BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGUYỄN THỊ THƠ XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG SELEN TRONG VIÊN PRUCELL VÀ CIGELTON BANG PHƯƠNG PHÁP ĐO PHỔ HẤP THỤ NGUYÊN TỬ (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược SỸ KHOÁ 1998- 2003) Người hướng dẫn: PGS. TSKH Lê Thành Phước Th.s Bùi Thị Hoà Noi thực hiện: Bộ môn Vô - Hoá lý Đại học Dược HN Viện kiểm nghiệm - Bộ Y Tế. Thời gian thực hiện: Từ 24/2 đến 18/5/2003. HÀ NỘI 5/ 2003 LỜI CẢM ƠN Sau hai tháng thực đề tài, khoá luận hoàn thành thời hạn. Trong năm học vừa qua, giúp đỡ tận tình thầy giáo, cô giáo bạn bè, có lượng kiến thức định phục vụ cho việc hoàn thành khóa luận mà phục vụ cho công tác sau này. Với vốn kiến thức đố, hy vọng sau tốt nghiệp trường, tiếp tục học tập củng cố thêm hiểu biết để trở thành người thầy thuốc tốt, không phụ công lao dạy dỗ thầy cô. Trước tiên xin chân thành cám ơn thầy giáo PGS. TSKH. Lê Thành Phước, người thầy tận tình giúp đỡ hoàn thành khoá luận này. Tôi xin gửi lời cẩm ơn tới Thạc sỹ Bùi Thị Hoà, Dược sĩ Nguyễn Văn Hà trực tiếp hướng dẫn làm thực nghiệm, cám ơn Viện kiểm nghiệm Bộ Y T ế đ ã tạo điều kiện vật chất kiến thức thực tế giúp cho đề tài hoàn thành. Cuối chân thành cảm ơn thầy cô giáo, bạn bè giúp đỡ vật chất lẫn tinh thẩn suốt năm học qua. Tôi ghi nhớ tất công lao ấy. Hà Nội tháng 5- 2003 Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thị Thơ MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỂ .1 PHẦN I - TỔNG QUAN 1. Đặc điểm nguyên tố Selen 2. Chức sinh học Selen 2.1. Vai trò chống oxy hoá Selen . 2.2. Vai trò bệnh ung thư 2.3. Selen lão h oá 2.4. Selen bệnh tim mạch 2.5. Selen trình viêm 2.6. Selen mẩt 3. Độc tính Selen .8 3.1. Đối vói động vậ t .8 3.2. Đối vói người 4. Các phương pháp định lượng Selen . 4.1. Phương pháp phân tích khối lượng . 4.2. Phương pháp đo quang 4.3. Phương pháp húỳnh quang 4.4. Phương pháp cực phổ . 10 4.5. Phương pháp kích hoạt phóng xạ 10 4.6. Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử 10 PHẦN II - THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 11 1. Nguyên vật liệu phương pháp 11 1.1. Nguyên vật liệu: 11 1.2. Phương pháp nghiên cứu: .12 2. Kết thực nghiệm nhận x ét .12 2.1. Khảo sát thông số máy đo phổ hấp thụ nguyên tử Selen . 12 2.2. Cách lấy mẫu 13 2.3. Xử lý mẫu phương pháp vô hoá ướt . 14 2.4. Xây dựng đường chuẩn định lượng .15 2.5. Độ lặp lại phương pháp 17 2.6. Độ phương pháp 21 2.7. Khảo sát phương pháp phá m ẫu . 23 2.8. Đánh giá phương pháp phân tích 24 PHẦN III - KẾT LUẬN VÀ ĐỂ x u ấ t 26 1. Kết luận 26 3. Đề xuất .27 TÀI LIỆU THAM KHẢO . 28 ĐẶT VẤN ĐỂ Selen nguyên tố vi lượng cần thiết cho thể sống. Nó có vai trò quan trọng trình hô hấp tế bào liên quan đến sinh tổng hợp co­ enzyme Q(ubiquinon) thành phần cấu tạo nên Glutathion peroxydase (GSHPx), enzyme chống lại trình oxy hoá lipid bảo vệ tế bào. Ngoài ra, Selen xúc tác cho phản ứng giải độc nguyên tố độc asen, chì, thuỷ ngân, cadimi . Những năm đầu kỷ 20 Selen biết đến chất độc với người động vật. Đến năm 1960 cồng trình nghiên cứu tác dụng Selen thể người động