Thông tin tài liệu
BÔ Y TÉ
TRlTÔNG DAI HOC DÜ0C HÀ NÔI
m
N G U Y Ê N ANH LY
NGHIÊN CtJU ÂNH HUÔNG CÜA NHIÊT DÔ TÔI
THÀNH PHAN HÔA HOC
VÀ TAC DUNG DlfOC
•
LŸ CÜA VITHUOC HOÀNG LIÊN
(KHÔA LUÂN TÔT NGHIÊP DLiüc SÏKHOÂ 1990 - 2003)
Nguèi huomg dân:
TS. PHÙNG HÔA BÏNH
DS. NGUYÊN THE MINH
Nai thirc hiên:
Bô mon Diïçfc hoc co truyên
Phong Vi sinh - Bô mon Công
nghiêp duac
Phong nghiên cuu trung tâm
Phong Duac lÿ Viên Duoc lieu
Thôi gian thuc hiên: 3/2003 - 5/2003
•
LÙl CfiM ON!
Trong quâ trinh thuc hiên dê tài này, em dâ nhân duoc su nhiêt tînh
giüp do cüa câc thây cô giâo.
Dâc b iê t, nhô cô su hctng dân tân tînh, chu dâo cüa thây:
TS. Phùng Hôa Binh , em dâ hoàn thành dê tài này . Em xin bày
tô long kmh trong và biêt on sâu sàc tcti thây .
Em xin chân thành câm on câc thây cô giâo trong bô mon Duoc co
truyên, DS. Nguyén Thé Minh, thây: TS Cao Van Thu bô môn Công
nghiêp Duoc - phong Vi sinh, thây: TS . Dô Ngoc Thanh, TS . Nguyên
Dâng Hoà phông nghiên curu Trung tâm dâ tao diêu kiên giüp dô em hoàn
thành dê tài này.
Hà Nôi, thâng 5 nam 2003
Sinh viên
Nguyên Anh Ly.
MUC LUC
Trang
DAT VAN DE
1
PHAN 1: TONG QUAN
2
1.1- Dâc diêm thuc vât
2
1.2- Thành phân hoâ hoc
3
1.3- Tac dung
5
1.4- Công dung
7
V 1.5- Dinh lirçmg
8
1.6- Che bien
9
1.6.1 - Mue dîch che bien thuoc co truyên
9
1.6.2 - Câc phifcfng phâp che bien thuoc co truyên
9
1.6.3 - Câc phuong phâp che bien Hoàng liên
11
1.7- Nhân xét chung
PHAN 2: THUC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ
2.1 - Nguyên lieu, phuong tien và phuong phâp nghiên cihi
11
12
12
2.1.1 - Doi ttfçfng nghiên cüu
12
2.1.2 - Thiet bi, hoâ chat, sue vât thî nghiêm
12
2.1.3 - Phvtcfng phâp nghiên cûu
12
2.2 - Két quâ thuc nghiêm và nhân xét
16
2.2.1 - Théo doi ânh huông cüa nhiêt dô dén si/ doi màu cüa
vi thuoc.
2.2.2 - Nghiên cüu su bien doi alcaloid ô câc MNC
16
16
2.2.3 - Nghiên cûu mot so tâc dung sinh hoc
2.3 - Bàn luân
31
36
2.3.1 - Phicong phâp dinh hcçfng alcaloid trong Hoàng lien
36
2.3.2 - Ânh huông nhiêt dô tâi thành phàn hoâ hoc
37
2.2.3 - Tâc dung sinh hoc
37
PHAN 3: KÉT LUÂN VÀ DE XUAT
3.1 - Ket luân
39
39
3.1.1 -Nhiêt dô ânh huông tâi màu sac vi thuô'c
39
3.1.2-Thành phàn hoâ hoc
39
3.1.3-Tâc
40
dung sinh hoc
3.2 - Mot vài ÿ kien de xuâ't
40
CAC KŸ HIÊU VIÉT TÂT.
Ber :
Berberin
DL :
Dirac lieu
g(mg)/KgT.T :
g(mg) duoc liêu/Kg thé trong suc vât thf nghiêm
HPLC :
Sâc kÿ long hiêu nâng cao
MeOH :
Methanol
MNC :
Mâu nghiên ciïu
Pal :
Palmatin
SKLM :
Sâc kÿ lorp mông
t°:
Nhiêt dô
t:
Thài gian
TT:
Thuoc thü
DÂT VAN DE
Vi thuôc Hoàng liên chân gà (Rhizoma Coptidis) là thân rë cüa nhiêu loài
Hoàng liên thuôc chi Coptis ho Hoàng liên (Ranunculaceae). Thành phân hôa
hoc chinh cüa vi thuôc Hoàng liên là alcaloid, trong dô chû yéu là Ber và Pal.
Hoàng liên cô vi dàng tmh hàn, cô tâc dung khâng khuan [3, 7, 12], chông viêm
[22], lai mât [1], ha huyét âp [3, 6].
Théo y hoc co truyên, truôc khi sü dung, câc vi thuôc duçfc ché bién nhàm
tâng tâc dung diêu tri giâm tâc dung không mong muôn, tâng dô an toàn. Vi
thuôc Hoàng liên duçfc ché bién theo nhiêu phuofng phâp khâc nhau, trong dô cô
phuong phâp sao. Phuong phâp sao thuc chat là su tâc dông cüa nhiêt dô dén vi
thuôc. Câc phuong phâp sao khâc nhau thi nhiêt dô tâc dông khâc nhau làm cho
thành phân hôa hoc sê bién doi khâc nhau dân toi tâc dung sinh hoc khâc nhau.
Vi vây, chüng tôi nghiên cüu dê tài này vôi mue dîch tîm hiëu su ânh huông
cüa nhiêt dô (â mûc dô nhiêt dô khâc nhau trong khoâng thdi gian khâc nhau)
dén Alcaloid cüa vi thuôc Hoàng liên
Nôi dung nghiên cüu gôm:
+ Dinh tïnh Alcaloid bàng phân ûng voi thuôc thü chung.
+ Phân tich su bién doi Alcaloid bàng SKLM
+ Dinh luong Berberin, Palmatin.
+ Thü mot sô tâc dung sinh hoc: khâng khuan, an thân.
1
PHAN 1: TÔNG QUAN
1.1- DÂC
DIÊM THÜC
VÂT:
•
•
•
C6 nhiêu loài Hoàng liên chân gà:
Coptis chinensis Franch, Coptis teeta Wall, Coptis teetoides C.Y. Cheng,
Coptis deltoidea C.Y. Cheng et Hsiao. Ho Hoàng liên (Ranunculaceae).
Hoàng liên là cây thâo sô'ng nhiêu nâm cao chùng 1 5 - 3 5 cm, thân moc
thang phfa trên phân nhânh, co nhiêu rê nhô. La moc so le tir thân rê lên, cuong
la dài 6 - 12 cm. Phién la gôm 3 - 5 la chét, môi la chét lai chia thành nhiêu thùy
mép cô nhüng rang ara [3, 2, 6, 7, 9, 12].
Cây thuông ra hoa vào mùa xuân. Hoa co 5 la dài màu vàng lue, cânh hoa
hïnh müi mâc dài bàng 1/2 la dài, co nhiêu nhi dài bàng cânh hoa. Quâ dai co
cuong trong chtra 7 - 8 hat màu xâm.
Hoàng liên thucmg moc à vùng nui cao 1500 - 2500 m. Cây ua noi mât am
thâ'p nhiêt dô 20 - 25 °C, dât dê thâo nuôc [3, 7, 9]. Hoàng liên trong bàng hat,
thucmg trong vào mùa xuân [2, 7].
