: Ganoderma lucidum 20 Hình 13: Salvia miltiorrhiza 21 Hình 14: Silybum marianum 22 Hình 15: Hình dạng tảo Spirulina 23 Hình 16: Phyllanthus urinaria 27 Hình 17: Hình dạng Xuyên tâm liên 28 Hình 18: Công thức cấu tạo chất có tác dụng tốt cho gan 29 Hình 19: Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 44 Hình 20: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 45 Hình 21: Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 46 Hình 22: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 47 Hình 23:Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 49 Hình 24: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 50 Hình 25: Thể tích nước tiểu (ml) chuột nhắt sau dùng thuốc nghiên cứu 51 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng biểu Trang Bảng 1: Thành phần mật gan túi mật Bảng 2: Đặc tính loại virus A, B, C, D E 12 Bảng 3: Những thuốc gây ngộ độc gan 15 Bảng 4: Những chất độc từ môi trường gây viêm gan 16 Bảng 5: Thành phần tảo Spirulina theo % trọng lượng khô 24 Bảng 6: Thành phần hàm lượng Vitamin tảo Spirulina 24 Bảng 7: Hàm lượng GOT (mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 44 Bảng 8: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 45 Bảng 9: Kết giải phẫu bệnh lý gan sau gây độc CCl4 ngày 46 Bảng 10: Hàm lượng GOT (mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 46 Bảng 11: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 47 Bảng 12: Kết giải phẫu bệnh lý gan sau gây độc CCl4 ngày 48 Bảng 13: Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 48 Bảng 14: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 49 Bảng 15: Thể tích nước tiểu (ml) chuột nhắt sau dùng thuốc nghiên cứu 50 Bảng 16: Trọng lượng số trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt sau dùng thuốc 50 ngày 52 10 Trắng Chuẩn Mẫu Thuốc thử ml ml ml Nước cất 10 µl - - Dung dịch chuẩn - 10 µl - Mẫu - - 10 µl Sau đó, trộn đọc kết OD sau ủ 10 phút Màu cuối phải ổn định 5.11.5 Kết protein = ODmãu × n với n = 60g/l hay n= 6g/dl ODchn 5.12 Phương pháp đo lượng glucose 5.12.1 Đại cương Định lượng glucose xét nghiệm sinh hóa phổ biến Hàm lượng glucose huyết thường cao hàm lượng glucose máu Nguyên tắc định lượng glucose thể theo phản ứng sau: Glu cos e + O2 glu cos e oxidase → Gluconic + H O2 peroxidase H O + Phenol + AAP → ↓ + H O ↓ có màu đỏ, AAP: amino – – antipyrine 5.12.2 Thuốc thử 5.12.2.1 Thuốc thử Đệm phosphat, pH 7,40: 100mmol/l Phenol: 10 mmol/l 4-aminoantipyrine: 0,3 U/l Glucose oxidase: ≥ 10000 U/l Peroxidase: ≥ 10000 U/l 5.12.2.2 Huyết chuẩn có nồng độ glucose 5.12.3 Bệnh phẩm Huyết tươi không vỡ hồng cầu 5.12.4 Xét nghiệm Chuẩn bị ống nghiệm, gồm: ống trắng, ống chuẩn, ống mẫu Mỗi ống cho thành phần vào ống theo bảng sau Trắng Chuẩn Mẫu 38 Thuốc thử ml ml ml Nước cất 10 µl - - Dung dịch chuẩn - 10 µl - Mẫu - - 10 µl Sau đó, trộn đọc kết OD sau ủ 10 phút Màu cuối phải ổn định 5.12.5 Kết glu cos e = ODmãu × n với n = 1g/l hay n= 100mg/l hay n= 5,56mmol/l ODchuån 5.13 Phương pháp đo lượng ure 5.13.1 