BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI i ì "ểtaểkaể* NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CEPHALEXIN TRONG NƯỚC TIỂU NHẰM ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA VIÊN NANG CEPHALEXN 500mg SẢN XUẤT TRONG NƯỚC (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1998 - 2003) : PGS. TS. TRẦN TỬ AN NGƯ ỜI HƯỚNG DẪN Th.s. NGUYỄN THỊ KIỂU ANH : B ộ MÔN HOÁ PHÂN TÍCH N ƠI THỰC HIỆN THỜI GIAN THỰC HIÊN : 03 - 06/2003 HÀ NỘI - 06/2003 LÒI CẢM ON Trong suốt trình thực khoá luận tố t nghiệp em nhận giúp đõ quý báu vả chân tình thầy GÔ, gia đình bè bạn. Qua em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tối: PG&TỔ. Trần Tử An Th.ô. Nguyễn Thị Kiéu Anh tận tình hướng dẫn em hoàn thầnh luận văn này. Em xin bảỵ tỏ lòng cảm ơn sâu sắc tối thầy cô BỘ MÔN HOÁ PHÂN TÍCH tận tình giúp đõ tạo điểu kiện thuận lợi cho em trình thực khoá luận tốt nghiệp nầỵ. Em xin chân thảnh cảm ơn! Hà Nội, ngảỵ 25 tháng năm 2003 ổinh viên NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THAO MỤC LỤC Trang Đặt vấn đề PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. Đại cương cephalexin 1.1.1. Công thức tính chất lý hoá . 1.1.2. Tính chất dược lý dược động học . 1.1.3. Chỉ định . 1.1.4. Chống định . 1.1.5. Tác dụng không mong muốn 1.1.6. Liều dùng 1.1.7. Dạng bào chế . 1.1.8. Các phương pháp định lượng 1.2. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.2.1. Phân loại phương pháp sắc k ý 1.2.2. Đặc điểm phương pháp 1.2.3. Nguyên tắc phương pháp . 1.2.4. Một số thông số đặc trưng HPLC 1.2.5. Cách tính kết phương pháp HPLC 10 1.3. Sinh khả dụng thuốc 10 1.3.1. Khái niệm sinh khả dụng 10 1.3.2. Cách đánh giá sinh khả dụng in vivo . 11 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1. Nguyên yật liệu phương pháp nghiên cứu .13 2.1.1. Nguyên vật liệu hoá chất .13 2.1.2. Phương pháp thực nghiệm . 14 2.2. Kết thực nghiệm nhận x ét 16 2.2.1. Khảo sát lựa chọn điều kiện sắc ký 16 2.2.2. Xây dựng phương pháp định lượng cephalexin nước tiểu .20 2.2.3. Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin 500mg sản xuất nước 25 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUÂT 3.1. Kết luận 32 3.2. Đề xuất 33 Tài liệu tham khảo 34 CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT A Diện tích pic ACN Acetonitril AUC Diện tích đường cong HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao IS Chất chuẩn nội MeOH Methanol R Tỷ số diện tích pic R-CEF/IS Tỷ SỐ diện tích pic cephalexin chất chuẩn nội SK Sinh khả dụng TĐSH Tương đương sinh học XNDF TW1 Xí nghiệp dược phẩm trung ương ĐẶT VẤN ĐỂ Trong năm trở lại đây, song song với phát triển nhiều ngành khoa học khác, ngành công nghệ dược phẩm thu hút quan tâm ý đầu tư nhiều nước, có Việt Nam. Thị trường dược phẩm trở nên phong phú vô đa dạng với đời nhiều chế phẩm thuốc mới, nhiều tên biệt dược khác nhau. Cephalexin kháng sinh cephalosporin hệ 1, hấp thu gần hoàn toàn qua đường tiêu hoá, đào thải qua đường niệu dạng không biến đổi. Ở Việt Nam, cephalexin kháng sinh đưa vào sản xuất phổ biến, với giá thành rẻ, hiệu điều trị tốt. Tuy nhiên tâm lý người tiêu dùng đánh giá thuốc ngoại tốt thuốc sản xuất nước giá thành đắt hiệu điều trị hai thuốc tương đương. Hiện chưa có tài liệu nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin sản xuất nước thực đề tài “Xây dựng phương pháp định lượng cephalexin nước tiểu nhầm đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin 500mg” với mục tiêu : - Xây dựng chương trình định lượng cephalexin nước tiểu kỹ thuật HPLC. - Áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng cephalexin mẫu nước tiểu người sau uống viên nang cephalexin 500mg nhằm đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin 500mg sản xuất nước (so sánh với viên đối chiếu nước ngoài). PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1. ĐẠI CƯƠNG VỀ CEPHALEXIN 1.1.1. Công thức tính chất lý hoá [3], [9], [20] - CTCT: COOH - CTPT: C16H17N 30 4S . H20. - Phân tử lượng: 365,4. - Tên khoa học: acid 7-a-D phenylglycylamino-3 methyl -3- cephem- 4carboxylic monohydrat. - Tính chất lý hoá: Bột kết tinh trắng hay gần trắng. Khó hoà tan nước. Thực tế không tan cloroform, ethanol 96% ether. 1.1.2. Tính chất dược lý dược động học [4], [8], [14], [15] Cephalexin kháng sinh nhóm cephalosporin hệ 1, kháng sinh uống có hoạt tính lên nhiều loại vi khuẩn gram dương gram âm, có tác dụng diệt khuẩn ức chế tổng hợp thành tế bào vi khuẩn. Cephalexin bền vững với penicillinase staphylococcus có tác dụng với chủng S. aureus tiết penicillinase kháng penicillin (hay ampicillin). Cephalexin có hoạt tính lên đa số E. coli đề kháng ampicillin. Cephalexin hấp thu gần hoàn toàn đường tiêu hoá, đạt nồng độ tối đa máu sau uống khoảng giờ. Thức ăn làm chậm khả hấp thu cephalexin tổng lượng thuốc hấp thu không thay đổi. Thuốc liên kết protein huyết tương 15%. Thời gian bán thải 0,5 - 1,2 giờ, dài trẻ sơ sinh tăng chức thận giảm. Cephalexin không bị chuyển hoá, thuốc đào thải với nồng độ cao nước tiểu, sau uống khoảng 80% liều dùng thải trừ qua nước tiểu dạng không biến đổi, với liều 500mg nồng độ cephalexin nước tiểu cao lmg/lml. Cephalexin đào thải qua lọc máu thẩm phân màng bụng (20%-50%). 1.1.3. Chỉ định [4], [8] Cephalexin định điều trị nhiễm khuẩn vi khuẩn nhạy cảm, không định điều trị nhiễm khuẩn nặng : - Viêm đường tiết niệu: viêm thận - bể thận cấp mãn, viêm bàng quang, viêm tuyến tiền liệt. Điều trị dự phòng nhiễm khuẩn đường niệu tái phát. - Nhiễm khuẩn hô hấp: viêm phế quản cấp mãn, giãn phế quản bội nhiễm. - Nhiễm khuẩn tai mũi họng: viêm tai giữa, viêm xoang, viêm amidan, viêm họng. - Nhiễm khuẩn sản phụ khoa. - Nhiễm khuẩn da, mô mềm xương. - Bệnh lậu (khi penicillin không phù hợp). - Trong nha khoa: điều trị dự phòng thay penicillin cho người bệnh mắc bệnh tim phải điều trị răng. 1.1.4. Chống định [4] - Dị ứng với kháng sinh khóm cephalosporin. - Bệnh nhân có tiền sử choáng phản vệ penicillin phản ứng trầm trọng khác qua trung gian globulin miễn dich IgE. 1.1.5. Tác dụng không mong muốn [4], [8] - Trên tiêu hoá: rối loạn tiêu hoá buồn nôn, nôn, tiêu chảy. - Toàn thân: đau đầu, chóng mặt, phản ứng phản vệ, mệt mỏi. - Phản ứng mẫn da: ngứa, mề đay, phát ban. - Máu: giảm bạch cầu trung tính có hồi phục. - Gan: tăng transaminase có hồi phục. 1.1.6. Liều dùng [8] - Người lớn trẻ em 12 tuổi: 500mg/lần X 31ần/ngày. - Trẻ em từ 5-12 tuổi: 250mg/lần X 31ần/ngày. - Trẻ em từ 1-5 tuổi: 125mg/lần X31ần/ngày. - Trẻ em tuổi: 125mg/lần X21ần/ngày. Lưu ý [4]: thời gian điều trị nên kéo dài từ 7-10 ngày, nhiễm