TRƯỜNG ĐẠI HỌC sư PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN PHAN THỊ HIÈN LƯƠNG “BƯỚC ĐÀU NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN NHANH GIỐNG LAN ĐAI CHÂU ĐỎ (RHYNCHOSTYLIS GIGANTEA) BẰNG CƠNG NGHỆ NI CẤY MƠ TẾ BÀO” KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC •••• Chuyên ngành: DI TRUYỀN HỌC Hà Nội, 2015 Trong suốt trình tìm hiểu nghiên cứu khóa luận, nhận giúp đỡ, bảo tận tình Th.s Phan Thị Thu Hiền TS Nguyễn Như Toản, em bước tiến hành nghiên cứu khóa luận với đề tài “Bước đầu LỜI CẢM nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylỉs gigantea) công nghệ nuôi cấy mô tế bào” ƠN Qua đây, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến Th.s Phan Thị Thu Hiền T.s Nguyễn Như Toản Các thầy cô tổ di truyền Trường Đại học sư phạm Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ em hoàn thành khóa luận Cuối em xin chân thành gửi lời cảm ơn tới gia đình, tập thể, bạn bè, người động viên, giúp đỡ tận tình tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình thực đề tài Một lần nữa, em xin chân thành cảm ơn tất cả! Hà Nội, tháng năm 2015 Sinh viên Phan Thị Hiền Lưong Để đảm bảo tính trung thực khóa luận, tơi xin cam đoan: Khóa luận “Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea)” cơng trình nghiên cứu cá nhân tôi, thực hướng dẫn ThS Phan Thị Thu Hiền TS Nguyễn Như Toản Các kết trình bày khóa luận trung thực chưa cơng bố ttong cơng trình trước LỜI CAM ĐOAN Hà Nội, tháng năm 2015 Sinh viên Phan Thị Hiền Lương CÁC CHỬ VIẾT TẤT TRONG LUẬN VĂN BAP Cs : 6-Benzyl Amino Purin : Cộng NN : Nhân nhanh NAA : Naphythyl Acetic Acid MS : Murashige Skoog THT : Than hoạt tính TR : Tạo rễ IBA : 3-Indol Butyric Acid 2,4-D : 2,4-Dichlorophenoxy Acetic Acid MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Cây hoa Lan (Orchidaceae) giống cảnh nhiều người ưa chuộng, bỏi yẻ đẹp quý phái chúng, mà cịn bỏi cơng dụng chữa bệnh số giống Nghề trồng lan đem lại lợi nhuận cao Ngày Phong lan xuất lưu thơng ngành thương mại nhanh chóng lan rộng phạm vi toàn giới Nên việc trồng hoa lan đem lại hiệu kinh tế thiết thực thu hút nhiều người tham gia Trên giói chi lan Hồng thảo (Dendrobium) có khoảng 1400 lồi, chủ yếu phân bố Đơng Nam Á đảo thuộc Philippine, Malaysia, Indonesia, Papua New Guinea, Đơng Bắc Australia Ở Việt Nam có 107 lồi thứ, phân bố vùng núi từ Bắc vào Nam số đảo ven biển [20] Tuy nhiên, nhiều nguyên nhân khác nhau, đến nhiều loài bị tuyệt chủng bị đe dọa Một số loài nằm danh mục Đỏ “Sách đỏ Việt Nam”, có lồi lan Thạch hộc (Dendrobium nobỉle Lỉndl) phân bố vùng trung du miền núi phía Bắc Việt Nam [11] Để bảo tồn phát triển lồi lan q này, khơng cịn cách khác phải tiến hành nhân giống nuôi ttồng chúng quy mô lớn Nguyễn