BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI 1=0 ĐỖ THỊ THUÝ NGA NGHIÊN CỨU CHỦNG STREPTOMYCES 13.312 CÓ KHẢ NĂNG SINH TổNG HỢP KHÁNG SINH (KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Người hướng dẫn Nơi thực Thời gian thực Dược s ĩ KHO Á 1999-2004) TS. CAO VÃN THƯ BỘ MÔN CÔNG NGHIỆP D ợ c 15/02/2004- 20/05/2004 ỵ ¡nir-viỆN ũ Ù I. • * : , v . ism. O A '.'/ ị Hà Nội, 05-2004 \ -Vry LỜI CẢM ƠN Với kính trọng lòng biết ơn sâu sắc xin bầy tỏ lời cảm ơn chân thành tới thầy giáo TS. Cao Văn Thu, người trực tiếp hướng dẫn, tận tình bảo, giúp đỡ hoàn thành khoá luận tốt nghiệp này. Đồng thời xin bày tỏ lòng cảm ơn tới thầy cô ban giám hiệu nhà trường, thầy cô, cán kỹ thuật viên môn Công nghiệp dược môn khác, phòng ban nhiệt tình giúp đỡ, tạo điều kiên cho trình thực nghiệm. Xin cảm ơn gia đình bạn bè, người giúp đỡ động viên thời gian qua. Do trình độ thân, thời gian có hạn nên đề tài khó tránh khỏi khiếm khuyết. Rất mong bảo thầy cô đóng góp ý kiến bạn bè. Tôi xin chân thành cảm ơn. Hà nội, ngày 20 tháng năm 2004 Sinh viên Đổ Thị Thuý Nga MỤC LỤC Trang Đặt vấn đ ề Phần 1: Tổng q uan . .Kháng sin h 1.1.1.Lịch s . . . .2 .Định ng h ĩa . 1.1.3.Phân loại . 1.1.4.SƠ đồ sản xuất kháng sin h 1.2.Đại cương Streptomyces .5 1.2.1 .Một số đặc điểm chung Streptomyces .5 .2 .2 .Đặc điểm hình thái sinh lý xạ khuẩn chi Streptomyces .6 1.2.3.Phân loại Streptomyces . 1.2.4.Khả STH kháng sinh Streptomyces . 1.3.Cải tạo giống v sv 1.3.1.Mục đ íc h 1.3.2.Các phương pháp cải tạo giống 1.4.Lên men STH kháng sin h . 10 1.4.1.Lên men bề m ặ t 1 .4 .2 .Lên men ch ìm 1.5.Chiết tách-tinh c h ế 15.1.Chiết x u ấ t 13 15.2.Tách sản phẩm 13 l.ó.Một số thành tựu nghiên cứu kháng sin h . 14 Phần 2: Thực nghiệm kết q u ả 16 . .Nguyên vật liệu phương pháp thực nghiệm . 16 2.1.1 .Nguyên vật liệ u 16 2.1.2.Phương pháp nghiên c ứ u . 19 2.2.Kết thực nghiệm nhận xét . 28 .2 . .Kết phân loại theo I S P 28 2.2.2.Khả STH kháng sinh chủng Streptomyces 13.312 môi trường phân lập(M T3) 29 2.2.3.Kết lựa chọn MT nuôi cấy v s v kiểm định chủng Streptomyces 13.312 . 29 2.2.4.Kết chọn chủng có hoạt tính cao phương pháp chọn lọc ngẫu n h iên . 32 2.2.5.Kết đột biến ánh sáng u v 34 2.2.6.Kết lên men sau đột b iến . 36 2.2.7.Kết lựa chọn dung môi chiết thích hợp dịch lên m e n . 37 2.2.8.Kết sắc ký lớp m ỏng 38 Phần 3: Kết lu ậ n . 39 3.1.Kết lu ậ n 39 3.2.Đề x u ấ t . 