Đại cương Nồng độ ure máu phụ thuộc vào vào hoạt động gna thận Nguyên tắc định lượng ure thể theo phản ứng sau: Ure + H O urease → NH + CO2 + NH + 2α cetoglutarate + NADH GIDH → L − glutamate + NAD 2+ + H O GIDH: glutamate dehydrogenase 5.13.2 Thuốc thử 5.13.2.1 Thuốc thử Đệm phosphat, pH 7,60: 100mmol/l ADP: 0,7 mmol/l -cetoglutarate: mmol/l Urease: ≥6500 U/l GIDH: ≥ 1100 U/l 5.13.2.2 Thuốc thử NADH: 320 µmol/l 5.13.2.3 Huyết chuẩn có nồng độ ure 5.13.3 Bệnh phẩm Huyết tươi không vỡ hồng cầu 5.13.4 Xét nghiệm Trộn ml thuốc thử 10 µl mẫu, đợi phút, tiếp sau thêm 250 µl thuốc thử 2, tiếp tục trộn Đọc biến thiên OD 30 giây 90 giây 5.13.5 Kết ure = ∆ODmãu × n với n = 50mg/dl hay n= 0,5g/l hay n= 8,325mmol/l ∆ODchn 39 Phương pháp xử lý thống kê kết thực nghiệm Số liệu kết thực nghiệm xử lý theo lô với công thức tính giá trị trung bình độ lệch chuẩn n Giá trị trung bình: X = ∑ Xi i =1 n n Độ lệch chuẩn: Với δ= ∑ Xi i =1 n −X X giá trị trung bình lô, δ độ lệch chuẩn lô, Xi giá trị súc vật lô, n số súc vật lô 40 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tác dụng điều trị nhiễm độc gan Bảng 7: Hàm lượng GOT (mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 Lô Hàm lượng GOT (mmol/L) sau gây độc CCl4 n Bình thường Điều trị 132,60 ± 33,13 144,56 ± 15,06 100% 100% 215,22 ± 20,57 198,75 ± 35,15 179,88 ± 32,24 145,28% 149,89% 124,43% 186,75 ± 37,12 164,29 ± 30,38 159,00 ± 22,11 126,06% 10 ngaøy 100% 13 ngày 148,14 ± 39,16 13 Bệnh lý ngày 123,90% 110,00% Hình 19: Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 250,00 200,00 BT 150,00 BL 100,00 ĐT 50,00 0,00 Ngày Ngày Ngày • Nhận xét: 24 sau tiêm CCl4, hàm lượng GOT lô BL ĐT tăng so với lô BT, lô ĐT có hàm lượng GOT thấp lô BL 19,22% Vào ngày thứ 4, hàm lượng GOT lô tiêm CCl4 giảm so với ngày thứ Khi này, hàm lượng GOT lô ĐT giảm nhanh lô BL 5% Vào ngày thứ 7, hàm lượng GOT lô gần Nhưng lô BL, hàm lượng GOT cao lô BT 24,43% lô ĐT 14,43% Bảng 8: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 Lô n Hàm lượng GPT (mmol/L) sau gây độc CCl4 ngày 41 Bình thường Bệnh lý 88,67 ± 34,66 100% 100% 163,60 ± 17,56 150,00 ± 28,16 132,13 ± 30,53 179,13% 176,47% 149,01% 149,50 ± 16,22 135,00 ± 35,33 115,57 ± 31,34 163,69% 10 85,00 ± 35,90 100% 13 Điều trị 91,33 ± 24,25 13 158,82% 130,34% Hình 20: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 180,00 160,00 140,00 120,00 100,00 80,00 60,00 40,00 20,00 0,00 BT BL ÐT Ngày Ngày Ngày • Nhận xét: Sau 24 giờ, với tác dụng CCl4, hàm lượng GPT cao lô BL, ĐT, nhiên lô ĐT hàm lượng GPT thấp 15,44% Vào ngày thứ 4, hàm lượng GPT giảm so với ngày thứ Khi này, hàm lượng GPT bắt đầu giảm lô, đồng thời lô ĐT, hàm lượng GPT giảm nhanh lô BL 5,33% Vào ngày thứ 7, hàm lượng GPT lô gần Nhưng lô BL, hàm lượng GPT cao lô BT 49,01% ĐT 18,67% Bảng 9: Kết giải phẫu bệnh lý gan sau gây độc CCl4 ngày Lô n Tế bào gan bất thường Tỷ lệ bất thường Bình thường 25% Bệnh lý 80% Điều trị 25% • Nhận xét: Ở lô BL, tỷ lệ bất thường cao lô BL 55% Ở lô ĐT, tỷ lệ bất thường thấp với lô