BÔ ̣ Y TÊ ́ TRƢƠ ̀ NG ĐA ̣ I HO ̣ C DƢƠ ̣ C HA ̀ NÔ ̣ I SOUTTHIDA VONGSAVATH GÓP PHẦN NGHIÊN CƢ ́ U LÊN MEN TÔ ̉ NG HƠ ̣ P KHA ́ NG SINH NHƠ ̀ STREPTOMYCES 166.28 KHA LUN TT NGHIP DƢC S H NI - 2013 B Y TÊ TRƢƠ ̀ NG ĐA ̣ I HO ̣ C DƢƠ ̣ C HA ̀ NÔ ̣ I SOUTTHIDA VONGSAVATH GP PHẦN NGHIÊN CƢ ́ U LÊN MEN TÔ ̉ NG HƠ ̣ P KHA ́ NG SINH NHƠ ̀ STREPTOMYCES 166.28 KHA LUN TT NGHIP DƢC S Ngƣơ ̀ i hƣơ ́ ng dâ ̃ n: PGS – TS. Cao Văn Thu Nơi thƣ ̣ c hiê ̣ n: Bô ̣ môn Vi sinh - Sinh ho ̣ c Trươ ̀ ng Đại học Dươ ̣ c Ha ̀ Nô ̣ i H NI - 2013 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 2  2   2  2  3  3  4  5  5  6  8  9  9   9  9  10  10  10  12  12 1.6.2  12  13  -VIS) 13  13 MS) 13  13 13 Streptomyces sp.   Streptomyces Orientalis 4912 sinh vancomycin  CHƢƠNG II : ĐI TƢNG V PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15  15  15  15  15 2.1.4 Dung môi. 17  18  18  19  19  19  19  19  20  21  21  23  23  24  24  25  26  26 CHƢƠNG III : KẾT QUẢ THỰC NGHIM V NHÂN XÉT 27 3.1 Kết quả sàng lọc ngẫu nhiên 27  28  29  30   31  32  33  33  37 KẾT LUN V KIẾN NGHỊ 39 LỜI CẢM ƠN  -TS  - B                        . Tôi xin chân thành  ,  ,  ,        -   ,          ,  -    gi.                                                                     .  ,            .            .                ,  .     ! ,  15  5 . Sinh viên Soutthida Vongsavath DANH MỤC CÁC KÝ HIU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT ADN Acid - deoxyribonucleic ARN Acid ribonucleic ATCC American Type Culture Collection DM Dung môi     Gr(+)  Gr(-) Gram âm HTKS  ISP International Streptomyces Project   KS Kháng sinh MT  MTdt    MC  SLNN    VSV   DANH MỤC CÁC BẢNG 2. 2. 2.    3.3       :     Hình 1.1 Hình 1.2: K Hình 1.3: S Hình 1.4 Hình 1.5:  Hình 1.6:  Hình P.1 Hình P.3:  Hình P.3 Hính P.4 Hính P.5 Hình P.6  Hình P.7 1 ĐẶT VẤN ĐỀ    ,   . T       WHO ) .      Streptomyces   55% Streptomyces.  Streptomyces     Streptomyces 166.28.   .   [...]... để nâng cao khả năng sinh tổng hợp kháng sinh của chủng xạ khuẩn gốc - Đột biến hóa học 2.2.2 Lên men, chiết tách kháng sinh - Từ 3 MT lên men bề mặt tốt nhất, chọn 1 MT lên men chìm tốt nhất - Thực hiện lên men từ các dạng chủng và biến chủng thu được, lựa chọn biến chủng (dạng chủng) có khả năng lên men tạo kháng sinh mạnh nhất - Tìm dung môi hữu cơ chiết dịch lọc của dịch lên men và pH chiết tốt...2 CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 Đại cƣơng về kháng sinh 1.1.1 Lich sử nghiên cứu kháng sinh Người đầu tiên đạt nền móng cho khoa học nghiên cứu chất kháng sinh là Alexander Fleming – nhà sinh vật học người Anh, đã phát hiện ra tác dụng kháng sinh vào tháng 10-1928 [17] Sau một thập kỷ, nhờ sự nỗ lực hợp tác của các nhà vi sinh học và sinh hóa học Anh, Mỹ, penicillin đã được nghiên cứu, sản xuất với... nguồn kháng sinh tự nhiên phong phú nhờ nghiên cứu những chất hóa học sinh ra bởi Streptomyces sp trên ong bắp cày [21] Việc tìm kiếm những kháng sinh mới là rất cần thiết , góp phần giảm thiểu tình trạng kháng kháng sinh của các vi khuẩn gây bệnh đang tiếp diễn 14 Những nghiên cứu gần đây đã chỉ ra một nguồn giàu tiềm năng cho việc phát hiện các kháng sinh mới là những loài xạ khuẩn sống cộng sinh. .. kháng sinh Các kháng sinh tác dụng chủ yếu qua việc ức chế các phản ứng