Tiến Bân, 2007, [2], Dương Đức Huyến, 2007,[11] Dựa ừên sở khoa học thực tiễn trên, tiến hành nghiên cứu xây dựng phát triển quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ Giống lan Đai châu đỏ có tên khoa học: (Rhynchostylỉs gigantea), thuộc họ: Phong lan (Orchidaceac) Lan Đai châu đỏ có nguồn gốc từ miền tây nam Trung Quốc - thân thảo, trồng ngồi trời bóng râm làm cảnh hoa Cuống hoa mọc từ Cây lan Đai châu đỏ ưa thích khí hậu nóng ẩm, yêu cầu ánh nắng đày đủ, nhiên càn đặt vào nơi mát mẻ vào mùa hè Cây lan Đai châu đỏ thích hợp trồng khắp nơi Giống lan Đai châu đỏ phân bố ngày hẹp, cần nhân nhanh để lưu trữ nguồn gen, phục vụ cho sản xuất đáp ứng nhu cầu thị hiếu người Xuất phát tò lý tiến hành thực đề tài “Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) công nghệ nuôi cấy mô tế bào” Muc tiêu đề tài Nhân nhanh thành công giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) công nghệ nuôi cấy mô tế bào Ý nghĩa 3.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên cứu đưa biện pháp kỹ thuật nhân giống hoa lan Đai châu đỏ phương pháp in vitro Đánh giá tác động số chất điều tiết sinh trưởng nhân giống hoa lan Đai châu 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Sản xuất sinh trưởng phát triển tốt, đồng bệnh vói khối lượng lớn, kịp thời phục yụ cho sản xuất Thuận lọi cho việc áp dụng biện pháp kỹ thuật giai đoạn sản xuất hoa thực phẩm, từ kích thích sản xuất hoa phát triển Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU Nguồn gốc xuất xứ, ví trí phân loại hoa lan 1.1 Nguồn gốc vị trí phân lồi 1.1.1 Nguồn gốc Từ thời cổ xưa người sớm thưởng thức đẹp thiên nhiên Hoa vào sống nét đẹp thiếu ngày lễ tết, hội hè, đình đám, trang hồng nhà cửa Ngày nay, với phát triển nhanh chóng xã hội, nhu cầu hoa giới nói chung nước ta nói riêng tăng nhanh hết, hoa tươi trở thành loại sản phẩm mang lại giá trị kinh tế cao chiếm vị trí đặc biệt thị trường hàng hóa nơng nghiệp giới Thị trường hoa tươi tập trung nước có cơng nghiệp phát triển cao: Hà Lan; Pháp; Anh; Nhật; Ý; Mỹ Cây hoa lan (Orchidaceae) biết đến Phương Đơng, nói hoa lan phải nói đến người Trung Hoa, họ biết lan vào khoảng 2500 năm trước tức thời đại Đức Khổng Tử (551 - 479 TCN) Theo tác giả Bretchacidon từ địi vua Thần Nơng (2800 TCN) số loài lan rừng dùng để làm thuốc chữa bệnh Chính vẻ đẹp kiêu sa hương thơm quyến rũ kết hợp với cơng dụng chữa bệnh nên lồi hoa nhanh chóng xuất Châu Âu Pharatus (376 - 285 TCN) coi cha đẻ ngành lan học, ơng người dùng từ Orchids để loài hoa lan củ trịn Sau Linrieatis (1707 - 1778) Bron (1773 - 1858) người phân biệt rõ ràng họ lan với họ thực vật khác Nhưng người đặt tảng cho môn học hoa lan Joanlind (1779 - 1858) Vào năm 1936 ông công bố tài liệu (A