BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NÔI *** NGUYỄN THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỀM THựC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY XÀO GIÔNG (MURRAYA KOENIGII{L.) SPRENG.) THU HÁI TẠI TỈNH NINH THUẬN KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ KHÓA 60 (2005- 2010) Ngưòi hướng dẫn Nơi thực hiện Thời gian thực hiện PGS. TS. Nguyễn Viết Thân TS. Nguyễn Thị Bích Thu Bộ môn dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội : từ 01/2010 - 05/ 201Ò HÀ NỘI-2010 LỜI CẢM ƠN Đề tài được thực hiên tại bộ môn Dược liệu, Đại học Dược Hà Nội. Trong quá trình nghiên cứu và hoàn thiện luận văn tốt nghiệp này, tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ của các thầy giáo, cô giáo, các anh chị kĩ thuật viên trên bộ môn, các nhà khoa học ở Viện Dược liệu và tỉnh Ninh Thuận. Trước tiên tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS. TS. Nguyễn Viết Thân, TS. Nguyễn Thị Bích Thu những thầy cô đã tận tình hướng dẫn, hết lòng chỉ bảo tạo điều kiện giúp đỡ tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và làm khóa luận. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn DS. Nguyễn Xuân Tuyển, hội Đông Y tỉnh Ninh Thuận, đã giúp đỡ tôi trong việc lấy mẫu nghiên cứu. Tôi xin cảm ơn ban giám hiệu nhà trưòfng, các thầy cô giáo, các kỹ thuật viên bộ môn dược liệu trường Đại Học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện cho tôi trong nghiên cứu thực hiện khóa luận. Cuối cùng tôi vô cùng cảm ơn gia đình và tất cả bạn bè, người thân đã động viên, giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Hà nội ngày 16 tháng 5 năm 2010 sv. Nguyễn Thị Hiền MỤC LỤC # • ĐẶT VẤN ĐỀ 1 PHẦN I: TỔNG QUAN 2 1.1.Vị trí phân loại chi Murraya 2 1.2.Đặc điểm thực vật, phân bố 2 1.2.1.Đặc điểm họ Cam (Rutaceae) 2 1.2.2.Đặc điểm chi Murraya 3 1.2.3.Đặc điểm một số loài thuộc chi Murraya 4 1.3.Thành phần hóa học 6 1.4.Tác dụng, công dụng 10 PHẦN II: ĐÓI TƯỢNG, PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU . . 14 2.1 .Đối tượng nghiên cứu 14 2.2.Hóa chất và phương tiện 14 2.3 PhưoTig pháp nghiên cứu 15 2.3.1.Nghiên cứu đặc điểm thực vật, hiển vi 15 2.3.2.Nghiên cứu thành phần hóa học cây Xào giông 15 PHẦN III: THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 18 3.1 .Đặc điểm hình thái, thực vật 18 3.1.1 .Đặc điểm h ì^ thái bên ngoài 18 3.1.2.Đặc điểm hiển vi 18 3.2.Nghiên cứu thành phần hóa học 24 3.2.1.Định lượng tinh dầu, xác định thành phần tinh dầu 24 3.2.2.Sơ bộ xác định một số nhóm chất . 27 3.2.3.Nghiên cứu một số phân đoạn dịch chiết cây Xào giông bằng sắc ký lóp mỏng 34 3.3 Bàn luận . ;••••:_ PHẦN IV: KẾT LUẬN VÀ ĐÈ NGHỊ . 45 4.1. Kết luận .