vật tiến hành. Selen nghiên cứu chất chống oxy hoá. Nó có tác dụng phân huỷ peroxyd, trung hoà gốc tự lạ có thể. Selen tham gia vào trung tâm hoạt động enzyme Glutathion peroxydase tế bào tham gia vào thành phần nhiều chất hoạt động sinh học chứa nhóm -SH, -SeH GSH, Selenomethionin. Ngoài ra, Selen có vai trò phòng ngừa ung thư tuyến tiền liệt có tác dụng bảo vệ thể chống lại ung thư vú, phổi, buồng trứng, thực quản . Đặc biệt vai trò Selen trình lão hoá. Selen làm chậm trình lão hoá tế bào mà làm chậm trình lão hoá toàn thể, kéo dài tuổi thọ người. Vai trò quan trọng Selen phủ nhận. Thiếu hụt Selen dẫn tới khả bị mắc bệnh ung thư, tim mạch, viêm thấp khớp, suy giảm miễn dịch, suy thoái võng mạc mắt. Vì vậy, nhà bào chế nghiên cứu sản xuất nhiều chế phẩm chứa Selen sử dụng cho dự phòng điều trị bệnh. Thiếu hụt Selen nguyên nhân nhiều bệnh, thừa Selen lại nguy hiểm dẫn tới tượng nhiễm độc. Để kiểm soát lượng Selen đưa vào thể phải có phương pháp xác tin cậy để kiểm tra hàm lượng Selen có dạng thuốc chống oxy hoá. Hiện nay, Việt Nam chưa có tài liệu pháp quy qui định phương pháp định lượng Selen dạng thuốc nang mềm. Mặt khác, phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử mẻ việc áp dụng vào định lượng nguyên tố Selen. Do đó, chọn đề tài: “Xác định hàm lượng Selen viên Prucell Cỉgelton phương pháp đo p h ổ hấp thụ nguyên t ’ với mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định lượng Selen viên nang mềm phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử. - Định lượng hàm lượng Selen viên thuốc Prucell Cigelton. Chúng mong muốn xây dựng phương pháp kiểm tra hàm lượng Selen có khả thực thi với độ xác cao góp phần vào quản lý chất lượng thuốc lưu hành thị trường. Đồng thời giúp quan kiểm nghiệm, kiểm tra giám sát xây dựng tiêu chuẩn chất lượng tương lai, giúp người sử dụng dùng chế phẩm thuốc an toàn, hiệu quả. PHẦN I -TỔNG QUAN 1. Đặc điểm nguyên tố Selen Nguyên tố Selen có tên quốc tế Selenium phát vào năm 1817 Berzelius(1779- 1848)- nhà hoá học người Thụy Điển. Lúc Selen coi chất thừa trình sản xuất H2S04. Nguyên tố Selen xếp vào nhóm 6A bảng hệ thống tuần hoàn với lưu huỳnh. Selen chất dạng tinh thể màu xám có công thức electeron lớp 4s24p4. Tính chất hoá học Selen giống lưu huỳnh có mức oxy hoá -2, +4, +6 tương ứng với hợp chất Sulfid- Selenid, Sulfit- Selenit, Sulfat- Selenat. mức oxy hoá +4, Selen tồn dạng Selen dioxyd(Se02), acid Selenơ(H2Se03), Selen tetraclorid(SeCl4) muối Selenit(Se032'). Selen nguyên tố cháy không khí thành Se02. Selen dioxyd có tính oxy hoá mạnh, tính khử yếu. Acid Selenơ acid yếu, tan nhiều nước bị phân huỷ nhanh đun nóng nhiệt độ nóng chảy. Ở mức oxy hoá -2, Selen tồn dạng Selenid(Se'2). Hydro Selenid(H2Se) acid yếu, không màu, thể khí, có độc tính cao. Hydro Selenid không bền không khí dễ bị phân huỷ thành Selen H20. Ở mức oxy hoá +6, Selen tồn dạng acid Selenic(H2Se04) muối Selenat(Se042'). H2Se04 acid mạnh, màu trắng, hút ẩm, có tính oxy hoá mạnh Acid sulfuric, hình thành trình oxy hơá Selen H2Se03. Selen tồn vài dạng thù hình: Selen đỏ vô định hình chất bột màu đỏ nâu Selen xám dạng tinh thể dạng thù hình bền nhất. Trong tự nhiên, Selen có động vật, thực vật, đất đá. Trong động vật, Selen tập trung nhiều gan da cá, đặc biệt cá ngừ. Do vậy, dầu gan cá, mỡ cá có hàm lượng Selen lớn. Trong thực vật, Selen tập trung vào họ đậu, cà phê, lúa mì, xấu hổ, ba kích vài loài nấm. Còn đất đá thường lẫn với quặng lưu huỳnh PbS, CuFeS . Trong nước khoáng hàm lượng Selen cao. 2. Chức sinh học Selen 2.1. Vai trồ chống oxy hoá Selen Các gốc tự dạng oxy, nitơ hoạt động có hoạt tính oxy hoá mạnh chất oxy hoá. Các chất chống oxy hoá có khả ngăn ngừa, chống lại, làm hoạt tính oxy hoá chúng. Trong thể khoẻ mạnh có cân hai hệ chất oxy hoá chống oxy hoá. Những gốc tự sinh ngày, trình sinh hoá thể lại có hệ thống chống oxy hoá có tác dụng phân huỷ gốc tự để trì nồng độ tối thiểu không gây độc hại lớn. Sau số gốc tự oxy hệ thống chất chống oxy hoá chính. Dạng oxy hoạt động Bình thường Các chất chống oxy hoá Bệnh lý -SOD: Superoxidismustase phân huỷ gốc 2t tv- + (V- 4- 2H+ H A +02 ■ GSHPx: Glutathion peroxidase; catalase phân huỷ H20 LOOH (peroxydlipid). Selen làm tăng hoạt tính GSHPx - Co- enzyme Q, Vitamin E loại bỏ !0 gốc *OH, LO*, LOO*. - Vitamin E loại bỏ gốc pha nước. - Ị3- croten loại bỏ '0 2. Phản ứng gốc lan truyền, xuất Hợp chất chứa nhóm -SH, -SeH, tổn thương sai lệch loại bỏ peroxyd gốc khác. Hình 1: Các gốc tự chứa oxy chất chống gốc tự Trong thể, gốc tự công vào quan gây hậu đây: - Tấn công vào ADN gây đột biến gen tế bào nguyên nhân dẫn tới ung thư. - Tấn công vào phân tử protein, cấu trúc màng nguyên nhân lão hoá già nua. - Tấn công lipoprotein tỷ trOọng thấp tạo nhiều LDL bị oxy hoá thành động mạch lắng đọng lại thành đám tế bào bọt, hình thành mảng xơ vữa động mạch nhiều bệnh tim khác. - Tấn công vào màng gây trình viêm. Selen đóng yai trò quan trọng trình loại bỏ gốc tự đó. Selen tham gia vào trung tâm hoạt động enzyme Glutathion peroxydase tham gia vào thành phần nhiều chất hoạt động sinh học chứa nhóm -SH, -SeH GSH, Selenomethionin . Bản thân Selen xúc tác cho tổng hợp Co­ enzyme Q chất chống oxy hoá chủ yếu thể. Cả Selen Co - enzyme Q có vai trò quan trọng trình phân huỷ loại bỏ gốc tự bảo vệ thể. 2.2. Vai trò bệnh ung thư Các tác nhân gây ung thư phát ngày nhiều. Từ dẫn chất amino, nitro, nitroso, hydrocacbon đa vòng, thuốc trừ sâu diệt cỏ . đến thực phẩm khác có khả gây ung thư. Chúng có chất chung sản sinh gốc tự gốc tự “ngoại sinh”. Cả gốc tự ngoại sinh nội sinh công vào ADN gây đột biến gen làm cho tế bào bình thường phát triển thành tế bào ung thư. Gốc tự công vào protein làm rối loạn chức enzyme, vào lipid acid béo chưa no tạo nhiều sản phẩm trực tiếp gây ung thư. Selen có tác dụng chống oxy hoá, trung hoà gốc tự ngăn ngừa, làm giảm tác dụng độc mà gốc tự gây nên. Qua thống kê nhà khoa học người ta thấy rằng, ăn thức ăn chứa nhiều Selen tỷ lệ ung thư vú, 2.2. Cách lấy mẫu 2.2.1. Xác định khối lượng dâu thuốc trung bình viên: Cân 10 viên thuốc cân phân tích tổng khối lượng viên mt. Sau dùng kéo cắt đầu thuốc, nặn lấy phần dầu thuốc cho vào cốc có mỏ sạch. Phần vỏ lại rửa ete, để khô tự nhiên