Tabules View of the tubes of orchidea) để xếp loài chi họ lan Tên họ lan ông đưa dùng ngày [9] Ở Việt Nam nghiên cứu lan buổi đầu chưa rõ rệt Người ta khơng biết xác có lẽ người khảo sát lan người tuyên giáo Bồ Đào Nha Joanisde Lourceiro, ông mô tả lan Việt Nam “Flora de cochinchinensis” (1789), sau người Pháp đến Việt Nam có cơng trình nghiên cứu cơng bố đáng kể Guillaumin, tác giả mô tả 101 chi gồm 750 lồi lan cho nước Đơng Dương “Thực vật chí Đơng Dương” Lecomle chủ biên, xuất từ năm 1932 - 1934 theo Phạm Hồng Hổ (1999) Ở Việt Nam có tới 755 lồi lan [7] 1.1.2 Phân loai thưc vât ••• Qua trình nghiên cứu phân loại hệ thống phân loại thực vật, hoa lan thuộc: Giới: Thực vật (Plantae) Ngành: Hạt kín (Mangoliophvaatjh) Lớp: Một mầm (Monocotyledoneae) Bộ: Măng tây (Asparagales) Họ: Phong lan (Orchỉdaceae) Chi: Hoàng thảo (Dendrobium) [21] Theo nghiên cứu trước họ phong lan chia làm họ phụ Tuy nhiên phân tích gần cho thấy có thêm họ phụ họ phong lan Vậy đến họ Phong lan chia thành họ phụ: Apostasỉscỉdeae; Orchỉdadae; Cypripedicidea; Epỉdendroideae; Neotrìcideae Vandoỉdeae Theo thống kê sơ giáo sư Leonid V.A very anov Việt Nam có khoảng 152 chi, 897 loài Với số lượng cho ta thấy phong phú họ lan Việt Nam Trong công tác chọn giống trồng,việc phân loại đơn vị loài quan trọng, nhiên cơng việc gặp nhiều khó khăn họ lan 1.1.3 Giới thiệu chung lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) Lan Đai châu đỏ (Rhỵnchostylis gỉgantea) thường gọi Ngọc điểm đai châu (chuỗi hạt châu) mà người bình dân gọi tắt đai châu, chồn hay gọi lan me (vì thường mọc me Sài Gòn) Hơn lại nở vào mùa xuân có thêm tên gọi Nghinh Xuân Cây lan thường có - dài từ 20 - 30 cm, rộng 4-7 cm, màu xanh vàng có sọc trắng chấm tím Cây lớn khỏe mạnh tới - chùm hoa cong dài từ 15 - 30 cm, hoa to chừng cm Lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) thuộc Họ Phong lan (Orchidaceac), Măng tây (Asparagales), lớp Một mầm (Monocotyledoneae) Chúng thân cứng, mọc so le, dày Các thuộc chi nhóm hoa lan đa dạng có hoa đẹp với đầy đủ màu sắc hương thơm Dù Bulbophyllum (Lan Lọng) loài lớn họ hoa lan luận hương sắc có lẽ Dendrobium vượt trội nhiều Hình 1.2 Cây lan Đai châu đỏ (Rhynchostylừ gỉgantea) (Hình 3.1 B) Theo Vũ Ngọc Lan Nguyễn Thị Lý Anh sử dụng cồn kết hợp với HgCl2 khử trùng lan cho kết tốt, tỷ lệ sống đạt 97% [14] Tuy nhiên xét độ an tồn, chúng tơi thấy Ca(OCỈ2)2 an tồn, độc hại A Hạt nảy mầm B Hạt bị nhiễm Hình 3.1: Ảnh hưởng chất khử trùng lên khả nảy mầm hạt 3.2 Ảnh hưởng tồ họp BAP NAA lên khả nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ Mục tiêu giai đoạn tìm mơi trường tốt để có nhiều chồi thịi gian ngắn Môi trường nuôi cấy bổ sung vào hợp chất cytokinin kết hợp với auxin với nồng