39 Tài liệu tham khảo Phụ lục CHÚ GIẢI CHỮ VIẾT TẮT A Agitation ADN Acid deoxyribonucleic AIDS Acquired immunodeficiency syndrome As Aspergillus niger BC Bacillus cereus ATCC 9946 BP Bacillus pumilus ATCC 10241 BS Bacillus subtilis ATCC 6633 D(min) Đường kính vòng vô khuẩn trung bình Dmhc Dung môi hữu DO Dissolved oxygen E Aeration EC Escherichia coli ATCC 25922 Gy Grey Ha hair HIV human immunodeficiency virus MT Môi trường MTdd Môi trường dung dịch N Pha nước Pseu Pseudomonas aeruginosa VM 201 Pro Proteus mirabilis BV 108 RA Retinaculiaperti RF Rectiflexibiles s Spirales s Sai số chuẩn hiêu chỉnh I Sal Salmonella typhi DT 220 Shi Shigella flexneri DT 112 SL Sarcina lutea ATCC 9341 sp spiny Sta Staphylococcus aureus ATCC 1228 STH Sinh tổng hợp V Verticillati vsv w Vi sinh vật Wa warty Y Yellow White ĐặTV/ỀRĐỂ Đ ề kháng kháng sinh vấn đề gây lo âu lớn không Việt Nam mà khắp giới. Các nhà khoa học chuyên gia y tế không ngừng tìm kiếm phương sách để chống lại tượng này, không kể đến nỗ lực không ngừng nhằm phát minh kháng sinh có hiệu lực mạnh. Trên đường nghiên cứu phát triển kháng sinh nhiều phương pháp khác nhờ thành tựu to lớn khoa học đại như: tổng hợp, bán tổng hợp công nghệ vi sinh tổng hợp kháng sinh tiếp tục khẳng định vai trò quan trọng nó, nhằm đưa lại ứìig dụng thực tế lĩnh vực Y- Dược học. Trong số khoảng 8000 chất kháng sinh biết đến giới có đến 60% xạ khuẩn sinh ra. Các công trình nghiên cứu chứng minh Streptomyces chi xạ khuẩn gồm nhiều loài có khả sinh tổng hợp kháng sinh đa dạng cấu trúc đặc điểm kháng khuẩn, số loài chi có khả sinh tổng hợp chất chữa ung thư điều trị HIV/AIDS. Bộ môn Công nghiệp Dược- TĐH Dược tìà nội tiến hành phân lập nghiên cứu số chủng Streptomyces có đất, bùn v.v . Việt Nam. Từ nghiên cứu khởi phát, Streptomyces 13.312 chủng xạ khuẩn có độ ổn định di truyền học tốt, có khả sinh tổng hợp kháng sinh phổ rộng có tiềm ứng dụng lĩnh vực phòng bệnh chữa bệnh. Do đó, chọn đề tài “Nghiên cứu chủng Streptomyces 13.312 có khả sinh tổng hợp kháng sinh ” với mục tiêu: * Nâng cao hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh đột biến cải tạo giống tối ưu hoá trình lên men. * Nghiên cứu sơ chiết tách tinh chế. * Nghiên cứu đặc điểm hình thái sinh lý nhằm phân loại, xác định tên khoa học chủng Streptomyces 13.312 theo khoá phân loại ISP (International Streptomyces Project). Phần TỔNG QUAN 1.1. Kháng sinh [1] [3] [5] [9] 1.1.1. Lịch sử. Loại kháng sinh Penicillin nhà bác học người Anh Alecxander Pleming(1881-1955) phát năm 1928. Có thể nói ông người mở kỷ nguyên cho nhân loại việc dùng kháng sinh để điều trị bệnh nhiễm trùng, nguyên gây bệnh tử vong năm đầu kỷ XX. Tiếp sau hàng loạt kháng sinh khác đời. 1.1.2. Định nghĩa. Kháng sinh sản phẩm đặc biệt nhận từ vi sinh vật hay nguồn tự nhiên khác có hoạt tính sinh học cao, có tác dụng kìm hãm tiêu diệt cách chọn lọc lên nhóm vi sinh vật xác định (vi khuẩn, nấm, nguyên sinh động vật .) hay tế bào ung thư. 1.1.3. Phân loại kháng sinh. Kháng sinh phân loại theo nguồn gốc, chế tác dụng, cấu trúc hoá học. Trong phân loại theo cấu trúc hoá