đem cân cân phân tích khối lượng vỏ mv. Khối lượng dầu thuốc trung bình ( m ) viên tính theo công thức sau: m, - m v m — — -------10 — Áp dụng cách vào tính khối lượng dầu thuốc trung bình viên Prucell Cigelton thu bảng sau: Bảng 1: Khối lượng dầu thuốc trung bình Loại viên Tổng khối lượng viên Khối lượng vỏ m, { g) mv(ẻ) Khối lượng dầu thuốc trung bình m (g/viên) Prucell 12.4506 3.8296 0.8621 Cigelton 14.7344 4.0036 1.0731 2.2.2. Lấy mẫu: Dùng kéo cắt đầu khoảng 17 viên nang mềm, nặn lấy phần dầu thuốc vào cốc có mỏ sạch. Sau lấy lượng dầu thuốc chứa khoảng 150|ig Se làm định lượng tương ứng với viên X m (g/viên) dầu thuốc( m khối lượng dầu thuốc trung bình viên). Lượng cân dầu thuốc đem định lượng ghi bảng 2. 13 Bảng 2: Số gam dầu thuốc đem định lượng Loại viên Lượng cân dầu thuốc(g) Prucell 2.5863 Cigelton 3.2193 2.3. Xử lý mẫu phương pháp vô hoá ướt Selen dạng hữu khó phá mẫu nên phải sử dụng acid có tính oxy hoá mạnh HNO3, HCIO4. Đồng thời sử dụng phương pháp vô hoá ướt để hạn chế bay Selen. Tiến hành vỏ hoá mẫu: • Trên viên Prucell: Cân khoảng 2,5(g) dầu thuốc cho vào cốc có nắp đậy. Làm mẫu song song đánh dấu từ Tj đến T5 sau tiến hành vô hoá sau: Cho vào cốc 15ml HNO3 đặc để yên 15 phút để vô hoá bước đầu. Sau đặt cốc lên bếp điện khoảng 10-15 phút nhằm tăng tốc độ oxy hoá. Tiếp để nguội thêm vào cốc 4ml HCIO4 đun 10 phút. Để nguội, gạn lớp. Tiếp tục đun đến khói trắng HC104 bay lên. Lọc vào bình định mức 25ml qua giấy lọc (tráng cốc nhiều lần nước cất). Hút 1,25ml NH4CI 10% vào bình thêm nước vừa đủ tới vạch. Song song tiến hành mẫu trắng. • Trên viên Cigelton: Cân khoảng 3.2g dầu thuốc cho vào cốc có nắp đậy. Làm mẫu song song đánh dấu từ Tcl đến Tc5 thêm khoảng 20ml HNO3 đặc vào cốc. Tiến hành bước vô hoá tương tự viên Prucell. Nhân xét: 14 Vì HC104 có tính oxy hoá mạnh nên phải cho sau cho HN03 nguội để tránh phản ứng mạnh xảy ra. Trong lúc đun bếp điện phải ý đậy mặt kính đồng hồ lên cốc để mẫu phân tích không bị trào ngoài. 2.4. Xây dựng đường chuẩn định lượng Tiến hành pha từ dung dịch chuẩn 1000(|ag/ml) thành dung dịch Cj, Q , C3, C4 có nồng độ 3,5,8,12(|ag/ml) sau: - Hút lml dung dịch chuẩn nồng độ 1000(|j.g/ml) vào bình định mức 50ml nồng độ 20(|ig/ml). - Hút 3ml dung dịch chuẩn nồng độ 20(|ig/ml) vào bình 20ml nồng độ Cj 3(|0.g/ml). - Hút 5ml chuẩn nồng độ 20(|Ẳg/ml) vào bình 20ml nồng độ C2 5(|^g/ml). - Hút ml chuẩn nồng độ 20(|ig/ml) vào bình 20ml nồng độ c 3là (|ig/ml). - Hút 12ml chuẩn nồng độ 20(|j,g/nil) vào bình 20ml nồng độ c 12(|~ig/ml). Sau thêm nước vừa đủ tới vạch, đồng thời làm mẫu trắng. Đem đo máy quang phổ hấp thụ thu kết bảng 3. Bảng 3: Sự phụ thuộc độ hấp thụ vào nồng độ Nồng độ Se chuẩn (|j,g/ml) 12 Độ hấp thụ (A) 0.0198 0.0318 0.0507 0.0764 15 Từ bảng thu đồ thị phụ thuộc độ hấp thụ vào nồng độ. Hình 2. Khảo phụ thuộc độ hấp thụ vào nồng độ Đồ thị có dạng tuyến tính khoảng nồng độ từ 0- 12ppm. Phương trình đường thẳng hồi quy có dạng y= ax +b a= 6,302.10'3; b= 5,59.10'4; r =0,9999. Từ xây dựng đường chuẩn định lượng Selen theo hình 3. 