Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀXã hội ngày càng phát triển, cuộc sống của con người ngày càng sung túc, đầy đủ. Đi kèm theo đó là sự phát triển ngày càng gia tăng của một sốbệnh liên quan đến chuyển hóa như béo phì, gút, cao huyết áp, xơ vữa động mạch, rối loạn chuyển hóa lipid… Chế độ sinh hoạt không hợp lý cùng với việc sử dụng quá nhiều đồ ăn nhanh, giàu chất béo, lười vận động là nguyên nhân trực tiếp gây ra tình trạng trên.Từ xa xưa, con người đã biết khai thác và sử dụng nhiều loài thảo dược để chữa bệnh. Cây Cần tây thuộc họ Cần (Apiaceae), có nguồn gốc từ châu Âu, được du nhập vào Việt Nam và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi. Tại Việt Nam, Cần tây từ lâu đã được sử dụng làm rau ăn, gia vị và làm thuốc. Cần tây có mặt trong nhiều bài thuốc dân gian (chữa thống phong, cao huyết áp, phong thấp…). Một số kết quả nghiên cứu đã chứng minh rằng cây Cần tây có tác dụng tốt trong điều trị các bệnh liên quan đến chuyển hoá như các bệnh về khớp (viêm khớp, gút), cao huyết áp 29, rối loạn chuyển hóa lipid, xơ vữa động mạch 38…Bên cạnh đó, dịch chiết từ hạt Cần tây còn có tác dụng bảo vệ tế bào gan trước các tác nhân gây hại như Acrylamid, giúp chống lại sự hình thành các khối u ở chuột thí nghiệm 17.Nhận thức rõ vai trò và ứng dụng của Cần tây trong y học, một sốcông trình nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây đã được thực hiện nhưng chưa đầy đủ. Vì vậy, việc tiếp tục nghiên cứu để xác định những thành phần hóa học mới có hoạt tính sinh học từ cây Cần tây là cần thiết.Với mục tiêu nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây, chúng tôi tiến hành đề tài “Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học của hạt Cần tây(Apium graveolens L.)” với những nội dung sau:1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây.
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HÙNG MẠNH TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HẠT CẦN TÂY (Apium graveolens L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2013 BỘ Y TẾ LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình thực hiện đề tài tôi đã nhận được nhiều sự quan tâm, giúp đỡ và hướng dẫn tận tình từ thầy cô, gia đình và bạn bè. Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo mà tôi vô cùng kính trọng TS.Nguyễn Thu Hằng (Bộ môn Dược liệu – Trường đại học Dược Hà Nội), người thầy đã luôn ở bên dìu dắt, động viên và khích lệ tôi trong suốt quãng thời gian tôi thực hiện khóa luận tốt nghiệp này. Cô đã chỉ dạy cho tôi nhiều điều, truyền cho tôi niềm đam mê với công việc và tình yêu với cây cỏ. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô và các anh chị kỹ thuật viên trong bộ môn Dược liệu – Trường đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quãng thời gian tôi thực hiện nghiên cứu tại bộ môn. Đồng thời, tôi muốn gửi lời cám ơn tới những người thân yêu trong gia đình, bạn bè. Những người đã luôn ở bên cạnh giúp đỡ, cổ vũ và động viên tôi. Trong phạm vi hạn chế của khóa luận, những kết quả thu được mới chỉ là bước đầu và trong quá trình làm việc khó tránh khỏi những thiếu sót, tôi rất mong nhận được sự góp ý của thầy cô giáo và các bạn bè. Hà Nội tháng 05 năm 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI NGUYỄN HÙNG MẠNH TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HẠT CẦN TÂY (Apium graveolens L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Nguyễn Thu Hằng Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI - 2013 LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình thực hiện đề tài tôi đã nhận được nhiều sự quan tâm, giúp đỡ và hướng dẫn tận tình từ thầy cô, gia đình và bạn bè. Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cô giáo mà tôi vô cùng kính trọng TS.Nguyễn Thu Hằng (Bộ môn Dược liệu – Trường đại học Dược Hà Nội), người thầy đã luôn ở bên dìu dắt, động viên và khích lệ tôi trong suốt quãng thời gian tôi thực hiện khóa luận tốt nghiệp này. Cô đã chỉ dạy cho tôi nhiều điều, truyền cho tôi niềm đam mê với công việc và tình yêu với cây cỏ. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các thầy cô và các anh chị kỹ thuật viên trong bộ môn Dược liệu – Trường đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ và tạo điều kiện cho tôi trong suốt quãng thời gian tôi thực hiện nghiên cứu tại bộ môn. Đồng thời, tôi muốn gửi lời cám ơn tới những người thân yêu trong gia đình, bạn bè. Những người đã luôn ở bên cạnh giúp đỡ, cổ vũ và động viên tôi. Trong phạm vi hạn chế của khóa luận, những kết quả thu được mới chỉ là bước đầu và trong quá trình làm việc khó tránh khỏi những thiếu sót, tôi rất mong nhận được sự góp ý của thầy cô giáo và các bạn bè. Hà Nội tháng 05 năm 2013 Sinh viên Nguyễn Hùng Mạnh MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU – CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1. TỔNG QUAN 3 1.1.Về thực vật 3 1.1.1. Tên gọi 3 1.1.2. Đặc điểm thực vật và phân bố loài Apium graveolens L. 3 1.2. Thành phần hóa học của hạt Cần tây 4 1.2.1. Tinh dầu 4 1.2.2. Flavonoid 6 1.2.3. Coumarin 8 1.2.4. Một số chất khác 12 1.3. Tác dụng sinh học của hạt Cần tây 13 1.3.1. Tác dụng hạ huyết áp 13 1.3.2. Tác dụng chống viêm 13 1.3.3. Tác dụng hạ acid uric huyết thanh 14 1.3.4. Tác dụng giải độc 14 1.3.5. Tác dụng chống ung thư 15 1.3.6. Tác dụng kháng khuẩn 15 1.4. Công dụng 15 Chương 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 16 2.1.1. Nguyên liệu 16 2.1.2. Hóa chất và dụng cụ 16 2.1.3. Thiết bị nghiên cứu 16 2.2. Nội dung nghiên cứu 18 2.3. Phương pháp nghiên cứu 18 Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây 20 3.1.1. Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây 20 3.1.2. Nghiên cứu thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây bằng phương pháp GC/MS 20 3.2. Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây 26 3.3. Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết n-hexan của hạt Cần tây 29 3.3.1. Sắc ký cột hấp phụ 29 3.3.2. Sắc ký chế hóa phân đoạn 2 (PĐ 2) 33 3.4. Bàn luận 37 KẾT LUẬN 39 ĐỀ XUẤT 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU – CÁC CHỮ VIẾT TẮT 3nB 3-n-butylphthalid SKLM Sắc ký lớp mỏng AST Ánh sáng thường UV Ultra violet Spectroscopy DANH MỤC CÁC BẢNG TÊN BẢNG TRANG Bảng 1.1: Thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây 4 Bảng 1.2: Các flavonoid có trong hạt Cần tây 6 Bảng 1.3: Các Coumarin trong hạt Cần tây 8 Bảng 1.4: Một số hợp chất khác trong hạt cây Cần tây 12 Bảng 3.1: Kết quả phân tích thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây bằng GC/MS. 23 DANH MỤC CÁC HÌNH TÊN HÌNH TRANG Hình 2.1: Ảnh chụp cây Cần tây tại thực địa 17 Hình 2.2: Ảnh chụp hạt Cần tây 17 Hình 2.3: Sơ đồ bộ dụng cụ định lượng tinh dầu cải tiến 18 Hình 3.1: Sơ đồ tóm tắt quy trình chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây 26 Hình 3.2: Ảnh chụp sắc ký đồ chất M 1 ở 3 hệ dung môi 31 Hình 3.3: Ảnh chụp tinh thể M 1 dưới kính hiển vi 32 Hình 3.4: Ảnh chụp sắc ký đồ của M 2 với 3 hệ dung môi 35 Hình 3.5: Ảnh chụp sắc ký đồ của M 3 với hệ IV 35 Hình 3.6: Tóm tắt quy trình phân lập chất từ phân đoạn n- hexan hạt Cần tây 34 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Xã hội ngày càng phát triển, cuộc sống của con người ngày càng sung túc, đầy đủ. Đi kèm theo đó là sự phát triển ngày càng gia tăng của một số bệnh liên quan đến chuyển hóa như béo phì, gút, cao huyết áp, xơ vữa động mạch, rối loạn chuyển hóa lipid… Chế độ sinh hoạt không hợp lý cùng với việc sử dụng quá nhiều đồ ăn nhanh, giàu chất béo, lười vận động là nguyên nhân trực tiếp gây ra tình trạng trên. Từ xa xưa, con người đã biết khai thác và sử dụng nhiều loài thảo dược để chữa bệnh. Cây Cần tây thuộc họ Cần (Apiaceae), có nguồn gốc từ châu Âu, được du nhập vào Việt Nam và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi. Tại