BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ PHƯƠNG NGÂN XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG METOPROLOL TRONG CHẾ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HUỲNH QUANG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2014 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ PHƯƠNG NGÂN XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG METOPROLOL TRONG CHẾ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ HUỲNH QUANG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: Ths. Phạm Lê Minh Ths. Đặng Thị Ngọc Lan Nơi thực hiện: Bộ môn Hóa phân tích - Độc chất Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2014 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên tôi xin được gửi tới thầy, cô giáo – ThS. Phạm Lê Minh, ThS. Đặng Thị Ngọc Lan lời biết ơn chân thành và sâu sắc nhất. Thầy và cô là những người đã trực tiếp giao đề tài và tận tình chỉ bảo, hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong quá trình hoàn thành khóa luận này. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô Bộ môn Hóa Phân tích – Độc chất trường Đại học Dược Hà Nội, các anh chị kỹ thuật viên đã giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi về máy móc, trang thiết bị, cơ sở vật chất cũng như hóa chất, dụng cụ trong suốt quá trình tôi thực hiện đề tài. Và tôi cũng xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường, các thầy cô Phòng Đào tạo và các thầy cô trường Đại học Dược Hà Nội đã hướng dẫn, cho tôi kiến thức của 5 năm chương trình đào tạo Dược sỹ Đại học để tôi có thể hoàn thành tốt khóa luận tốt nghiệp. Cuối cùng, tôi xin được cảm ơn Bố mẹ và những người thân trong gia đình tôi, cảm ơn tất cả bạn bè đã luôn động viên, cổ vũ để tôi hoàn thành tốt khóa luận của mình. Hà Nội, tháng 05, năm 2014 Sinh viên Lê Phương Ngân MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 2 1.1. Metoprolol tartrat 2 1.1.1. Công thức cấu tạo 2 1.1.2. Đặc điểm dược lý 2 1.1.3. Các phương pháp định lượng 3 1.2. Phương pháp huỳnh quang 5 1.2.1. Hiện tượng huỳnh quang 5 1.2.2. Sự tạo thành phổ huỳnh quang – Cơ chế của sự phát quang 5 1.2.3. Cường độ huỳnh quang 7 1.2.4. Phổ huỳnh quang 8 1.2.5. Các yếu tố ảnh hưởng đến sự tạo thành huỳnh quang 10 1.2.6. Máy quang phổ huỳnh quang 12 1.2.7. Ứng dụng của quang phổ huỳnh quang 13 1.3. Phương pháp HPLC 14 1.3.1. Khái niệm 14 1.3.2. Nguyên tắc 14 1.3.3. Một số thông số đặc trưng của HPLC 14 1.3.4. Ứng dụng của HPLC 17 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 2.1. Đối tượng nghiên cứu- Nguyên liệu và thiết bị 19 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu 19 2.1.2. Nguyên liệu và thiết bị 19 2.2. Phương pháp nghiên cứu 20 2.2.1. Xây dựng phương pháp định lượng metoprolol tartrat bằng quang phổ huỳnh quang…………………………………………… 20 2.2.2. Thẩm định phương pháp 20 2.2.3. Ứng dụng phương pháp quang phổ huỳnh quang để định lượng metoprolol tartrat trong chế phẩm …22 2.2.4. Xử lý kết quả thực nghiệm 22 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN……… ….23 3.1. Kết quả thực nghiệm 23 3.1.1. Xây dựng phương pháp định lượng metoprolol tartrat bằng quang phổ huỳnh quang ………………… ……………………………… ….23 3.1.2. Thẩm định phương pháp định lượng metoprolol tartrat 25 3.1.3. Ứng dụng phương pháp quang phổ huỳnh quang để định lượng trong chế phẩm ……………………………….