15 Nồng độ (juglml) Hình 3: Đường chuẩn định lượng Selen 16 2.5. Độ lặp lại phương pháp Chúng tiến hành hai loại viên thuốc Prucell Cigelton thu kết sau: 2.5.1. Trển viên Prucell: Lán 1: Tiến hành làm song song mẫu thử. Các bước lấy mẫu, vô hoá mẫu mục 2.2 2.3. Sau đem đo máy hấp thụ nguyên tử thu kết bảng 4. Bảng : Kết định lượng Se viên Prucell lần STT Khối lượng mẫu Nồng độ Se đo theo Hàm lượng Se dầu thuốc mc(g) đường chuẩn c (|-ig/ml) viên M (|j,g/viên) 2.5570 4.6004 38.7760 2.5422 4.5699 38.7431 2.5341 4.7838 40.6862 2.5575 4.7991 40.4429 2.5924 4.5699 37.9929 TB 2.5566 4.6646 39.3282 ? Hàm lượng Selen viên tính theo công thức: ^ _ c x25xm mc Trong đó: M: Hàm lượng Selen viên(|ig/viên); C: Nồng độ Selen đo theo đường chuẩn(|ig/ml); m : Khối lượng dầu thuốc trung bình viên(g/viên); Ở m = 0.8621(bảng 1); mc: Khối lượng mẫu phân tích; 25: Là thể tích bình định mức tạo dung dịch mẫu thử sau vô hoá(mì). Từ bảng tính giá trị sau: - Giá trị trung bình: M = 39.33 - Độ lệch chuẩn s = 1.17 - Độ lệch chuẩn tương đối: RSD%= 2.99% Từ kết tính toán trên, nhận thấy độ lệch chuẩn độ lệch tương đối nhỏ(< 3%) chứng tỏ phương pháp có độ lặp lại tốt. Lần 2: Chúng tiến hành lần thu kết bảng 5. Bảng 5: Kết định lượng Selen viên Prucell lần STT Khối lượng mẫu Nồng độ Se đo theo Hàm lượng Se dầu thuốc mc(g) đường chuẩn c (|_ig/ml) viên M (ịig/viên) 2.5175 4.7892 41.0007 2.5742 4.8509 40.6142 2.5655 4.5887 38.5492 2.5334 4.4961 38.2499 2.5600 4.8663 40.9691 TB 2.5501 4.7182 39.8766 18 - Hàm lượng Selen viên tính theo công thức: T., M= Cx25xm ------------- — -------------- mc Ở m = 0.8621 (bảng 1) - Từ bảng tính giá trị sau: Giá trị trung bình: M =39.88 Độ lệch chuẩn: s= 1.36 Độ lệch tương đối: RSD% = 3.41% Khoảng tin cậy: Ở xác suất tin cậy 95% vói số bậc tự t= 1.776 từ tính khoảng tin cậy ịi = 39.88 ± 1.08 • So sánh lán lán 2: Chúng sử dụng test- T để so sánh hai giá trị trung bình lần thực nghiệm với phương sai khác ( giá trị trung bình hàm lượng Se(Ịig/viên). Ở mức tin cậy 95% với số bậc tự ta = 1.776. Giá trị t tính bảng Bảng 6: So sánh hai giá trị trung bình STT Giá trị trung bình t ta Lầnl 39.33 0.686 1.776 Lần2 39.88 Nhân xét: 19 Qua bảng thấy rằng: t < ta , chứng tỏ hai giá trị trung bình khác ý nghĩa thống kê. Phương pháp có độ ổn định cao, độ lặp lại tốt. 2.5.2. Trên viên Cigelton: Tiến hành làm song song mẫu thử. Các giai đoạn lấy mẫu, vô hoá mục 2.2 2.3. Đem đo máy hấp thụ nguyên tử thu kết qủa bảng 7. Bảng 7: Kết định lượng Seỉen viên Cigelton STT Khối lượng mẫu Nồng độ Se đo theo Hàm lượng Se viên dầu thuốc mc (g) đường chuẩn c (ị-ig/ml) M (|j,g/viên) 3.1499 5.3086 45.213 3.1911 5.7480 48.323 3.2014 5.8578 49.088 3.8255 6.9560 48.781 2.8645 5.0156 46.974 TB 3.2465 5.7772 47.676 - Hàm lượng Selen viên tính mục 2.5.1. Ở m = 1.0731(bảng 1). - Từ bảng tính giá trị sau: Giá trị trung bình: M = 47.68 Độ lệch chuẩn: s =1.60 Độ lệch tương đối: RSD% = 3.35% Nhân xét: 20 Từ kết thấy phương pháp có độ lặp lại tốt. 2.6. Độ phương pháp Tiến hành hút ml dung dịch gốc(Cg) bảng hút lml dung dịch chuẩn nồng độ 20|j.g/ml vào bình định mức 5ml vừa đủ nước cất. Như vậy, 3c nồng độ dung dịch thử đem định lượng ——- 1-ig/ml cộng với nồng độ chuẩn 90 — = Ịig /m l (trong bảng 8). Bảng 8: Nồng độ dung dịch thử đem định lượng STT Nồng độ gốc Cg (|ig/ml) Tổng nồng độ thử đem định lượng (Ịig/ml) 4.6004 6.7602 4.5699 6.7419 4.7838 6.8703 4.7991 6.8795 4.5699 6.7419 TB 4.6646 6.7988 Đem mẫu đo máy quang phổ hấp thụ nguyên tử qua xử lý kết thu bảng 9. 