Đang tải... (xem toàn văn)
1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bá bệnh là một cây thuốc gần đây ở cả Việt Nam và nước ngoài đã sử dụng nhiều để điều trị suy giảm chức năng sinh dục nam giới. Ở Việt Nam Bá bệnh có ở nhiều nơi như: các tỉnh miền Trung, các tỉnh Tây Nguyên và một số tỉnh ở miền Bắc như Quảng Ninh, Hòa Bình. Một số nghiên cứu gần đây cho thấy cây mọc ở Việt Nam cũng có tác dụng khá tốt, nhưng cũng cảnh báo cây này có thể có độc với huyết và dùng lạ m dụng gây ra tiêu chảy, chán ăn. Mặt khác, nguồn dược liệu này hiện nay có bán rất sẵn ở nhiều chợ và quầy thuốc đông y, được nhập vào Việt Nam từ nhiều nguồn khác nhau như từ Campuchia, Lào, Thái Lan, Malaysia, Trung Quốc… dưới hình thức cả dược liệu lẫn sản phẩm dạng thực phẩ m chức năng. Trong khi đó ở Việt Nam tài liệu nghiên cứu còn ít, chưa đầy đủ toàn diện và hệ thống, chưa có tài liệu có giá trị về mặt pháp lí cho việc đánh giá chất lượng dược liệu này. Chính vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu so sánh đặc điểm vi học và thành phần hóa học của 3 mẫu rễ cây Bá bệnh hướng tới xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu” với mục tiêu: Hướng tới xây dựng tiêu chuẩn kiể m nghiệm cho dược liệu Bá bệnh. Trong khuôn khổ khóa luận này chúng tôi tiến hành nghiên cứu một số nội dung sau: Nghiên cứu đặc điểm vi học của rễ 3 mẫu Bá bệnh thu thập ở các địa phương khác nhau. Dự kiến một số tiêu chuẩn kiể m nghiệm sơ bộ dược liệu Bá bệnh.
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ GIANG NGHIÊN CỨU SO SÁNH ĐẶC ĐIỂM VI HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA 3 MẪU RỄ CÂY BÁ BỆNH HƯỚNG TỚI XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI 2013 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ GIANG NGHIÊN CỨU SO SÁNH ĐẶC ĐIỂM VI HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA 3 MẪU RỄ CÂY BÁ BỆNH HƯỚNG TỚI XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. TS. Hà Vân Oanh Nơi thực hiện: 1.Bộ môn Dược học cổ truyền Trường Đại học Dược Hà Nội 2.Bộ môn Dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI 2013 LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình hoàn thành khóa luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được rất nhiều sự hướng dẫn, giúp đỡ quý báu từ thầy cô, gia đình, bạn bè. Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin được bày tỏ lời cảm ơn chân thành nhất tới: TS. Hà Vân Oanh, người thầy đã trực tiếp hướng dẫn và chỉ bảo tận tình giúp tôi hoàn thành khóa luận. PGS.TS Vũ Văn Điền - Bộ môn Dược học cổ truyền ThS.DS Lê Thanh Bình - Bộ môn Dược liệu Là những người thầy đã hết lòng tận tình chỉ bảo, giúp đỡ, động viên và truyền đạt những kinh nghiệm quý báu giúp tôi hoàn thành khóa luận này. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến tất cả các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược liệu - Dược học cổ truyền trường Đại học Dược Hà Nội đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian thực hiện nghiên cứu đề tài tại bộ môn. Tôi xin trân trọng cảm ơn ban giám hiệu, phòng đào tạo và các phòng ban khác trong trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành tốt chương trình học tập tại trường trong suốt 5 năm học vừa qua. Cuối cùng tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè, những người đã luôn ở