Thu hâi Hoàng liên vào cuôi mùa thu dàu mùa dông thâng 9 - 1 0 [3, 7, 12,
17, 24], néu là cây trong thï thu hâi sau 4 - 5 nâm. Hoàng liên moc hoang và
trong nhiêu à Trung Quôc (TûXuyên, Hô Bac). Ô Viêt Nam, Hoàng liên moc
hoang trên dây nui Hoàng liên Son (Sapa cô Coptis quinquesecta Wang, ô Quang
Ba- Hà Giang cô Coptis chinensis Franch) [3,2,12].
- Bô phân dùng:
Bô phân dùng cüa Hoàng liên là thân rê, dô là nhüng mâu cong queo dài tù
3 cm trô lên, rông 0,2 - 0,5 cm. Cô nhiêu dot khüc khuÿu, phân nhânh nhiêu
giông hînh chân gà nên côn goi là Hoàng liên chân gà. Mât ngoài thân rê màu
vàng nâu côn vêt tich cûa rê phu và cuô'ng lâ. The chat ctfng rân, bê ngang không
phâng, phàn gô màu vàng tuai, phân vô và ruôt màu vàng dô [3, 24], không mùi,
vi rat dâng, ton tai lâu trong miêng.
2
9
X
Anh 1.1 : Mâu Hoàng liên lây tai SaPa
Ghi chu: 1: Toàn cây
2: Hoa
3:Thân ré (MNC)
4: Thân rê
1.2- THÀNH PHAN HÔA HOC:
Thành phàn hoa hoc chmh cüa thân rê là Alcaloid (5 -8 %), trong do chü
yéu là Berberin, Palmatin, ngoài ra là
Worenin, Coptisin, Jatrorizin,
Magnoflorin, Columbamin [3,6, 9, 12].
Hàm lirong Alcaloid trong cây thay doi theo mùa và thcfi kÿ sinh truang cüa
cây. Hàm luong Ber trong thân rê cao nhât vào thâng 9 -1 0 , thâp nhât vào thofi kÿ
cây ra hoa. Trong la cüng cô Ber, à la già hàm luçmg Ber cao nhât vào thâng 7 10 khoâng 2,5 - 2,8 % [3, 20]. Ô hoa và hat cüng chüa 1 luong nhô Ber: hoa 0,56
%, hat 0,23 %.
Ngoài Alcaloid trong thân rê Hoàng liên côn cô tinh bot, acid hùu co nhu
acid ferulic [3].
3
Công thuc eau tao cüa mot so Alcaloid trong Hoàng liên:
Jatrorizin
=
- H
r 2= - c h 3
R {=
Berberin
Ri + ~ ■CH2-
Palmatin
R, +R2 = - CH 3
Coptisin
R - - H
Worenin
R = - CH3
CH 3O
CH - COOH
HO
HO
Acid ferulic
CH
3
O
M a g n o flo rin
Mot so tînh chât vât lÿ cüa câc Alcaloid tlO, 11, 15, 21, 26Î duoc ghi à
bàng 1.1
Bàng 1.1: Mot sô tmh chat vât lÿ cüa câc Alcaloid
Alcaloid
Nhiêt dô nông chây
Cire dai hâp thu
UV X max (nm)
Ber dang base
144 °C
354, 278, 218
Ber dang nitrat ( N+)
205 °C
350, 264, 228
Ber clorid
Pal dang nitrat ( N+)
427, 349, 266, 230
192 °C
Pal clorid
340, 270, 224
430,348,267,227
D- tetrahydro Pal
142 °C
L- tetrahydro Pal
147 °C
DL- tetrahydro Pal
148 °C
4
335, 287
1.3- TAC DUNG:
♦♦♦ Tâc dung khâng khudn:
Hoàng liên cô tâc dung khâng khuân manh dâc biêt là trên vi khuân Gram (-).
Trong dô cô nhiêu vi khuân duông ruôt. Nuôc sâc Hoàng liên cô tâc dung rïc ché
mot sô' vi khuân:
Shigellashiga, Shigella dysenteriae, Vitrio cholerae,
Streptococus virideus Bacilhis proteus, Bacillus typhi, Bacillus pyocyaneus,
Staphylococus aureus... [3,12].
Y
hoc cë truyên thucmg dùng Hoàng liên két hop vôi hoàng bâ, hoàng càm,
chi tü trong bài Hoàng liên giâi dôc thang dê giâi dôc li truc khuân, tiêu chây
cap, viêm màng nâo [4, 16].
Tâc dung khâng khuân cüa Hoàng liên theo co ché: Ber ûc ché sinh tong
hop ARN, ADN và protein cüa té bào vi khuân [ 20 ,22 ]. Ngoài ra Ber côn tàng
cucmg chiïc nàng thuc bào vi khuân cüa câc té bào miên dich bach câu [4].
Mot sô vi khuân Staphylococus aureus, Streptococus hemolyticus dê khâng
thuoc vôi Ber sulfat nhung vôi bài Hoàng liên giâi dôc thang lai khô sinh ra tînh
chat khâng thuôc [4, 20].
❖ Tâc dung chong viêm:
Do Ber cô tâc dung \xc ché giâi phông acid arachidonic tir màng té bào, giâm
luong prostaglandin (PGI2) trong huyét tUdng [22], ûc ché hïnh thành u hat trên
suc vât thuc nghiêm.
❖ Tâc dung trên tim:
Ber làm giâm su co that cüa tim, làm giâm nhip tim trên chuôt thuc nghiêm [22].
Fang cho ràng vôi liêu lmg/kg trên mèo thî nghiêm, Ber làm giâm co co tâm
thât. Ber cô tâc dung chông loan nhip tim, duoc xép vào nhôm thuôc dô'i khâng
canh tranh vôi hê a , , a 2 adrenergic [20].
*X* Tâc dung ha huyét âp :
5
Do làm dân mach [3,6] thuông dùng dé phong ngùa xü vûa dông mach, do Ber
làm giâm luçmg cholesterol trong huyét tuong [20].
♦♦♦ Vôi dudng tiêu hoa:
Hoàng liên vôi liêu nhô kich thich giûp su tiêu hoa tàng co bôp da dày, ruôt,
chûa viêm da dày [3,6,12].
♦♦♦ Tâc dung khâng virût cûm [4,6,20] :
Nuôc sàc Hoàng liên vôi nông dô 50% nghiên cûu trên phôi gà cô tâc dung ûc
chê su phât triën cua virût cüm chung PR8, 56S8 P.M [20].
❖ Ba Protoberberin alcaloid tù dich chiét Hoàng liên cô tâc dung ûc ché
monoamino oxydase (MAO), riêng Jatrorrhizin ûc chê' không canh tranh câ
MAOA và MAOB (ô ti lap thé nâo chuôt công trâng) vôi giâ tri IC50 là 4pM và
62 (J.M. Côn Ber chî ûc ché canh tranh vôi MAOA vôi IC50 là 126 p,M trong khi
Pal vôi IC5() = 200jiM cüng không ûc ché 2 enzim này [23].
❖ Nhüng hop chat protoBer làm giâm hàm luçmg seretonin vôi IC50 cüa
Ber là 3,0(xM cüa Pal là 16,5pM. Câc hop chat protoBer vôi liêu toi da 20(j,M
không dôc hai vôi té bào P815 két quâ là Ber và Pal ûc ché hoat tmh enzim
tryptophan hydroxylase do dô làm giâm hàm luong seretonin à té bào P8i5 [13].
