TRNG I HC CN TH KHOA NễNG NGHIP V SINH HC NG DNG B MễN TH Y * Lấ VNG CNH PHN LP VI KHUN CLOSTRIDIUM SPP. TRấN VT Cể TRIU CHNG LIT CHN, LIT CNH, LIT C, TIấU CHY TI MT S TNH NG BNG SễNG CU LONG V KIM TRA TNH NHY CM CA VI KHUN VI MT S LOI KHNG SINH Lun tt nghip Ngnh Thỳ Y Cn Th, 11/2014 TRNG I HC CN TH KHOA NễNG NGHIP V SINH HC NG DNG B MễN TH Y * Lun tt nghip Ngnh Thỳ Y Tờn ti: PHN LP VI KHUN CLOSTRIDIUM SPP. TRấN VT Cể TRIU CHNG LIT CHN, LIT CNH, LIT C, TIấU CHY TI MT S TNH NG BNG SễNG CU LONG V KIM TRA TNH NHY CM CA VI KHUN VI MT S LOI KHNG SINH Giỏo viờn hng dn: ThS. Nguyn Thu Tõm Sinh viờn thc hin: Lờ Vng Cnh MSSV: 3102932 Lp: CN1067A1 Cn Th, 11/2014 TRNG I HC CN TH KHOA NễNG NGHIP & SINH HC NG DNG B MễN TH Y ---TRANG DUYT ti: Phõn lp vi khun Clostridium spp. trờn vt cú triu chng lit chõn, lit cỏnh, lit c, tiờu chy ti mt s tnh ng bng sụng Cu Long v kim tra tớnh nhy cm ca vi khun vi mt s loi khỏng sinh. Do sinh viờn: Lờ Vng Cnh, mó s sinh viờn: 3102932, thc hin ti phũng Vi Trựng v Min Dch ca b mụn Thỳ Y, Khoa Nụng Nghip & Sinh Hc ng Dng, trng i Hc Cn Th. Thi gian thc hin ti: t thỏng 07/2014 n 11/2014. Cn Th, ngy thỏng nm 20 Cn Th, ngy thỏng nm 20 Duyt ca B mụn Duyt ca Cỏn b hng dn ThS. Nguyn Thu Tõm Cn Th, ngy thỏng nm 20. Duyt ca Khoa Nụng Nghip & SHD i LI CAM OAN Tụi xin cam oan õy l cụng trỡnh nghiờn cu ca tụi. Do chớnh bn thõn tụi thc hin sut quỏ trỡnh lm ti ti phũng Vi Trựng v Min Dch ca b mụn Thỳ Y, Khoa Nụng Nghip & Sinh Hc ng Dng, trng i Hc Cn Th. Cỏc s liu, kt qu c trỡnh by lun l trung thc v cha tng c cụng b bt k cụng trỡnh lun no trc õy. Cn Th, ngy thỏng nm 20. Tỏc gi lun Lấ VNG CNH ii LI CM N Khong thi gian xa nh hc v rốn luyn ti trng i Hc Cn Th, ó giỳp tụi ngy cng khụn ln v trng thnh hn, cho tụi thy c rng: bờn cnh tụi luụn cú gia ỡnh, thy cụ, bn bố v tt c mi ngi sn sng giỳp v ng viờn tụi tụi cú th vt qua tt c. n giõy phỳt ny õy, tụi ó hon thnh lun tt nghip v kt thỳc khúa hc chuyờn ngnh Thỳ Y ca mỡnh, tht hnh phỳc v vụ cựng sung sng. Tụi khụng bit núi gỡ hn ngoi vic by t lũng bit n ca mỡnh n nhng ngi ó bờn tụi, quan tõm, chm súc, giỳp , ng viờn, luụn t nim tin v hy vng vo tụi sut khong thi gian va qua. u tiờn, xin kớnh gi lũng bit n n vi b kớnh yờu v cha m. Cụng n dng dc, sinh thnh, dy bo con, luụn t nim tin v hy vng vo con. Mi ngi ó lao ng mit mi to mi iu kin cho n - hc thnh ti, ú luụn l ngun ng lc, ng viờn ln nht sng v hc n hụm nay. Tip theo, tụi xin gi li cỏm n n thy Lờ Hong S, thy l c hc ca tụi, ngi luụn quan tõm, hng dn v ch bo tụi nm hc i hc. Cụ Nguyn Thu Tõm, ngi ó luụn giỳp , to mi iu kin tụi tỡm tũi, hc hi v nghiờn cu khong thi gian thc hin ti tt nghip ca mỡnh, em vụ cựng bit n v cỏm n Cụ. Tụi xin gi n quý thy cụ B mụn Thỳ Y, thy cụ Khoa Nụng Nghip v Sinh hc ng Dng núi riờng cựng ton th thy cụ, ban giỏm hiu trng i Hc Cn Th núi chung li cỏm n tha thit nht. Quý thy cụ ó tn tỡnh ging dy, truyn t kin thc quý bỏo cng nh to mi iu kin cho tụi hc v phỏt trin trờn ging ng i hc. Cỏm n cỏc bn lp Thỳ Y khúa 36 ó ng hnh cựng tụi khong thi gian nm ny, cựng tt c nhng ngi bn ca tụi ó luụn bờn cnh - sỏt vai cựng tụi hc v khụn ln. Xin cỏm n quý cụng ty Vemedim ó to iu kin cho tụi c hc v nghiờn cu. Cỏm n cỏc anh, ch phũng vi sinh ó luụn hng dn - giỳp tụi. Bờn cnh ú l li cỏm n n cỏc cỏn b Thỳ y v cỏc ch h chn nuụi ti An Giang v mt s Tnh Khỏc ó tn tỡnh giỳp tụi quỏ trỡnh ly mu. Cui cựng, tụi xin gi li cỏm n chõn thnh n quý thy cụ Hi ng Giỏm Kho, cỏc thy cụ ó dnh thi gian quý bỏo ca mỡnh xem xột ti ca tụi, nghe tụi bỏo cỏo v a nhng nhn xột cho tụi hon thin bi bỏo cỏo ca mỡnh. Xin chõn thnh cỏm n! iii MC LC Trang Trang duyt . i Li cam oan . ii Li cm n iii Mc lc . iv Danh sỏch bng . vi Danh sỏch hỡnh . vii Danh mc ch vit tt . viii Túm lc . ix Chng T VN Chng C S Lí LUN 2.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu v vi khun Clostridium spp. ti Vit Nam v trờn th gii . 2.1.1 Tỡnh hỡnh nghiờn cu v vi khun Clostridium spp. ti Vit Nam 2.1.2 Tỡnh hỡnh nghiờn cu v vi khun Clostridium spp. trờn th gii . 2.2 Gii thiu v vi khun Clostridium spp. 2.2.1 c im hỡnh thỏi ca vi khun Clostridium spp. 2.2.2 c im nuụi cy vi khun Clostridium spp. . 