BT 25% Tác dụng dự phòng điều trị nhiễm độc gan 42 Bảng 10: Hàm lượng GOT (mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 Lô Hàm lượng GOT (mmol/L) sau gây độc CCl4 n Bình thường 13 Bệnh lý 13 Dự phòng & Điều trị 14 ngaøy ngaøy ngaøy 148,14 ± 39,16 132,60 ± 33,13 144,56 ± 15,06 100% 100% 100% 215,22 ± 20,57 198,75 ± 35,15 179,88 ± 32,24 145,28% 149,89% 124,43% 184,00 ± 40,13 176,70 ± 77,19 155,42 ± 40,66 124,21% 133,26% 107,51% Hình 21: Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 250,00 200,00 150,00 BT 100,00 BL DP+ĐT 50,00 0,00 Ngày Ngày Ngày • Nhận xét: Sau 24 giờ, với tác dụng CCl4, hàm lượng GOT cao lô BL, DP+ĐT, nhiên lô DP+ĐT hàm lượng GOT thấp 21,07% Vào ngày thứ 4, hàm lượng GOT giảm so với ngày thứ Khi này, hàm lượng GOT bắt đầu giảm 7,65% lô BL 3,97% lô DP+ĐT Vào ngày thứ 7, hàm lượng GOT lô gần Nhưng lô BL, hàm lượng GOT cao lô BT 24,43% DP+ĐT 16,92% Bảng 11: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 Lô n Bình thường 13 Bệnh lý 13 Hàm lượng GPT (mmol/L) sau gây độc CCl4 ngày 91,33 ± 24,25 85,00 ± 35,90 88,67 ± 34,66 100% 100% 100% 163,60 ± 17,56 150,00 ± 28,16 132,13 ± 30,53 179,13% 176,47% 149,01% 43 Dự phòng & 130,29 ± 17,49 Điều trị 105,11 ± 35,71 101,80 ± 34,90 142,66% 14 123,66% 114,81% Hình 22: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 180,00 160,00 140,00 120,00 100,00 80,00 60,00 40,00 20,00 0,00 BT BL DP+ĐT Ngày Ngày Ngày • Nhận xét: Sau 24 giờ, với tác dụng CCl4, hàm lượng GPT cao lô BL, DP+ĐT, nhiên lô DP+ĐT hàm lượng GPT thấp 36,47% Vào ngày thứ 4, hàm lượng GPT giảm so với ngày thứ Khi này, hàm lượng GPT bắt đầu giảm lô BL, đồng thời lô DP+ĐT, hàm lượng GPT giảm nhanh 5,01% lô BL Vào ngày thứ 7, hàm lượng GPT lô gần Nhưng lô BL, hàm lượng GPT cao lô BT 49,01% DP+ĐT 34,20% Bảng 12: Kết giải phẫu bệnh lý gan sau gây độc CCl4 ngày Lô n Tế bào gan bất thường Tỷ lệ bất thường Bình thường 25% Bệnh lý 80% Dự phòng & điều trị 16,77% • Nhận xét: Ở lô BL, tỷ lệ bất thường cao cao tỷ lệ bất thường lô BT 55%, lô DP+ĐT 63,23% Ở lô DP+ĐT lô BT, tỷ lệ bất thường thấp 25% Tác dụng dự phòng nhiễm độc gan Bảng 13: Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 Lô Bình thường n 13 Hàm lượng GOT (mmol/L) sau gây độc CCl4 ngaøy 148,14 ± 39,16 132,60 ± 33,13 144,56 ± 15,06 100% 100% 100% 44 Bệnh lý 13 Dự phòng 12 215,22 ± 20,57 198,75 ± 35,15 179,88 ± 32,24 145,28% 149,89% 124,43% 180,80 ± 114,49 167,43 ± 71,54 165,43 ± 32,10 122,05% 126,27% 114,44% Hình 23:Hàm lượng GOT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 250,00 200,00 BT 150,00 BL 100,00 DP 50,00 0,00 Ngày Ngày Ngày • Nhận xét: Sau 24 giờ, với tác dụng CCl4, hàm lượng GOT cao lô BL, DP, nhiên lô DP hàm lượng GOT thấp 23,23% Vào ngày thứ 4, hàm lượng GOT giảm so với ngày thứ Khi này, hàm lượng GOT bắt đầu giảm lô BL 7,65% lô DP 7,39% Vào ngày thứ 7, hàm lượng GOT lô gần Nhưng lô BL, hàm lượng GOT cao lô BT 24,34% DP 9,99% Bảng 14: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 Lô n Bình thường 13 Bệnh lý 13 Dự phòng 12 Hàm