khuẩn đường niệu phức tạp, tái phát, mạn tính, nên điền trị tuần (lg X lần ngày). Cũng kháng sinh đào thải chủ yếu qua thận, cephalexin có tích tụ thể chức thận giảm nửa mức bình thường, nên giảm liều tối đa cho phù hợp với bệnh nhân này. Ở người cao tuổi cần đánh giá mức độ suy thận. Khi phối hợp với thuốc khác độc với thận aminoglycosid hay thuốc lợi tiểu mạnh, liều cao cephalexin ảnh hưởng xấu tới chức thận. 1.1.7. Dạng bào chế [4], [8] - Viên nang: 250mg, 500mg. - Viên nén: 250mg, 500mg, lg. - Nhũ dịch: 125mg/5ml, 250mg/ml. - Siro: 250mg/ml, 500mg/ml. - Thuốc giọt dùng cho trẻ em: 125mg/l,25ml. - Thuốc bột 250mg: gói 3g. * Biệt dược [5], [14]: Novo-lexin, Opxil, Ceporex, sporidex, Ospexin . 1.1.8. Các phương pháp định lượng Ll.8.1. Phương pháp đo ỉod [3], [13], [18] định lượng cephalexin chế phẩm. Oxy hoá dung dịch cephalexin dung dịch iod 0,02N môi trường natri hydroxyd, định lượng iod thừa dung dịch natri thiosulfat 0,02N với thị dung dịch hồ tinh bột (CT). Song song làm mẫu chuẩn điều kiện. Hàm lượng cephalexin mẫu thử tính theo công thức: VT Cị = ----- XCc vc Trong đó: Cp nồng độ cephalexin mẫu thử (mg/ml) Cclà nồng độ cephalexin mẫu chuẩn (mg/ml) v x thể tích dung dịch iod 0,02N dùng cho dung dịch thử (ml) v c thể tích dung dịch iod 0,02N dùng cho dung dịch chuẩn (ml) 1.1.8.2. Phương pháp đo quang [3]: định lượng cephalexin nguyên liệu chế phẩm. Dung dịch cephalexin nước có cực đại hấp thụ 262 nm. Đo độ hấp thụ dung dịch cephalexin thử bước sóng 262 nm. Tính hàm lượng cephalexin mẫu thử cách so sánh với chuẩn. Hàm lượng cephalexin mẫu thử tính theo công thức sau: Dt Cp = — — XCc Dc Trong đó: DTlà mật độ quang dung dịch thử Dc mật độ quang dung dịch chuẩn 1.1.8.3. Phương pháp vi sinh vật [3] - Chủng thị: Staphylococcus aureus ATCC 19737. - Phương pháp định lượng: phương pháp khuyếch tán (phiến kính phẳng). 1.1.8.4. Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao Trong HPLC, sắc ký phân bố pha đảo với cột c 8, C18 hay phenyl pha động dung môi hữu methanol, acetonitril . phương pháp sử dụng phổ biến để định lượng cephalexin nguyên liệu chế phẩm dịch ■=> Từ kết điều kiện sắc ký chọn là: - Pha tĩnh: Cột phenyl 5|0.m - 3,9 X 150 mm Waters®' - Pha động: ACN : MeOH : NaCH3COO 0,1 M (4,5 : 2,5 : 93) + 0,3% triethylamin (pH = 6,4). ■ / - Chất chuẩn nội: theophyllin. - Lưu lượng dòng: 1,00 ml/phút - Bước sóng: 261 nm - Thể tích mẫu tiêm: 50 mcl 2.2.2. Xây dựng phương pháp định lượng cephalexin nước tiểu. < Khảo sát khoảng tuyến tinh. Chuẩn bị dãy dung dịch hỗn hợp cephalexin IS mẫu trắng với nồng độ cephalexin 0,5 4- 20mcg/ml IS 10mcg/ml. Tiến hành sắc ký. Kết thu diện tích pic cephalexin IS, từ tính đươc tỷ số diện tích pic cephalexin theophyllin (RCEP/Is)Bảng 2.2: Kết khảo sát độ tuyến tính. C(mcg/ml) A-IS A- c e p , R c e p / is 0,5 28909 588687 0,0491 69748 559656 0,1246 143712 596308 0,2524 224044 586134 0,3822 293267 570412 0,5141 12 445800 581708 0,7664 16 585777 571538 1,0249 20 747024 586177 1,2744 20 Đường chuẩn cephalexin nước tiểu R C(mcg/ml) Hình 2.1: Đồ thị biểu diễn mối tương quan nồng độ cephalexin tỷ số diện tích pic R Phương trình hồi qui: R = 0,0252.c + 0,0158 Trong đó: R tỷ số diện tích pic cephalexin IS c nồng độ cephalexin (mcg/ml) Hệ số tương quan hồi qui : r = 0,9996 Từ suy ra: R - 0,0158 0,0252 Từ kết cho thấy khoảng nồng độ khảo sát có tương quan tuyến tính nồng độ cephalexin với tỷ số diện tích pic cephalexin IS, với hệ số tương quan hồi quy r = 0,9996. < Xác định tính xác phương pháp. Tiến hành chạy sắc ký với mẫu nước tiểu có chứa cephalexin nồng độ mcg/ml, 12 mcg/ml, 16 mcg/ml IS 10 mcg/ml. Kết thu biểu thi diện tích pic, từ tính tỷ số diện tích pic RCEp/is 21 Bảng 2.3 : Kết xác định tính xác phương pháp (trong ngày) c 4(mcg/ml) 12(mcg/ml) 16 (mcg/ml) n Acef Ais R-CEF/IS Acef Ais RfKF/IS Acef Ais R c e f / is 1. 145904 556886 0,2620 447712 582579 0,7685 581980 578049 1,0068 2. 141471 536281 0,2638 448714 591425 0,7587 596486 587671 1,0150 3. 147735 556022 2,2657 444457 579022 0,7676 589302 582948 1,0109 4. 143748 532154 0,2702 450258 592055 0,7605 531385 574605 1,0118 5. 137794 518803 0,2656 439660 578576 0,7599 596327 589256 1,0120 6. 138079 527422 0,2618 440720 574902 0,7666 593491 584030 1,0162 TB 0,2648 0,7636 1,0121 Sd 0,0031 0,0044 0,0033 RSD(%) 1,175 0,575 0,327 Tiến hành xác định tính xác phương pháp ngày phân tích khác, kết thu sau: Bảng 2.4: Kết xác định tính xác phương pháp (ngày phân tích khác). TB - RSD(%) 4(mcg/ml) 12(mcg/ml) 16(mcg/ml) 0,2615 0,7591 1,0121 0,0028 0,0035 0,0036 1,054 0,467 0,361 Từ bảng 2.3 2.4 cho thấy phương pháp xây dựng có độ xác đảm bảo với n=6 , cho phép ứng dụng để định lượng cephalexin nước tiểu. < Tính phương pháp: xác định phương pháp thêm - Mẫu thử: Mẫu nước tiểu người sau uống viên nang cephalexin 500 mg 22 thêm IS lmg/ml, sau pha loãng 100 lần. - Mẫu chuẩn: Dung dịch cephalexin chuẩn mẫu trắng với nồng độ 0,5mg/ml lmg/ml, thêm IS lmg/ml, sau pha loãng 100 lần. - Mẫu thử + chuẩn: Mẫu thử + cephalexin chuẩn 0,5mg/ml, mẫu thử + cephalexin chuẩn lmg/ml, thêm IS lmg/ml, pha loãng 100 lần. Tiến hành sắc ký với điều kiện sắc ký chọn, kết thu biểu thị diện tích pic, từ tính tỷ số diện tích pic cephalexin IS ( R cef/is )- Bảng 2.5: Kết xác định tính phương pháp: mẫu thử n Mẫu thử c thử(mcg/ml) 5,24 5,54 5,33 5,51 5,08 5,23 Cchuẩn(mcg/ml) 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 TB ^-'thử+clniẩn(mcg/lĩll) % tìm lại 10,23 10,61 10,36 10,45 10,06 10,24 99,81 101,32 100,54 98,76 99,65 100,23 100,23 Bảng 2.6: Kết xác định tính phương pháp: mẫu thử n c thử(mcg/ml) 5,34 5,75 5,35 5,54 5,44 5,60 Mẫu thử Cchuẩn(mcg/ml) Cthừ+ duiẩn(mcg/nil) 10,00 15,36 10,00 16,03 10,00 15,17 10,00 10,00 10,00 TB 23 15,70 15,68 16,56 % tìm lại 100,15 102,80 99,35 101,55 102,35 99,60 100,97 Như % cephalexin chuẩn tìm lại 100,05% (mẫu thử 1) 100,97% (mẫu thử 2), số mẫu phân tích n = cho thấy phương pháp xây dựng có tính đảm bảo, cho phép định lượng cephalexin nước tiểu. Hình 2.3: Sắc đồ mẫu chuẩn Hình 2.4.: Sắc đồ mẫu thử => Kết luận: vói kết thực nghiệm đạt được, chứng tỏ phương pháp mà đề xuất có tính đảm bảo, tính xác tốt tuyến tính 24 chặt chẽ tỷ số diện tích pic cephalexin theophyllin với nồng độ cephalexin khoảng khảo sát, cho phép áp dụng để định lượng cephalexin nước tiểu. 2.2.3. Bước đầu đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin 500mg sản xuất nước (so sánh với viên đối chiếu nước ngoài). 