* 45 4.2 Đề nghị 45 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT SKLM : sắc ký lớp mỏng GC : sắc ký khí MS : khối phổ DĐVNI : dược điển Việt Nam 1 DĐVNIV : dược điển Việt Nam 4 TT : thuốc thử Dm : dung môi SKĐ : sắc ký đồ CÁC HÌNH VÀ BẢNG DỦNG TRONG KHÓA LUẬN Phần I: Bảng 1.3.1. thành phần tinh dầu trong lá non và lá già Xào giông. Phần III: Hình 3.1.1 .Cành, lá cây Xào giông. Hình 3.1.2.1. Vi phẫu lá. Hình 3.1.2.2. Vi phẫu thân. Hình 3.1.3. Đặc điểm bột thân, lá Xào giông. Hình 3.2.3.1. đến hình 3.2.3.8. sắc ký đồ các phân đoạn dịch chiết Xào giông. Bảng 3.2.1. Thành phần hóa học trong tinh dầu Xào giông. Bảng 3.2.2. Kết quả định tính các nhóm chất chính trong thân, lá Xào giông. Sơ đồ 3.2.3.1. Quy trình chiết xuất các phân đoạn dịch chiết Xào giông. ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam là một nước nhiệt đới nóng ẩm với địa hình phức tạp và hệ thực vật phong phú. Điều kiện nước ta dễ mắc nhiều bệnh nhưng bù lại tài nguyên cây thuốc cũng rất giàu có. Cùng với đó, nền y học của đồng bào các dân tộc trên khắp đất nước đã được xây dựng từ xa xưa với việc sử dụng cây cỏ thiên nhiên làm thuốc chữa bệnh và bảo vệ sức khỏe. Tuy nhiên, việc sử dụng này mới chỉ theo kinh nghiệm dân gian, còn nhiều cây chưa được nghiên cứu về mặt khoa học. Đe bắt kịp với sự phát triển ngày càng cao của thời đại và nhu cầu sử dụng các dược liệu thiên nhiên trong chăm sóc sức khỏe, cần có nhiều nghiên cứu hơn nữa về những cây thuốc nhằm khai thác nguồn tài nguyên đất nước một cách hiệu quả, an toàn và hợp lý. Đồng bào Người Chăm ở Ninh Thuận có nghề thuốc nam từ lâu đời. Họ sử dụng rất nhiều cây cỏ thiên nhiên trong chữa bệnh và có nhiều bài thuốc cổ truyền quý. Trong số đó, có Xào giông là một cây có nhiều ở địa phương rất hay được đồng bào ở đây sử dụng trong ăn uống hằng ngày và trong các bài thuốc theo kinh nghiệm dân gian để chữa một số bệnh như lỵ, ăn uống khó tiêu, ban sởi, ghẻ Hiện nay ở Việt Nam chưa thấy có tài liệu nào nghiên cứu đầy đủ về cây này. Với mục đích xây dựng cơ sở khoa học để sử dụng cây Xào giông một cách hiệu quả và an toàn hơn, chúng tôi kết họp với sở Khoa Học Và Công Nghệ tỉnh Ninh Thuận; Hội Đông Y tỉnh Ninh Thuận và Viện Dược Liệu thực hiện đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây Xào giông thu hái tại tỉnh Ninh Thuận” với nội dung sau: - Nghiên cứu đặc điểm thực vật, mô tả đặc điểm vi học góp phần xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm. - Định lượng và xác định thành phần tinh dầu Xào giông. - Định tính một số nhóm chất hóa học. - Phân tích một số phân đoạn dịch chiết bằng sắc ký lóp mỏng. PHẦN I: TỎNG QUAN Xào giông là cây có nhiều ở Ninh Thuận và một số tỉnh miền trung nước ta. Theo chương trình điều tra cây rừng của tỉnh Ninh Thuận thì cây Xào giông có tên