21 Bảng 9: Kết định lượng lại dung dịch chuẩn. (1) STT (2) (4)=(2)-(3) (3) Nồng độ Nồng độ (5) Nồng độ chuẩn Nồng độ chuẩn tổng(ng/ml) thử (Ịig/ml) tìm lai(jxg/ml) (6) % Tìm lại ban đầu(|j.g/ml) 6.7096 2.7602 3.9494 98.74 6.7096 2.7419 3.9677 99.19 6.9847 2.8703 4.1144 102.86 6.9236 2.8795 4.0441 101.10 6.8777 2.7419 4.1358 103.40 TB 6.8410 2,7988 4.0423 101.06 Phần trăm tìm lại đạt từ 98.74% đến 103.04%. Từ bảng tính giá trị sau: - Giá trị trung bình: ~x- 4.0423 - Độ lệch chuẩn: s = 0.08 - Độ lệch chuẩn tương đối: RSD%= 2.08% - Khoảng tin cậy: mức tin cậy 95% vói số bậc tự t = 1.776 từ tìm gía trị 0.0667. Như khoảng tin cậy |J= 4.0423 ±0.0667 - Sai số tuyệt đối 1.06%. - Sai số tương đối 1.65%.Sai số hệ thống: Giá trị thực xb= hiệu = 0.0423. So sánh giá trị với giá trị sai số ngẫu nhiên 22 — ts nhận thấy x - x b 2 thực không khác nhau. Nếu dựa vào Test-T so sánh hai giá trị trung bình thu kết sau: t = 1.8396. Ở mức tin cậy 90% với số bậc tự ta= 2.132. Như vậy, t < ta chứng tỏ giả thuyết H0 tức hai giá trị trung bình không khác nhau. 25 PHẦN III - KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 1. Kết luận Sau nghiên cứu thực đề tài, khoá luận đạt kết sau: * Thực tổng quan ngắn vai trò sinh học Selen phương pháp định lượng Selen. * Đã xác định điều kiện để định lượng Selen dầu nang mềm phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử với kỹ thuật nguyên tử hoá lửa, gồm: - Ổn định thông số máy đo. - Cách lấy mẫu dầu thuốc nang mềm. - Cách vô hoá mẫu. - Xây dựng đương chuẩn định lượng. * Đã khảo sát: - Độ lặp lại phương pháp. - Độ phương pháp. - Định lượng theo phương pháp đường chuẩn thêm đường chuẩn. Kết khảo sát cho thấy qui trình phân tích định lượng có độ tin cậy cao. * Áp dụng qui trình phân tích xây dựng để định lượng Selen dầu nang mềm hai-biệt dược có thị trường cho kết sau: - Đối với Prucell 39.60(|ig/viên), đạt 79.20% so với hàm lượng ghi nhãn(50ịigSe). - Đối với Cigelton 47,68(p,g/viên), đạt 95.36% so vói hàm lượng ghi nhãn(50jigSe). 26 Khoá luận hoàn thành kết cố gắng học hỏi, nỗ lực thân có đóng góp định. Tuy nhiên, thời gian có hạn, lượng kiến thức nhiều, khoá luận tránh khỏi thiếu sót. Rất mong nhận đóng góp ý kiến cổ vũ nhiệt tình thầy cô bạn. 3. Đề xuất * Với Bộ Y Tế: - Bộ Y Tế cần kiểm tra chất lượng thuốc đưa vào thị trường Việt Nam cách chặt chẽ tránh tình trạng thuốc chất lượng, thuốc không đảm bảo hàm lượng trôi nổi, gây ảnh hưởng tới sức khoẻ nhân dân. - Quan tâm đầu tư trang thiết bị hoá chất cho công tác kiểm nghiệm sở, trung tâm kiểm nghiệm. - Nghiên cứu đưa vào Dược Điển Việt Nam phương pháp định lượng Selen quang phổ hấp thụ nguyên tử. * Với sở. - Cần thường xuyên tổ chức huấn luyện, đào tạo đội ngũ cán có trình độ chuyên môn cao, sử dụng thành thạo máy móc trang thiết bị đại công tác kiểm nghiệm. - Nghiên cứu xây dựng qui trình định lượng Selen phù hợp với trang thiết bị có sở, để phục vụ tốt cho công tác kiểm nghiệm thuốc chứa nguyên tố vi lượng sản xuất sở tương lai. 