2.2.3.1. Độ đồng hàm lượng. Tiến hành thử 10 nang cephalexin riêng rẽ lấy bất kỳ, xác định hàm lượng cephalexin nang phương pháp đo quang. Dung dịch cephalexin nước có cực đại hấp thụ 262nm. Song song tiến hành với 10 nang Ospexin 500mg. Kết qủa thu được trình bày bảng 2.7. Bảng 2.7: Kết qủa xác định độ đồng hàm lượng viên nang cephalexin 500mg STT Cephalexin 500mg % so với nhãn Ospexin 500mg % so với nhãn 481,11 96,2 489,14 95,8 471,05 94,2 477,47 95,5 475,74 95,1 495,24 93,0 473,25 94,6 478,86 95,8 468,96 93,8 502,07 100,4 480,78 96,2 494,42 98,9 467,43 93,5 505,66 101,1 465,18 93,0 97,7 488,30 466,73 93,3 507,11 101,4 10 469,81 94,0 99,7 498,32 TB 94,4 97,9 Từ bảng .7 cho thấy hàm lượng cephalexin chế phẩm thử có sai khác so với chế phẩm đối chiếu. Và nguyên nhân dẫn đến sai khác giá trị AUC viên nang cephalexin đem thử so với giá trị AUC viên đối chứng. 25 2.2.3.2. Đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin 500 mg XNDF TW1, so sánh với viên đôi chiếu nước (Ospexỉn 500mg) Úng dụng phương pháp xây dựng để định lượng cephalexin mẫu nước tiểu người sau uống viên nang cephalexin 500mg nhằm đánh giá sinh khả dụng thuốc thông qua thử nghiệm người tình nguyện. < Đôi tượng thử Chọn người tình nguyện khoẻ mạnh (3 nam, nữ). + Không mắc bệnh gan- thận. + Tuổi: 23 ± 3. + Chiều cao: 160 ± 15 cm. + Cân nặng: 50 ± 15 kg. + Không có tiền sử dị ứng với kháng sinh nhóm bêta- lactam. < Phương pháp đánh giá Thuốc thử thành đợt, đợt người tình nguyện chia làm nhóm , nhóm người. Bảng 2.8: Hai giai đoạn thử thuốc CA THE A, B, c D, E,F Giai đoạn Cephalexin Ospexin Giai đoạn Ospexin Cephalexin Mỗi cá thể uống liều đơn viên nang cephalexin 500mg Ospexin 500mg với 240ml nước. 0,99). Mẫu thực thòi điểm lgiờ, 2,5 giờ, giờ, giờ, thêm IS pha loãng 100 lần. Mẫu thực thời điểm giờ, thêm IS pha loãng 50 lần, 12 10 lần lần mẫu thực 24 giờ. Kết phân tích biểu thị diện tích pic, từ tính tỷ số diện tích pic R Cef/is v nồng độ cephalexin mẫu thực thời điểm lấy mẫu. Kết định lượng cephalexin mẫu thực trình bày bảng 2.10 . 11. 27 Bảng 2.10: Kết qủa định lượng cephalexin mẫu thực (giai đoạn 1) T(giờ) Viên nang Cephalexin Viên nang Ospexin (mcg/ml) (mcg/ml) A B c D E F 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 520,47 421,08 632,33 337,64 633,18 826,62 2,5 1002,47 1063,68 1112,33 1276,43 1038,18 1126,02 833,01 828,70 801,31 809,89 708,07 899,60 552,19 569,42 236,68 476,43 352,69 422,05 302,81 214,35 90,42 105,08 96,52 69,58 12 7,71 12,02 18,21 39,10 14,22 16,08 24 0,00 0,00 1,16 4,35 3,64 3,01 Bảng 2.11: Kết qủa định lượng cephalexin mẫu thực (giai đoạn 2) Viên nang Ospexin Viên nang Cephalexin (mcg/ml) (mcg/ml) T(giờ) A B c D E F 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 615,61 711,26 850,82 772,55 523,21 787,93 2,5 1055,82 1013,77 1150,89 1236,05 1235,21 1087,81 859,76 837,32 819,88 740,23 621,42 852,18 443,98 316,98 301,45 460,38 444,42 404,32 206,33 118,96 122,28 309,29 163,38 49,05 12 32,10 20,73 17,55 15,33 38,45 7,24 24 3,45 3,04 3,25 5,40 2,38 1,06 28 c Viên nang cephalexin 500mg Hình 2.5: Đường cong AUC cephalexin nước tiểu Hình 2.6: Đường cong AUC Ospexin nước tiểu 29 Từ kết bảng 2.10 2.11, với trợ giúp chương trình WinNorlin, thông số dược động học cephalexin nước tiểu xác định là: Bảng 2.12: Các thông sô dược động học Cephalexin Ospexin nước tiểu. Giai đoạn 1. CÁ THỂ AUC (mcg.h.ml1) Tmax (giờ) Cmax (mcg/ml) Ti/2 (giờ) A,z A 69015569,49 2,50 1002,47 1,2130 0,5714 B 67553535,24 2,50 1063,68 1,2884 0,5380 c 60659300,91 2,50 1112,33 1,4960 0,4633 D 73694159,78 2,50 1276,43 1,8309 0,3768 E 63467622,51 2,50 1038,18 1,3893 0,4989 F 68053722,04 2,50 1126,02 1,3259 0,5228 CÁ THỂ AUC (mcg.h.ml"1) T Ti/2 (giờ) (giờ) Cmax (mcg/ml) A 70971653,32 2,50 10585,80 1,6924 0,4096 B 65994442,50 2,50 1013,77 1,5446 0,4488 c 67551181,20 2,50 1150,89 1,4932 0,4642 D 75365711,42 2,50 1236,05 1,4452 0,4796 E 66980710,66 2,50 1235,21 1,9419 0,3569 F 63828656,19 2,50 1087,81 1,551 0,6001 Giai đoạn m ax 30 Từ kết bảng 2.12 cho thấy chế phẩm thử (viên nang cephalexin 500mg) có thông số AUC, Tmax, Cmax gần tương đương với chế phẩm đối chiếu (viên nang Ospexin 500mg) 31 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 3.1. Kết luận Kết thúc thời gian làm khoá luận, đề tài thu số kết sau: 3.1.1. Ý nghĩa khoa học * Vê nhận thức Đã biết cách tra cứu tài liệu, kê hoạch hoá trình thực nghiệm, xây dựng quy trình thực nghiệm phân tích thuốc dịch sinh học, xử lý số liệu, tiến hành phân tích nhận định kết . * Về kỹ Thực tương đối thành thạo sử dụng số máy móc, thiết bị phân tích máy sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), máy quang phổ UVVIS, số thiết bị kèm theo. 3.2.1. Ý nghĩa thực tê 1. Xây dựng chương trình sắc ký lỏng hiệu cao nhằm định lượng cephalexin nước tiểu người. Khảo sát cột, với hệ pha động chất chuẩn nội khác nhau, lựa chọn điều kiện sắc ký thích hợp với tính tốt (khả tìm lại trung bình phương pháp xây dựng cephalexin chuẩn nước tiểu 100,60%), tính xác đảm bảo (RSD nồng độ 4- 12- 16 mcg/ml < 1,5) có tương quan tuyến tính chặt chẽ diện tích pic nồng độ cephalexin khoảng từ 0,5 - 20mcg/ml (r2 > 0,99). Theo dõi độ ổn định cephalexin mẫu thử cho thấy sau thời gian 30 ngày bảo quản nhiệt độ - 30°c nồng độ cephalexin ổn định. 2. Đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin 500mg sản xuất nước thông qua thử nghiệm người tình nguyện. Kết thu cho thấy viên nang cephalexin 500mg sản xuất nước (XNDF TW1) có 32 thông số AUC, Cmax, Tmax tương đương với chế phẩm đối chiếu Áo (viên nang Ospexin 500mg). 3. Đây mô hình phương pháp đánh giá sinh khả dụng thuốc chế phẩm đào thải chủ yếu qua đường niệu. 3.2. Đề xuất Trong thời gian thực nghiệm vừa qua, tiến hành đánh giá sinh khả dụng viên nang cephalexin 500mg sản xuất nước, nhiên đánh giá bước đầu, để kết luận cách xác sinh khả dụng viên nang cephalexin sản xuất nước, đưa số đề xuất sau: 1. Tăng thêm cá thể tình nguyện để đề tài mang tính khách quan hơn. 2. Xây dựng mối tương quan nồng độ cephalexin nước tiểu với nồng độ cephalexin huyết tương để việc đánh giá tương đương sinh học thuốc thuận lợi dễ dàng hơn. 33 TÀI LIÊU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt 1. Bộ môn Dược lâm sàng, Trường đại học dược Hà Nội (2001), Dược lâm sàng, Nhà xuât Y học, tr. —18. 2. Bộ môn Hoá phân tích, Trường đại học dược Hà Nội (2002), Hoá phân tích II, Trung tâm thông tin thư viện trường đại học Dược Hà Nội, tr. 55 - 84. 3. Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam III, Nhà xuất Y học, tr. 52 - 54, PL 10.10, tr. PL194 - 199. 4. Bộ Y tế (2002), Dược thư quốc gia, Nhà xuất Y học, tr. 120 - 122. 5. Tào Duy Cần (1999), Tra cứu sử dụng thuốc biệt dược nước ngoài, I, Nhà xuất khoa học kỹ thuật, tr. 603 - 604. 