♦♦♦ Ber ûc ché su két tâp tiëu eau, làm giâm luong Thromboxan (TXB2),
do dô cô tâc dung chông thiéu mâu nâo eue bô [22].
♦> Dich chiét tù Hoàng liên cô tâc dung ûc ché su phât triën cüa té bào
ung thu, Hoàng liên dâ ûc ché su phât triën khôi u và su hinh thành trong quàn
thë dông té bào ung thu da dày, ruôt két, vü, phu thuôc vào liêu và thôi gian
dùng. Su phât triën cüa té bào bi ûc ché hoàn toàn sau 3 ngày chiu tâc dung cüa
thuôc à 10|ag/ml duoc thâo. Tâc dung ûc ché phât triën khôi u cüa Hoàng liên là
do giân tiép ûc ché hoat tmh cüa CDC2 kinase. Tâc dung này nôi bât lên nhu môt
mue tiêu diêu tri ung thu bàng hoa liêu phâp [18].
Thuc nghiêm tiê'n hành trên té bào u thân kinh dêm cüa chuôt, Chen cho
ràng Ber ûc ché sinh t6ng hop ARN, ADN và protein và làm giâm nàng luong
lase dë tiêu diêt té bào u thân kinh dêm [22].
6
♦♦♦ Ber co tâc dung vôi dan bào (leihsmania), diêt kÿ sinh trùng sot rét
[2 0 , 21]
❖ Pal rïc ché epinephrine, co tâc dung khâng khuan, hoat hoâ
acetylcholin esterase, hoat hoâ câ enzim anticholin esterase [21]
❖ Dôc tmh cüa Hoàng liên :Ber co LD50 =25 mg/Kg T .T , LD50 cüa
hoàng liên sông = 6,875 ± 0,904 g/Kg T.T 0 ].
1.4- CÔNG DUNG:
*Theo y hoc co truyên, Hoàng liên cô tâc dung thanh nhiêt tâo thâp, thanh
nhiêt tâ hôa [2,4].
*Hoàng liên cô vi dàng, tmh hàn, quy vào nàm kinh: tâm, tÿ, vi, can, dai
tràng [4, 5 ,7, 20]
* Công nâng chü tri:
■ Thanh nhiêt tâo thâ'p:diêu tri li, viêm ruôt. Hoàng liên cô tmh khâng
khuan manh phé rông nên dùng dé tri li amip, li truc khuan [3,4, 24].
■ Thanh tâm trùphiên: dùng dë diêu tri chùïïg tâm hôa thinh gây ra hôi
hôp mât ngü, bon chôn, niêm mac luôi miêng phông dôp [4,24].
■ - Thanh can sang mât: tri chiïng can hôa gây ra dau mât dô , sot cao
xuât huyét hoàng dân , diên cuông phâ phâch ( can hoâ vuang ) [2, 7 ].
■ Chi huyêt: dùng cho truông hap huyét nhiêt dân dén chây mâu cam,
non ra mâu [4, 6].
■ Gidi dôc ha hôa: diêu tri ung nhot dôc bên trong, sot cao mê sâng
phât cuông [4, 6].
Trong dân gian thuàng dùng dich nuôc sàc Hoàng liên dë tri chûng dau mat
dô, dùng ngoài dë tri nam ngoài da, eczema, viêm tai giûa cô mü [3,24] bôi
ngoài diêu tri trê em tua luôi ,sung luôi ,viêm miêng , lô môi [7].
Can chu y; Hoàng liên vi rat dàng không nên dùng liêu cao kéo dài dë gây
non, liêt thân kinh vi giâc, ton thuang dich vi, ân không biét ngon [4].
7
1.5- DINH LÜONG ALCALOID:
De dinh luçmg Alcaloid trong Hoàng liên cô nhiêu phuong phâp:
• Dinh luong bàng phiïüng phâp cân [3,5,11 ]
Nguyên tâc: Chiét alcaloid trong duoc lieu bàng côn, két tüa Ber bàng dung
dich Kl, thêm aceton, kiêm hoa bàng amoniac de tao tüa phüc. Loc lày tüa sày
khô dem cân.
lg tüa tuong duong 898,2 mg Berberin.
lml dich loc tuong ûng 0,0272 mg Berberin.
Duoc diën Viêt Nam I quy djnh duoc lieu phâi cô ft nhât 4% Berberin.
• Phtfcfng phâp acid base [3,11]
Nguyên tac: Chiét alcaloid trong duoc lieu duôi dang base bàng dung môi
hüu co ft phân eue, acid hoa dich chiét chuyën alcaloid sang dang muôi tan duoc
trong nuôc. Gan lây lôp nuôc, kiêm hoa bàng NaOH, làc vôi dung môi hüu co ft
phân eue de chuyën hét alcaloid base sang pha dung môi. Thêm chmh xâc mot
luong acid HC1. Chuân dô HC1 du bàng NaOH, chî thi dô Methyl, tù dô trnh
luong alcaloid.
• Phtfong phâp dùng sac kÿ chê'hoâ de tâch roi do quang [11,24]
Nguyên tâc: dùng SKLM dë tâch riêng câc alcaloid khôi hôn hop, cao lày
riêng câc vét, phân hâp phu bàng dung môi thich hop, do quang ô buôc sông
thïch hop. Mât dô quang tî le vôi nông dô dung dich alcaloid.
• Phtfcfng phâp sâc kÿ long hiêu nâng cao (HPLC) [15]
Nguyên tac: Dich chiét alcaloid duoc tiêm vào côt sâc kÿ pha dông
duoc bom liên tue qua côt tâch riêng câc alcaloid khôi hôn hop. Môi alcaloid
khi ra khôi côt duoc detector UV nhân biét, biéu hiên ra bàng 1 pic. Diên tich
pic tuong ung vôi nông dô alcaloid trong dung dich tiêm vào côt.
8
1.6. CHÉ BIEN:
1.6.1. Mue dîch che bién thuôc co truyên:
> Loai bô nhüng thành phân không can thiét làm vi thuôc tôt hon lên.
Giâm dôc tmh cüa vi thuôc vî du Ban ha ngâm trong nirôc vôi giâm hét vi ngüa,
ché phu tu thành bach phu diêm phu dë giâm dôc tmh cüa aconitin [4, 12 , 14]
> Giâm tâc dung không mong muôn, thay doi tâc dung cüa thuôc, vî
du: Hà thü ô ché vôi dàu den dë giâm anthranoid, giâm tâc dung nhuân tay [4,
12].
> Giüp bâo quân thuôc tôt hon: làm on dinh duoc lieu trânh nam môc,
vî du Hoè hoa trong diêu kiên am, men rutinase phân huÿ rutin thành queexetin
làm hoè bi xâm di [4, 12].
> Làm thay doi tmh vi quy kinh cüa thuôc tù dô làm thay doi tâc
dung cüa thuôc, vî du: Sinh dia vi dang tmh hàn, tâc dung thanh nhiêt luong
huyét, sau khi ché vôi sa nhân, gùng, ruou duôi tâc dung cüa nhiêt trü thành thuc
dia vi ngot tînh ôn cô tâc dung bo huyét ; hoàng kÿ trîch mât tàng quy kinh tÿ ,
tâng tâc dung bo khî [4, 7, 12].