………….………… 34 3.2. Bàn luận 36 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT HPLC (High Performance Liquid Chromatography): Sắc ký lỏng hiệu năng cao UV – Vis (Utraviolet – Visble): Tử ngoại – khả kiến Q (Quencher): Chất làm tắt hóa học SĐK: Số đăng kí BQ: Bảo quản NSX: Ngày sản xuất NXB: Nhà xuất bản R: Hệ số tương quan tuyến tính RSD: Độ lệch chuẩn S 2 : Phương sai TB: Trung bình tt / tt: Thể tích/thể tích DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1. Kết quả khảo sát khoảng tuyến tính của metoprolol tartrat……………………………………………………………………… 27 Bảng 3.2. Kết quả xác định độ lặp lại của phương pháp………………………………………………………………………….29 Bảng 3.3. Kết quả khảo sát độ đúng…………………………………………… 30 Bảng 3.4. Kết quả khảo sát tính phù hợp của hệ thống HPLC…………………………………………………………………… …33 Bảng 3.5. Kết quả xác định hàm lượng metoprolol tartrat bằng phương pháp HPLC ………………………………………………………………… ……34 Bảng 3.6. Kết quả định lượng metoprolol tartrat trong chế phẩm viên nén………………………………………………………………………… 36 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1. Công thức cấu tạo của metoprolol tartrat…………………… … 2 Hình 1.2. Phổ huỳnh quang của vitamin B 1 ………………………………… 9 Hình 1.3. Phổ huỳnh quang của Natri salicylat………………………… 9 Hình 1.4. Sơ đồ cấu tạo máy quang phổ huỳnh quang…………………… 13 Hình 3.1. Phổ phát xạ của metoprolol tartrat nồng độ 2000ng/ml………… 24 Hình 3.2. Phổ kích thích của metoprolol tartrat 2000ng/ml…………………25 Hình 3.3. Phổ kích thích của chất thử và chất chuẩn metoprolol tartrat nồng độ khoảng 2000ng/ml……………… ………………………………… 26 Hình 3.4. Phổ phát xạ của chất thử và chất chuẩn metoprolol tartrat nồng độ khoảng 2000ng/ml ………………………………………………………… 26 Hình 3.5. Đường hồi quy tuyến tính của metoprolol tartrat……………… 28 Hình 3.6. Sắc ký đồ dung dịch chuẩn metoprolol tartrat 500µg/ml……… 32 Hình 3.7. Sắc ký đồ dung dịch thử metoprolol tartrat khoảng 500µg/ml… 32 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong cuộc sống hiện nay, bệnh tim mạch là bệnh khá phổ biến, là gánh nặng sức khỏe chính yếu, là nguyên nhân gây tử vong hàng đầu trên toàn thế giới. Trong đó, tăng huyết áp (hay còn gọi là cao huyết áp) là bệnh rất tiêu biểu và thường gặp nhất. Nếu không được chẩn đoán và điều trị có thể gây ra các biến chứng nặng nề như tai biến mạch máu não, suy thận… ảnh hưởng xấu đến chất lượng cuộc sống của người bệnh, trở thành gánh nặng cho gia đình và xã hội. Do đó thuốc điều trị tim mạch cũng như tăng huyết áp ngày càng chiếm tỷ trọng lớn, có vai trò quan trọng trong công tác chăm sóc sức khỏe cộng đồng. Cùng với sự phát triển mạnh mẽ của công nghiệp Dược phẩm trong và ngoài nước trong nhiều năm gần đây, có rất nhiều loại thuốc được đưa vào sử dụng với nhiều hàm lượng hoạt chất khác nhau của các nhà sản xuất khác nhau. Tuy nhiên không phải hoạt chất nào cũng có chuyên luận riêng trong Dược điển Việt Nam. Một trong số đó là metoprolol tartrat, hoạt chất được sử dụng phổ biến để điều trị các bệnh tim mạch. Do đó đánh giá đúng và kịp thời chất lượng các chế phẩm