2.2.3 c tớnh sinh húa ca vi khun Clostridium spp. 10 2.2.4 Kh nng khỏng, c im tn ti v phõn b ca vi khun Clostridium spp. t nhiờn 12 2.2.5 Kh nng sinh c t ca vi khun Clostridium spp. 14 2.2.6 Kh nng gõy bnh trờn ngi v ng vt ca vi khun Clostridium spp. 16 2.3 c im sinh hc ca vt 18 2.3.1 Ngun gc, c im thớch nghi ca vt 18 2.3.2 c im tiờu húa, hp thu thc n ca vt 18 Chng PHNG TIN V PHNG PHP NGHIấN CU . 21 3.1 Ni dung nghiờn cu 21 3.2 Phng tin nghiờn cu . 21 3.2.1 Thi gian, i tng v a im . 21 3.2.2 Dng c v trang thit b 21 3.2.3 Húa cht v mụi trng 21 3.3 Phng phỏp tin hnh thớ nghim 22 3.3.1 Phng phỏp ly mu . 22 3.3.2 Phng phỏp nuụi cy phõn lp . 23 3.3.3 Kim tra c tớnh sinh húa ca vi khun Clostridium spp. 25 iv 3.3.4 Phng phỏp kim tra nhy cm ca vi khun Clostridium spp. phõn lp c vi khỏng sinh . 26 3.4 Phng phỏp x lý s liu . 27 Chng KT QU V THO LUN . 28 4.1 Tng quang v a im ly mu . 28 4.2 Kt qu phõn lp vi khun Clostridium spp . 30 4.2.1 T l vt bnh nhim vi khun Clostridium spp. 30 4.2.2 T l vt bnh nhim cỏc chng vi khun Clostridium 31 4.2.3 T l vt bnh nhim vi khun Clostridium spp. theo a im . 34 4.3 Kt qu kim tra nhy cm ca vi khun vi mt s loi khỏng sinh 37 Chng KT LUN V NGH 41 5.1 Kt Lun 41 5.2 Ngh 41 TI LIU THAM KHO . 42 PH CHNG . 46 v DANH SCH BNG Trang Bng 1: Mt s phn ng sinh húa ca cỏc vi khun Clostridium . 11 Bng 2: S hin din ca cỏc Clostridium mt s loi mu . 13 Bng 3: Cỏc loi c t ca vi khun Clostridium botulinum 14 Bng 4: Bnh c t thn kinh ca Clostridium 16 Bng 5: Bnh Clostridium gõy trỳng c mụ bo . 16 Bng 6: Bnh ng rut v c t ng rut Clostridium 17 Bng 7: ỏnh giỏ mc nhy cm ca vi khun vi mt s loi khỏng sinh 26 Bng 8: T l vt bnh nhim vi khun Clostridium spp. t mu rut . 30 Bng 9: Kt qu xỏc nh vt bnh nhim cỏc chng Clostridium bng phn ng sinh húa 32 Bng 10: T l mu rut vt bnh nhim cỏc chng Clostridium theo a im ly mu . 35 Bng 11: Kt qu khỏng sinh ca vi khun Clostridium spp. vi mt s loi khỏng sinh 37 Bng 12: Tớnh nhy cm ca cỏc chng Clostridium phõn lp c i vi khỏng sinh 39 Bng 13: Kt qu a khỏng ca vi khun Clostridium spp. i vi khỏng sinh . 39 vi DANH SCH HèNH Trang Hỡnh 1: Quy trỡnh giũi phõn hy xỏc ca bnh ng c tht gia cm . Hỡnh 2: S vai trũ C. botulinum mt h sinh thỏi nc ngt . Hỡnh 3: Thu thp cỏc mu vt b bnh cỳm cn . 22 Hỡnh 4: Mu rut c bo qun tỳi nilong v ui khớ oxy . 23 Hỡnh 5: Mu rut c chun b nuụi cy phõn lp . 23 Hỡnh 6: Mụi trng c chun b phõn lp vi khun . 23 Hỡnh 7: T m CO2 nuụi cy cỏc vi khun ym khớ 23 Hỡnh 8: Khun lc vi khun dung huyt trờn thc mỏu 24 Hỡnh 9: Khun lc vi khun trờn thch mỏu . 24 Hỡnh 10: Mụi trng CMM gi ging vi khun 24 Hỡnh 11: Vi khun Clostridium spp. di kớnh hin vi quang hc vt kớnh 100 25 Hỡnh 12: Bo t vi khun c xem di kớnh him vi quang hc vt kớnh 100 25 Hỡnh 13: Vi khun Clostridium spp. sinh catalates 25 Hỡnh 14: Kt qu sinh húa b kit API 20A 26 Hỡnh 15: a im ly mu ti mt s tnh BSCL . 28 Hỡnh 16: Kt qu phõn lp cỏc chng Clostridium bng phn ng sinh húa . 32 Hỡnh 17: T l mu rut vt bnh nhim cỏc chng vi khun Clostridium theo a im ly mu 35 Hỡnh 18: Kt qu khỏng sinh ca vi khun Clostridium spp. vi mt s loi khỏng sinh . 37 Hỡnh 19: Kt qu khỏng sinh ca vi khun Clostridium spp. phõn lp c 38 vii DANH MC CH VIT TT BSCL: ng bng sụng Cu Long PCR: Polymerase Chain Reation SNAP: Survivors Network of those Abused by Priests CMM: Cooked Meat Medium CTV: Cng tỏc viờn viii vy xy ng c vic ghi nhn s hin din khỏ cao ca vi khun C. botulinum l phự hp. T l vt bnh nhim khỏ cao vi khun C. botulinum ó c nghiờn cu v chng minh rng: vi khun C. botulinum ó hin din mụi trng (bao gm: t, trm tớch v t ngp nc, .) (Nguyn c Hin, 2012; Smith v ctv, 1978); S tớch ly ca vi khun mụi trng v lch s cỏc v ng c lp i lp li ti cỏc vựng b ụ nhim nng bi bo t ca vi khun C. botulinum (Wobeser v ctv, 1987). Khi vt sc bựn tỡm kim thc n (Bựi Xuõn Mn, 2000; Lõm Minh Thun v Ch Minh Hựng, 2004) s l nguy c quan trng cho bnh ng c vt (Rocke v Friend, 1998). Yu t truyn lõy vi khun vũng sinh thỏi v chui thc n rt a dng. u tiờn, to xanh l loi phự du thc vt phỏt trin mnh v phong phỳ ti cỏc vựng ao, h, m nc ta (Nguyn Thin v ctv, 2005) v l ngun qua trng cung cp mụi trng sng cho C. botulinum (Chun v ctv, 2013). Tip theo, l cỏc loi ng-thc vt phõn hy mụi trng to iu kin thun li cho vi khun phỏt trin (Defilippo v ctv, 2013). V cui cựng l cỏc