khoa học là Murraya koenigii (L.) Spreng họ Rutaceae. Cây này nằm trong danh mục thực vật của vườn quốc gia Núi Chúa. Tuy nhiên, hiện nay ở Việt Nam chưa thấy có nhiều tài liệu nghiên cứu đầy đủ về thành phần hóa học và tác dụng dược lý của cây này. 1.1. Vị trí phân loại chi Murraya (L.) Qua nghiên cứu các tài liệu [6], [9], [12] về chi Murraya, chúng tôi thấy các tác giả đều thống nhất xác định vị trí phân loại của chi Murraya như sau: Giới Thực Vật (Plantae). Ngành Thực Vật Hạt Kín (Magnoliophyta). Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida). Phân Lófp Hoa Hồng (Rosidae). Bộ Cam (Rutales). Họ Cam (Rutaceae). ,Chi Murraya 1.2. Đặc điểm thực vật, phân bố. 1.2.1. Đặc điểm họ Cam (Rutaceae): Theo tài liệu [6], [13], họ Cam (Rutaceae) là một họ lớn thuộc bộ Cam (Rutales) phân lớp Hoa Hồng (Rosidae). Đặc điểm thực vật: Cây gỗ, bụi, ít khi là cây cỏ. Lá đơn hoặc kép, mọc sole hay mọc đối. Không có lá kèm. Trên lá và cả trên cơ quan sinh sản có nhiều túi tiết dầu thơm dưới dạng những điểm trong khi soi lên ánh sáng. Cụm hoa là xim. Hoa thường đều, lưỡng tính, mẫu 4-5, các thành phần của bao hoa rời. Nhị có vòng ngoài thường đối diện với cánh hoa. số nhị tliưòmg nhiều hơn số cánh hoa. Bầu nguyên, một vòi và một đầu nhụy. Bộ nhụy có 4- 5 lá noãn dính liền thành bầu trên, có khi nhiều lá noãn (15-20), số ô của bầu bằng số lá noãn, mỗi ô có 1-2 hay nhiều noãn đính trung trụ. Quả nang hay quả mọng loại cam, có khi là quả tụ gồm nhiều đại. Hạt không có nội nhũ. Có 1600 loài phân bố ở vùng nhiệt đới và ôn đới, đặc biệt ở Nam Phi và Australia. Việt Nam có gần 30 chi, 110 loài, mọc hoang và được trồng phổ biến lấy quả (cam, quít, bưởi, chanh); làm cảnh (quất); gia vị (hồng bì, sẻn). Một số chi của họ Cam: - Chi Acronychia - Bưởi bung: A. pedunculata (L.) Miq. Chi Cỉtrus - Cam, Chanh: Chanh (C. japónica Thunb. var. madurensỉs Guill.), bưởi (C. grandis osbeck). - Chi Clausena — Hồng bì: Hồng bì (C. lansium (Lour.) Skeells. - Chi Euodỉa - Ba chạc: Ngô thù {E. rutaecarpa Hemsl. Et. Thom.); Ba chạc {E. ỉepta (Spreng.) Merr.) - Chi Murraya - Củ khỉ: Nguyệt quý (M paniculata (L.) Jack.). - Chi Phellodendron — Hoàng bá: Hoàng bá {P. chínense Schneid). - Chi Zanthoxylum — Muồng truổng: Xuyên tiêu (Z nỉtỉdum (Lam.) DC.). 1.2.2. Đặc điểm chi Murraya: Theo [9], [12] chi Murr aya L. có đặc điểm thực vật: Cây nhỡ hay cây gỗ nhỏ, không gai. Lá có tuyến, mọc sole, kép lông chim lẻ; lá chét mọc sole, nguyên hay có răng. Cuống lá có cánh hay không, có lông hay không. Cụm hoa thành chùm ở nách lá hay ở ngọn. Lá đài 5, rời rất nhỏ, thường có lông nhung ở mặt ngoài. Cánh hoa 5, rời, có tuyến, tiền khai lọp, có màu sắc, dài hoTi lá đài nhiều. Nhị 10, mà 5 cái ngắn, chỉ nhị hình dùi; bao phấn có 4 