học xem phân loại khoa học nhất: kháng sinh phân loại thành nhóm sau: ❖.Nhóm P-Lactam: Phân nhóm penicillin, cephalosporin, ức chế P" lactamase ❖.Nhổm Aminosid: Streptomycin, gentamicin, . A.Nhóm Phenicol: Cloramphenicol, thiamphenicol . *.Nhóm Tetracyclin: tetracycline, oxytetracyclin, doxycyclin . ❖.Nhóm Macrolid: Erythromycin, spiramycin . *.Nhóm Rifamicin: Rifampicin . Ạ.Nhóm Quinolon: Ciprofloxacin, . 1.1.4. Sơ đồ sản xuất kháng sinh: Được giới thiệu hình Hình 1: Sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh Bảng 4: Ảnh hưởng loại môi trường đến khả sinh tổng hợp kháng sinh Streptomyces 13.312 nuôi cấy bề mặt \M T MT1 MT2 MT3 MT4 MT5 MT6 MT7 11,32 11,77 12,01 0,00 10,23 0,00 9,07 0,13 13,32 0,31 12,48 0,10 13,59 0,00 0,00 0,47 10,50 0,00 0,00 0,21 9,76 0,46 11,56 0,45 11,93 0,59 12,25 0,00 0,00 0,09 11,35 0,00 0,00 0,33 10,05 0,26 13,73 0,10 14,77 0,31 15,33 0,00 0,27 12,40 0,00 0,37 11,07 0,13 13,15 0,14 13,51 0,27 14,35 0,00 0,00 0,00 0,76 11,97 0,00 0,40 12,67 0,12 0,00 0,86 0,00 13,56 0,25 14,03 0,00 11,48 0,00 0,14 10,06 0,37 14,25 0,32 14,69 0,40 15,12 0,00 0,00 0,66 13,51 0,00 0,00 0,56 12,99 s 0,45 0,24 0,07 0,00 0,35 0,00 0,96 D s 14,74 15,08 15,27 0,00 14,50 0,00 12,11 0,25 13,55 0,34 14,24 0,08 15,70 0,00 0,00 0,00 0,45 11,78 0,00 0,67 9,16 0,76 14,08 0,41 15,62 0,37 16,83 0,00 0,00 0,32 12,25 0,00 0,00 1,10 11,49 0,41 0,32 0,47 0,00 0,05 0,00 0,21 vsv \ BC D s D BP s D BS s D s SL D s Sta D s EC D Pr Ps Sal D s Shi D s 30 0,00 0,00 0,57 10,41 Nhận xét: - Streptomyces 13.312 không sinh tổng hợp kháng sinh MT4,MT6 . Các nghiên cứu không chọn môi trường này. - Trên MT5, MT7 Streptomyes 13.312 cho hoạt tính kháng sinh yếu. - Streptomycesl3.312 phát triển tốt cho hoạt tính kháng sinh mạnh môi trường chứa c N đặc thù (MT1, MT2, MT3). Trong MT3 môi trường Streptomyces 13.312 sinh tổng hợp kháng sinh tốt nhất. - Qua bảng trên, định chọn chủng vsv kiểm định là: Shigella ýỉexneri, Sarcina lutea với hai chủng có hoạt tính kháng sinh ổn định, chọn MT3 làm môi trường nuôi cấy chủng Streptomyces 13.312. Sau nuôi cấy bề mặt tiến hành lên men máy lắc để khảo sát khả sinh tổng hợp kháng sinh Streptomyces 13.312 môi trường khác nhau. Đánh giá hoạt tính kháng sinh dịch lọc sau lên men phương pháp giếng thạch. Kết trình bày bảng 5. 31 É Bảng 5: Ảnh hưởng loại môi trường đến khả sinh tổng hợp kháng sinh Streptomyces 13.312 lên men chìm. Hoạt lực kháng sinh Shi SL Môi trường D (mm) s D(mm) s MT1 12,23 0,56 13,08 0,21 MT2 15,37 0,62 16,65 0,34 MT3 13,59 0,14 14,05 0,07 Nhận xét: - MT3 môi trường sinh tổng hợp kháng sinh mạnh nuôi cấy bề mặt lên men chìm MT2 môi trường cho kết tốt nhất. Qua kết lựa chọn MT3 làm môi trường nuôi cấy bề mặt, MT2 làm môi trường lên men chìm. 2.2.4. Kết chọn chủng có hoạt tính cao phép chọn lọc ngẫu nhiên Tiến hành theo phương pháp chọn lọc ngẫu nhiên để chọn chủng có hoạt tính tốt từ chủng gốc 13.312 để tiến hành nghiên cứu tiếp theo. Kết trình bày bảng . 