loi ng vt khụng xng sng bao gm: chun chun, b xớt v rui l nhng nhõn t phỏt tỏn vi khun khp ni (Vidal v ctv, 2013) hay trng ký sinh trờn xỏc cht vt ch, hỡnh thnh quỏ trỡnh giũi phõn hy xỏc bnh ng c gia cm (Locke v Friend, 1989 ; Rocke v Friend, 1998 ) hay quỏ trỡnh giũi phõn hy xỏc (Wobeser, 1997). Kt qu vi khun C. botulinum c phõn lp trờn vt lit chõn, lit cỏnh, lit c, tiờu chy v cht l phự hp vi nghiờn cu ca Nguyn c Hin v Phm Mnh Hựng (2012) th nghim c t ca vi khun C. botulinum trờn vt. T l mu rut vt bnh nhim vi khun C. botulinum l khỏ cao chim 21,43%; So vi Nguyn c Hin (2012) phõn lp vi khun C. botulinum trờn vt ti thnh ph Cn Th, kt qu thp hn t l vt bnh cú cựng triu chng nhim vi khun C. botulinum (43,66%). Kt qu phõn lp ny thp hn so vi kt qu nghiờn cu ca Vidal v ctv (2013) vi t l phõn lp vi khun C. botulinum chim 38,7%. Theo Nguyn c Hin (2012) so sỏnh vi cỏc bnh khỏc, cỏc bnh cú triu chng in hỡnh thỡ t l phõn lp mm bnh (21,43%) l rt thp. iu ny cú th c lý gii bi c im bnh lý ca bnh, c t botulin ca vi khun C. botulinum gõy ra, bn thõn vi khun ó khụng trc tip gõy bnh. Vt cú th phỏt bnh nhim trc tip c t botulin t thc n nh giũi, cụn trựng, xỏc ng vt, bựn nhim c t t xỏc ng-thc vt phõn hy, .(Rocke, 2006), vỡ vy vt cú triu chng in hỡnh ca bnh nhng phõn lp li khụng phỏt hin c vi khun sn sinh c t c th. Kt qu ny phự hp vi nghiờn cu ca Woo v ctv (2010), kho sỏt trờn 93 trng hp vt tri b cht sụng Hangang, Hn 33 Quc v thu c kt qu dng tớnh vi c t loi C ca vi khun C. botulinum nhng ó khụng cú vi khun C. botulinum no c phõn lp xỏc cht ca chỳng. Cooper v ctv (2013) ghi nhn vi khun C.colinum, C. difficile v C. perfringens l nhng nguyờn nhõn gõy bnh tiờu chy quan trng. T l phõn lp vi khun C.colinum cao nht chim 29,76%, kt qu ny cao hn nhiu so vi nghiờn cu ca Roussan v ctv (2009) trờn g tht chim t l 11,8%, l tỏc nhõn gõy viờm loột rut cỏc loi cm nhim v gõy cht vi t l t 1-5% (Kondo v ctv, 1988), kt qu nhim khỏ cao ca vi khun C.colinum rut ó lm bnh thờm trm trng v dn n t l cht cao cỏc vt bnh. T l phõn lp vi khun C. difficile chim 2,38%, kt qu ny cao hn so vi nghiờn cu ca Salf v Brazier (1996) vi t l mu phõn ca cỏc loi ng vt nhim vi khun C. difficile (2,2%), kt qu ny cho thy t l nhim vi khun C. difficile khỏ thp nhng l mt nhõn t gõy bnh quan trng ng rut ca vt ch (Duchesnes v ctv, 2006), theo kt qu nghiờn cu: vi khun C. difficile l mt nhõn t lm bnh thờm trm trng v tng t l cht vt. T l phõn lp vi khun C. perfringens thp nht chim 1,19%, kt qu ny thp hn nhiu so vi nghiờn cu Svobodovỏ v ctv (2007) v t l g khe nhim vi khun C. perfringens (chim 18,39%), v thp hn rt nhiu so vi Osman v ctv (2012) nghiờn cu vi khun C. perfringens trờn g tht thng phm v g mỏi tht ging b m vi t l dng tớnh ln lt l 41,7% v 58,4%. Mc dự vi khun C. perfringens sn sinh nhiu loi c t nguy him (Duchesnes v ctv, 2006), nhng t l nhim rt thp ca vi khun khụng th ỏnh giỏ c kh nng gõy bnh ca vi khun v hin vi khun C. perfringens li c xem l nhng vi khun thng trỳ rut ca nhiu loi ng vt (Cooper v ctv, 2013). Thờm vo ú, kt qu phõn lp vi khun Clostridium spp. t cỏc mu vt bnh ghi nhn trng hp nhim ghộp gia vi khun C. botulinum v C. colinum chim t l 1,19% (1/84). Kt qu ny cng khng vi khun C. botulinum l nhõn t chớnh gõy bnh-cht vt v C. colinum l nhõn t lm bnh thờm trm trng v tng t l cht vt. 4.2.3 T l vt bnh nhim vi khun Clostridium spp. theo a im Cui cựng, cn xem xột t l nhim cỏc chng vi khun Clostridium ti cỏc a im ly mu v ỏnh giỏ tỡnh hỡnh bnh. 34 Bng 10: T l mu rut vt bnh nhim cỏc chng Clostridium theo a im ly mu An Giang Chng Clostridium S mu xột S mu nghim dng tớnh Tnh Khỏc T l (%) s mu xột S mu T l nghim dng tớnh (%) C. botulinum 37 16,22 47 12 25,53 C. difficile 37 5,41 47 0,00 C. perfringens 37 2,70 47 0,00 C. colinum 37 11 29,73 47 14 29,79 T l (%) 30 25 29,79 25,53 C. botulinum C. difficile 2,70 5,41 An Giang Tnh Khỏc 16,22 15 10 29,73 20 C. perfringens C. colinum Hỡnh 17: T l mu rut vt bnh nhim cỏc chng vi khun Clostridium theo a im ly mu Theo kt qu bng 10 cho thy: ti An Giang tỡnh hỡnh nhim cỏc chng vi khun Clostridium phong phỳ hn ti mt s Tnh Khỏc; ti An Giang cú n bn chng vi khun Clostridium c ghi nhn: C. colinum chim t l cao nht l 29,73%, tip n C. botulinum chim 