ô, mở dọc. Bầu hình trứng, có cuống nhụy dạng vòng, vòi dài; đầu nhụy hình đầu; 2 ô, với 1 noãn treo, quả nạc, có com nhầy, có tuyến, thường mang đài tồn tại; hạt 2 (hoặc 1 do tiêu biến). Gồm 4 loài phân bố từ vùng Ấn Độ - Mã Lai đến Thái Bình Dương, ở Việt Nam có cả 4 loài. 3 loài thông dụng là: - Murraya glabra G. ; chùm hôi nhẵn. - Murraya koenigỉỉ (L.) Spreng.: chùm hôi trắng. - Murrayapanỉculata (L.) Jack.: nguyệt quý , nhâm hôi. 1.2.3. Đặc điểm một số loài thuộc chi Murraya: 1.2.3.1. Murr aya koenỉgỉi (L.) Spreng. Theo [8], [9], [11], [12], [17], [20], Xào giông {Murraya koenigii (L.) SprengJ còn có tên khác là chùm hôi trắng, xan tróc. Đặc điểm thực vật: Cây bụi cao l-2m, có các nhánh màu tía sẫm. Lá kép lông chim lẻ với 17-21 đôi lá chét dài 3-5cm, mọc sole, hình trái xoan thon, không cân xứng, nhẵn hơi có lông mịn, nhạt ở mặt dưới; mép có răng tròn thấp, gân bên 4-6 đôi, lồi rõ ở mặt dưới. Lá rất thơm. Hoa nhỏ, màu trắng có mùi không thơm lắm, tập hợp thành ngù kép ở ngọn ngắn hơn lá. Quả dạng quả mọng, dài 1 cm, màu tía sẫm có tuyến, với 1-2 hạt bao bởi chất nhầy. Cây xuất sứ ở các khu rừng cận nhiệt đới miền nam Châu Á. Phân bố ở Ấn Độ, Trung Quốc, Việt Nam, Lào, Campuchia, Indonesia, dọc dãy Himalaya từ Kumaon đến Sikkim ở độ cao 5000 ft. ở nước ta, cây này có gặp tại Ninh Thuận, Nha Trang tỉnh Khánh Hòa, và một số tỉnh miền nam, miền trung, có thể là cây trồng. Mùa hoa bắt đầu từ giữa tháng 4, kết thúc vào giữa tháng 5. Dưới điều kiện Sanwara, chính vụ được quan sát là khoảng cuối tháng 4. Mùa quả được quan sát từ giữa tháng 7 đến cuối tháng 8. Tuy nhiên mùa cao điểm từ cuối tháng 7 đến đầu tháng 8 [19]. 1.2.3.2. Murraya glabra G. Cây còn có tên gọi là chùm hôi nhẵn có tuyến rất thơm. Đặc điểm thực vật: Lá dài 12-16 cm, có 3-9 lá chét xen kẽ, nhẵn dày ít thơm, màu lục rất sẫm ở mặt trên, hơi trắng ở mặt dưới, hình trái xoan ngược hay thuôn ngọn giáo nhọn ở gốc, có mũi nhọn đột ngột ở đầu hơi khía răng nhỏ. 6-9 đôi gân bên, lồi ở mặt dưới, gân con hơi sít và hơi lồi ở mặt dưới cuống lá chét hình trụ, nhẵn có tuyến. Cụm hoa ngắn hon các lá, có lông rất ngắn. Cuống hoa dài hơn hoa, ở gốc hay 1 phần 3 dưới có 2 lá bắc nhỏ. Hoa màu trắng rất thơin. Đài có 4 lá đài liền, không rõ rệt có lông rất ngắn. 4 cánh hoa nhẵn hình mũi mác. 8 nhị, trong đó 4 cái lớn hơn, chỉ nhị phồng và có lông ở phía trên hoặc nhẵn, bao phấn đính lưng hình trái xoan, với vài cái lông. Đĩa rất ngắn. Bầu hình trụ, sần sùi, nhẵn. Vòi dài hơn bầu, kết thúc bởi một đầu nhụy hình cầu, rụng sớm. Quả có com nhầy, vỏ hạt trông giống như nỉ. Phân bố ở Việt Nam, từ Hà Nam đến Quảng Trị, Đà Nang. Cây mọc trong rừng vùng núi. Lá dùng nấu canh. Quả ăn được. 1.2.3.3. Murrayapanỉculata (L.) Jack. Tên Việt