lượng GPT (mmol/L) sau gây độc CCl4 ngaøy 91,33 ± 24,25 85,00 ± 35,90 88,67 ± 34,66 100% 100% 100% 163,60 ± 17,56 150,00 ± 28,16 132,13 ± 30,53 179,13% 176,47% 149,01% 139,00 ± 33,59 137,14 ± 26,62 114,00 ± 34,54 152,20% 161,34% 128,57% 45 Hình 24: Hàm lượng GPT(mmol/L) chuột nhắt sau gây độc CCl4 200,00 150,00 BT 100,00 BL DP 50,00 0,00 Ngày Ngày Ngày • Nhận xét: Sau 24 giờ, với tác dụng CCl4, hàm lượng GPT cao lô BL, DP, nhiên lô DP hàm lượng GPT thấp 26,93% Vào ngày thứ 4, hàm lượng GPT giảm so với ngày thứ Khi này, hàm lượng GPT bắt đầu giảm lô BL 8,31% DP 1,34% Vào ngày thứ 7, hàm lượng GPT lô gần Nhưng lô BL, hàm lượng GPT cao lô BT 49,01% DP 20,44% Tác dụng lợi tiểu Bảng 15: Thể tích nước tiểu (ml) chuột nhắt sau dùng thuốc nghiên cứu Liều TN (g/kg) n 15 15 15 0,5 15 15 Thể tích nước tiểu (ml) sau dùng thuốc giờ giờ 24 0,01 ± 0,02 0,13 ± 0,18 0,14 ± 0,22 0,14 ± 0,22 0,24 ± 0,33 100% 216,67% 127,27% 127,27% 109,09% 0,02 ± 0,05 0,07 ± 0,10 0,07 ± 0,10 0,07 ± 0,10 0,13 ± 0,11 200% 116,67% 63,64% 63,64% 59,09% 0,09 ± 0,18 0,09 ± 0,18 0,09 ± 0,18 0,11 ± 0,20 0,24 ± 0,24 900% 150% 81,82% 100% 109,09% 0,08 ± 0,13 0,12 ± 0,19 0,14 ± 0,20 0,14 ± 0,20 0,27 ± 0,26 800% 200% 127,127% 127,27% 122,73% 0,01 ± 0,05 0,06 ± 0,15 0,11 ± 0,21 0,11 ± 0,21 0,22 ± 0,23 100% 100% 100% 100% 100% 46 Hình 25: Thể tích nước tiểu (ml) chuột nhắt sau dùng thuốc nghiên cứu 0,3 0,25 5g.kg 0,2 3g/kg 1g/kg 0,15 0.5g/kg 0,1 Nước 0,05 1h 2h 3h 4h 24h • Nhận xét: Tại thời điểm giờ, lô chuột uống liều 1g/kg tích nước tiểu nhiều Lô 1g/kg lô 0,5g/kg tích nhiều 800% so với lô chứng uống nước cất (liều 0g/kg) Tại thời điểm giờ, giờ, giờ, lô tích nước tiểu tăng nhanh Đặc biệt, thể tích nước tiểu lô uống thuốc liều 5g/kg cao 216,67% so với lô uống nước Tại thời điểm 24 giờ, lô 0,5g/kg tích nước tiểu nhiều (0,27ml) Thể tích nước tiểu giảm dần lô g/kg lô 3g/kg So với lô chứng, thể tích nước tiểu lô uống thuốc nhiều (trừ lô g/kg) nh hưởng thuốc nghiên cứu sử dụng dài ngày trọng lượng, trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt Bảng 16: Trọng lượng số trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt sau dùng thuốc 50 ngày Lô chứng Lô dùng thuốc (n=6) (n=10) Trọng lượng (g) 22, 67 ± 1,97 Hồng cầu (triệu/mm3) Trị số % so với chứng P 25,00 ± 2,53 110,28% >0,05 8,38 ± 1,10 8,92 ± 0,46 106,44% >0,05 Bạch cầu (ngàn/mm3) 7,00 ± 0,63 7,40 ± 1,02 105,71% >0,05 Hematocrit (%) 51,86 ± 2,14 50,80 ± 2,32 97,96% >0,05 Hemoglobin (g/dL) 13,14 ± 0,20 13,54 ± 0,59 103,04% >0,05 Máu chảy (giây) 175,00 ± 42,66 168,00 ± 48,44 96,00% >0,05 Máu đông (giây) 439,00 ± 92,65 420,00 ± 28,11 95,67% >0,05 GOT (mmol/L) 189,60 ± 26,24 188,20 ± 15,92 99,26% >0,05 GPT (mmol/L) 77,00 ± 11,14 79,00 ± 4,58 102,60% >0,05 47 Protein TP (g/L) 6,05 ± 0,79 6,00 ± 0,80 99,17% >0,05 Glucose (mmol/L) 4,74 ± 0,95 5,02 ± 0,65 105,91% >0,05 Ure (mg%) 20,90 ± 2,46 20,98 ± 3,62 100,38% >0,05 • Nhận xét: Trọng lượng: sau uống thuốc 50 ngày, trọng lượng lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 10,28%, khác