16,22%, C. difficile chim 5,41% v thp nht l C. perfringens chim 2,70%; cũn ti mt s Tnh Khỏc: ch ghi nhn c hai chng vi khun Clostridium l: C. colinum chim 29,79% v C. botulinum l 25,53%. iu ny cú th c lý gii bi iu kin mụi trng, 35 ia phng khỏc nờn tỡnh hỡnh vt nhim cỏc chng vi khun Clostridium s khỏc nhau. Xột v yu t bựng phỏt ng c ti hai a im c ghi nhn cho thy: ti mt s tnh khỏc cú nguy c bựng phỏt ng c cao hn so vi An Giang, vi nhõn t quan trng ú l t l mu nhim vi khun C. botulinum ti mt s Tnh Khỏc l 25,53% cao hn so vi An Giang cú t l l 16,22%. Nhng kh nng bựng phỏt ng c cũn ph thuc vo nhiu yu t: th trng, sc khỏng ca vt nuụi, mụi trng, cỏc yu t t nhiờn, . 36 4.3 Kt qu kim tra nhy cm ca vi khun vi mt s loi khỏng sinh Kho sỏt tớnh nhy cm ca vi khun Clostridium spp. phõn lp c i vi loi khỏng sinh thu c kt qu bng 11. Bng 11: Kt qu khỏng sinh ca vi khun Clostridium spp. vi mt s loi khỏng sinh Mn cm trung bỡnh Khỏng thuc Mn cm cao Loi khỏng sinh S mu kim tra Trimethoprime/ Sulfamethoxazol 46 46 100 Penicillin 46 46 100 Tetracycline 46 6,52 14 30,43 29 63,04 Erythromycin 46 8,69 10 21,74 32 69,57 Norfloxacin 46 46 100 STT nhy 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 S mu T l dng (%) S mu T l S mu T l dng (%) dng (%) Khỏng Trung bỡnh Nhy Nr Er Te Pn Hỡnh 18: Kt qu khỏng sinh ca vi khun Clostridium spp. vi mt s loi khỏng sinh Bt Ghi chỳ: Te: Tetracycline Nr: Norfloxacin Er: Erythromycin Bt: Trimethoprime/Sulfamethoxazol 37 Pn: Penicillin Kt qu khỏng sinh bng 11 cho thy: nhy cm rt cao ca vi khun Clostridium spp. vi norfloxacin l 100%, t kt qu ny ta cú th s dng khỏng sinh norfloxacin phũng bnh cho vt vo cỏc thi im ó xy bnh vi khun Clostridium spp. quỏ trỡnh chn th trờn ng rung s mang li hiu qu. Tip n l erythromycin v tetracycline cú tỏc dng c ch s phỏt trin ca nhúm vi khun Clostridium spp. ny nhng hiu qu thp hn vi t l ln lt l 69,57% v 63,04%. ỏng chỳ ý l kh nng khỏng hon ton ca vi khun Clostridium spp. vi penicillin v trimethoprime/sulfamethoxazol l 100%. Do vi khun Clostridium spp. l vi khun thng trỳ h tiờu húa ca ng vt (Smith v ctv, 1978; Cooper v ctv, 2013), nờn cỏc loi khỏng sinh ó c s dng iu tr bnh hoc b sung vo thc n phũng bnh cho vt u cú tỏc dng gõy nờn nhng bin i di truyn hỡnh thnh cỏc chng Clostridium khỏng vi khỏng sinh. Vỡ vy, nhiu kt qu nghiờn cu khỏc v nhy v tớnh khỏng ca vi khun i vi khỏng sinh s ph thuc vo thi im, a phng kho sỏt. Hỡnh 19: Kt qu khỏng sinh ca vi khun Clostridium spp. phõn lp c 38 Bng 12: Tớnh nhy cm ca cỏc chng Clostridium phõn lp c i vi khỏng sinh Khỏng sinh C. perfringens ( n= 1) C. difficile (n= 2) C. botulinum (n=18) C. colinum (n= 25) K TB N K TB N K TB N K TB N Bt 100 100 100 100 Pn 100 100 100 100 Te 100 50 50 5,55 27,78 66,67 28 64 Er 100 100 11,11 27,78 61,11 16 76 Nr 100 100 100 100 TB: Trung bỡnh N: Nhy Te: Tetracycline Er: Erythromycin Pn: Penicillin Nr: Norfloxacin Bt: Trimethoprime/Sulfamethoxazol Ghi chỳ: K: Khỏng Theo kt qu bng 12 cho thy cỏc chng vi khun Clostridium spp. phõn lp c cú nhy cm v khỏng c th vi tng loi khỏng sinh kim tra, õy l nhng s liu hu ớch cho nhng ngi lm cụng tỏc iu tr. Kt qu khỏng sinh ca vi khun C. botulinum cho thy, vi khun C. botulinum nhy cm rt cao vi norfloxacin t l 100%, kt qu ny phự hp vi nghiờn cu ca Nguyn c Hin (2012) v vi khun C. botulinum cú nhy cm cao ca norfloxacin vi t l 80%. V vi khun C. botulinum khỏng hon ton vi penicillin v trimethoprime/sulfamethoxazol u l 100%, kt qu ny phự hp vi nghiờn cu ca Swenson v ctv (1980). Bng 13: Kt qu a khỏng ca vi khun Clostridium spp. i vi khỏng sinh Cỏc loi khỏng sinh S mu kim tra S mu khỏng T l (%) Bt, Pn 46 46 100 Bt, Pn, Er 46 8,70 Bt, Pn, Te 46 6,52 Bt, Pn, Er, Te 46 2,17 Ghi chỳ: Bt: Trimethoprime/Sulfamethoxazol Pn: Penicillin Er: Erythromycin Te: Tetracycline 39 Theo kt qu bng 13 cho thy: vi khun Clostridium spp. phõn lp c ó khỏng vi nhiu loi khỏng sinh, khỏng ng thi hai loi khỏng sinh: penicillin v trimethoprime/sulfamethoxazol l 100% (46/46), khỏng ng thi vi ba loi khỏng sinh l 15,32%, vi: penicillin, trimethoprime/sulfamethoxazol v tetracycline 8,70% (4/46) v penicillin, trimethoprime/sulfamethoxazol v erythromycin vi t l l 6,52% (3/46), khỏng ng thi bn loi khỏng sinh: penicillin, trimethoprime/sulfamethoxazol, tetracycline v erythromycin vi t l l 2,17% (1/46). Vỡ vy, cn chỳ ý n vic la chn hay kt hp cỏc loi khỏng sinh phũng bnh vi khun Clostridium spp. gõy bnh trờn vt. 40 Chng KT LUN V NGH 5.1 Kt Lun Qua thi gian thc hin ti, chỳng tụi cú nhng kt lun sau: T l vt bnh nhim rt cao vi khun Clostridium spp. 54,76%. T l vt bnh nhim vi khun C. colinum 29,76%. T l vt bnh nhim vi khun C. botulinum 21,43%. T l vt bnh nhim vi khun C. difficile 2,38%. T l vt bnh nhim vi khun C.perfringens 1,19%. T l vt bnh cú s nhim ghộp gia vi khun C. botulinum vi C. colinum 1,19%. Kt qu kho sỏt khỏng sinh cho thy vi khun Clostridium spp. nhy cm rt cao vi norfloxacin 100%, khỏng hon ton vi penicillin 100% v trimethoprime/sulfamethoxazol 100%. Kt qu a khỏng cao ca vi khun Clostridium spp. vi khỏng sinh, c bit l ó xy s khỏng ca vi khun Clostridium spp. vi bn loi khỏng sinh: erythromycin, tetracycline, penicillin v trimethoprime/sulfamethoxazol 2,17%. 5.2 Ngh Cn nghiờn cu s hin din ca vi khun Clostridium spp. mụi trng (thc vt, t, trm tớch, nc, .) v cỏc yu t ca mụi trng: nhit , pH, mn, cht hu c, .nh hng n s hin din ca vi khun. Tin hnh th nghim c t lờn ng vt cm nhim t vi khun phõn lp c, xỏc nh loi c t v tin hnh nghiờn cu sn xut gii c t. 41 TI LIU THAM KHO Ti liu ting vit: 1. Bựi Xuõn Mn, 2000. Giỏo trỡnh chn nuụi vt. T sỏch i hc Cn Th, trang 1-7. 2. ng Xuõn Bỡnh, 2005. Vi khun Escherichia coli v Clostridium perfringens bnh tiờu chy ln theo m, ch to sinh phm phũng tr. Lun ỏn Tin S Nụng nghip, H NI. 3. Hunh Th M L, Ngc Thỳy v Nguyn Bỏ Hiờn, 2012. Xỏc nh genotyp ca vi khun Clostridium perfringens phõn lp c t bũ v ln mc hi chng tiờu chy nuụi ti H Ni v vựng ph. Tp Khoa hc v Phỏt trin 2012, 10, s 4, trang 627-632. 4. Hunh Th M L, Trn Th Lan Hng, Lờ Vn Lónh, Ngc Thỳy v Nguyn Bỏ Hiờn, 2009. T l nhim Clostridium hi chng tiờu chy ln nuụi ti H Ni v vựng ph cn. Tp Khoa hc v Phỏt trin, 7, s 2, trang 172-179. 5. Lõm Minh Thun v Ch Minh Hựng, 2004. K thut chn nuụi thy cm (Vt, ngang, ngng). Nh xut bn Nụng Nghip TP. H Chớ Minh, trang 25-29. 6. Lờ Vn Sn, 2011. Nghiờn cu mt s c tớnh ca Clostridium perfringens gõy viờm rut tiờu chy dờ, cu ti mt s tnh Nam Trung b v bin phỏp phũng tr. Lun ỏn Tiờn S Nụng nghip, H NI. 7. Lờ Vn Sn, ng Thanh Hiờn, Lờ ỡnh Hi, Lờ Lp, Nguyờn Ngc Nhiờn v Nguyn Vit Khụng, 2011. Xỏc nh gen c t v t hp ca chỳng vi cỏc gen mó húa nhng c t chớnh ca Clostridium perfringens phõn lp t dờ v cu duyờn hi Nam Trung B. Khoa hc k thut Thỳ y, 18, s 5, trang 38-44. 8. Nguyn c Hin v Phm Mnh Hựng, 2012. c tớnh v tớnh gõy bnh trờn vt ca c t vi khun (Clostridium botulinum) phõn lp ti thnh ph Cn Th. Tp Khoa hc, 22c, trang 40-46. 9. Nguyn c Hin, 2012. Phõn lp v xỏc nh tớnh nhy cm khỏng sinh ca vi khun (Clostridium botulinum) t vt v mụi trng chn th ti thnh ph Cn Th. Tp khoa hc, 22c, trang 64-71. 10. Nguyờn Nh Thanh, Nguyn Bỏ Hiờn v Trn Th Lan Hng, 2001. Vi sinh vt hc thỳ y. Nh xut bn Ngụng nghip H Ni, trang 134138. 11. Nguyn Thin, Lờ Xuõn Hng v Nguyn Cụng Quc, 2005. Xúa gim nghốo bng phng thc chn nuụi kt hp vt-cỏ-lỳa. Nh xut bn Nụng nghip, trang 9-19. 42 12. Phựng c Tin, 2013. Cm Nang Chn Nuụi Vt Vit Nam. Nh xut bn Nụng Nghip. 13. Trn c Hnh, 2013. Nghiờn cu vai trũ ca E.coli, Salmonella v Clostridium perfringens gõy tiờu chy ln ti tnh nỳi phớa Bc v bin phỏp phũng tr. Lun ỏn Tin S Nụng nghip, H NI. 14. Trn c Hnh, Nguyn Quang Tuyờn v Cự Hu Phỳ, 2011. Kt qu phõn lp, xỏc nh mt s c tớnh sinh hc ca vi khun Cl. Perfringens ln tiờu chy ti cỏc tnh phớa Bc. Khoa hc k thut Thỳ y, 18, s 5, trang 32-37. 15. Trn Linh Thc, 2010. Phng phỏp phõn tớch vi sinh vt nc, thc phm v m phm. Nh xut bn Giỏo Dc Vit Nam, trang 99100. Ti liu nc ngoi 1. Chun, C. L., U. Ochsner, M. N. Byappanahalli, R. L. Whitman, W. H. Tepp, G. Lin, E. A. Johnson, J. Peller and M. J. Sadowsky, 2013. Association of toxin-producing Clostridium botulinum with the macroalga Cladophora in the Great Lakes. Environ Sci Technol, 47(6): 2587-2594. 2. Cooper, K. K., J. G. Songer and F. A. Uzal, 2013. Diagnosing clostridial enteric disease in poultry. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 25(3): 314327. 