độ khác để kích thích nhân nhanh chồi Chúng tơi tiến hành thí nghiệm có phối họp chất điều tiết sinh trưởng, nhằm tìm công thức tối ưu khả nhân nhanh chất lượng chồi loài lan.Trong nghiên cứu dùng tổ họp BAP NAA kết tốt nhất, kết cho thấy sau 40 ngày cấy, chồi có khả nhân nhanh, mơi trường có bổ sung chất kích thích sinh trưởng (bảng 3.2) Bảng 3.2: Ảnh hưởng tổ họp BAP, NAA đến khả nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ in vỉtro Công thức Số chồi ban đầu Số chồi sau 40 ngày cấy Sô chôi Hê sô nhân NN1 150 359 2,39 NN2 150 372 2,48 NN3 150 413 2,75 NN4 150 504 3,36 NN5 150 302 ■ 2,01 Qua bảng 3.2 nhận thấy, tăng dần nồng độ BAP kết hợp với nồng độ NAA ta thấy hệ số nhân chồi tăng dần từ (2,39 - 3,36 chồi), mẫu có số chồi mói tạo thành/số chồi ban đầu cao (số chồi tạo thành/chồi ban đầu cao CT4 có bổ sung mg/1 BAP mg/1 NAA đạt 504 chồi, hệ số nhân lớn đạt 3,36 chồi chồi mập, khỏe, sinh trưởng mạnh dễ tách rời Nhưng bổ sung 2,5 mg/1 BAP mg/1 NAA hệ số nhân lại giảm (hệ số nhân giảm 2,01 chồi) Điều chứng tỏ rằng, nồng độ chất kích thích cao ức chế sinh trưởng chồi Ket thấp so với kết nghiên cứu Kalimuthu cs (2006) Oncỉdỉum sp Và kết Anjum cs (2006) nghiên cứu D.Malones mơi trường có bổ sung 1,5 mg/1 BAP lmg/1 NAA sau 25 ngày hệ số đạt 3,66 lần, chồi nhỏ yếu Kết nghiên cứu giống với kết cơng trình nghiên cứu tác giả Nguyễn Văn Song [19] lan Kim điệp nồng độ phối hợp mơi trường nhân nhanh có bổ sung mg/1 BAP mg/1 NAA tốt Như môi trường nhân nhanh cho giống lan Đai châu đỏ môi trường nuôi cấy có bổ sung (2 mg/1 BAP + mg/1 NAA + 30 g/1 khoai tây + 10 g/1 nước dừa + 30 g/1 saccarose) phù hợp (hình 3.2 B) A Chồi lan trước nhân nhanh B Chồi lan sau nhân nhanh Hình 3.2: Ảnh hưởng tổ họp BAP, NAA đến khả nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ in vitro 3.3 Giai đoạn tạo rễ Thí nghiệm Ảnh hưởng cường độ ánh sáng lên khả sinh trưởng chồi Ánh sáng nuôi cấy mô thực vật ánh sáng nhân tạo, cường độ ánh sáng 1000 ~ 5000 lux, chu kì chiếu sáng thơng thường 16h chiếu sáng Để chồi lan Đai châu đỏ phát triển hồn chỉnh cần điều chỉnh cường độ ánh sáng thích họp Để tìm hiểu điều nghiên cứu dải cường độ ánh sáng khác chu kì chiếu sáng cơng thức vói 150 mẫu chồi lan Kết thu thể bảng 3.3 Bảng 3.3: Ảnh hưảng cường độ ánh sáng lên khả sinh trưởng (sau 40 ngày nuôi cấy) CT Chiêu cao TB/cây (cm) Sô TB/cây (cm) Sô rê TB/cây (cm) Ban đâu Sau tuân Ban đâu Sau 6tuân Ban đâu Sau tuân CT1 3,0 3,09 3,0 3,27 2,0 2,02 CT2 3,0 3,48 3,0 3,44 2,0 2,54 CT3 3,0 3,87 3,0 3,76 2,0 2,65 CT4 3,0 5,01 3,0 5,33 2,0 4,67 CT5 3,0 4,32 3,0 4,00 2,0 3,33 Dựa vào bảng số liệu ta thấy, CT1 sử dụng đèn chiếu sáng loại 800 lux cho chiều cao thấp đạt 3,09 cm, số trung bình đạt 3,27 cm, rễ phát