thuốc trên thị trường là yêu cầu bắt buộc. Để góp phần xây dựng các phương pháp định lượng metoprolol tartrat có khả năng ứng dụng trong công tác kiểm nghiệm thuốc, chúng tôi tiến hành đề tài: “Xây dựng phương pháp định lượng metoprolol trong chế phẩm bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang” với hai mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định lượng metoprolol tartrat bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang, lấy phương pháp HPLC là phương pháp đối chiếu. - Ứng dụng phương pháp để định lượng metoprolol tartrat trong chế phẩm. 2 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Metoprolol tartrat 1.1.1. Công thức cấu tạo [19] O CH 3 O NH CH 3 CH 3 H OH 2 H OH CO 2 H OH H CO 2 H Hình 1.1. Công thức cấu tạo của metoprolol tartrat. - Tên khoa học: 2-propanol,1-[4-(2-methoxyethyl)phenoxy]-3-[(1- methylethyl)amino]-, (±)-, [R- (R * , R * )]-2,3-dihydroxybutandioat (2 : 1) - Công thức hóa học:                - Khối lượng phân tử: 684,81 - Tính chất: Bột màu trắng hoặc gần như trắng, hay tinh thể không màu Dễ tan trong nước và alcol. 1.1.2. Đặc điểm dược lý [1] 1.1.2.1. Dạng dùng và hàm lượng Viên nén 50mg, 100mg metoprolol tartrat. Viên nén giải phóng chậm 50 mg, 100mg, 200mg metoprolol tartrat, metoprolol succinat. Ống tiêm (metoprolol tartrat) 5mg/5 ml. Mỗi ống tiêm chứa 45mg natri clorid. 1.1.2.2. Dược động học Sau khi uống, metoprolol tartrat được hấp thụ gần như hoàn toàn, nhưng khả dụng sinh học tương đối thấp (khoảng) do sự chuyển hóa ban đầu. Nồng độ của thuốc trong huyết tương thay đổi trong phạm vi rộng (tới 17 lần), [...]... phổ huỳnh quang để định lượng metoprolol tartrat trong chế phẩm Trên cơ sở phương pháp đã xây dựng, áp dụng để định lượng metoprolol tartrat trong chế phẩm viên nén đang lưu hành ở Việt Nam 2.2.4 Xử lý kết quả thực nghiệm [4] So sánh kết quả của phương pháp quang phổ huỳnh quang và HPLC bằng kiểm định thống kê toán học được tiến hành với mức tin cậy 95% Giá trị trung bình: ̅= X ∑n X i i=1 n (2.3) Phương. .. nằm trong khoảng từ 98 -102% với 22 RSD ≤ 2% 2.2.2.5 Sử dụng phương pháp HPLC làm phương pháp đối chiếu - Chuẩn bị mẫu nghiên cứu và điều kiện sắc ký theo chuyên luận viên nén metoprolol tartrat trong Dược điển Mỹ(2009) - Đánh giá tính phù hợp của hệ thống - So sánh kết quả định lượng metoprolol tartrat trong chế phẩm giữa 2 phương pháp quang phổ huỳnh quang và HPLC 2.2.3 Ứng dụng phương pháp quang phổ. .. viên nén metoprolol ở nhiệt độ 15 – 30°C và chống ẩm mốc Ðựng thuốc trong lọ kín, tránh ánh sáng - Bảo quản thuốc tiêm ở nhiệt độ không quá 30°C Tránh ánh sáng 1.1.3 Các phương pháp định lượng Phương pháp Đặc điểm Tài liệu tham khảo Quang phổ UV Định lượng metoprolol trong chế phẩm: Dung môi: Ethanol tuyệt đối [10] 4 Đo quang tại bước sóng 274nm Định lượng metoprolol tatrat trong chế [13] phẩm: Tạo... hoạt tăng lên Do vậy trong máy quang phổ huỳnh quang, đèn nguồn có công suất lớn nên phải có kính cách nhiệt hoặc có bộ phận làm mát đèn 1.2.6 Máy quang phổ huỳnh quang [2] Máy quang phổ huỳnh quang cũng có các bộ phận chính như: nguồn sáng, bộ phận đơn sắc hóa, buồng đo và bộ phận phát hiện 13 Hình 1.4 Sơ đồ cấu tạo máy