Nam là nguyệt quý, nhâm hôi. Đặc điểm thực vật: Cây nhỡ cao 3- 8m. Thân thẳng, vỏ mỏng, màu vàng nhạt. Cành hình trụ màu vàng. Lá kép lông chim lẻ dài từ 20- 25 cm, gồm 5-11 lá chét, tròn, gần tròn hoặc hình nêm ở gốc, hình trái xoan ngược và không có mũi nhọn, dài 5- 7 cm, nguyên, nhẵn, gân không lồi, nhiều khi không nom thấy trừ gân giữa. Hoa mọc thành xim nhẵn, ở nách lá hoặc ở ngọn, thưa hoa. Hoa trắng hơi vàng, thơm, lá đài 5, nhỏ, hình tam giác có lông tuyến, rời nhau, về sau còn lại trên quả. Cánh hoa 5, có tuyến mọc đứng rồi thõng xuống ở phần trên. [...]... 1.3 Thành Phần hóa học Hầu hết các tài liệu đều thống nhất rằng thành phần của Xào giông có tinh dầu Và thành phần chính của tinh dầu tạo lên mùi của cây có a,ß-pinen, ß-caryophyllen Ngoài ra còn có alcaloid và glycosid Qua nghiên cứu tài liệu chúng tôi thấy thành phần của Xào giông {Murraya koenigii (L. ) Spreng .) gồm có: * Tỉnh dầu: có trong thành phần dược liệu Xào giông Tuy nhiên, tinh dầu của Murraya... Thành phần chính tạo nên mùi Xào giông là pinen, Sabinen, caryophyllen, cadinol, cadinen Raina và cộng sự (200 2) báo cáo thành phần tinh dầu Murraya koenigii (L. ) Spreng, có ß-pinen (70 %), ß-caryophyllen (6.5 %), a-pinen (5.4 %) Walde và cộng sự (200 5) báo cáo thành phần tinh dầu Murraya koenigỉỉ (L. ) Spreng. có a-pinen (52 %), cis-ß-ocimen (34 %) Thành phần hóa học của tinh dầu Murraya koenỉgii (L. ) Spreng, ... (L. ) Spreng, ở các nơi khác nhau thì có thành phần và tỷ lệ khác nhau Thành phần tinh dầu của Murraya koenỉgỉi (L. ) Spreng, ở Bangladesh nghiên cứu bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ có 39 họp chất [16] Hoạt chất chính là 3-caren (54.2 %), caryophyllen (9.5 %) Còn tinh dầu Murraya panỉculata (L. ) Jack, cũng ở đó có 58 hợp chất; caryophyllen oxit (16.6 %), ßcaryophyllen (11.8 %), spathulenol (10.2 %) Thành. .. bản vi phẫu, nghiên cứu cấu tạo giải phẫu cành và lá - Lựa chọn phần thân, lá làm sạch, sấy khô tán bột mịn, bảo quản để nghiên cứu đặc điểm bột - Dược liệu thu hái đem cất định lượng tinh dầu, phần còn lại đem nghiên cứu sơ bộ thành phần hóa học - Một phần dược liệu khác sấy khô, bảo quản để chiết xuất nghiên cứu các phân đoạn dịch chiết bằng sắc ký lóp mỏng 2.2 Phương tiện nghiên cứu * Thu c thử, dung... kỹ thu t số - Nghiên cứu đặc điểm bột: quan sát hình dạng, màu sắc, ngửi, nếm, nhận biết mùi vị của bột Soi tìm đặc điểm bột và chụp ảnh bằng kính hiển vi có gắn máy ảnh kỹ thu t số 2.3.