Việt Nam, Cần tây từ lâu đã được sử dụng làm rau ăn, gia vị và làm thuốc. Cần tây có mặt trong nhiều bài thuốc dân gian (chữa thống phong, cao huyết áp, phong thấp…). Một số kết quả nghiên cứu đã chứng minh rằng cây Cần tây có tác dụng tốt trong điều trị các bệnh liên quan đến chuyển hoá như các bệnh về khớp (viêm khớp, gút), cao huyết áp [29], rối loạn chuyển hóa lipid, xơ vữa động mạch [38]…Bên cạnh đó, dịch chiết từ hạt Cần tây còn có tác dụng bảo vệ tế bào gan trước các tác nhân gây hại như Acrylamid, giúp chống lại sự hình thành các khối u ở chuột thí nghiệm [17]. Nhận thức rõ vai trò và ứng dụng của Cần tây trong y học, một số công trình nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây đã được thực hiện nhưng chưa đầy đủ. Vì vậy, việc tiếp tục nghiên cứu để xác định những thành phần hóa học mới có hoạt tính sinh học từ cây Cần tây là cần thiết. Với mục tiêu nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây, chúng tôi tiến hành đề tài “Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học của hạt Cần tây (Apium graveolens L.)” với những nội dung sau: 1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây. 2. Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây. 2 3. Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết n-hexan hạt Cần tây và sơ bộ nhận dạng các chất phân lập được. 3 Chương 1. TỔNG QUAN 1.1.Về thực vật 1.1.1. Tên gọi - Tên khoa học của cây Cần tây: Apium graveolens L., họ Cần (Apiaceae) - Tên đồng nghĩa: Apium dulce Mill, Apium graveolens subsp. dulce (Mill.) Schübl. & G. Martens. - Tên tiếng Anh: Celery. 1.1.2. Đặc điểm thực vật và phân bố loài Apium graveolens L. Cây thảo, cao từ 15-150cm, có mùi thơm mạnh. Lá ở gốc có hình thuôn hay hình trứng ngược, kích thước lá 7-18cm x 3.5-8cm, lá xẻ ba hay chia ba thùy, thùy cuối cùng có dạng hình thoi, kích thước 1.2-2.5cm x 0.8- 2.5cm, có khía tai bèo hay có răng cưa. Các lá phía trên có cuống ngắn, phiến lá hình tam giác thường xẻ 3, thùy cuối cùng có hình trứng ngược. Cụm hoa tán thường mọc đối diện với lá, kích thước 1.5-4cm theo chiều ngang, cuống hoa thường mập và ngắn, dài 4-15mm ít khi bị teo đi. Các cánh hoa bao bọc phía ngoài của cụm hoa có 3-8(-16) cánh hoa mảnh, kích thước 0.5-2.5cm. Các tán hoa có 7-25 hoa, hoa có kích thước 6-9mm theo chiều ngang. Cuống quả dài 1-1.5mm, quả có kích thước 1.3-1.5 x 1-2mm. Ra hoa và ra quả từ tháng 4 đến tháng 7 [19]. Loài Apium graveolens L. có nguồn gốc từ châu Á và châu Âu, được du nhập và trồng rộng rãi ở khắp nơi trên thế giới. Từ thời cổ đại, cây đã được trồng và sử dụng như một loại rau ăn và là một vị thuốc phổ biến trong nhiều nền y học cổ truyền. [19] Ở Việt Nam, loài A.graveolens L. thường gọi là cây Cần tây. Cây mới di nhập vào nước ta và được trồng rộng rãi ở nhiều nơi để làm rau ăn, làm thuốc chữa cao huyết áp [8]. [...]...4 1.2 Thành phần hóa học của hạt Cần tây 1.2.1 Tinh dầu Hạt Cần tây chứa 2-3% tinh dầu [13], trong đó có d-limonen (60%); selinen (10%); các phthalid; santalol; α và β-eudesmol; hydrocarvon Các phthalid gồm 3-n-butyl phthalid; sedanenolid; sedanolid; anhydrid sedanonic [13] Thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây được tổng kết ở bảng 1.1 Bảng 1.1: Thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây Ký... quả: Sử dụng phần mềm DATA ANALYSIS Đối chiếu khối phổ của các pic ghi nhận được với thư viện phổ khối FLAVOR2 và NIST 08 để nhận dạng các thành phần của tinh dầu Hàm lượng % tương đối của các thành phần được tính dựa trên diện tích pic - Kết quả: Thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây được trình bày ở bảng 3.1 23 Bảng 3.1: Kết quả phân tích thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây bằng phương... (MS) Phổ khối phân giải cao được đo trên máy Varian MS tại Viện Hóa học – Viện Khoa Học và Công nghệ Việt Nam 20 Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây 3.1.1 Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây • Tiến hành Hạt Cần tây tán thành bột thô bằng máy xay, đem đo độ ẩm Cân 100,04 g bột hạt Cần tây, cho vào bình cầu đựng dược liệu (A), thêm 400 ml nước cất... N-[2-(4-hydroxyphenyl) etyl] tetracosanamit [49] [44] [5] Nhận xét chung: Cho đến nay đã phát hiện khoảng 61 chất có trong hạt Cần tây, chủ yếu thuộc các nhóm tinh dầu, flavonoid, coumarin Trong đó có 13 hai nhóm chất rất được quan tâm nghiên cứu và được coi là hoạt chất chính của hạt Cần tây là tinh dầu và flavonoid 1.3 Tác dụng sinh học của hạt Cần tây 1.3.1 Tác dụng hạ huyết áp Tác dụng hạ huyết áp của hạt Cần tây. .. bị nghiên cứu - Cân phân tích Mettler Toledo AB204-S9 (Thụy Sĩ) - Máy cất quay Buchi Rotavapor R-200 (Đức) - Tủ sấy Memmert (Đức) - Kính hiển vi Leica (Đức) - Máy sắc ký khí kết hợp khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 7890A - Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu cải tiến 17 Hình 2.1: Ảnh chụp cây Cần tây tại thực địa Hình 2.2: Ảnh chụp hạt Cần tây 18 2.2 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần. .. 2.2 Nội dung nghiên cứu - Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây - Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây - Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết n-hexan hạt Cần tây và sơ bộ nhận dạng các chất phân lập được 2.3 Phương pháp nghiên cứu - Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây Nguyên tắc: Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây bằng phương pháp cất kéo hơi nước sử dụng bộ định lượng tinh... tinh dầu (% tt/kl): X = 2,53% 3.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của tinh dầu hạt Cần tây bằng phương pháp GC/MS Tiến hành trên máy sắc ký khí khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 7890A với các điều kiện: + Cột sắc ký 19091S-433HP-5MS kích thước 30m x 250µm x 0,25µm + Hệ thống tiêm mẫu tự động + Detector: Khối phổ AGILENT TECHNOLOGIES 5975C + Khí mang: Heli - Chuẩn bị mẫu: Tinh dầu hạt Cần tây được pha loãng... sedanonic [13] 6 Nhận xét: Cho đến nay đã phát hiện 23 chất có trong thành phần tinh dầu hạt Cần tây Trong số đó, thành phần chính là d-limonen (60%), selinen (10%) 1.2.2 Flavonoid Các flavonoid trong hạt Cần tây được tổng kết ở bảng 1.2 Bảng 1.2: Các flavonoid có trong hạt Cần tây Ký hiệu chất Tên chất Công thức cấu tạo Tác dụng sinh học (nếu có) Tài liệu trích dẫn Hạ huyết áp Chống (24) Apigenin kết... VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, thiết bị 2.1.1 Nguyên liệu - Hạt Cần tây được thu hái tại xã Hải Nam - Hải Hậu - Nam Định - Thời gian thu mẫu: tháng 12 năm 2012 - Mẫu cây Cần tây có hoa đã được làm tiêu bản lưu giữ tại Phòng tiêu bản, Bộ môn thực vật với số hiệu là HNIP/17860/13 và được xác định tên khoa học là Apium graveolens L., họ Cần (Apiaceae) - Xử lý mẫu: Hạt Cần tây thu hái về... choloroform của hạt Cần tây có tính kháng vi sinh vật yếu, chỉ kháng một số vi khuẩn Gram (-) là P.aeruginosa với nồng độ ức chế tối thiểu là 200µg/ml [5] 1.4 Công dụng Hạt Cần tây được dùng để chữa một số bệnh về khớp (thấp khớp, viêm khớp, đau xương khớp) [13] Hạt Cần tây có tác dụng lợi tiểu nhẹ và tác dụng kháng khuẩn, do đó được dùng điều trị bệnh viêm bàng quang [1] Ngoài ra, hạt Cần tây còn làm . hóa học mới có hoạt tính sinh học từ cây Cần tây là cần thiết. Với mục tiêu nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây, chúng tôi tiến hành đề tài Tiếp tục nghiên cứu thành phần hóa học. Cần tây trong y học, một số công trình nghiên cứu về thành phần hóa học của hạt Cần tây đã được thực hiện nhưng chưa đầy đủ. Vì vậy, việc tiếp tục nghiên cứu để xác định những thành phần hóa. nghiên cứu 18 Chương 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 20 3.1. Nghiên cứu thành phần tinh dầu hạt Cần tây 20 3.1.1. Định lượng tinh dầu trong hạt Cần tây 20 3.1.2. Nghiên cứu thành phần hóa học