32 Bảng 6: Kết chọn lọc ngẫu nhiên Kết Ký SL hiệu Kết Ký hiệu Shi Shi SL biến biến chủng D (mm) s D (mm) s chủng D (mm) s D (mm) s 12,35 0,49 14,21 0,07 17 13,40 0,62 13,43 0,17 12,95 0,05 13,81 0,23 18 10,98 0,75 12,03 0,32 15,51 0,03 16,27 0,24 19 8,55 0,54 9,24 0,81 14,77 0,52 15,02 0,56 20 11,49 0,74 12,57 0,12 11,45 0,80 12,68 0,58 21 14,56 0,62 15,23 0,81 10,37 0,20 10,95 0,26 22 10,52 0,58 11,38 0,51 7,83 0,18 8,64 0,60 23 14,62 0,40 13,39 0,84 10,09 0,47 11,68 0,33 24 9,37 0,34 10,93 0,46 9,21 1,00 10,34 0,55 25 13,99 0,59 14,57 0,42 10 9,81 0,14 11,15 0,43 26 14,01 0,75 12,62 0,38 11 9,56 0,88 10,53 0,25 27 7,14 1,06 8,24 0,39 12 15,15 0,16 16,07 0,14 28 8,07 1,01 9,41 0,84 13 10,63 0,09 11,97 0,37 29 13,71 0,80 13,76 0,25 14 11,26 0,42 12,11 0,38 30 11,75 0,16 12,85 0,03 15 12,95 0,16 13,78 0,41 31 13,41 0,23 14,02 0,88 16 13,76 0,77 13,75 0,49 32 9,47 0,85 10,24 0.71 33 Nhận xét:Sau xử lý kết giữ lại biến chủng 3, 12, 21 để tiến hành lên men chìm. Dịch lên men sau lọc loại bỏ sinh khối, đánh giá hoạt tính kháng sinh phương pháp giếng thạch, kết giới thiệu bảng 7. Bảng 7: Hoạt tính kháng sinh biến chủng 3,12, 21 sau sàng lọc ngẫu nhiên lên men chìm SL Ký hiệu biến chủng Shi D (mm) s D (mm) s 14,04 0,54 16,86 0,47 12 16,03 0,15 17,24 0,55 21 13,86 1,02 15,10 0,81 Nhận xét: qua bảng , ta thấy: -Dịch lọc sau lên men chìm biến chủng 12cóhoạt tính kháng sinh mạnh nhất. Trong nghiên cứu sử dụng giống biến chủng 12. -Kết chọn lọc ngẫu nhiên có ý nghĩa ban đầu chủng có hoạt tính kháng sinh cao sau chọn lọc ngẫu nhiên cần cải tạotiếp 2.2.5. Kết đột biến ánh sáng uv. -Tiến hành đột biến Streptomyces 13.312 ánh sáng uv thu kết sau: - Độ sống sót sau đột biến : 0,12%. - Sàng lọc sau đột biến: tuyển chọn ngẫu nhiên 32 biến chủng thử khả STH kháng sinh, để chọn biến chủng có % biến đổi hoạt tính (+) cao. Kết trình bày bảng . 34 Bảng 8: Các biến chủng có % biến đổi hoạt tính (+) cao sau đột biến chủng Shi SL Biến s D (mm) % biến đổi D (mm) s hoạt tính %biến đổi hoạt tính 12.5 19,73 0,25 139,73 21,14 0,16 140,19 12.8 18,71 0,33 132,51 19,84 0,37 131,56 12.13 16,45 0,48 116,50 18,49 0,26 122,61 12.16 17,20 0,09 121,81 19,25 0,41 127,65 12.17 19,38 0,16 137,25 20,75 0,18 137,60 12.20 17,79 0,62 125,99 19,46 0,80 129,05 12.24 18,36 0,25 130,03 19,81 0,44 131,37 12.26 16,94 0,55 119,97 18,49 0,12 122,61 12.29 18,94 0,25 134,13 19,96 0,58 132,36 12.31 17,48 0,05 123,80 19,13 0,41 126,86 Chứng 14,12 0,36 100 15,08 0,25 100 Nhận xét: - Như sau đột biến khả sinh tổng hợp