bên động viên và là chỗ dựa tinh thần cho tôi những lúc khó khăn trong suốt quá trình học tập và làm khóa luận tốt nghiệp. Hà Nội, ngày 14 tháng 5 năm 2013. Sinh viên Hoàng Thị Giang MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 PHẦN I: TỔNG QUAN 2 1.1. Vị trí phân loại và đặc điểm thực vật của họ Thanh thất. 2 1.1.1. Vị trí phân loại của loài. 2 1.1.2. Đặc điểm thực vật của cây Bá bệnh. 2 1.1.3. Phân bố - thu hái 3 1.2 .Thành phần hóa học. 3 1.2.1. Quassinoid 4 1.2.2. Dẫn xuất Squalen. 5 1.2.3. Alkaloid . 5 1.2.4.Coumarin.……………………………………………………… 7 1.3. Tác dụng dược lý, công dụng 7 PHẦN II: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 9 2.1. Nguyên liệu nghiên cứu 9 2.2. Phương tiện nghiên cứu 9 2.2.1. Các máy và thiết bị dùng trong nghiên cứu 9 2.2.2. Hóa chất và dụng cụ 9 2.3. Phương pháp nghiên cứu 10 2.3.1. Nghiên cứu về đặc điểm thực vật 10 2.3.1.1. Mô tả đặc điểm dược liệu 10 2.3.1.2. Nghiên cứu đặc điểm vi học 10 2.3.2. Nghiên cứu về thành phần hóa học 10 2.3.2.1. Định tính bằng các phản ứng hóa học 10 2.3.2.2. Định tính bằng sắc ký lớp mỏng 11 2.3.3. Xác định các chỉ tiêu vật lý, hóa lý 11 2.3.4. Phương pháp xử lý số liệu 11 PHẦN III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 12 3.1. Nghiên cứu về đặc điểm thực vật 12 3.1.1. Mô tả đặc điểm dược liệu (rễ). 12 3.1.2. Đặc điểm vi phẫu vỏ rễ. 13 3.1.3. Đặc điểm bột rễ. 15 3.2. Nghiên cứu về thành phần hóa học. 17 3.2.1. Định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phản ứng hóa học 17 3.2.2. Sắc ký lớp mỏng. 26 3.3. Xác định một số chỉ tiêu hóa lý của dược liệu. 34 3.3.1. Xác định các chất chiết được bằng dung môi. 34 3.3.2. Xác định độ ẩm an toàn của dược liệu. 37 3.3.3. Xác định độ tro toàn phần. 37 3.4. Sơ bộ xây dựng tiêu chuẩn cho vị thuốc rễ Bá bệnh 39 3.5. Bàn luận 42 PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 44 4.1. Kết luận. 44 4.2. Đề xuất 45 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viêt tắt Tên đầy đủ 1 BB Bá bệnh 2 Dd Dung dịch 3 EtOH Ethanol 4 EtOAc Ethylacetat 5 H Độ ẩm 6 KH Khánh Hòa 7 m c Khối lượng cắn 8 m DL Khối lượng dược liệu 9 MeOH Methanol 10 PƯ Phản ứng 11 QN Quảng Ninh 12 SKLM Sắc ký lớp mỏng 13 SD Độ lệch chuẩn 14 SD TB Độ lệch chuẩn trung bình 15 TN Tây Ninh 16 TT Thuốc thử 17 UV Tử ngoại (Ultra – violet) 18 x, X TB Giá trị trung bình DANH MỤC BẢNG STT Bảng Tên bảng Trang 1 3.1 Kích thước các hạt tinh thể, tinh bột của 3 mẫu 17 2 3.2 Bảng kết quả định tính các nhóm chất trong 3 mẫu rễ cây Bá bệnh 25 3 3.3 Tỉ lệ các chất chiết được bằng nước 35 4 3.4 Tỉ lệ các chất chiết được bằng cồn 36 5 3.5 Độ ẩm an toàn dược liệu 37 6 3.6 Tỉ lệ tro toàn phần 38 DANH MỤC HÌNH TT Hình Tên hình Trang 1 1.1 Cây và quả Bá bệnh 3 2 1.2 Một số Quassinoid trong rễ cây Bá bệnh 5 3 1.3 Nhóm β- carbolin 6 4 1.4 Nhóm canthin – 6 – on 6 5 3.1 Rễ cây Bá bệnh 12 6 3.2 Miếng nhỏ rễ cây Bá bệnh 13 7 3.3 Vi phẫu vỏ rễ 14 8 3.4 Đặc điểm bột mẫu Tây Ninh 15 9 3.5 Đặc điểm bột mẫu Quảng Ninh 16 10 3.6 Đặc điểm bột mẫu Khánh Hòa 16 11 3.7 Sắc ký đồ (1), đồ thị (2) và bảng phân tích sắc ký đồ (3) của dịch chiết MeOH rễ BB ở = 254nm 27 12 3.7.1 Mẫu QN 27 13 3.7.2 Mẫu TN 28 14 3.7.3 Mẫu KH 28 15 3.8. Sắc ký đồ (1), đồ thị (2) và bảng phân tích sắc ký đồ (3) của dịch chiết MeOH rễ BB ở = 366nm 29 16 3.8.1 Mẫu QN 29 17 3.8.2 Mẫu TN 30 18 