6. Phạm Luận (1989), Cơ sở lý thuyết sắc k ý lỏng cao áp - HPLC, Trường đại học Tổng hợp Hà Nội, tr. 36 - 58. Võ Xuân Minh (1999), Đại cương sinh dược học, Trung tâm thông tin ện trường đại học Dược Hà Nội, tr. -1 . 8. Vidal 2002, tr. 119-122. Tài liệu tiếng nước 9. British Pharmacopoeia (2001), pp. 327 - 329, 1919 - 1920, A141 - 145. 10. European o f Pharmacopoeia (1997), pp. 558. 11. Emm, T. A.; Leslie, J.; Chai, M.; Lesko, L. J.; Perkal, M. B. (1988), "High - performance liquid chromatographic assay of cephalexin in serum and urine", Journal o f Chromatographic Science, No. 427, Elsevier, pp. 162 - 165. 12. Huang, H. - s.; Wu, J. - R.; Chen, M. - L. (1991), " Rversed - phase high - performance liquid chromatography of amphoteric p - lactam antibiotics: effects of columns, ion - pairing regeants and mobile phase pH on their retention times", Journal o f Chromatographic Science, No. 564, pp. 195 203. 34 13. Indian Pharmacopoeia (1996), pp. 152 - 155. 14. James E.F Reynolds (1982), Martindale, The Extra Pharmacopoeia, The Pharmaceutical press, pp. 1123-1125. 15. Kathleen Parfitt et al (1999), Martindale, The complete drug reference, Thirty - second edition, The Pharmaceutical press, pp. 178. 16. Liang, D.; Chow, D.; White, c. (1994), "High - performance liquid chromatographic assay of cephalexin in rat tissue", Journal o f Chromatography B, No. 656, pp. 460 - 465. 17. Adorjan Aszalos (1986), Modem analysis o f antibiotics, Marcel Dekker Inc., pp. 160 - 162. 18. Pharmacopoeia o f the people’s republic o f China (1997), pp. 99 - 100. 19. Susan Budavari et al (1996), The Merck index, Merck & CO., INC., pp. 2021. 20. The United States Pharmacopoeia X X IV (2000), pp. 360 - 363. 35 [...]... pic cephalexin và theophyllin với nồng độ cephalexin trong khoảng khảo sát, cho phép áp dụng để định lượng cephalexin trong nước tiểu 2.2.3 Bước đầu đánh giá sinh khả dụng của viên nang cephalexin 500mg sản xuất trong nước (so sánh với viên đối chiếu của nước ngoài) 2.2.3.1 Độ đồng đều hàm lượng Tiến hành thử trên 10 nang cephalexin riêng rẽ được lấy bất kỳ, xác định hàm lượng cephalexin trong mỗi nang. .. hàm lượng cephalexin trong chế phẩm thử có sự sai khác so với chế phẩm đối chiếu Và đây là một trong những nguyên nhân dẫn đến sự sai khác giá trị AUC của viên nang cephalexin đem thử so với giá trị AUC của viên đối chứng 25 2.2.3.2 Đánh giá sinh khả dụng của viên nang cephalexin 500 mg của XNDF TW1, so sánh với viên đôi chiếu của nước ngoài (Ospexỉn 500mg) Úng dụng phương pháp đã xây dựng để định lượng. .. đầu đánh giá sính khả dụng của viên nang cephalexin 500mg sản xuất trong nước < Xác định độ đồng đều hàm lượng Tiến hành thử trên 10 nang cephalexin riêng rẽ được lấy bất kỳ, xác định hàm lượng cephalexin trong mỗi nang bằng phương pháp đo quang Dung dịch cephalexin trong nước có cực đại hấp thụ ở 262nm Với mỗi nang: cân chính xác một lượng bột thuốc đã nghiền nhỏ tương ứng với khoảng 0,250g cephalexin, ... 