kháng sinh biến chủng 12 tăng lên rõ rệt. - Từ bảng kết định giữ lại biến chủng có % biến đổi hoạt tính dương cao vsv kiểm định: 5, cứu tiếp theo. 35 17, 29 để tiến hành nghiên 2.2.6.Kết lên men sau đột biến. Ba biến chủng giữ lại sau đột biến tiến hành lên men chìm MT2. Kết giới thiệu bảng đây: Bảng 9: Kết lên men chìm biến chủng sau đột biến Đường kính vòng vô khuẩn Ký hiệu biến chủng 17 29 Nhận xét: - SL Shi s 0,08 0,43 0,77 D (mm) 19,23 17,84 18,11 D (mm) 22,45 19,27 20,15 s 0,15 0,11 0,27 Qua kết ta thấy biến chủng có hoạt tính kháng sinh cao vsv kiểm định nuôi cấy bề mặt lên men chìm, So sánh với kết bảng ta thấy hoạt tính kháng sinh sau lên men chìm biến chủng sau đột biến tăng so với biến chủng sau sàng lọc ngẫu nhiên, chứng tỏ cải tạo giống có kết tốt. «í» Đã khảo sát độ bền vững kháng sinh pH khác nhau. Kết xin giới thiệu bảng 10. Vi sinh vật kiểm định Shigeỉlaýlexneri. Bảng 10: Ảnh hưởng pH đến độ bền vững kháng sinh pH Đường kính vòn.g vô khuẩn (mm) Sau ] ngày Sau ngày s D (mm) D (mm) s 18,32 0,25 18,08 0,37 19,89 0,09 19,23 0,12 19,43 0,42 19,04 0,09 11,37 0,21 10,15 0,45 11 10,98 0,57 14,56 0,67 36 Nhận xét: - Kháng sinh chủng Streptomyces 13.312 tổng hợp bền vững khoảng pH rộng. - Kháng sinh bền vững pH = 5. Giữ dịch lên men pH = để tiến hành nghiên cứu tiếp theo. 2.2.7. Kết lựa chọn dung môi chiết thích hợp dịch lên men Sử dụng dung môi chiết khác nhau. Tiến hành chiết lần pH = 3, 5, 7, 9, 11. Đánh giá hoạt tính kháng sinh pha dung môi hữu (dmhc), pha dịch lọc (N). Kết trình bày bảng 11. Bảng 11: Kết chiết lần kháng sinh dung mỏi hữu co ỏ pH khác (VSV kiểm định Shigella fỉexnerì) Đường kính vòng vô khuẩn (mm) Butylacetat pH Cloroíorm N dmhc N dmhc 0,00 18,63 0,00 17,87 0,00 20,02 0,00 19,46 0,00 19,49 0,00 18,53 0,00 15,87 0,00 15,21 11 0,00 15,72 0,00 14,98 Nhận xét: - Cả Butylacetat Cloroíorm chiết hết kháng sinh từ dịch lọc pH - Tại pH5 kết chiết tốt nhất. 37 2.2.7. Kết sắc ký lớp mỏng Dịch chiết butylacetat pH = sử dụng để chấm sắc ký lớp mỏng. Sau sử dụng 25 hệ dung môi chọn hệ tách tốt, có thành phần sau: Hệ : Dicloromethan : dimethylíormamit : 10:5 Hệ : Butylacetat: methanol: aceton :16:4:2 Hệ : Cloroform: ethanol: amoniac 25% : : : 0,05 Hệ : Ethylacetat: Ethanol: acid acetic :5 :3 : Hệ : Diclomethan : propanol :2 :3 0,5 Bảngỉ2: Kết sắc ký lớp mỏng Rf Hệ dung môi uv vsv Thuốc thử hoá học Hệ - 0,83 - Hệ - 0,77 - Hệ - 0,60 - Hệ - 0,85 - Hệ - 0,69 - Nhận xét: - Kết sắc ký cho thấy dịch chiết có vết kháng sinh hình phương pháp vsv. - Vết kháng sinh không phát quang ánh sáng tử ngoại không cho phản ứng mầu với thuốc thử hoá học sử dụng. Phần KẾT LUẬN 1.Kết luận: Sau thời gian tiến hành làm thực nghiệm hoàn thành mục tiêu đề thu kết sau: - Phân loại theo ISP