> Làm tâng tâc dung cüa thuôc do làm giâm dô bên co hoc, tâng khâ
nâng giâi phông hoat chat, làm mât mot sô thành phân không can thiét, sinh ra
mot sô thành phân moi cô tâc dung diêu tri bênh. Vî du thâo quyét minh vi sao
cô tâc dung nhuàn tây , sao vàng cô tâc dung nhuân ha, ha âp, sao chây cô tâc
dung an thân [4]
1.6.2. Câc phuong phâp ché bién thuoc co truyên:
Cô ba phuong phâp co bân ché bién thuôc co truyên: hoâ ché, thuÿ ché, thuÿ
hoâ hop ché [4, 12].
♦> Hoâ che: là phuong phâp ché bién chî dùng lüa, nhàm mue dîch:
- Giâm dôc tînh, giâm tâc dung quâ manh cüa vi thuôc.
- On dinh hoat chât trong vi thuôc.
- Giâm dô bên co hoc cüa vi thuôc.
Câc phuong phâp hoâ ché duoc ghi à bâng 1.2
9
Bàng 1.2: câc phuong phâp hoâ ché.
Câc phirang phâp hoâ
che
Sao qua
Sao truc
tiép
(không
cô phu
liêu)
Sao vàng
Sao vàng
chây canh
Sao vàng ha
thô
Nhiêt dô
(°C) '
Màu sac vi
thuôc
50-80
Màu cüa duac
lieu sông
Màu vàng
140-180
Màu vàng, canh
màu den chây
Giâm bot mùi vi khô chiu
100 -140
Vàng
Cân bàng âm dueng cho vi thuoc
180 - 240
Sao chây
180-240
Sao câch cât
200 - 250
Sao
Sao câch
câm
Sao câch
hoat thach
hoac van
câp
Làm khô và thofm thuoc trânh moi
mot, on dinh hoat chat.
100 -140
Sao den
(hâc sao)
Sao
giân
tiép
(cô phu
liêu)
Mue dich
Mat ngoài màu
den, bên trong
màu vàng
Mât ngoài màu
den, bên trong
màu nâu den
Dân thuoc vào kinh tÿ
Tàng tâc dung tiêu thuc giâm tmh
mânh liêt cüa vi thuôc
Tàng tâc dung câm mâu
Truyên nhiêt dô dông dèu vào vi
thuôc.
Tàng tâc dung kiên tÿ, giâm tmh khô
tâo cüa vi thuôc
Trânh két dmh thuôc
200
Nung
Hàng
nghin
Ché sirang
Hàng
nghln
Vô ca hoâ, phâ vô câu truc cüa thuôc
Tinh ché thuôc cô nguôn khoâng vât,
à nhiêt dô cao câc hoat chat thàng hoa
tâch ra khôi tap
Giâm bôi chat dàu trong vi thuôc,
giâm tmh kich ufng cüa vi thuôc
Làm chin, giâm tmh mânh liêt cüa vi
thuôc
Làm thay doi tmh chat vi thuôc loai
trîr nuôc trong câu truc phân tu tàng
khâ nàng hüt nuôc làm sàn se
Lùi
Nirâng
Hoâ phi
Mot so công trinh nghiên cuu vê ânh huông cüa nhiêt dô tôi thành phàn
hoâ hoc cüa duoc liêu cho thày : ô mue t° < 80° C ( tuong duong phuong phâp sao
qua cüa YHCT ) thành phàn hoâ hoc cüa vi thuôc ft thay dôi : diosgenin trong
thân rê mot sô loài thuôc chi Dioscorea L . ft thay doi à mire t° 50-60°C[ 10]. Ô
mûc t° cao (180 -200° C) tuong duong sao chây cüa YHCT thành phàn hoâ hoc
thay doi rat lôn .
10
Tuÿ theo mue dich sir dung mà ta lua chon phuong phâp ché bién khâc
nhau.
1.6.3. Câc phuong phâp ché bién Hoàng liên:
• Hoàng liên dé sông dùng dé tâ tâm hoâ, tri chüng phât ban diên
cuông phiên khât.
• Hoàng liên trich ruçru sao qua tâc dung tâp trung à nüa nguôi phia
trên, tri viêm mât, lô miêng luôi [20 , 24]
• Hoàng liên trich nuôc gùng tâng tâc dung à trung tiêu dùng trong
truông hop dày bung, buôn non, non do câm mao phong nhiêt [20 , 24]
• Hoàng liên trich nuôc ngô thù du cô tâc dung thanh can, diêu hoà
truông vi, chông non, o chua [24]
• Hoàng liên tâm giâm tri can hu hoâ [1]
• Hoàng liên sao vôi hoàng thé cô tâc dung tiêu thuc chûa bênh cam ô
trê con.
• Hoàng liên trich mât lçm tri can dôm thuc hoâ.
Mot sô công trînh dâ nghiên cüu vê ché bién Hoàng liên cho thây: Hoàng
liên trich gùng cô tâc dung loi mât, ha sot tôt hon Hoàng liên sông. Hoàng liên
ché giâm cô tâc dung loi mât tôt hon câ Hoàng liên trich gùng [1]
1.7 NHÂN XÉT CHUNG:
Viêc ché bién làm ânh huông râ't nhiêu tôi tfnh chat cûa vi thuoc, qua
ché bién tâc dung cüa vi thuoc cüng thay doi. Do dô cân nàm chàc duoc quy
luât cüa ché bién dé tao ra nhüng tâc dung diêu tri bênh theo y muôn chü
quan. De tâng giâ tri su dung cüa vi thuoc cân lua chon nhüng phuong phâp
ché bién phù hop.
11
PHAN 2: THÜC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ
2.1- NGUYÊN LIÊU PHI/ÛNG TIÊN, PHI/ONG PHÂP NGHIÊN CÜU:
2.1.1 Doi ttrong nghiên cuti:
Chüng tôi tien hành nghiên cüu trên thân rê cây Hoàng liên (Rhizoma
Coptidis) thuôc chi Coptis ho Ranunculaceae. Mâu lây tai Sapa thâng 9/2002.
2.1.2 Thiét b i, hoâ chat ,suc vât thî nghiêm .
- Tü sây: Memmert, SHELLAB
-
May xâc dinh dô âm Précisa HA60 (Thuy Sï)
-
Cân phân tîch
- Bô Shoxhlet 150 ml
- May sâc kÿ long (HPLC) Thermo Finnigan.
- Dung eu thüy tinh.
- Chat chuân: Ber clorid, Pal sulfat do Viên Duçfc lieu cap
Rotundin do khoa Duoc Hoc viên Quân y cap
- Bân mông Silicagel GF254Merck.
Hôa chat dat tiêu chuân phân tich (P.A): Methanol, Buthanol, acid
clorydric, acid acetic dàc, Natrilauryl sulfat, Kalidihydrophosphat
- Chüng vi khuan do phông vi sinh, Bô mon công nghiêp duçfc cap.
2.1.3 Phirong phâp nghiên cuti:
2.1.3.1 Chê bien:
- Sây câc mâu Hoàng liên à câc müc nhiêt dô khâc nhau (tù 100° C dén 220
°C ) trong khoâng thefi gian 10’, 20’, 30’.
- Nhân xét câm quan trên co sô màu cüa câc mâu nghiên cüu.
- So bô dânh giâ mâu cô nhiêt dô và thôi gian cho sân phâm tuong duong
sao vàng, sao chây.
2.1.3.2 - Nghiên cüu su: bien doi thành phân hôa hoc
* Chiê't xuâ't: chiét bàng acid loâng trong MeOH [15]
12
* Nguyên tâc: trong môi truông acid alcaloid trong duoc liêu chuyën sang
dang muôi dê tan trong MeOH. Dùng MeOH de chiét alcaloid.