3. Defilippo, F., L. Andrea, M. Giulia, M. Dario, C. F. Maria, P. Federica, B. Paolo, D. Michele and G. Merialdi, 2013. Outbreak of Type C Botulism in Birds and Mammals in the Emilia Romagna Region, Northern Italy. Journal of Wildlife Diseases. Journal of Wildlife Diseases, 49, s 4, trang 1042-1046. 4. Duchesnes, C., P. E. Granum, M. G. Menozzi, M. Peck, S. Pelkonen, M. Popoff, E. Stackebrandt and R. Titball, 2006. Genus Clostridium, Clostridia in medical, veterinaryand food microbiology Diagnosis and typing. Trang: 51-54; 163. 5. Espelund, M. and D. Klaveness, 2014. Botulism outbreaks in natural environments - an update. Fronties in Microbiology, 5, s 287, trang 1-7. 6. Gao, Q. Y., Y. F. Huang, J. G. Wu, H. D. Liu and H. Q. Xia, 1990. A review of botulism in China. Biomed Environ Sci, (3): 326-336. 7. Haagsma, J., 1991. Pathogenic anaerobic bactreria and the environment. trang 749-764. 43 8. Kondo, F., J. Tottory and K. Soki, 1988. Ulcerative Enteritis in Broiler Chickens Caused byClostridium colinum and In Vitro Activity of 19 Antimicrobial Agents in Tests on Isolates. Poultry Science, 67(10): 1424-1430. 9. Kouassi, K. A., 2014. Clostridium perfringens and Clostridium difficile in cooked beef sold in Cụte d'Ivoire and their antimicrobial susceptibility. Trang 90-94. 10. Locke, L. N. and M. Friend, 1989. Avian botulism: geographic expansion of a historic disease. Federal Government Series: Fish and Wildlife Leaflet - Waterfowl Management Handbook, National Wildlife Health Research Center, trang 1-6. 11. Markey, B., F. Leonard, M. Archambault, A. Cullinane and D. Maguire, 2013. Chapter 16: Clostridium species. Clinical Veterinary Microbiology. 2nd ed. 12. Neimanis, A., D. Gavier-Widộn, F. Leighton, T. Bollinger, T. Rocke and T. Mửrner, 2007. An outbreak of type C botulism in herring gulls (Larus argentatus) in southeastern Sweden. J Wildl Dis, 43 (3): 327-36. 13. Osman, K. M., Y. A. Soliman, Z. M. Amin and M. A. Aly, 2012. Prevalence of Clostridium perfringens type A isolates in commercial broiler chickens and parent broiler breeder hens in Egypt. Rev Sci Tech, 31(3): 931-941. 14. Pir Tina, J. Avberek, U. Zajc, J. Miunovi, B. Krt, A. Kocuvan, M. Rupnik and M. Ocepek, 2012. Clostridium difficile in poultry production: detection and characterisation. 15. Public Health England, 2014. Identification of Clostridium species. UK Standards for Microbiology Investigations. Page 1-22. 16. Rocke, T. E. and M. Friend, 1998. AvianBotulism. Field Manual of Wildlife Diseases: General Field Procedures and Diseases of Birds, phn 6: Biotoxins, chng 38: AvianBotulism, trang 271-281. 17. Rocke, T. E., 2006. The global importance of avian botulism. Waterbirds around the world. The Stationery Office, Edinburgh, United Kingdom, trang 422 426. 18. Rocke, T., K. Converse, C. Meteyer and B. McLean, 2005. The impact of disease in the American White Pelican in North American. Waterbirds 28 (Special Puplication), trang 87-94. 19. Roussan, D. A., R. H. Al Rifai, G. Y. Khawaldeh and W. S. Totanji, 2009. Flock-level prevalence of Clostridium colinumin broiler flocks with digestive disease in Jordan by polymerase chain reaction. Poultry Science, 88, s 8, trang 1639-1642. 44 20. Salf, N. A. and J. S. Brazier, 1996. The distribution of Clostridium difficile in the environment of South Wales. J Med Microbiol, 45(2): 133-137. 21. Smith, G. R., R. A. Milligan and C. J. Mioryson, 1978. Clostridium botulinum in aquatic environments in Great Britain and Ireland. Trang: 431-438. 22. Svobodovỏ, I., I. Steinhauserovỏ and M. Nebola, 2007. Incidence of Clostridium perfringens in Broiler Chickens in the Czech Republic. Acta Vet. Brno, 76: 25-30. 23. Swenson, J. M., C. Thornsberry, L. M. McCroskey, C. L. Hatheway and V. R. Dowell, 1980. Susceptibal of Clostridiun botulinum to Thirteen Atimicribial Angents. J Clin Microbiol,18(1): 13-19. 24. Todar, K., (2006). Diagnostic Bacteriology, Chapter 29: Pathogenic Clostridia, including Tetanus and Botulism, trang: 1-4. 25. Vidal, D., I. Anza, M. A. Taggart, E. Pộrez-Ramớrez, E. Crespo, U. Hoe and R. Mateo, 2013. Environmental Factors Influencing the Prevalence of a Clostridium botulinum Type C/D Mosaic Strain in Nonpermanent Mediterranean Wetlands. Trang 4262-4271. 