xác định Streptomyces 13.312 Streptomyces griseosporeus. - Streptomyces 13.312 xạ khuẩn phân lập từ chất Việt Nam trình nuôi cấy tạo kháng sinh phổ rộng, có tác dụng tốt vi khuẩn Gram(+) Gram(-). - Khi nuôi cấy bề mặt Streptomyces 13.312 STH kháng sinh tốt MT3- môi trường phân lập. Tuy nhiên lên men chìm MT2dd môi trường tốt nhất. - Qua trình cải tạo chọn giống v s v thu biến chủng có khả STH kháng sinh tốt chủng gốc biến chủng 5, 17, 29. - Kháng sinh chủng Streptomyces 13.312 tạo bền vững khoảng pH rộng, bền pH5. - Kháng sinh chiết dễ dàng butylacetat cloroíbrm. - Kết sắc ký lớp mỏng cho thấy có vết có hoạt tính kháng sinh. 2.Đề xuất: Qua trình nghiên cứu có số đề xuất sau: - Cần tiếp tục nghiên cứu sâu chủng Streptomyces 13.312 đặc biệt trình chiết xuất tinh chế. 39 - Tiến hành cải tạo giống để thu chủng có khả STH kháng sinh ngày tốt hơn. -Lên men quy mô lớn sau chiết xuất tinh chế nhằm thu lượng kháng sinh đủ để tiến hành xác định cấu trúc, tính chất lý hoá tiến hành thử tiền lâm sàng chất kháng sinh điều kiện cho phép. - Nghiên cứu thêm khả ứng dụng. 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO [1 ], Bộ môn Hoá dược(1998) - Hoá dược II- Trường ĐH Dược Hà Nội [2], Bộ môn Hoá phân tích(1999)-Hoá phân tích II- Trường ĐH Dược Hà Nội [3], Bộ môn Hoá sinh- Vi sinh (1999)-Vi sinh học-Trường ĐH Dược Hà Nội [4]. Nguyên Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (1997)- Vi sinh vật học-Nhà xuất giáo dục [5], Từ Minh Koóng chủ biên (2001)- Kỹ thuật sản xuất Dược phẩm- Tập 1Truờng ĐH Dược Hà nội [6 ], Lê Đình Lương- Phan Cự Nhân (2000)- Cơ sở di truyền học- NXB Giáo dục [7], Nguyễn Tiên Phong (2000)- “Góp phần nghiên cứu kháng sinh từ chủng Mỉcromonospora N°9 Khoá luận tốt nghiệp DSĐH, Hà Nội. [8 ], HỒ Viết Quí(2001)-C/ỉ/ếí tách, phân chia, xác định chất dung môi hữu cơ, -NXB Khoa học kỹ thuật. Tập 1. [9], Cao Văn Thu(1998)- Bài giảng kháng sinh vitamin- Hà Nội. [10]. Cao Văn Thu, Nguyễn Thị Hoa (1999)- “Qui hoạch đơn hình nghiên cứu lên men STH kháng sinh” -Tạp chí Dược học, Số , trang 12-14. [11], Huỳnh Thu Trang(2002)- “ Góp phần nghiên cứu kháng sinh từ chủng Streptomyces 315”- Khoá luận tốt nghiệp DSĐH, Hà Nội [12]. Indrani Datta, Mita Banerjee, Shanka Kumar Mukherjee and Saroj Kanti Majumdar(2 0 ), “JU-2, a novel phosphorous-containing antifungal antibiotic from Streptomyces kanamyceticus Mg”, Indian Journal of Experimental Biology, Vol.39, P.604-606. [13]. Jun Kohno, Takuya Kawahata, Toru Otake, Motoko Morimoto, Haruyo Mori, Noboru Ueba, Maki Nishio, Akio Kinumaki, Saburo Komaisubara and Keisuke Kawashima (1996), “Boromycin, an Anti-HIV Antibiotic”, Biosci, Biotech, Biochem, Vol.60, No.3, P. 1036-1037. [14]. Shigetoshi Okada, Sinroku Iwamatu (1997) - “Scale-up