* Dinh tinh câc mâu nghiên cüu:
- Dinh tinh bàng phân ûng vôi TT chung Alcaloid: Mayer, Dragendorff,
Bouchardat.
- Dinh tinh bàng SKLM: so sânh thành phân Alcaloid cüa câc mâu sây vôi
nhau, vôi mâu sông, vôi chat chuân Ber, Pal, Rotundin. Dânh giâ so bô su bien
doi thành phàn hoa hoc.
* Dinh luong Alcaloid:
Dinh luong Ber và Pal bàng HPLC dâ duoc TS. Pham Thanh Kÿ, Trinh Vàn Lâu
nghiên ctru [15].
* Nguyên tac:
Dich chiét duoc liêu duoc tiêm vào côt sàc kÿ và duoc pha dông chay qua
côt tâch thành câc Alcaloid riêng biêt. Môi Alcaloid ra khôi côt duoc detector
UV nhàn biét, biëu hiên ra bàng môt pic. Diên tich pic tî le thuân vôi nông dô
dung dich Alcaloid.
* Tmh két quâ theo công thuc (1)
X%
cc.sTvc y
= --------—7----- r—.100
mO.Sc VT.rn.(\-a)
(1)
X: hàm luong hoat chat (%)
Cc: nông dô hoat chat dich chuân tiêm sàc kÿ (mg/ml) (Berberin , Palmatin)
Vc: thë tfch tiêm mâu chuân (|j,l)
VT: thë tich tiêm mâu thü (|j.l)
V : thë tich dich chiét thu duoc (ml)
Sc: diên tich pic chat chuân
Sj'. diên tfch pic chat thü
m: khôi luong duoc liêu chiét (g)
a: hàm âm cüa duoc lieu (%)
So sânh diên tich pic cüa Ber, Pal trong mâu thü vôi diên tich Ber, Pal trong
mâu chuân tù dô suy ra hàm luong Ber, Pal trong duoc liêu theo công thüc (1).
13
2.3.2.4 - Thütâc dung sinh hoc:
* Nguyên tac chon mâu:Trên co sa phân tich dinh tînh, dinh luong , chüng
tôi chon mâu dé thü tâc dung sinh hoc : mâu sông, mâu cô su thay dôî nhiêu vê
thành phân hoâ hoc , hàm luong Ber , Pal.
* Tâc dung khâng khudn: dùng phuong phâp khuyêch tan trên môi truông
thach [19].
Nguyên tac:
Dua trên su khuyêch tân cüa dich thü vào môi truông thach, üc ché su phât
triên cüa vi khuân chï thi, tao ra câc vông vô khuân cô duông kmh tî le vôi hoat
lue khâng khuân cüa thuoc.
Chî tiêu theo dôi: so sânh duông kînh vèng vô khuân cüa MNC vôi khâng
sinh dôi chüng và cüa câc MNC vôi nhau.
* Tâc dung an thân: Thü tâc dung hiêp dông vôi thuôc ngü barbituric [25]
(Viên Duoc lieu dâ chînh lÿ ) .
Nguyên tac: Chuôt duoc uông thuôc (cao long câc MNC) sau môt thôi
gian, gây ngü bàng thiopentan. Tâc dung tàng cuông thôi gian ngü cüa chuôt
duoc dânh giâ bàng su kéo dài thôi gian ngü ô lô dùng thuôc so vôi lô chüng ( chî
dùng thiopentan ).
Chî tiêu theo dôi: thôi gian ngü cüa chuôt ô tu thé nàm ngüa, dén khi chuôt
lât mînh trô dây trên bon chân. So sânh thôi gian ngü cüa câc lô dùng thuôc vôi
lô chüng và câc lô dùng thuôc vôi nhau.
Két qua: duoc xü lÿ theo phuong phâp thông kê âp dung cho sinh, y hoc [8]
ô nguông 5%.
■ Xü lÿ sai s6 thô : loai sai sô nghi ngô (b) ra khôi mâu
n -
Tînh :
1
X =
14
t = L ? L ztL
(2)
J n -1
So sânh t vôi ta n tra trong bàng
+ Néu t > ta n : so b là sai so thô , loai bô
+ Nëu t < ta n : so b không phâi sai s6 thô , giù la i.
■ Thôi gian ngü cüa chuôt duoc tmh theo công thuc:
y/n
Trong dô:
X : khoâng tin cây
X : trung bînh công thôi gian ngü cüa lô thü.
S: dô lêch chuân:
S
=
n(n-1)
t0: thay doi tuÿ theo bâc tu do cüa mâu phu thuôc vào xâc suât p cüa
phép tînh. à dây ta xü lÿ két quâ vôi p = 0,95 (95%)
■ Dë kiëm tra hai mâu thü cô thuc su khâc nhau cô ÿ nghîa thông kê
không, phâi dùng chi tiêu kiëm dinh Test t, tînh theo công thuc:
_
|AT,
-X ,
s Jy1n] +
-
n2
Trong dô:
X{
là trung bînh cüa mâu 1 cô n, con chuôt
X 2 là trung bînh cüa mâu 2 cô n2 con chuôt
S2C là phuong sai chung cüa hai mâu
s,
=
«, +n2-2
15
x^: thofi gian ngü cüa chuôt à mâu 1
x2i: thôi gian ngü cüa chuôt à mâu 2
Giâ tri t0 duorc tra trong bâng Student vôi bac tu do chung cüa hai mâu là:
itj + n2 - 2.
> Néu:
t > t0 thi hai mâu khâc nhau cô ÿ nghîa thông kê à nguông 5%.
t < t0thî hai mâu khâc nhau không cô ÿ nghîa thông kê à nguông 5%.
2.2 . K ÉT QUA THlTC NGHIÊM VÀ NHÂN XÉT.
2.2.1.Theo dôi ânh huông cüa nhiêt dô den sir doi màu cüa vi thuôc.
Thân rë Hoàng liên duoc tâch nhô, bô rê con, rüa sach phüi khô thâi phiên
chéo dây 2 - 4 mm, tan thành bôt thô.
Sây bôt thô duoc liêu ô câc müc t° khâc nhau trong khoâng thôi gian khâc
nhau (10 20 30 ’). Su dôi màu cüa vi thuôc duoc ghi à bâng 2.3.
Bàng 2.3: Su chuyén màu cüa vi thuoc Hoàng liên khi sây â nhiêt dô khâc nhau.
t sây
t°
(°C)
Màu cüa câc MNC
10
100
110
130
140
150
160
180
200
220
Nhân xét:
20
Vàng
Vàng
Vàng
Vàng dâm
Vàng nâu
Vàng nâu
Nâu den
Den
30
Vàng
Vàng
Vàng
Vàng dâm
Vàng nâu
Nâu
Den
Den
Vàng
Vàng
Vàng
Vàng
Vàng dâm
Nâu
Nâu dâm
Den
Den
> Câc mâu 100°C/30’, 110°C /10’, 20’, 30’, 130° / 10’, 20’, 30’,
140°C / 10 ; 20 ; màu câc mâu tuong duong nhau dêu cô màu vàng giông duoc
liêu sông.
> Câc mâu 140°C / 30 ; 150° / 10’, 20, 30 : câc mâu cô màu vàn
dâm, tuong duong vôi sao vàng.
> Câc mâu 200°C / 10’, 20, 30 ; 220°C / 10’, 20, 30 cô màu den
tuong duong sao chây.