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1. Đàm Trung Bảo (1983): Selen sinh học - Nhà xuất Y Học. 2. Bùi Long Biên (1995): Phân tích hoá học định lượng - Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hà Nội (tr 174-189). 3. Hoàng Nhâm (1990): Từ điển bách khoa nhà hoá học trẻ tuổi- NXB Giáo dục Hà Nội (tr 288-292, tr326-327). 4. Phạm Thị Mận (2001): Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng thuỷ ngân dược liệu phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử - Khoá luận tốt nghiệp DS. 5. Lê Thành Phước - Nguyễn Quang Thường(1998): Phức chất gốc tự Y- Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội. 6. Tô Phi Phượng (1998): Giáo trình lý thuyết thống kê- NXB Giáo dục (tr 113120) 7. Nguyễn Quang Thường (1998): Gốc tự oxy Y Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội. 8. Đào Hữu Tố (1994): Giáo trình thống kê toán học - Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hà Nội. 9. Bộ môn Phân tích độc chất Trường Đại học Dược Hà Nội (1984): Bài giảng kiểm nghiệm độc chất - Nhà xuất Y học. 10. Lê Kim Long - Hoàng Nhuận (2001): Tính chất lý hoá học chất vô Nhà xuất khoa học kỹ thuật Hà Nội. 28 [...]... Selen và các phương pháp định lượng Selen * Đã xác định các điều kiện để định lượng Selen trong dầu nang mềm bằng phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử với kỹ thuật nguyên tử hoá bằng ngọn lửa, gồm: - Ổn định các thông số máy đo - Cách lấy mẫu dầu thuốc trong nang mềm - Cách vô cơ hoá mẫu - Xây dựng đương chuẩn định lượng * Đã khảo sát: - Độ lặp lại của phương pháp - Độ đúng của phương pháp - Định lượng. .. pháp cần có thiết bị phức tạp và phương tiện chống nhiễm xạ 4.6 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử Nguyên tác: Selen được nguyên tử hoá biến thành dạng hơi sẽ hấp thụ chùm tia sáng có bước sóng X = 196,1 nm Hàm lượng Selen trong mẫu tỷ lệ với cường độ hấp thụ và tuân theo định luật Lambert- Beer Phương pháp này có thể định lượng Selen đến khoảng nồng độ 10'6 |J.g/ml và có thể thực hiện với những... - Máy đo phổ hấp thụ nguyên tử z - 5000 của hãng Hitachi - Cân phân tích có độ chính xác 0.0001 g của Satorius - Bếp điện dùng cho vô cơ hoá - Máy nén khí của Hitachi 1.2 Phương pháp nghiên cứu: Khoá luận sử dụng các phương pháp sau: - Phương pháp xử lý mẫu: phương pháp vô cơ hoá ướt - Phương pháp phân tích định lượng: phương pháp đường chuẩn - Kỹ thuật nguyên tử hoá: kỹ thuật nguyên tử hoá bằng ngọn... rằng phương pháp phá mẫu có phần trăm tìm lại đạt 97.57%, chứng tỏ mẫu không bị ảnh hưởng lớn trong quá trình xử lý 23 2.8 Đánh giá phương pháp phân tích Chúng tôi tiến hành so sánh, đánh giá hai phương pháp đường chuẩn và thêm đường chuẩn trên viên Cigelton 2.8.1 Phương pháp đường chuẩn: Tiến hành định lượng bằng phương pháp đường chuẩn trên máy quang phổ hấp thụ nguyên tử thu được kết quả như trong. .. cao, độ lặp lại tốt 