triển đạt 2,02 cm Cịn CT4 sau 40 ngày ni cấy, nuôi cấy cường độ chiếu sáng 2300 lux cho kết phát triển mạnh nhất, chiều cao đạt 5,01 cm, dài rộng đạt 5,33 cm, màu xanh sẫm, bóng, thân mập rễ phát triển mạnh đạt 4,67 cm Nhưng tăng cường độ chiếu sáng mức 2800 lux sinh trưởng chậm lại, ánh sáng mạnh ừao đổi chất lớn mức trở thành kìm hãm phát triển Vậy cường độ ánh sáng tốt cho phát triển lan Đai châu đỏ 2300 lux Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng nồng độ NAA lên khả tạo rễ lan Đai châu đỏ Đe đưa ngồi vườn ươm trồng nhanh thích ứng với mơi trường phải đảm bảo rễ hồn chỉnh NAA nhiều nhà khoa học nghiên cứu ứng dụng q trình hình thành rễ [23] Để xác định nồng độ thích hợp NAA bổ sung vào môi trường ta phải tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến trình hình thành rễ giống lan Đai châu đỏ Chồi lan Đai châu đỏ thu từ thí ngiệm ừên tách riêng rẽ cấy lên môi trường tạo rễ để khảo sát khả hình thành rễ Ket thí nghiệm sau tuần theo dõi trình bày bảng 3.4, hình 3.3 Bảng 3.4: Ảnh hưởng nồng độ NAA lên khả tạo rễ lan Đai châu đỏ Công thức Số rễ TB/cây Sô lượng rê TB/cây Chiều dài TB (cm) TRI (chiếc) 2,75 0,83 TR2 4,62 1,74 TR3 3,15 0,82 TR4 2,88 0,81 Qua kết bảng cho thấy, rễ phát triển tất loại môi trường, tỷ lệ rễ đạt 100% Trên môi trường MS có bổ sung mg/1 NAA cho khả tạo rễ lớn đạt 4,62 (rễ/chồi), rễ trắng đục, chiều dài rễ đạt 1,74 cm Mơi trường có bổ sung mg/1 NAA số rễ đạt thấp, đạt 2,88 rễ/chồi, nồng độ NAA cao, làm ức chế khả rễ NAA hoocmơn thuộc nhóm auxin, cần thiết việc tạo rễ nhiều loài Mặc dù vậy, nồng độ auxin cao gây ức chế khả hình thành, mức độ phân nhánh chiều dài rễ Ngồi ra, số cơng trình nghiên cứu khác lại cho mg/1 NAA nồng độ tốt để tạo rễ nồng độ ttên mg/1 gây ức chế khả tạo rễ Vì vậy, khả tạo rễ phát triển rễ phụ thuộc vào nguồn hoocmôn nội sinh giống Kết phù hợp với kết Nguyễn Văn Song tiến hành nghiên cứu in vitro lan Kim điệp mơi trường thích họp cho tạo rễ tốt 1,0 mg/1 NAA (5,93 rễ/chồi) [26] Vậy nồng độ NAA thích hợp 2,0 mg/1 NAA, tạo rễ có chiều dài lớn 1,74 cm số lượng rễ tốt 4,62 Hình 3.3: Hình ảnh rễ lan Đai châu đỏ phát triển in vừro Thí nghiệm Ảnh hưởng nồng độ than hoạt tính lên hình thái rễ giống lan Đai châu đỏ Để nghiên cứu ảnh hưởng than hoạt tính (THT) đến hình thái rễ, chúng tơi thử nghiệm nồng độ than hoạt tính từ g/1 đến g/1 Sau tháng nuôi cấy, tiến hành thống kê thu kết bảng 3.5 hình 3.4 Bảng 3.5: Ảnh hưởng than hoạt tính (THT) đến khả tạo rễ chồi lan Đai châu đỏ (sau 40 ngày) Công thức Chiêu dài rêTB Hình thái rễ Tỷ lệ tạo Sơ rê Og/ITHT rễ(%) 83,00 TB/chiếc 3,02 (cm) 1,38 Vừa, trắng ngà 0,5g/lTHT 100,00 3,11 2,25 Vừa, trắng lg/lTHT 100,00 5,01 4,56 Mập, tròn, trắng I,5g/1THT 100,00 3,24 2,08 