16
2.2.2. Nghiên cûu sir bien doi alcaloid à câc MNC
2.2.2.I. Chiét xuât alcaloid
Dùng phuong phâp chiét bàng acid loâng trong MeOH [13]
So dô chiét alcaloid duoc mô tâ à hînh 2.1
Hinh 2.1: Sa dô chiét xuât alcaloid trong câc MNC
Cân chmh xâc 1 luong MNC theo bàng 2.7. Chiét bàng shoxhlet vôi dung
môi MeOH: HCl ( 100 : 1), chiét tôi khi dich chiét không côn tua vôi thuôc thü
Mayer, Dragendorff. Cât thu hôi MeOH trên nôi câch thuÿ. Cân alcaloid duoc
chiét bàng nuôc nông 3 lân, môi lân vôi 20 ml. Loc. Cô câch thuÿ dich loc tôi
can. Cân duoc hoà vào MeOH, chuyën vào binh dinh miic 50 ml, thêm MeOH tôi
vach. Duoc dich alcaloid (A).
2.2.2.2. Dinh tînh alcaloid
*t* Dinh tinh bàng thuoc thü chung:
Chiét xuât alcaloid cüa câc MNC theo mue 2.2.2.1.
Dich (A) duoc dinh tmh bàng câc TT: Mayer, Dragendorff, Bouchardat.
Lây 1 ml dich (A) cho lân luot vào câc ông nghiêm, nhô vào môi ông nghiêm 1
- 2 giot TT.
TT Mayer: phân rïng duong tmh (+) khi xuât hiên tüa trang.
TT Dragendorff: phân ûng duong tmh (+) khi xuât hiên tüa vàng cam.
TT Bouchardat: phân ûng duong tînh (+) khi xuât hiên tüa nâu.
Kêï qua : tât câ câc MNC dêu cho phân üng duong tînh vôi TT chung alcaloid.
♦♦♦ Dinh tînh alcaloid bàng SKLM:
So sânh mâu sô'ng vôi câc MNC (ô t° và thdi gian khâc nhau) cô chat
chuân Ber, Pal, Rotundin.
■ Dich châm sâc kÿ:
* MNC: Lây 1 ml dich (A) ô mue 2.2.2.1, cô can kiêm hoâ bàng amoniac
10%, chiét alcaloid base bàng cloroform, gan lây lôp cloroform, bôc hoi
cloroform duoc cân. Hoâ tan cân trong 1 ml MeOH duoc dich châm MNC.
* Alcaloid chuân: Ber clorid, Pal sulfat, rotundin; kiêm hôa bàng amoniac
10%, chiët alcaloid base bàng cloroform, bôc hoi cloroform dén cân. Hoà tan can
trong 1 ml MeOH duoc dich châm chât chuân.
■ Chât hâp phu: silicagen GF254 (hâng Merck) kfch thuôc 10 cm x 10
cm, hoat hoâ ô 110°C trong 30 phüt
■ Hê dung môi khai triën:
n Butanol: acid acetic bàng: nuôc [ 7 : 1 : 2 ]
■
Hiên màu: *Soi duôi ânh sang tir ngoai X = 366 nm
*TT Dragendorff
Két quâ phân tfch duoc ghi ô bàng 2.4 ,2.5, ânh 2 . 2, 23
Anh 2.2: Két quâ phân tich alcaloid trong câc MNC bàng SKLM
( hiên màu bàng TT Dragendorff)
lU .V IIW '
\
■M
' -m
B
P
R
S
z
150° 160° 160° 160° 180° 180° 180° 200° 200° 200° 220° 220° 220°
30'
10’ 20’
30’ 10’
20’
18
30’
10’ 20’
30’ 10’ 20’
30’
*1
Anh 2.3: Két qua phân tich alcaloid trong câc MNC bàng SKLM
( hiên màu bàng ânh sâng tü ngoai  = 366 nm )
x
3
2
1
B
o
100
30'
o
O
110 110
10’ 20’
O
110
30'
O
130
10'
O
130
20'
O
130
30’
B
P
R
140° 140° 140° 150° 150° 150° 160° 160° 160°
10’ 20' 30’ 10’ 20' 30' 10' 20' 30'
BP
R
R : Rotundin chuân
Ghi chu : B : Ber chuân
S : MNC sông
P : Pal chuân
19
180° 180° 180° 200° 200° 200° 220° 220° 220°
10’ 20'
30’ 10' 20' 30' 10' 20’ 30’
Bàng 2.4 : Két qua phân tich alcaloid bàng SKLM
(hiên màu diroi dèn tur ngoai A = 366 nm)
Rf câc vet
Chat chuan
B
1
0,42
2
0,52
3
0,61
X
0,68
P
+
Sông
R
++
+
100°C
110°C
130°C
140°C
150°C
160°C
30'
10'
20’
30’
10'
20’
30’
10'
20’
30’
10'
20’
30’
10'
20’
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
180°C
30’
10'
20’
200°C
30’
220“C
10'
20’
30’
10'
20’
30’
+
+
+
+
++
+
+
+
+
+
+
+
+
++
+++
++
++
+
+
+
+
+
+
+
+
+
++
++
++
+++
+++
+
Bàng 2.5: Két quâ phân tich alcaloid bàng SKLM
( hiên màu bàng TT dragendorff )
Rf
Chat chuan
B
1
0,42
2
0,52
3
0,61
X
0,68
4
0,70
P
Sông
R
+
+
100W
C
110°C
130°C
140°C
150°C
160"C
30’
10'
20’
30’
10’
20’
30’
10'
20’
30’
10'
20’
30’
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
180°C
* Ghi chu:
B: Ber berin
+ : vêt nhô
P: Palmatin
++: vêt vira
R: Rotundin
+++: vêt to
Chat moi sinh ra dàt tên là X
20
220#C
20’
30’
10’
20’
30’
10'
20’
30’
10
20’
++
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+++
++
++
++
++
++
+
200°C
10'
30’
++
++
+
+
+
+
+
+
++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
+++
Nhân xét:
> Hiên màu bàng dèn tü ngoai.
Vét Ber chuân cô màu xanh , Pal chuân & vët sô 1 cô màu xanh
•
vàng , vét môi X cô màu nâu vàng cô Rf lân lugt là : 0,61 ; 0,52 ; 0,42 ; 0,68
•
Rotundin chuân không phât quang duôi ânh dèn tu: ngoai ô buôc sông
366 nm
•
Câc màu sông; 100°C/30’; 110°C /10’, 20’, 30’; 130°C /10’, 20 , 30’,
140°C / 10’, 20’, 30’; 150°C / 10’, 20’, 30’; 160°C / 10’, 20’ tuongduong nhau cô 3
vét cô Rf lân luot là: 0,42 ; 0,52 ; 0,61
Trong dô: Vét 2 tuong duong Pal chuân
Vét 3 tuong duong Ber chuân
Câc mâu 160°C / 30 mât vét 1
• Mâu 180°C / 10 : cô 4 vét ; xuât hiên thêm vét X cô Rfx = 0,68,
•
Mâu 180°C / 20’, 30’; 200°C / 10’, 20’, 30’; 220°C / 10’, 20’, 30’ xuât
hiên thêm vét X cô Rf = 0,68. Vét 1 côn rat mô.
> Hiên màu bàng TT Dragendorff.
• Tât câ câc vét dêu cô màu dô cam.
•
Vét
Ber chuân , Pal chuân , Rotundin chuân cô Rf lân luot là :
0,61 ; 0,52 ; 0,70
•
Câc mâu: sông, 100°C / 30’, 110°C - 150°C / 10’, 20’, 30’ tuong
duong nhau: cô 3 vét cô Rf lân luot là: 0,42 ; 0,52 ; 0,61
Trong dô : Vét 2 tuong duong Pal chuân
Vét 3 tuong duong Ber chuân.