quang phổ huỳnh quang - Nguồn sáng trong máy quang phổ huỳnh quang có nhiệm vụ tạo... cả 4 mặt trong suốt Để tăng tín hiệu đến bộ phận thu người ta có thể bố trí thêm gương phía đối diện 1.2.7 Ứng dụng của quang phổ huỳnh quang [2], [3] - Định tính: Có thể dựa vào bước sóng kích thích và bước sóng huỳnh quang để định tính các hợp chất - Định lượng: Do phương pháp huỳnh quang có độ nhạy và độ đặc hiệu cao  Có thể đo cường độ huỳnh quang và dùng phương pháp so sánh để định lượng các... hành trong cùng điều kiện - Xác định độ lặp lại bằng cách tính độ lệch chuẩn tương đối giữa các giá trị của các lần định lượng - Yêu cầu: Độ lệch chuẩn tương đối RSD ≤ 2% 2.2.2.4 Kiểm tra độ đúng của phương pháp - Xác định bằng phương pháp thêm chuẩn:  Mẫu thử: Chế phẩm được pha thành dung dịch  Mẫu thử + chuẩn: Dung dịch chế phẩm + một lượng xác định chất chuẩn Các dung dịch có nồng độ nằm trong. .. tartrat và huỳnh quang felodipin trong chế phẩm: đồng bộ Dung môi: Nước [14] Δλ = 70nm λmax = 260nm Sắc ký khí Định lượng metoprolol trong nước tiểu ghép khối phổ người : [8] Tạo dẫn xuất metoprolol tartrat với N- Methyl- N- trifloroacetamid Pha động: ethylacetat : diethylether = 2 : 1 (tt/tt) Cột: HP-5 MS 0,25µm, 30m × 0,25mm Tốc độ dòng: 1ml/phút 1.2 Phương pháp huỳnh quang 1.2.1 Hiện tượng huỳnh quang. .. năng huỳnh quang lớn 14  Với những chất không có huỳnh quang có thể tác dụng với thuốc thử không huỳnh quang để tạo ra dẫn chất có huỳnh quang hay dùng thuốc thử có huỳnh quang để đo và sử dụng các cách xử lý thích hợp Ngoài ra phương pháp huỳnh quang còn được sử dụng trong bộ phận phát hiện của sắc ký lỏng vì tính đặc hiệu cao và độ nhạy của nó, với nguồn sáng laser có thể phát hiện tới 10-12g 1.3 Phương. .. phản ứng trong methanol của metoprolol và clorodinitrobenzen và đo quang trong hợp chất màu vàng tại λ = 425nm HPLC Định lượng đồng thời metoprolol tatrat và [17] hydroclothiazid trong chế phẩm: Pha động: acid phosphoric 0,5%: methanol : acetonitril = 35 : 15 : 50 Cột: LiChrosorb C18 10µm, 250mm × 4,6mm Tốc độ dòng: 1ml/phút Detector: 280nm Định lượng metoprolol tartrat trong chế [15], [18] phẩm: Tạo... 224nm, 299nm 3.1.2 Thẩm định phương pháp định lượng metoprolol tartrat 3.1.2.1 Thẩm định tính chọn lọc của phương pháp So sánh phổ kích thích và phổ phát xạ của chất chuẩn và chất thử 26 Hình 3.3 Phổ kích thích của chất thử và chất chuẩn metoprolol tartrat nồng độ khoảng 2000ng/ml Hình 3.4 Phổ phát xạ của chất thử và chất chuẩn metoprolol tartrat nồng độ khoảng 2000ng/ml 27 Nhận thấy phổ kích thích và . trong chế phẩm bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang với hai mục tiêu: - Xây dựng phương pháp định lượng metoprolol tartrat bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang, lấy phương pháp HPLC là phương. 2.2.1. Xây dựng phương pháp định lượng metoprolol tartrat bằng quang phổ huỳnh quang ………………………………………… 20 2.2.2. Thẩm định phương pháp 20 2.2.3. Ứng dụng phương pháp quang phổ huỳnh quang để định. pháp định lượng metoprolol tartrat bằng quang phổ huỳnh quang ………………… ……………………………… ….23 3.1.2. Thẩm định phương pháp định lượng metoprolol tartrat 25 3.1.3. Ứng dụng phương pháp quang phổ huỳnh