2.5.2 Trên viên Cigelton: Tiến hành làm song song 5 mẫu thử Các giai đo n lấy mẫu, vô cơ hoá như trong mục 2.2 và 2.3 Đem đo trên máy hấp thụ nguyên tử chúng tôi thu được kết qủa ở bảng 7 Bảng 7: Kết quả định lượng Seỉen trong viên Cigelton STT Khối lượng mẫu Nồng độ Se đo được theo Hàm lượng Se trong viên dầu thuốc mc (g) đường chuẩn c (ị-ig/ml) M (|j,g /viên) 1 3.1499 5.3086 45.213... lấy lượng dầu thuốc chứa khoảng 150|ig Se đi làm định lượng tương ứng với 3 viên X m (g /viên) dầu thuốc( m là khối lượng dầu thuốc trung bình trong viên) Lượng cân dầu thuốc đem định lượng ghi trong bảng 2 13 Bảng 2: Số gam dầu thuốc đem định lượng Loại viên Lượng cân dầu thuốc(g) Prucell 2.5863 Cigelton 3.2193 2.3 Xử lý mẫu bằng phương pháp vô cơ hoá ướt Selen ở dạng hữu cơ rất khó phá mẫu nên chúng... đó tính ra độ lệch chuẩn s = 1.60 2.8.2 Phương pháp thêm đường chuẩn: Chúng tôi tiến hành định lượng theo phương pháp thêm chuẩn, thu được kết quả trong bảng 11 Bảng 11: Kết quả định lượng Se trên viên Cigelton bằng phương pháp thêm đường chuẩn STT Khối lượng mẫu dầu thuốc mc (g) Nồng độ Se tìm được theo đường chuẩn c (ịig/ml) Hàm lượng Se trong viên M (ịig /viên) 1 3.1499 5.2176 44.44 2 3.1911 5.3680... 2.5924 4.5699 37.9929 TB 2.5566 4.6646 39.3282 ? Hàm lượng Selen trong một viên được tính theo công thức: ^ _ c x25xm mc Trong đó: M: Hàm lượng Selen trong một viên( |ig /viên) ; C: Nồng độ Selen đo được theo đường chuẩn(|ig/ml); m : Khối lượng dầu thuốc trung bình trong viên( g /viên) ; Ở đây m = 0.8621(bảng 1); mc: Khối lượng mẫu phân tích; 25: Là thể tích bình định mức tạo dung dịch mẫu thử sau vô cơ hoá(mì)... Tiến hành làm song song 5 mẫu thử Các bước lấy mẫu, vô cơ hoá mẫu như trong mục 2.2 và 2.3 Sau đó đem đo trên máy hấp thụ nguyên tử thu được kết quả trong bảng 4 Bảng 4 : Kết quả định lượng Se trên viên Prucell lần 1 STT Khối lượng mẫu Nồng độ Se đo được theo Hàm lượng Se trong dầu thuốc mc(g) đường chuẩn c (|-ig/ml) viên M (|j,g /viên) 1 2.5570 4.6004 38.7760 2 2.5422 4.5699 38.7431 3 2.5341 4.7838... hàm lượng Selen thấp hơn 3.2 Đối với con người Đối với người không thấy có báo cáo về những tác hại nghiêm trọng do ngộ độc Selen gây ra Có chăng chỉ là những dấu hiệu mơ hồ như chán ăn, suy dinh dưỡng, xanh xao, hỏng răng, mất màu da, mất móng chân tay và phù dưới da 8 4 Các phương pháp định lượng Selen 4.1 Phương pháp phân tích khối lượng Nguyên tác: Chuyển Selen trong hợp chất Selenat(Se042'), Selenit(Se03 . Xác định hàm lượng Selen trong viên Prucell và Cỉgelton bằng phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử ’ với mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định lượng Selen trong viên nang mềm bằng phương pháp. quy nào qui định phương pháp định lượng Selen 1 trong các dạng thuốc nang mềm. Mặt khác, phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử còn mới mẻ trong việc áp dụng vào định lượng nguyên tố Selen. Do đó,. phương pháp đo phổ hấp thụ nguyên tử. - Định lượng được hàm lượng Selen trong viên thuốc Prucell và Cigelton. Chúng tôi mong muốn xây dựng một phương pháp kiểm tra hàm lượng Selen có khả năng