26. Wobeser, G., 1997. Avian botulism-another perspective. J Wildl Dis, 33(2): 181-186. 27. Wobeser, G., S. Marsden and R. J. MacFarlane, 1987. Occurrence of toxigenic Clostridium botulinum type C in the soil of wetlands in Saskatchewan. J Wildl Dis, 23 (1): 67-76. 28. Woo, G. H., H. Y. Kim, Y. C. Bae, Y. H. Jean, S. S. Yoon, E. J. Bak, E. K. Hwang and Y. S. Joo, 2010. Outbreak of botulism (Clostridium botulinum type C) in wild waterfowl: Seoul, Korea. Journal of Wildlife Diseases. Trang 951-955. Ti liu t Internet 1. http://tailieu.vn/doc/cam-nang-chan-nuoi-vit-1438292.html (Cm nang chn nuụi vt phn III, trang 251-255). 2. http://www.angiang.gov.vn 3. http://vi.wikipedia.org/wiki/%C4%90%E1%BB%93ng_b%E1%BA%B 1ng_s%C3%B4ng_C%E1%BB%ADu_Long 45 PH CHNG 1. BNG C KT QU API 20A Xét nghiệm Thành phần Số l-ợng L-tryptophan 0.98 URE Urea 0.684 UREase GLU MAN LAC D-glucose D-mannitol D-lactose (nguồn gốc từ bò) D-saccrose (sucrose) D-maltose Salicin D-xylose L-arabinose 1.96 1.96 1.96 Axit hóa (GLUcose) Axit hóa (MANnitol) Axit hóa (LACtose) 1.86 Axit hóa (SACcarose) 1.96 1.64 1.64 1.64 Axit hóa (MALtose) Axit hóa (SALicin) Axit hóa (XYLose) Axit hóa (ARAbinose) Gelatin (nguồn gốc từ bò) 0.6 Thủy phân (protease) (GELatin) ESC Esculin Fe(NO3)2 0.6 Thủy phân (-glucosidase) (ESCulin) GLY CEL MNE MLZ RAF SOR RHA TRE Glyceron D-cekkobiose D-manose D-melazitose D-rafinosse D-sorbitol L-rhamnose D-trehalose 1.82 1.86 1.96 7.96 2.18 2.18 1.96 1.96 Axit hóa (GLYcerol) Axit hóa (CELlobiose) Axit hóa (ManMoSe) Axit hóa (MeLeZitose) Axit hóa (RAFfinose) Axit hóa (SORbitol) Axit hóa (RHAmnose) Axit hóa (TREhalose) IND SAC MAL SAL XYL ARA Kết Phản ứng/ Enzym Sự tạo thành INDole Âm tính D-ơng tính XYL - trộn/ 2-3 phút + HER/5 phút Vàng Đỏ Vàng chanh Đỏ BCP Tím Vàng/ Vàng xanh Không phát Phát tán tán thuốc thuốc nhuộm nhuộm (1) màu đen (2) Vàng (2) Nâu đen (2) UV (365 nm) Phát hùynh Không phát quang huỳnh quang BCP Tím Vàng/ Vàng xanh Sau 30 phút đặt không khí H2O2 ống d-ơng tính CAT CATalsse Không bọt Bọt khí khí SPOR Bào tử Không có Có bào tử GRAM Phản ứng Gram Màu hồng Màu tím COCC Hình thái Hình que Hình cầu (1) Với việc ủ lọ tròn, Thuốc nhuộm khuếch tán phần thấp tuýp. (2) Màu nâu đen xuất đ-ợc đ-a không khí: việc phảI đ-ợc cân nhắc đọc kết quả. Màu đen tạo thành FeS H2S phản ứng với Fe(NO3)2. Phản ứng phân hủy esculin. Hai việc đ-ợc phân biệt dạng kết tủa màu đen FeS đáy ống kết phân hủy esculin vùng nâu đen phía tuýt. Nếu tuýt đen hoàn toàn, tr-ờng hợp nghi ngờ, xét nghiệm nên đọc cách kiểm tra phát quang d-ới ánh sáng UV. 46 2. KT QU THNG Kấ So sỏnh t l vt bnh nhim vi khun Clostridium spp. t mu rut ti An Giang v Tnh Khỏc a phng An Giang Tnh Khỏc S mu dng 20 26 S mu õm 17 21 Tng cng 37 47 Chi-Square Test: An Giang, Tnh Khỏc Expected counts are printed below observed counts An Giang 20 20.26 Tnh Khỏc 26 25.74 Total 46 17 16.74 21 21.26 38 Total 37 47 84 Chi-Sq = 0.003 + 0.004 + 0.003 + 0.003 = 0.013 DF = 1, P-Value = 0.908 47 3. PHIU LY MU PHIU LY MU 1. H tờn ch h: .in thoi: 2. a ch: 3. Tng n vt ang nuụi: . con. Trong ú: Vt con: con; Vt : con; Vt tht: . 4. Phng thc chn nuụi: Nuụi trang vt Nuụi th quanh nh Nuụi chy ng 5. Thc n chn nuụi: Thc n hn hp Lỳa Vt t tỡm mi + B sung lỳa, THH 6. Tỡnh trng vt ly mu: Vt (di tun tui) Vt tht (di 4-12 tun tui) Vt (>12 tun tui) Bỡnh thng Lit chõn Lit c Khỏc: . 7. Ghi nhn m khỏm vt ly mu: Ni tng bỡnh thng Ni tng xut huyt H tiờu húa nhiu thc n H tiờu húa khụng thc n Bnh tớch khỏc: 8. Tỡnh trng t: t mi gt lỳa t mi ngp nc t khụ t mm (khụng ngp nc) 9. Loi mu v s mu ly: Bnh phm (rut vt): s lng . Ký hiu: Bựn, t: s lng . Ký hiu: Ngy thỏng nm 20 Ch h nuụi vt Ngi ly mu 48 [...]