biệt trọng lượng ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Hồng cầu: sau uống thuốc 50 ngày, số lượng hồng cầu lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 6,44%, khác biệt số lượng hồng cầu ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Bạch cầu: sau uống thuốc 50 ngày, số lượng bạch cầu lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 5,71%, khác biệt số lượng bạch cầu ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Hematocrit: sau uống thuốc 50 ngày, hematocrit lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 2,04%, khác biệt hematocrit ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Hemoglobin: sau uống thuốc 50 ngày, hemoglobin lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 3,04%, khác biệt hemoglobin ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Máu chảy: sau uống thuốc 50 ngày, thời gian máu chảy lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 4,00%, khác biệt thời gian máu chảy ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Máu đông: sau uống thuốc 50 ngày, thời gian máu đông lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 4,33%, khác biệt thời gian máu đông ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% GOT: sau uống thuốc 50 ngày, hàm lượng GOT lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 0,74%, khác biệt hàm lượng GOT ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% GPT: sau uống thuốc 50 ngày, hàm lượng GPT lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 2,60%, khác biệt hàm lượng GPT ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Protein: sau uống thuốc 50 ngày, protein lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 0,83%, khác biệt protein ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Glucose: sau uống thuốc 50 ngày, glucose lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 5,91%, khác biệt glucose ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Ure: sau uống thuốc 50 ngày, ure lô uống thuốc thử nghiệm cao lô chứng (uống nước) 0,38%, khác biệt ure ý nghóa thống kê với độ tin cậy 95% Thuốc nghiên cứu (liều 10g/kg) không làm thay đổi có ý nghóa thống kê trọng lượng, số trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt dùng thử nghiệm sau sử dụng 50 ngày Bàn luận 6.1 Tác dụng giải độc CCl4 • Vào ngày thứ (sau 24 giờ) 48 Hàm lượng GOT lô BL tăng cao (145,28% so với lô BT) ảnh hưởng CCl4, tế bào gan bị hoại tử nặng Đây khoảng thời gian hàm lượng GOT tăng cao lô BL Ở lô ĐT, DP+ĐT DP, hàm lượng GOT tăng cao (lần lượt 126,06%, 124,21% 122,05% so với lô BT) tăng so với lô BL thuốc có tác dụng bảo vệ tế bào gan khỏi bị tổn thương oxy hóa • Vào ngày thứ Hàm lượng GOT lô BL bắt đầu giảm dần so với ngày thứ (134,16% so với 145,28%) tác dụng CCl4 giảm dần cao hàm lượng GOT lô BT ngày (134,16% so với 89,51%) Ở lô ĐT, DP+ĐT DP, hàm lượng GOT bắt đầu giảm dần so với ngày thứ (110,90% so với 126,06%; 119,28% so với 124,21%; 113,02% so với 122,05%) cao so với lô BT ngày Như vậy, với giảm tác