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của dược liệu * Định lượng tỉnh dầu và xác định thành phần tỉnh dầu: - Cất lấy tinh dầu bằng phương pháp cất kéo hơi nước sử dụng bộ dụng cụ cất tinh dầu cải tiến có bình hứng trong của. .. dụng lá cây Murraya koenỉgiỉ (L. ) Spreng, cho bệnh nhân tiểu đường Tuy nhiên, Lyer- Mani (199 0), Abebajo và cộng sự (200 4), Yadav và cộng sự (200 4) không tìm thấy bất cứ một tác dụng nào của lá cây Murraya koenigỉi (L. ) Spreng, trong bệnh nhân tiểu đường [20] Điều này có lẽ còn phụ thu c vào chất lưọng lá Xào giông được nghiên cứu 13 1.4.5 Thu c tính diệt côn trùng: 3 carbazol alcaloid sinh học là;... 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu về đặc điểm thực vật, hiển vi: - Quan sát và mô tả hình thái thực vật bằng mắt thường, cảm quan - Quan sát và mô tả hình dạng, màu sắc, mùi vị, kích thước dược liệu bằng cảm quan của mắt thường và kính lúp, kết hợp với chụp ảnh - Nghiên cứu đặc điểm vi phẫu: ■ Cắt vi phẫu lá cành bằng máy cắt cầm tay, tẩy nhuộm tiêu bản theo tài liệu phần vi học [4], [14' ■... nhau và chụp ảnh 19 PHẦN III: THựC NGHIỆM VÀ KÉT QUẢ 3.1 Đặc điểm hình thái, thực vật 3.1.1 Mô tả đặc điểm hinh thái Mô tả: cây gỗ nhỏ, cao 3-5m Lá kép lông chim lẻ với 17-21 đôi lá chét dài 3-5cm, mọc sole, hình trái xoan ứion, không cân xứng, nhẵn hơi có lông mm, nhạt ở mặt dưới; gân bên 4-6 đôi, lồi rõ ở mặt dưới Lá rất ứiom \ Z : r 'Á Hình 3 ĩ 1 Cành, lá cây Xào giông 3.1.2 Đặc điểm hiển vi * Tiến... piperiton oxid 1.75 22 Caryophylen 2.18 23 (+)Spathulenol 1.20 24 ( -)- Caryophylen oxid 7.74 25 Humulen oxid 0.92 Hàm lượng ( %) 28 Thành phần chính của tinh dầu Xào giông có 1-4-Terpineol (42.14 %), Alpha-thujene (4.53 %), alpha-Terpineol (4.03 %), ( -)- Caryophyllene oxide (7.74 %) 3.2.2 Định tính sơ bộ một số nhóm chất hữu cơ có trong dược liệu bằng phản ứng hóa học Dược liệu sau khi cất tinh dầu, còn lại... DelraDun nghiên cứu bằng sắc ký khí khối phổ có 34 hợp chất chính trong tinh dầu chiếm 97,4% lượng hợp chất trong tinh dầu [21], các họp chất chính gồm có: a-pinen (51.7 %) Sabinen (10.5 %) ß-pinen (9.8 %) ß-caryophyllen (5.5 %) limonen (5.4 %) bomyl acetat ( 1.8 %) terpinen-4-ol (1.3 %) Ỵ-terpinen ( 1.2 %) humulen-a ( 1.2 %) Theo Philip BC (198 1), tinh dầu Xào giông trong lá non nhiều hơn lá già[20] Cụ thể thành . đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học của cây Xào giông thu hái tại tỉnh Ninh Thu n” với nội dung sau: - Nghiên cứu đặc điểm thực vật, mô tả đặc điểm vi học góp phần xây. BỘYTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NÔI *** NGUYỄN THỊ HIỀN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỀM THựC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY XÀO GIÔNG (MURRAYA KOENIGII{L .) SPRENG .) THU HÁI TẠI TỈNH NINH THU N KHÓA LUẬN. hóa học cây Xào giông 15 PHẦN III: THựC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 18 3.1 .Đặc điểm hình thái, thực vật 18 3.1.1 .Đặc điểm h ì^ thái bên ngoài 18 3.1.2 .Đặc điểm hiển vi 18 3.2 .Nghiên cứu thành phần