... những vấn đề trên, giúp tôi có định hƣớng và tiến hành nghiên cứu về vi khuẩn Clostridium spp trong đề tài Phân lập vi khuẩn Clostridium spp trên vịt có biểu hiện liệt chân, liệt cánh, liệt cổ, tiêu chảy tại một số tỉnh Đồng bằng sông Cửu Long và kiểm tra tính nhạy cảm của vi khuẩn với một số loại kháng sinh Với mục tiêu là:  Tìm hiểu thêm nhiều thông tin, có thêm kiến thức và đƣợc đóng góp vào nguồn... nhóm vi khuẩn Clostridium  Xác định sự hiện của các chủng vi khuẩn Clostridium và ảnh hƣởng của chúng trong nhóm vi khuẩn Clostridium với các triệu chứng của bệnh  Kiểm tra độ nhạy của vi khuẩn Clostridium spp phân lập đƣợc với một số loại kháng sinh 1 Chƣơng 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tình hình nghiên cứu về vi khuẩn Clostridium spp tại Vi t Nam và trên thế giới 2.1.1 Tình hình nghiên cứu về vi khuẩn Clostridium. .. của vịt bệnh có biểu hiện liệt chân, liệt cánh, liệt cổ và tiêu chảy được thu thập tại tỉnh An Giang và một số Tỉnh Khác Tiến hành phân lập bằng môi trường thạch máu và kiểm tra sinh hóa bằng test API 20A, thu được kết quả vi khuẩn Clostridium spp nhiễm rất cao 54,76% (46/84) từ mẫu ruột vịt bệnh, với tỷ lệ mẫu ruột vịt bệnh nhiễm cao nhất vi khuẩn Clostridium colinum 29,76% (25/84), kế đến là vi khuẩn. .. học của Trƣờng Đại học Cần Thơ, với nội dung nghiên cứu về vi khuẩn Clostridium botulinum tại thành phố Cần Thơ:  Nghiên cứu của Nguyễn Đức Hiền (2012) trên mẫu ruột vịt và bùn tại nơi chăn nuôi có vịt bệnh Tỷ lệ mẫu nhiễm vi khuẩn C botulinum: trên ruột vịt là 14,77% (52/252) và bùn là 25,71% (27/105) Khi khảo sát tính nhạy cảm của vi khuẩn với kháng sinh thì cho kết quả: 100% vi khuẩn nhạy cảm với. .. cho thấy: vi khuẩn Clostridium spp nhạy cảm rất cao với norfloxacin 100%, nhạy cảm vừa với erythromycin 69,57%, tetracycline 63,04%, kháng hoàn toàn với penicillin 100% và trimethoprime/sulfamethoxazol 100% Sự đa kháng cao của vi khuẩn Clostridium spp với: hai loại kháng sinh (penicillin và trimethoprime/sulfamethoxazol) 100% (46/46); ba loại kháng sinh là 15,32%, với tetracycline, penicillin, và trimethoprime/sulfamethoxazol... Nuôi cấy, phân lập vi khuẩn Clostridium spp từ các mẫu bệnh phẩm Định danh một số chủng vi khuẩn Clostridium bằng phản các ứng sinh hóa với test API 20A Thực hiện kháng sinh đồ, kiểm tra độ nhạy của vi khuẩn Clostridium spp phân lập đƣợc với kháng sinh 3.2 Phƣơng tiện nghiên cứu 3.2.1 Thời gian, đối tượng và địa điểm Thời gian thực hiện đề tài: Từ tháng 07/2014 đến tháng 11/2014 Đối tượng: Vịt ở độ... Đối tượng: Vịt ở độ tuổi 21-22 tuần tuổi có biểu hiện các triệu chứng liệt chân, liệt cánh, liệt cổ, tiêu chảy và chết ngoài đồng trong quá trình chăn thả Địa điểm lấy mẫu: tại một số tỉnh ĐBSCL (trên địa bàn tỉnh An Giang và các Tỉnh Khác: Bến Tre, Cần Thơ, Đồng Tháp, Hậu Giang, Kiên Giang, Long An, và Vĩnh Long) Địa điểm phân lập: Phòng thí nghiệm Vi trùng và Miễn dịch, Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp... án Tiến Sĩ và có những đóng góp riêng của mình trong luận án: “Nghiên cứu một số đặc tính của Clostridium perfringens gây vi m ruột tiêu chảy ở dê, cừu tại một số tỉnh Nam Trung bộ và 2 biện pháp phòng trị” Kết quả bệnh vi m ruột tiêu chảy ở dê, cừu tại một số tỉnh Nam Trung bộ là do vi khuẩn C perfringens thuộc hai typ: A (76,28%) và D (23,72%) Đặc biệt, typ D ở gia súc bệnh cao hơn so với gia súc... đến là vi khuẩn Clostridium botulinum 21,43% (18/84), vi khuẩn Clostridium difficile 2,38% (2/84) và thấp nhất vi khuẩn Clostridium perfringens 1,19% (1/84), đồng thời đã ghi nhận một trường hợp nhiễm ghép giữa vi khuẩn Clostridium botulinum với Clostridium colinum 1,19% (1/84) Kiểm tra độ nhạy của vi khuẩn với 5 loại kháng sinh (norfloxacin, erythromycin, tetracycline, penicillin và trimethoprime/sulfamethoxazol)... liệt chân, liệt cánh, liệt cổ, tiêu chảy hay chết để mổ khám lấy mẫu ruột kiểm tra Hình 3: Thu thập các mẫu vịt bị bệnh “cúm cần” Nội dung tiến hành gồm: Quan sát, ghi nhận dấu hiệu bên ngoài của vịt bệnh và ghi vào phiếu lấy mẫu (bao gồm các triệu chứng: liệt chân, liệt cánh, liệt cổ, tiêu chảy và các triệu chứng khác nếu có) Giết vịt bằng cách cắt cổ hay hủy tủy Đặt vịt nằm ngữa, dùng kéo cắt vùng . LIỆT CÁNH, LIỆT CỔ, TIÊU CHẢY TẠI MỘT SỐ TỈNH ĐỒNG BẰNG SÔNG CỬU LONG VÀ KIỂM TRA TÍNH NHẠY CẢM CỦA VI KHUẨN VỚI MỘT SỐ LOẠI KHÁNG SINH Giáo vi n hướng dẫn: Sinh vi n thực hiện: . tiêu chảy tại một số tỉnh Đồng bằng sông Cửu Long và kiểm tra tính nhạy cảm của vi khuẩn với một số loại kháng sinh . Với mục tiêu là:  Tìm hiểu thêm nhiều thông tin, có thêm kiến thức và đƣợc. bằng sông Cửu Long và kiểm tra tính nhạy cảm của vi khuẩn với một số loại kháng sinh . Do sinh vi n: Lê Vƣơng Cảnh, mã số sinh vi n: 3102932, thực hiện tại phòng Vi Trùng và Miễn Dịch của bộ