dụng CCl4 lên tế bào gan, bảo vệ tế bào gan thuốc làm hàm lượng GOT tiến gần đến giá trị bình thường • Vào ngày thứ Hàm lượng GOT lô BL giảm nhanh (tỷ lệ giảm 12,73% so với 11,12% so với ngày thứ 4) nhiên cao so với hàm lượng GOT ngày (121,34% so với 97,58%) Ở lô ĐT, DP+ĐT DP, hàm lượng GOT giảm dần so với ngày thứ (107,33% so với 110,90%; 104,91% so với 119,28%; 111,67% so với 113,02%) cao so với lô BT ngày Sự chênh lệch không nhiều hàm lượng GOT lô BT lô ĐT, DP+ĐT, DP cho ta thấy tác dụng thuốc lên tế bào gan Với kết giải phẫu tế bào gan, ta thấy rõ tác dụng bảo vệ tế bào gan thuốc, lô BL, tỷ lệ bất thường cao (chiếm 80% lô), lô BT, ĐT DP+ĐT, tỷ lệ bất thường thấp (dưới 25% lô) • Kết luận Cốm bổ sổ độc Hoàng Nam có tác dụng bảo vệ tế bào gan không bị oxy hóa mô hình gây viêm gan CCl4 Tác dụng thể trình dự phòng trình điều trị 6.2 Tác dụng lợi tiểu Trong suốt trình theo dõi, thể tích nước tiểu lô cho uống thuốc có phần nhiều so với lô cho uống nước Ở thời điểm giờ, có lô cho uống thuốc tích nước tiểu nhiều so với lô uống nước; thời điểm giờ, có lô; thời điểm giờ, có lô; thời điểm 24 giờ, có lô Sau 24 theo dõi, lô 0,5g/kg tích nước tiểu cao nhất, thể tích nước tiểu giảm dần lô 1g/kg lô 3g/kg (0,27 so với 0,24 0,13) Như Cốm bổ sổ độc Hoàng Nam có tác dụng lợi tiểu hàm lượng có tác dụng nhiều thí nghiệm hàm lượng 0,5g/kg 6.3 nh hưởng thuốc nghiên cứu sử dụng dài ngày trọng lượng, trị số huyết học sinh hóa chuột nhắt 49 Trong suốt trình thí nghiệm, hai lô chứng lô dùng thuốc, số máu không chênh lệch nhiều (độ chênh lệch 7% số) việc sử dụng thuốc không gây hại cho thể sử dụng lâu dài Ngoài ra, thuốc làm tăng tăng trọng nhanh (trọng lượng lô dùng thuốc so với lô chứng 110,28%) Như vậy, cốm bổ sổ độc Hoàng Nam chưa thể tác dụng nguy hại chuột nhắt trắng trình sử dụng thuốc 50 ngày CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết thu từ thực nghiệm, có số kết luận sau Cốm bổ sổ độc Hoàng Nam tác dụng giải độc CCl4 chuột nhắt trắng sử dụng liều 10g/kg, làm giảm 13,78% GOT giảm 24,44% GPT so với lô không điều trị Cốm bổ sổ độc Hoàng Nam thể tác dụng lợi tiểu chuột nhắt trắng liều uống 0,5g/kg thể trọng Cốm bổ sổ độc Hoàng Nam tác dụng nguy hại chuột nhắt trắng sử dụng liều uống 10g/kg liên tục 50 ngày Kiến nghị Cần thêm thời gian trình thí nghiệm thí nghiệm tác dụng giải độc CCl4 thí nghiệm tác dụng lợi tiểu để làm rõ tác dụng bảo vệ gan thuốc Cần thêm xét nghiệm số gan máu để xác kết luận thí nghiệm tác dụng giải độc CCl4 thí nghiệm tác dụng lợi tiểu Cần thêm hàm lượng thuốc để hiểu rõ ảnh hưởng hàm lượng thuốc lên lợi tiểu thí nghiệm tác dụng lợi tiểu Giảm sai sót trình thí nghiệm nhằm đưa kết xác 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế – Vụ Khoa học Đào tạo - Hóa sinh lâm sàng (sách dùng trường trung học y tế) – NXB Y học – Hà Nội – 2002 Trường đại học Dược Hà Nội – Bộ môn hóa sinh - Hóa sinh học – NXB Y học – Hà Nội – 2004 Trường đại học Y dược Hà Nội – Bộ môn miễn dịch sinh lý bệnh - Sinh lý bệnh học – NXB Y học – Hà Nội – 2002 