5,40 2,38 1,06 28 c Viên nang cephalexin 500mg Hình 2.5: Đường cong AUC của cephalexin trong nước tiểu Hình 2.6: Đường cong AUC của Ospexin trong nước tiểu 29 Từ kết quả bảng 2.10 và 2.11, với sự trợ giúp của chương trình WinNorlin, các thông số dược động học của cephalexin trong nước tiểu được xác định là: Bảng 2.12: Các thông sô dược động học của Cephalexin và Ospexin trong nước tiểu Giai đoạn 1 CÁ... trưng định lượng của chất Khi so sánh chiều cao hay diện tích pic của mẫu thử và mẫu chuẩn trong cùng điều kiện phân tích ta tính được hàm lượng hoạt chất trong mẫu thử 1.2.5 Cách tính kết quả trong phương pháp HPLC Để tính kết quả trong phương pháp HPLC, người ta có thể dựa vào: - Phương pháp đường chuẩn - Phương pháp thêm - Phương pháp so sánh Đối với việc xác định nồng độ hoạt chất trong dịch sinh. .. tác dụng lâm sàng một cách thích hợp Trong đề tài này, chúng tôi tiến hành đánh giá SKD tương đối của viên nang cephalexin 500mg sản xuất trong nước thông qua việc xác định lượng thuốc được bài tiết trong nước tiểu theo thời gian (so sánh với viên đối chiếu của nước ngoài) SKD tương đối = AUC*ử X AUCđ i ố 100(%) C|-|j£'u Hai thuốc được coi là tương đương sinh học với nhau nếu chế phẩm thử có... lượng cephalexin trong mẫu nước tiểu người sau khi uống viên nang cephalexin 500mg nhằm đánh giá sinh khả dụng của thuốc thông qua thử nghiệm trên người tình nguyện < Đôi tượng thử Chọn 6 người tình nguyện khoẻ mạnh (3 nam, 3 nữ) + Không mắc các bệnh về gan- thận + Tuổi: 23 ± 3 + Chiều cao: 160 ± 15 cm + Cân nặng: 50 ± 15 kg + Không có tiền sử dị ứng với kháng sinh nhóm bêta- lactam < Phương pháp đánh giá. .. nội sử dụng phải tách hẳn với cephalexin và tạp chất trong nước tiểu, bền vững và phát hiện dễ dàng ở điều kiện sắc ký khảo sát 2.1.2.2 Xây dựng phương pháp định lượng cephalexin trong nước tiểu < Khảo sát khoảng tuyến tính Chủ động cho cephalexin vào mẫu trắng (nước tiểu không có cephalexin) để được các nồng độ 0,5 - 2 - 4 - 6 - 8 - 12 - 16 - 20mcg/ml Sau đó, cho vào các ống nghiệm cùng một lượng chất... hình thang Khi đánh giá SKD, phải xem xét đồng thời các yếu tố trên 1.3.2 Cách đánh giá SKD in vivo [7] Sinh khả dụng in vivo đánh giá giai đoạn hấp thu dược chất từ chế phẩm bào chế Hiện nay, nhiều nước trên thế giới đã có các tiểu ban chuyên về đánh giá SKD và TĐSH và đã đưa ra các quy định hoặc các hướng dẫn về việc đánh giá SKD và TĐSH của thuốc: - Thử in vivo ở người bằng cách xác định sự biến thiên... chuẩn với nồng độ khác nhau vào dịch sinh vật Xử lý mẫu và đem chạy sắc ký 1.3 SINH KHẢ DỤNG CỦA THUỐC 1.3.1 Khái niệm về sinh khả dụng [1], [7] Sinh khả dụng là khái niệm đặc trưng cho quá trình sinh dược học của dạng thuốc, nó phản ánh mức độ và tốc độ hấp thu của dược chất từ dạng bào chế vào hệ tuần hoàn và đưa đến nơi có tác dụng Trong đó, mức độ hấp thu được đánh giá bởi diện tích dưới đường cong . nghiên cứu đánh giá sinh khả dụng của viên nang cephalexin sản xuất trong nước vì vậy chúng tôi thực hiện đề tài “Xây dựng phương pháp định lượng cephalexin trong nước tiểu nhầm đánh giá sinh. "ểtaểkaể* NGUYỄN THỊ PHƯƠNG THẢO NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG CEPHALEXIN TRONG NƯỚC TIỂU NHẰM ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG CỦA VIÊN NANG CEPHALEXN 500mg SẢN XUẤT TRONG NƯỚC (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP. lượng cephalexin trong mẫu nước tiểu người sau khi uống viên nang cephalexin 500mg nhằm đánh giá sinh khả dụng của viên nang cephalexin 500mg sản xuất trong nước (so sánh với viên đối chiếu của