Mảnh, trắng, g/1 THT 100,00 2,82 2,52 Gầy, dẹt Từ bảng kết cho thấy, thay đổi nồng độ than hoạt tính từ g/1 - 2g/l tỷ lệ chồi tạo rễ tăng từ 83% lên 100% Nồng độ than hoạt tính g/1 cho kết tốt nhất, số rễ trung bình đạt 5,01 chiếc/cây, chiều dài rễ vừa phải (4,56 cm), rễ mập ừòn; tăng dần nồng độ than lên 1,5 g/1, số rễ đạt 3,24 chiều dài rễ giảm 2,08 cm, rễ mảnh Càng tăng nồng độ THT lên số rễ giảm 2,82 (chiếc/cây), chiều dài rễ tăng 2,52 cm, hình thái rễ xấu, dẹt Vậy bổ sung vào môi trường nuôi cấy lan Đai châu đỏ lg/1 THT môi trường nuôi cấy tối ưu A CT1 B CT2 C CT3 D CT4 E CT5 Hinh 3.4: Hinh thai re lan Dai chau vol cac ndng THT khac 3.4 Kit qua cay lan Dai chau Gia the lan rat quan trong, lien quan den suot qua trinh sinh trucmg va phat trien cua cay Cac loai gia the lan duac biet den bao gom than cui, xa dira, g6, than, don, reu, rl beo, ducmg xi [3], nhung d6i voi cay lan nuoi cay mo thi gia the nao phu hop de cay co ty le song cao, sinh trucmg phat trien tot, de tra loi cho cau hoi chung toi da tien hanh thi nghiem nghien ciiu anh hucmg gia the cua ty le song va chat lugng cay ngoai vucm uorm cua gi6ng lan Dai chau duac thi hien a bang sau: Bang 3.6: Anh hiro’ng cua gia the d§n ty le sdng va chit lvong cay ngoai virfrn irom cua giong lan Dai chau Cong Gia thi thuc Ty le song (%) CT1 Bot xa dira 59,80 CT2 Than cui 49,80 CT3 Chit lirong cay - Xo dira La xanh nhat, khong re moi La xanh nhat, khong re moi, cac re cu den quat di La xanh, re moi 90,90 Qua số liệu bảng 3.6 thấy: Giá thể xơ dừa cho tỷ lệ sống cao 90,9% đồng thòi chất lượng tốt xanh bắt đầu rễ mói Vậy giá thể thích hợp để ttồng in vitro vườn ươm giá thể xơ dừa (CT3) Cây cao khoảng 4-5 cm, rễ phát triển đầy đủ chuyển vườn ươm Cây lấy khỏi ống nghiệm, rửa agar đặt chậu có bóng râm, độ ẩm cao, cường độ chiếu sáng thấp để thích nghi từ từ Sau khoảng tuần quen với điều kiện bên ngồi lúc tăng cường độ chiếu sáng hạ độ ẩm Giai đoạn thường bị chết nhiều khác biệt môi trường nhân tạo tự nhiên Đe hạn chế cần phải giữ ẩm tốt cho phun sương nhiều lần tưới thuốc rễ Trong điều kiện in vitro, nuôi dưỡng đày đủ dinh dưỡng, ánh sáng sống điều kiện vơ trùng với mục đích xây dựng quy trình nhân nhanh phục yụ cho việc cung cấp nguồn giống, không tạo in vỉtro mà phải tiếp tục chuyển vườn ươm - lượng sống xót phát triển tốt tiêu chuẩn thực để chứng tỏ hiệu việc nhân nhanh Kết khác với kết Hoàng Thị Giang cộng sự, 2010 [6]đã nghiên cứu nhân giống in vitro nuôi trồng lan hài quý p Hangianum pemur Gurss (Hài Hằng) thu thập Việt Nam, đưa vườn trồng giá thể dớn tốt ươm Theo tác giả Sompom Prasertsongskun, Rosemina Awaesuemae, năm 2006 nghiên cứu ảnh hưởng dừa: giá thể: bột xơ dừa, viên than nhỏ, bột xơ viên than nhỏ = 1:1, không giá thể đến tỉ lệ sống tăng chiều dài rễ việc nuôi cấy mô co— lồi lan Aerìdes houlletiana Rchb.