Production of Milbemycin by Streptomyces hygroscopicus subsp.aureolacrimosus with Control of Internal pressure, Temperature, Aeration and Agitation”, J, Chem, Technol, Biotechnol, Vol.70, P.179-187. [15]. E.B Shilling and D.Gottleib (1966), “Methods for characterization of Streptomyces species”, Int.J.Syst. Bacteriol., Vol.16, No.3, P.313-340. [16]. Selman A. Waksman (1957), The Actinomyces, London Bailliere. Tidall and Cox, LTD, Vol.II, page 82-87 and 92-93. PHỤ LỤC Hình2: Bề măt bào tử Hình 3: Kết thử hoạt tính dịch lọc sau lên men phương pháp giếng thạch. Hình 4: Kết chiết xuất kháng sinh butylacetat pH khác nhau. [...]... ty khí sinh, + Hình dạng chuỗi bào tử, + Bề mặt bào tử - Đặc điểm sinh lý học: + Khả năng tạo sắc tố hoà tan, + Khả năng tạo sắc tố melanoid, + Khả năng sử dụng các nguồn đường của xạ khuẩn 7 1.2.4 Khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của Streptomyces: Một số khá lớn kháng sinh do một số loài Streptomyces sinh tổng hợp được nghiên cứu và sử dụng thuộc nhiều nhóm kháng sinh khác nhau: Nhóm kháng sinh Nhóm... bản kết luận Streptomyces 13. 312 có tên Streptomyces griseosporeus 28 2.2.2 Khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của chủng Streptomyces 13. 312 trên môi trường phân lập(MT3) Hoạt tính của kháng sinh do chủng Streptomyces 13. 312 sinh tổng hợp trên MT3 được thử trên một số vsv kiểm định, kết quả được trình bày ở bảng3 Bảng 3: Hoạt tính kháng sinh của chủng Streptomyces 13. 312 trên một số vsv kiểm định vsv... Đường kính vòng vô khuẩn 12,68 13, 26 12,14 15,64 14,54 13, 18 15,42 15,48 16,82 15,54 Nhận xét: Sau khi thử trên nhiều chủng Streptomyces, quyết định chọn chủng Streptomyces 13. 312 để tiến hành nghiên cứu tiếp theo 2.2.3 Kết quả lựa chọn môi trường nuôi cấy và các vsv kiểm định của chủng Streptomyces 13. 312 Đánh giá khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của chủng Streptomyces 13. 312 khi thay đổi môi trường... nghiệp 1.6.3 JU-2, kháng sinh kháng nấm chứa phospho phân lập từ Streptomyces kanamyceticus Mg Indrani Datta và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu Streptomyces kanamyceticus Mg có khả năng STH kanamycin hiệu suất cao bằng tác động đột biến để tạo ra biến chủng có khả năng STH một hợp chất kháng sinh mới chống lại Aspergillus niger .Hợp chất kháng sinh này gồm 4 thành phần và thành phần có hoạt tính mạnh... nuôi cấy, trạng thái sinh lý của vi sinh vật cũng ảnh hưởng đến hiệu quả đột biến của ánh sáng u v 9 1.4 Lên men sinh tổng hợp kháng sinh [5] [7] [9] [10] [11] Trừ một số rất ít kháng sinh có thể tổng hợp toàn phần như cloramphenicol, hầu hết các kháng sinh hiện có đều là sản phẩm của quá trình lên men hoặc bán tổng hợp Lên men là quá trình nuôi cấy v s v trong các điều kiện thích hợp nhằm tạo ra những... kết hợpcả hai phương pháp: Phương pháp chia cắt pha và phương pháp chuyển pha l.