3.8.3 Mẫu KH 30 19 3.9 Sắc ký đồ (1), đồ thị (2) và bảng phân tích sắc ký đồ (3) của dịch chiết MeOH rễ BB sau khi phun TT hiện màu 31 20 3.9.1 Mẫu QN 31 21 3.9.2 Mẫu TN 32 22 3.9.3 Mẫu KH 32 23 3.10 Sắc ký đồ dịch chiết MeOH rễ BB quan sát ở các bước sóng khác nhau 33 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Bá bệnh là một cây thuốc gần đây ở cả Việt Nam và nước ngoài đã sử dụng nhiều để điều trị suy giảm chức năng sinh dục nam giới. Ở Việt Nam Bá bệnh có ở nhiều nơi như: các tỉnh miền Trung, các tỉnh Tây Nguyên và một số tỉnh ở miền Bắc như Quảng Ninh, Hòa Bình. Một số nghiên cứu gần đây cho thấy cây mọc ở Việt Nam cũng có tác dụng khá tốt, nhưng cũng cảnh báo cây này có thể có độc với huyết và dùng lạm dụng gây ra tiêu chảy, chán ăn. Mặt khác, nguồn dược liệu này hiện nay có bán rất sẵn ở nhiều chợ và quầy thuốc đông y, được nhập vào Việt Nam từ nhiều nguồn khác nhau như từ Campuchia, Lào, Thái Lan, Malaysia, Trung Quốc… dưới hình thức cả dược liệu lẫn sản phẩm dạng thực phẩm chức năng. Trong khi đó ở Việt Nam tài liệu nghiên cứu còn ít, chưa đầy đủ toàn diện và hệ thống, chưa có tài liệu có giá trị về mặt pháp lí cho việc đánh giá chất lượng dược liệu này. Chính vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài nghiên cứu “Nghiên cứu so sánh đặc điểm vi học và thành phần hóa học của 3 mẫu rễ cây Bá bệnh hướng tới xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu” với mục tiêu: Hướng tới xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho dược liệu Bá bệnh. Trong khuôn khổ khóa luận này chúng tôi tiến hành nghiên cứu một số nội dung sau: - Nghiên cứu đặc điểm vi học của rễ 3 mẫu Bá bệnh thu thập ở các địa phương khác nhau. - Dự kiến một số tiêu chuẩn kiểm nghiệm sơ bộ dược liệu Bá bệnh. [...]... kính hiển vi xác định đặc điểm vi phẫu và chụp ảnh các đặc điểm vi phẫu dưới kính hiển vi 2 .3. 2 Nghiên cứu về thành phần hóa học 2 .3. 2.1 Định tính bằng các phản ứng hóa học Định tính các nhóm chất hữu cơ có trong mẫu dược liệu theo các phương pháp hóa học thường quy được ghi trong các tài liệu hóa thực vật như: 11 Bài giảng dược liệu tập I [3] , II [15] thực tập dược liệu – phần hóa học [17] ... của phương pháp trên mỗi mẫu nghiên cứu Phương pháp xác định giá trị trung bình của các mẫu nghiên cứu khác nhau 12 PHẦN III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3. 1 Nghiên cứu về đặc điểm thực vật 3. 1.1 Mô tả đặc điểm dược liệu (rễ) Rễ hình trụ, thẳng hay hơi cong queo Lớp vỏ ngoài có màu vàng nhạt, rễ hóa gỗ, thể chất cứng, chắc, mặt cắt ngang có màu vàng Không mùi, vị rất đắng Hình 3. 1: Rễ cây Bá bệnh 13. .. ( Hình 3. 4 – 3. 6 và bảng 3. 1) Hình 3. 4: Đặc điểm bột mẫu Tây Ninh 16 Hình 3. 5: Đặc điểm bột mẫu Quảng Ninh Hình 3. 6: Đặc điểm bột mẫu Khánh Hòa 17 Bảng 3. 1: Kích thước các hạt tinh thể, tinh bột của 3 mẫu Đặc điểm hạt Tinh thể Tinh bột tròn hoặc gần tròn Tinh bột hình trứng hoặc thuôn dài Mẫu TN (µm) Mẫu QN (µm) Mẫu KH (µm) 21,00 * 17,00 25,00 * 19,00 23, 00 * 19,00 21,00 * 18,00 22,26 *19 ,32 23, 00 *... dưới ánh sáng thường để mô tả đặc điểm bên ngoài, thể chất và mặt cắt ngang của dược liệu 2 .3. 