ýyầ cơng bố tốt không cần sừ dụng giá thể cho tỷ lệ sống 84%, chiều dài rễ đạt 0,42 cm Ket khơng phù họp vói thực nghiệm chúng tôi, nguyên nhân nhiều yếu tố khác ? r A Cây đạt tiêu chuân vườn ươm B Cây lan sinh trưởng tôt giá thê Hình 3.5: Cây lan hồn chỉnh khỉ cho ngồi mơi trường tự nhiên 3 ? CHƯƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ * Kết luận Từ kết thí nghiệm trình bày trên, đưa số kết luận sau: - Môi trường nuôi cấy: MS + 20g/l saccrose + 7g/l agar - Mơi trường nhân nhanh thích hợp là: MS + mg/1 BAP+ lmg/1 NAA + 30g/l khoai tây + 10% nước dừa + 30g/l saccrose + 7g/l agar+ g/1 than hoạt tính (pH = 5.7) - Mơi trường rễ tốt là: MS + mg/1 NAA + 30g/l khoai tây + 10% nước dừa + 30g/l saccrose + 7g/l agar+ g/1 than hoạt tính (pH = 5.7) Sau tháng nuôi cấy điều kiện cường độ ánh sáng 2300 lux, ỉn vitro có chiều cao trung bình cm; số 5cm; số rễ 4cm Cây có rễ hồn chỉnh đưa vườn ươm với giá thể tốt xơ dừa, tỷ lệ sống sót đạt 90,9% Như vậy, chứng tơi nghiên cứu hồn thiện quy trình nhân nhanh nhằm bảo tồn nguồn gen giảm chi phí sản xuất giống lan, cho chất lượng cao vói số lượng lớn, giá thành rẻ cho thị trường công nghệ nuôi cấy mô tế bào * Kiến nghị Trên sở kết nghiên cứu thu được, bước đầu đề xuất ứng dụng kết thu nhân giống in vitro cho giống Đai châu đỏ đồng thời làm tiền đề cho nghiên cứu giống giống lan Đai châu khác Do thời gian nghiên cứu hạn chế nên chưa thể đánh giá đặc điểm sinh trưởng, đặc điểm chất lượng giống lan vườn ươm Vì chúng tơi mong muốn có thêm thời gian để thực phần thí nghiệm đánh giá tiêu sinh trưởng, phát triển tiêu chất lượng in vitro vườn TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng việt: [1] Tràn Văn Bảo (2001), “Kỹ thuật nuôi trồng phong lan” Nhà xuất trẻ, TP Hồ CHÍ Minh [2] Nguyễn Tiến Bân, (2007), Sách Đỏ Việt Nam, Phần Thực vật; NXB Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Hà Nội [3] Việt Chương, Nguyễn Văn Thái (2002), Kỹ thuật trồng kinh doanh phong lan, NXB TP.HCM [4] Đặng Văn Đông, Trần Duy Quý, Chu Thị Ngọc Mỹ (2009) “Điều tra phân bổ hoa lan Việt Nam kết lưu giữ, đánh giá số giống lan quý Gia Lâm - Hà Nội”, Tạp chí Khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam số 3(12)/2009: 96 - 101 [5] Võ Hà Giang, Ngô Xn Bình (2010), “Nghiên cứu nhân giống phong lan Đi Chồn (Rhychotylic retunsa [L] Blume) phương pháp nuôi cấy mơ tế bào Tạp chí nơng nghiệp PTNT số 5/2010: 25 30 [6] Hoàng Thị Giang, Nguyễn Quang Thạch, Mạch Hồng Thắm, Đỗ Thị Thu Hà, (2010) “Nghiên cứu nhân giống in vỉtro nuôi trồng giống lan hài quý ịHài Hằng) thu thập Việt Nam”, Tạp chí KH&PT 2010, tập 8, số 2: 194-201 [7] Phạm Hoàng Hổ, 