•
Mâu 160°C / 10’, 20’; 180°C / 10’
mat vêt cô Rf = 0,42
•
Câc mâu 160°C / 30’; 180°C / 20’, 30’; 200°C - 220°C / 10’, 20’, 30’
tuong duong nhau dêu cô 3 vét trong dô xuâthiên thêm vét X cô Rfx=0,68, mât
vét cô Rf = 0,42 ( câc vét tuong duong Ber ,Pal chuân vân côn ). Nhu vây ô
nhüng mâu sây ô t° cao , câcMNC tuong duong sao chây (160°C/30 ; 180°C/20,
21
30 ; 200°C - 220°C/10, 20, 30 ) dâ cô su biêh doi vê thành phàn hoâ hoc: vêt cü
mât di, xuât hiên thêm vêt môi, câc vêt cô Rf = 0,52; 0,61 turong dirong vôi Ber,
Pal vân côn.
2.2.23. Dinh luong Ber, Pal trong câc MNC
* Xâc dinh dô dm cüa duac liêu: bàng mây précisa HA60
Két quâ sau 3 lân xâc dinh ghi à bâng 2.6
Bâng 2.6: Dô dm cüa duoc liêu
Lân
Dô âm (%)
1
9,8
2
9,6
3
10,1
Trung binh
9,8
* Chiét xuât:
Cân chrnh xâc khoâng 5g bôt Hoàng liên sông. Sây à câc m ut t° và thôi
gian khâc nhau nhii bàng 2.7
Bâng 2.7: Su thay doi khôi luong cüa câc MNC khi sây
10’
t sâ'y
t°sây
20’
30’
mDL
m
m
mDL
m
m
mDL
m
m
sông
sau
sây
dinh
luong
sông
sau sây
sông
sau sây
(g)
(g)
dinh
luçmg
(g)
(g)
dinh
lirong
(g)
(g)
(g)
(g)
100
110
(g)
5,00
4,60
0,644
5,01
4,59
0,641
5,00
4,56
0,638
5,01
4,56
0,637
5,03
4,55
0,633
5,00
4,51
0,631
130
5,03
4,61
0,641
140
5,03
4,59
0,639
160
5,05
4,58
0,635
5,05
4,52
0,632
5,03
4,52
0,629
180
5,00
4,48
0,630
5,01
4,55
0,636
5,08
4,51
0,638
5,00
4,40
6,16
5,01
4,22
0,613
5,00
4,24
0,594
200
220
5,02
4,36
0,608
22
-
Cân chmh xâc khoâng 0,7g duoc lieu sông: mDL sông = 0,704(g). Câc
MNC khâc cân 1 luçmg tuong duong 0,7g duoc lieu sông khôi luong câc MNC
dem dinh luong ( duoc ghi ô bàng 2.7). Chiét bàng shoxhlet theo quy trînh chiét
xuât à mue 2.2.2.1
* Chuan bi mâu:
+ MNC: lây 1 ml dich A cho vào bînh dinh mire 10 ml thêm MeOH vira du.
+ Mâu chuan: là dung dich chuan chira hôn hop Ber và Pal.
Cân 0,1216 Ber chuan, cho vào bînh dinh mire 100ml thêm MeOH tôi vach, pha
loâng 2 lân duoc dung dich Ber cô nông dô 0,608 mg/ml (dung dich 1).
Cân 0,0318g Pal chuan, cho vào bînh dinh mire 100ml thêm MeOH tôi vach, pha
loâng 2 lân duoc dung dich Pal cô nông dô 0,159 mg/ml (dung dich 2).
Lây 1 ml dung dich 1 và 1 ml dung dich 2 cho vào bînh dinh mrïc 10ml
thêm MeOH tôi vach duoc dung dich chuan hôn hop.
* Diêu kiên sac kÿ:
+ Côt Thermo hypersil Flow
Hypurity C18 (150 x 4,6 mm, 5 p )
Nhiêt dô côt 35°C
+ Bom P4ooo
+ Bô phân tiêm mâu tu dông và ôn dinh côt AS 3000
+Pha
dông:
Hoà
tan
1,73g
Kalidihydrophosphat,
0,85g
Natrilaurylsulfat trong 1000 ml hôn hop dung môi nuôc - acetonitril (1: 1), loc
qua màng loc 0,45 p m, duôi khi bàng siêu âm.
+ Detector UV 6000 LP ô duôi sông 345 nm
+ Toc dô dông 1,2 ml/phüt.
+ Diëu khiën bàng hê thông phân mêm Chrom Quest 2.51
* Tiénhành:
+ Xâc dinh thài gian li(u cüa Ber và Pal:
Tiêm 20 p 1 lân luot dung dich chuan Ber và Pal vào côt. Bom liên tue pha
dông qua côt.
Thôi gian luu cüa
Ber : tluu = 8,9 ± 0,3 (phüt)
23
Pal : tluu= 8,2 ±0,3 (phüt)
+ Khâo sât khoâng tuyén tmh cüa Ber và Pal. Pha dung dich chuân Ber cô
nông dô 0,03 dën 0,09 mg/ml, dung dich Pal chuân tù 0,007 - 0,0025 mg/ml chay
sâc kÿ. Tmh phuong trinh hôi quy và hê sô tuong quan tuyê'n tmh giûa diên tich
pic và nông dô.
Kët quâ duoc ghi a bàng 2.8, hinh 2.1
Bàng 2. 8: Tirong quan nông dô và diên tich pic cua Ber
Nông dô mg/ml
Diên tîch pic
0,0304
6221655
0,0608
11956696
0,0912
19473833
Bâng 2.9 : Tuong quan nông dô và diên tich pic cüa Pal
Nông dô mg/ml
Diên tîch pic
0,00795
2211059
0,0159
3848758
0,02385
5872561
Hinh 2.1: Du&ng chuân Ber và Pal
Berberin
Palmatin
nông dô
nông dô
Câc MNC dinh luçmg cô nông dô hoat chât nâm trong khoâng dâ khâo sât
cô su liên quan tuyê'n tmh giûa diên tich pic và nông dô câc chât nghiên cùu.
+ Hàm luong Ber và Pal trong câc MNC duoc tmh theo công thuc (1) o
mue 2.1.
2*
Két quâ dinh luçmg duç/c ghi à bâng 2.10, hinh 2.2 - 2.6
Bâng 2.10: Tuong quan giüa diên tich pic và hàm luong alcaloid
MNC
Diên tich pic
V tiêm mâu
Ber
Pal
Hàm Iiroong (%)
Ber
Pal
Ber chuân
pi
20
Pal chuân
20
Ber + Pal chuân
20
12912022
3654610
Sông
10
12993944
4353011
7,82
2,43
100°C/30’
10
12850737
4185741
7,78
2,35
110#C/20’
10
12804013
4040813
7,76
2,17
110°C/30’
10
13156977
4116144
7,97
2,31
130°C/10’
10
13410954
4426669
8,12
2,49
Ber + Pal chuân
20
16501714
3768226
130°C/20’
10
16653685
4338800
7,84
2,36
130°C/30’
10
15539358
4087569
7,36
2,23
140°C/10’
10
15072686
4060914
7,14
2,21
140°C/30’
10
15347145
3846674
7,28
2,09
160°C/10’
10
13962634
3552323
6,62
1,93
160°C/20
10
13278934
3269719
6,29
1,78
160°C/30’
10
9369482
2590217
4,44
1,41
180°C/10’
10
12172912
3003863 S,11
180°C/20’
10
11295094
2759911
5,35
1,50
180°C/30’
10
9085765
2415628
4,31
1,31
200°C/20’
20
9414382
2820516
2,23
0,77
200°C/30’
20
10036946
3474247
2,38
0,94
220°C/10’
20
7523185
2707870
1,78
0,74
220°C/20’
20
3111925
1395227
0,74
0,38
1245445
81,3
3694559
81,5
Berberin chuân chî dat 81,3% nên nông dô chuân thuc cüa
Ber = 0,0608 x 81,3% = 0,0494 mg/ml
Palmatin chuân chî dat 81,5% nên nông dô chuân thuc cüa
Pal = 0,0159 x 81,5 = 0,01296 (mg/ml).