1.2 Nghiên cứu đặc điểm vi học [16] [17] Soi bột: các mẫu rễ dược liệu được nghiền nhỏ bằng thuyền tán, cối sứ, rây lấy bột mịn, lên tiêu bản và quan sát, chụp ảnh dưới kính hiển vi để xác định các đặc điểm bột Vi phẫu: các mẫu dược liệu được ngâm trong EtOH 40%, cắt vi phẫu bằng máy cắt cầm tay, tẩy nhuộm... ngoài vào trong, nhỏ ở ngoài và loe rộng dần ở phía trong Nằm xen kẽ giữa các bó libe là các tia ruột Hình ảnh vi phẫu vỏ rễ được thể hiện ở hình 3. 3: 14 Hình 3. 3: vi phẫu vỏ rễ (a) Mẫu Tây Ninh (b) Mẫu Khánh Hòa (c) Mẫu Quảng Ninh Trong đó: 1 Bần 2 Mô mềm vỏ 3 Bó libe 4 Tia ruột 5 Các tế bào thành dày hóa gỗ Nhận xét: Quan sát đặc điểm vi phẫu vỏ rễ Bá bệnh có thể nhận thấy các mẫu Bá bệnh thu hái từ 3. .. nước của rễ Bá bệnh làm giảm lượng glucose huyết trên chuột thử nghiệm có đường huyết cao và làm giảm không đáng kể đối với chuột có đường huyết bình thường [26], [35 ] + Tác dụng khác như: hạ sốt, đau đầu, ho dai dẳng, phù, tiêu chảy…[6], [19], [32 ], [31 ] Ức chế sự nhân lên của virus HIV [27], chống loét [32 ] 9 PHẦN II: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu nghiên cứu Dược liệu là rễ cây. .. nhau đều có các đặc điểm tương 15 đồng nhau Như vậy từ các đặc điểm quan sát được có thể dùng làm cơ sở để kiểm nghiệm dược liệu Bá bệnh từ các vùng khác nhau 3. 1 .3 Đặc điểm bột rễ Bột có màu vàng nhạt, vị rất đắng Soi dưới kính hiển vi có các đặc điểm sau: mảnh bần (1) là các tế bào hình đa giác thành dày, có màu vàng nhạt hay không màu; mảnh mô mềm (2) là các tế bào hình đa giác thành mỏng; mảnh... cả 3 mẫu + Phản ứng với FeCl3 5% : Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm 2 – 3 giọt dd FeCl3 5% không thấy xuất hiện màu xanh đen ở cả 3 mẫu + Phản ứng với AlCl3 3% trong cồn : Cho vào ống nghiệm 1ml dịch chiết, thêm 2 – 3 giọt dd AlCl3 % trong cồn không thấy xuất hiện màu xanh ở cả 3 mẫu Kết luận: Trong rễ cây bá bệnh không có flavonoid 3. 2.1.4 Định tính anthranoid + Phản ứng Borntrager: Cho 3g... khác nhau này có thể do các mẫu dược liệu thu mua có tuổi cây không giống nhau hoặc do điều kiện khí hậu, thổ nhưỡng mỗi vùng khác nhau 3. 2 Nghiên cứu về thành phần hóa học 3. 2.1 Định tính các nhóm chất hữu cơ bằng phản ứng hóa học 3. 2.1.1 Định tính alkaloid Cho khoảng 5g bột dược liệu vào bình nón dung tích 100ml, thấm ẩm dược liệu bằng dd amoniac đặc Đậy kín bình trong vòng 30 phút Cho 25ml chloroform... hái rễ quanh năm, tuy nhiên rễ cây sau 4 tuổi mới có giá trị thương mại [14] 1.2 Thành phần hóa học Hiện nay, ở Vi t Nam chưa có nhiều công trình nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Bá bệnh Cho đến nay, theo một số tài liệu cho thấy trong rễ cây có các nhóm như: quassinoid, alkaloid, ngoài ra còn có coumarin, squalen triterpen, riêng lá còn có thêm flavonoid, tannin [33 ] 1.2.1 Quassinoid Các hợp . ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI HOÀNG THỊ GIANG NGHIÊN CỨU SO SÁNH ĐẶC ĐIỂM VI HỌC VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA 3 MẪU RỄ CÂY BÁ BỆNH HƯỚNG TỚI XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU. lượng dược liệu này. Chính vì vậy, chúng tôi thực hiện đề tài nghiên cứu Nghiên cứu so sánh đặc điểm vi học và thành phần hóa học của 3 mẫu rễ cây Bá bệnh hướng tới xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm. số liệu 11 PHẦN III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 12 3. 1. Nghiên cứu về đặc điểm thực vật 12 3. 1.1. Mô tả đặc điểm dược liệu (rễ) . 12 3. 1.2. Đặc điểm vi phẫu vỏ rễ. 13 3. 1 .3. Đặc điểm bột rễ.