1999, Cây cỏ Việt Nam, ni, Nhà xuất trẻ [8] Lê Văn Hồng (2008), Giáo trình nuôi cấy mô tế bào thực vật Đại học Đà Nằng [9] Tràn họp (1990), “Phong lan Việt Nam”, tập 1,2 - NXB khoa học Kỹ thuật, Hà Nội [10] Phạm Thị Kim Hạnh , Đoàn Duy Thanh, Hà Thị Thúy, Đỗ Năng Vịnh (2008), “Kết nghiên cứu nhân nhanh giống lan in vitro Ngọc Điểm Đai Châu (Rhynchostylỉc gỉgantean) Bỉoreactor” T p chí nơng nghiệp PTNT số 3/2008: 46 - 50 [11] Dương Đức Huyến (2007) Thực vật chí Việt Nam, - Họ lan (Orchỉdceae) - NXBKH Kỹ thuật [12] Phạm Thị Liên, Tràn Thúy Oanh, Lê Thanh Nhuận (2009), “Kết thu thập, đánh giá tuyển chọn sổ giống Phong lan Hoàng Thảo (Dendrobium) nhập nội miền Bẳc Việt Nam ”, Tạp chí khoa học Công nghệ Nông nghiệp Việt Nam số 3(12)/2009: 15 20 [13] Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Hữu Cường, Nguyễn Văn Giang (2010), “Ảnh hưởng giá thể trồng đến q trình sinh trưởng lan Hồng thảo Trúc Đen (Den Hancockỉi), Tạp chí khoa học PT 2010, tập 8, số 5: 757 - 764 [14] Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Thị Lý Anh (2013), “Nhân giống in vitro lồi lan địa (Dendrrobỉum nobile Lỉndl) ”, Tạp chí khoa học phát triển 7: 917- 925 [15] Nguyễn Công Nghiệp (2000), Trồng hoa lan, Nhà xuất trẻ TP Hồ Chí Minh [16] Nguyễn Quỳnh Trang, Vũ Thị Huệ, (2013), Nhân giống in vitro Lan phi điệp tím (Dendrobium anosum), Tạp chí KH&CN Lâm Nghiệp [17] Khuất Hữu Trung, Trần Duy Vượng, Phạm Thanh Vân (2007), “Nghiên cứu đa dạng di truyền tập đoàn lan Kiểm (Cymbidium swartz) Việt Nam kĩ thuật RAPD”, Tạp chí nơng nghiệp PTNT số 14/2007: 26 - 30 [18] Khuất Hữu Trung (2009), “Nghiên cứu đa dạng di truyền loài lan Hài Đốm (Paphiopedilum concloro Pfizer)bẳũ địa Việt Nam” Tạp chí khoa học cơng nghệ Việt Nam, số (12/2009): l ữ 11 [19] Nguyễn Văn Song (2011), Nhăn nhanh ỉn vitro lan Kim Điệp ịDendrobỉum chrysotoxum) - loài lan rừng có nguy tuyệt chủng, Tạp chí khoa học ĐH Huế 64:127-136 [20] Đào Thanh Vân Đặng Thị Tố Nga (2008),Giáo trình hoa, NXB Nơng nghiệp Hà Nội [21] Đỗ Năng Vịnh, (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông Nghiệp: 16 - 38 ... (Rhynchostylis gigantea) công nghệ nuôi cấy mô tế bào? ?? Muc tiêu đề tài Nhân nhanh thành công giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea) công nghệ nuôi cấy mô tế bào Ý nghĩa 3.1 Ý nghĩa khoa học Kết nghiên. .. nghiên cứu xây dựng phát triển quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ Giống lan Đai châu đỏ có tên khoa học: (Rhynchostylỉs gigantea), thuộc họ: Phong lan (Orchidaceac) Lan Đai châu đỏ có... tính trung thực khóa luận, tơi xin cam đoan: Khóa luận ? ?Bước đầu nghiên cứu quy trình nhân nhanh giống lan Đai châu đỏ (Rhynchostylis gigantea)? ?? cơng trình nghiên cứu cá nhân tơi, thực hướng