25
1,64
Hînh 2.2: Sâc kÿ dâ hôn hffp Ber, Pal chuan
300 A
R é te n tio n Time
h 300
h
200
200
100
100
r\0
O *>o0 o
Tf; O «O y©
ro oo,^
en ror-~
^
«O
ITi
10
12
14
Hînh 2.3: Sâc kÿ do alcaloid mâu song
R é te n tio n Time
400
400
200
200
[...]... C18 (150 x 4,6 mm, 5 p ) Nhiờt dụ cụt 35C + Bom P4ooo + Bụ phõn tiờm mõu tu dụng v ụn dinh cụt AS 3000 +Pha dụng: Ho tan 1,73g Kalidihydrophosphat, 0,85g Natrilaurylsulfat trong 1000 ml hụn hop dung mụi nuục - acetonitril (1: 1), loc qua mng loc 0,45 p m, duụi khi bng siờu õm + Detector UV 6000 LP ụ duụi sụng 345 nm + Toc dụ dụng 1,2 ml/phỹt + Diởu khiởn bng hờ thụng phõn mờm Chrom Quest 2.51 * Tiộnhnh:... (TXB2), do dụ cụ tõc dung chụng thiộu mõu nõo eue bụ [22] > Dich chiột tự Hong liờn cụ tõc dung ỷc chộ su phõt triởn cỹa tộ bo ung thu, Hong liờn dõ ỷc chộ su phõt triởn khụi u v su hinh thnh trong qun thở dụng tộ bo ung thu da dy, ruụt kột, vỹ, phu thuục vo liờu v thụi gian dựng Su phõt triởn cỹa tộ bo bi ỷc chộ hon ton sau 3 ngy chiu tõc dung cỹa thuục 10|ag/ml duoc thõo Tõc dung ỷc chộ phõt triởn khụi... thich hop, do quang ụ buục sụng thùch hop Mõt dụ quang tợ le vụi nụng dụ dung dich alcaloid Phtfcfng phõp sõc k long hiờu nõng cao (HPLC) [15] Nguyờn tac: Dich chiột alcaloid duoc tiờm vo cụt sõc k pha dụng duoc bom liờn tue qua cụt tõch riờng cõc alcaloid khụi hụn hop Mụi alcaloid khi ra khụi cụt duoc detector UV nhõn biột, biộu hiờn ra bng 1 pic Diờn tich pic tuong ung vụi nụng dụ alcaloid trong dung... phu liờu) Mue dich Mat ngoi mu den, bờn trong mu vng Mõt ngoi mu den, bờn trong mu nõu den Dõn thuoc vo kinh t Tng tõc dung tiờu thuc giõm tmh mõnh liờt cỹa vi thuục Tng tõc dung cõm mõu Truyờn nhiờt dụ dụng dốu vo vi thuục Tng tõc dung kiờn t, giõm tmh khụ tõo cỹa vi thuục Trõnh kột dmh thuục 200 Nung Hng nghin Chộ sirang Hng nghln Vụ ca hoõ, phõ vụ cõu truc cỹa thuục Tinh chộ thuục cụ nguụn khoõng võt,... bien doi thnh phn hoa hoc * Dinh luong Alcaloid: Dinh luong Ber v Pal bng HPLC dõ duoc TS Pham Thanh K, Trinh Vn Lõu nghiờn ctru [15] * Nguyờn tac: Dich chiột duoc liờu duoc tiờm vo cụt sc k v duoc pha dụng chay qua cụt tõch thnh cõc Alcaloid riờng biờt Mụi Alcaloid ra khụi cụt duoc detector UV nhn biột, biởu hiờn ra bng mụt pic Diờn tich pic tợ le thuõn vụi nụng dụ dung dich Alcaloid * Tmh kột quõ theo... cụ duụng kmh tợ le vụi hoat lue khõng khuõn cỹa thuoc Chợ tiờu theo dụi: so sõnh duụng kợnh vống vụ khuõn cỹa MNC vụi khõng sinh dụi chỹng v cỹa cõc MNC vụi nhau * Tõc dung an thõn: Thỹ tõc dung hiờp dụng vụi thuục ngỹ barbituric [25] (Viờn Duoc lieu dõ chợnh l ) Nguyờn tac: Chuụt duoc uụng thuục (cao long cõc MNC) sau mụt thụi gian, gõy ngỹ bng thiopentan Tõc dung tng cuụng thụi gian ngỹ cỹa chuụt...Do lm dõn mach [3,6] thuụng dựng dộ phong ngựa xỹ vỷa dụng mach, do Ber lm giõm luỗmg cholesterol trong huyột tuong [20] Vụi dudng tiờu hoa: Hong liờn vụi liờu nhụ kich thich giỷp su tiờu hoa tng co bụp da dy, ruụt, chỷa viờm da dy [3,6,12] Tõc dung khõng... + Toc dụ dụng 1,2 ml/phỹt + Diởu khiởn bng hờ thụng phõn mờm Chrom Quest 2.51 * Tiộnhnh: + Xõc dinh thi gian li(u cỹa Ber v Pal: Tiờm 20 p 1 lõn luot dung dich chuan Ber v Pal vo cụt Bom liờn tue pha dụng qua cụt Thụi gian luu cỹa Ber : tluu = 8,9 0,3 (phỹt) 23 Pal : tluu= 8,2 0,3 (phỹt) + Khõo sõt khoõng tuyộn tmh cỹa Ber v Pal Pha dung dich chuõn Ber cụ nụng dụ 0,03 dởn 0,09 mg/ml, dung dich Pal ... phõp khõc nhau, dụ cụ phuong phõp Phuong phõp thuc chat l su tõc dụng cỹa nhiờt dụ dộn vi thuục Cõc phuong phõp khõc thi nhiờt dụ tõc dụng khõc lm cho thnh phõn hụa hoc sờ biộn doi khõc dõn toi tõc... Hypurity C18 (150 x 4,6 mm, p ) Nhiờt dụ cụt 35C + Bom P4ooo + Bụ phõn tiờm mõu tu dụng v ụn dinh cụt AS 3000 +Pha dụng: Ho tan 1,73g Kalidihydrophosphat, 0,85g Natrilaurylsulfat 1000 ml hụn hop... dụ dụng 1,2 ml/phỹt + Diởu khiởn bng hờ thụng phõn mờm Chrom Quest 2.51 * Tiộnhnh: + Xõc dinh thi gian li(u cỹa Ber v Pal: Tiờm 20 p lõn luot dung dich chuan Ber v Pal vo cụt Bom liờn tue pha dụng
Ngày đăng: 15/10/2015, 17:27
Xem thêm: Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ tới thành phần hóa học và tác dụng dược lý của vị thuốc hoàng liên , Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ tới thành phần hóa học và tác dụng dược lý của vị thuốc hoàng liên