ó.Một số thành tựu trong nghiên cứu kháng sinh [12] [13] [14] 1.6.1 .Kháng sinh Boromycin chống HIV từ xạ khuẩn Boromycin- kháng sinh chống HIV thuộc nhóm polyether-macrolid có chứa một nguyên tử Bo trong phân tử được STH từ Streptomyces sp A-3376 Boromycin có khả năng ngăn chặn sự phát triển HIV ở giai đoạn cuối và có thể... độ 20- 40°c nhưng nhiệt độ thích hợp là 30°c và pH thích hợp là 6 ,8-7,5 * Khả năng tạo sắc tố của Streptomyces: Sắc tố tạo thành từ Streptomyces được chia thành 4 loại: sắc tố hoà tan, sắc tố khuẩn ty cơ chất, sắc tố melanin, sắc tô khuẩn lạc 1.2.3 Phán loại Streptomyces: Chi Streptomyces bao gồm một số lượng lớn các xạ khuẩn có khả năng sinh tổng hợp ra các kháng sinh ứng dụng trong nhiều lĩnh vực... hưởng đến DO và hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh Để nghiên cứu ảnh hưởng của các thông số vật lý đến hiệu suất sinh tổng hợp kháng sinh, sử dụng phương pháp: CMA (thay đổi A); CMB (thay đổi lần lượt E, A); CMC (thay đổi lẩn lượt T, I, E, A); CMD ( thay đổi lần lượt T, E, A,I); CME (thay đổi lần lượt I, T, E, A); CMF ( thay đổi lần lượt I, E, A, T) để kiểm soát DO Sau nghiên cứu áp dụng trên qui mô... ngăn - Trên mỗi nhánh có từ 10-100 bào tử, bào tử có thể là hình cầu, elip hoặc hình trụ hai đầu tròn, đường kính của bào tử thường tương ứng với đường kính của khuẩn ty - Bề mặt của bào tử có thể có các kiểu trơn, nhẩn(sm) hoặc xù xì(wa) hoặc có gai (sp) hoặc có tóc(ha) * Streptomyces là vi sinh vật có thành tế bào kiểu CWI có chứa L.DAP (diaminopimelat) và glycin * Streptomyces có thể phát triển ở... S.noursei S.nodosus S.griseus S.nalanensis Kháng sinh chống nấm 1.3 Cải tạo giống Vi sinh vật [3] [5] [6] [9] [11] [16] 1.3.1 Mục đích Trong thực tế không thể phân lập được từ tự nhiên một chủng vi sinh vật có khả năng tạo chất kháng sinh mong muốn với một hàm lượng đủ để thoả mãn yêu cầu của sản xuất công nghiệp Các vi sinh vật phân lập từ cơ chất tự nhiên thường có hoạt tính thấp đồng thời trong quá trình . sinh tổng hợp kháng sinh phổ rộng và có tiềm năng ứng dụng trong lĩnh vực phòng bệnh và chữa bệnh. Do đó, chúng tôi chọn đề tài Nghiên cứu chủng Streptomyces 13. 312 có khả năng sinh tổng hợp kháng. khuẩn. 7 1.2.4. Khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của Streptomyces: Một số khá lớn kháng sinh do một số loài Streptomyces sinh tổng hợp được nghiên cứu và sử dụng thuộc nhiều nhóm kháng sinh khác. nghiên cứu một số chủng Streptomyces có trong đất, bùn v.v Việt Nam. Từ những nghiên cứu khởi phát, Streptomyces 13. 312 là một chủng xạ khuẩn có độ ổn định di truyền học tốt, có khả năng sinh