Phan Lê (hiệu đính Lê Quý Ngưu, Lương Tú Vân) - Cây thuốc phòng trị bệnh ung thư – NXB Thuận Hóa TS.BS Hòang Trọng Thảng – Bệnh tiêu hóa gan mật –NXB Y học – Hà Nội – 2002 Vũ Minh Hiếu – Phương pháp tình hình nuôi trồng tảo Spirulina Việt Nam –Luận văn tốt nghiệp – 1999 Micjael A J Moster – Effect of preoperative interventions on the outcome following liver resection in a rat model of cirrhosis –Edmonton, Alberta – Fall 1998 O.Ulicna, M.Greksak – Hepatoprotective effect of Rooibos Tea (Aspalathus linearis) on CCl4 – induced liver damage in rats –06/2002 Buxiang Sun, Koji Wakame –Preventive effects of AHCC on carbon tetrachloride induced liver injury in mice –1997 10 http://www.ctu.edu.vn/coursewares/khoahoc/sinhhocdc_a2/phan3/ch2.htm 11 http://www.cimsi.org.vn/Sach/dinhduong&attp/chuong7.htm 12 Nguyễn Thị Mai Anh, Đỗ Văn Phan – Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan nấm Linh Chi Việt Nam (Ganodermalucium) chuột gây suy gan thực nghiệm – Tạp chí nghiên cứu Y học số năm 2003 13 Hà Văn Mạo – Quá trình thành tự khám phá xử lý phòng chống bệnh viêm gan virus nửa kỷ qua –Tạp chí Thông tin Y dược số năm 2001 14 Phạm Minh Hưng – Tác dụng bảo vệ gan vài dược liệu Việt Nam – Tạp chí Thông tin Y dược số năm 2002 15 Hà Văn Mạo – Những biện pháp phòng ngừa bệnh ung thư gan nguyên phát – Tạp chí thông tin Y Dược số naêm 2001 16 http://www.drthuthuy.com/Faq/Xogan.htm 17 http://www.cimsi.org.vn/ViemGan/home/htm 18 http://www.drthuthuy.com/Faq/ThuocHaiGan.htm 19 http://www.vitacost.com/science/hn/Herb/Phyllanthus.htm 20 http://healthyherbs.about.com/od/monographs/p/andrographis.htm 21 Trường đại học Y dược TPHCM –Bộ môn Sinh lý học – Sinh lý học Y khoa– 2001 22 http://www.phamhoangtrung.com/benhgan.html 51 23 http://plants.usda.gov/java/profile?symbol=PHAM5 24 Lê Ngọc Thông – Luận văn thạc só khoa học sinh học - Bước đầu thử nghiệm tác dụng Phycocyanin từ tảo Spirulina chuột nhắt trắng bị viêm gan thực nghiệm Tetrachlorur carbon –– Trường đại học Khoa học tự nhiên TPHCM – 1996 25 Nguyễn Đình Giậu – Sinh lý người động vật –NXB Đại học quốc gia – TPHCM – 2000 26 Bộ Y tế – Dược điển Việt Nam –Hà Nội – 2002 27 Nguyễn Thị Thu Hương, Nguyễn Xuân Thảo, Nguyễn Bá Hoạt – Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan ngũ vị Kontum –Tạp chí Y học TP.HCM tập 9, phụ số năm 2005 28 Hồ sơ nghiên cứu khoa Y học cổ truyền, trường Đại học Y dược TpHCM – Dược lý thực nghiệm độc tính chế phẩm “Đọan đại tràng viêm” –TPHCM – 2005 52 ... tiêu sau: Nghiên cứu tác dụng giải độc CCl4 cốm bổ sổ độc Hoàng Nam chuột nhắt trắng Nghiên cứu tác dụng lợi tiểu cốm bổ sổ độc Hoàng Nam chuột nhắt trắng Khảo sát ảnh hưởng cốm bổ sổ độc Hoàng... sản phẩm có nguồn gốc thiên nhiên chữa trị bệnh viêm gan cần thiết Cùng với phát triển nhanh chóng Tây dược, Đông dược sản phẩm có nguồn gốc thiên nhiên quan tâm đưa vào nhiều nghiên cứu tác dụng. .. 44 Tác dụng điều trị nhiễm độc gan 44 Tác dụng dự phòng điều trị nhiễm độc gan 46 Tác dụng dự phòng nhiễm độc gan 48 Tác dụng lợi tiểu