tổng hợp khác nhau của tế bào vi sinh vật gây bệnh bằng cách gắn vào các vị trí chính xác hay các phân tử đích của tế bào vi sinh vật, làm biến đổi các phản ứng đó Mỗi nhóm kháng sinh tác dụng lên các đích khác nhau [15]Có 6 kiểu chủ yếu: - Tác dụng lên việc tổng hợp thành tế bào - Tác dụng lên màng nguyên sinh chất - Tác dụng lên. .. thời , họ cũng nghiên cứu hoạt tính kháng khuẩn và kháng nấm của kháng sinh do 15 loài xạ khuẩn này sinh ra Các loài xạ khuẩn sống cộng sinh trên ong bắp cày giúp bảo vệ loài ong này khỏi các vi sinh vật gây bệnh , và chúng có thể là nguồn cung cấp những kháng sinh tự nhiên mới mà các nhà nghiên cứu dược phẩm quan tâm 1.8.2 Tối ƣu hóa môi trƣờng lên men chủng Streptomyces Orientalis 4912 sinh vancomycin... 3-6 tháng cấy lại 1 lần [14] 10 1.5 Lên men tổng hợp kháng sinh 1.5.1 Đại cƣơng Lên men là quá trình phân giải hydrocacbon trong điều kiện thích hợp ( hiếu khí hay kị khí ) và kháng sinh là một trong những sản phẩm quan trọng của quá trình lên men sử dụng xạ khuẩn.[9] Cụ thể hơn , kháng sinh là sản phẩm trao đổi bậc hai, được tạo thành gần váo lúc kết thúc quá trình sinh trưởng của xạ khuẩn ,thường vào... thành từ Streptomyces được chia làm 4 loại: sắc tố hòa tan, sắc tố của khuẩn ty cơ chất, sắc tố của khuẩn ty khí sinh, sắc tố melanoid 8 1.3 Sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh Dưới dây giới thiệu sơ đồ tổng quát sản xuất kháng sinh [4,9] Giống truyền ủ trong phòng thí nghiệm Nhân giố ng trong phòng thí nghiê ̣m Nhân giố ng trên thiế t bi ̣nhân giố ng Lên men tổng hợp kháng sinh Dịch lên men Lọc,... + Lên men: Sau 48h nhân giống, tiến hành lên men trên một số MT khác nhau để chọn MT lên men tốt nhất Giống cấp 1 được cấy vô trùng sang bình nón 500ml 24 chứa các MT dinh dưỡng với tỷ lệ Vgiống:Vmôi trường = 1:10 Các bình lên men được lắc ở nhiệt độ 28°C ± 0,1°C, tốc độ quay 140 vòng/phút trong 120h Để chọn chủng có khả năng lên men sinh tổng hợp kháng sinh tốt nhất: giống cấp 1 trên MT2dt được lên. .. Các kháng sinh có cấu trúc 4 vòng (tetracyclin) - Các kháng sinh polypeptid (polymyxin, bacitracin) - Các kháng sinh macrolid (erythromycin, spiramycin) - Các kháng sinh polyen (nystatin, amphotericin B) - Các kháng sinh nhóm antracyclin chống ung thư (daunorubicin) - Các kháng sinh nhóm actinomycin chống ung thư (dactinomycin D) - Các kháng sinh khác : rifampicin … [9,16] 1.1.4 Cơ chế tác dụng của kháng. .. hoạt tính kháng sinh được tiến hành tương tự như phương pháp đột biến UV 2.3.6 Lên men chìm tổng hợp kháng sinh - Nguyên tắc: Sau khi có kết quả xác định được các môi trường nuôi cấy bề mặt tối ưu cho việc sản xuất kháng sinh, sử dụng giống cấp 1 để lên men gián đoạn trong các môi trường lỏng tương ứng - Tiến hành + Tạo giống cấp 1: Chủng giống Streptomyces 166.28 sau khi nuôi cấy trên thạch nghiêng . tetracyclin) - Các kháng sinh polypeptid (polymyxin, bacitracin) - Các kháng sinh macrolid (erythromycin, spiramycin) - Các kháng sinh polyen (nystatin, amphotericin B) - Các kháng sinh nhóm antracyclin.  -6 [14] 10 1.5 Lên men tổng hợp kháng sinh 1.5.1 Đại cƣơng . Lên men là quá trình   lên. DƢƠ ̣ C HA ̀ NÔ ̣ I SOUTTHIDA VONGSAVATH GÓP PHẦN NGHIÊN CƢ ́ U LÊN MEN TÔ ̉ NG HƠ ̣ P KHA ́ NG SINH NHƠ ̀ STREPTOMYCES 166. 28 KHA LUN TT NGHIP DƢC S H NI -