BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI TRẨN THỊ THU HIỂN NGHIÊN cúu ĐỊNH UrỢNG NEVIR(iPIN TRONG CHẾ PHẨM RỒN PHÂN LIỀa BẻNG PHtfơNG PHÁP sếc KÝ LỔNG HIỆU NĂNG CflO (HPLC) (KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP Người hướng dẫn Dược SỸ KHĨA 2001-2006) TS ĐỒN CAO SƠN TS NGUYỄN HẢI NAM Noi thực hiện' Phịng Hóa lý II- Viện Kiểm nghiệm Thời gian thực hiện: 9/2005 đến 5/2006 HÀ NỘI, 5-2006 LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực hồn thành phịng Hóa lý II - Viện Kiểm nghiệm Bộ Y tế Bộ mơn Hóa dược - Trường Đại học Dược Hà Nội Trong trình thực khóa luận tốt nghiệp tơi nhận giúp đỡ tận tình thầy hướng dẫn, giảng viên Bộ mơn Hóa dược cán phịng Hóa lý II - Viện Kiểm nghiêm Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành sâu sắc tới: - Tiến sỹ Đoàn Cao Sơn - Trưỏng phịng Hóa lý II - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tê - Tiến sỹ Nguyễn Hải Nam - Bộ mơn Hóa dược - Trường Đại học Dược Hà Nội người thầy trực tiếp hướng dẫn, dìu dắt, bảo cho tơi ý kiến quỷ báu suốt q trình thực khóa luận Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ thầy, cô, kỹ thuật viên Bộ mơn Hóa dược cán phịng Hóa lý II - Viên Kiểm nghiêm tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Tôi xin cảm ơn quan tâm Ban Giám hiệu, Phịng Đào tạo thầy truyền đạt kiến thức cho suốt thời gian ngồi ghế nhà trường Tôi vô biết ơn gia đình, bạn bè người ln sát cánh bên tôi, động viên giúp đỡ học tập sống Sinh viên Trần Thị Thu Hiền A1K56 MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN Đ Ể PHẦN 1- TỔNG Q UAN 1.1 Tổng quan nevirapin 1.1.1 Công thứ c 1.1.2 Tính c h ấ t 1.1.3 Tác dụng dược l ý 1.1.4 Tác dụng không mong m uốn 1.1.5 Một số chế p h ẩm 1.1.6 Chỉ đ ịn h 1.1.7 Các phương pháp định lượng 1.2 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.2.1 Khái niệm sắc ký lỏng sắc ký lỏnghiệu c a o 1.2.2 Nguyên tắc trình sắc k ý 1.2.3 Cơ sở lý thuyết sắc k ý 1.2.4 Nguyên tắc cấu tạo hệ thống H PLC 1.2.5 Các thơng số đặc trưng q trình sắc kývàyếu tố ảnh hưởng 10 1.2.6 Cơ sở lý thuyết việc lựa chọn điều kiện sắc k ý 13 1.2.7 ứng dụng H PL C .17 PHẦN 2- ĐỐI TƯỢNG, PHƯƠNG TIỆN, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨ U 20 2.1 Đối tượng nghiên u 20 2.2 Phương tiện, dụng cụ, hóa ch ất 20 2.2.1 Hóa c h ấ t 20 2.2.2 Thiết bị, dụng c ụ .21 2.3 Nội dung phương pháp nghiên u 22 2.3.1 Nội dung nghiên c ứ u 22 2.3.2 Phương pháp nghiên c ứ u 22 2.3.3 Các đặc trưng thống kê để xửlý kết phân tíc h 22 2.3.4 Cách đánh giá kết q u ả 23 PHẦN 3- THỰC NGHIỆM VÀ KẾT Q U Ả 24 3.1 Nghiên cứu xây dựng điều kiện sắc ký để định lượng nevirapin đánh giá phương pháp 24 3.1.1 Nghiên cứu lựa chọn điều kiên sắc k ý 24 3.1.2 Khảo sát tính thích hợp hệ thống .29 3.1.3 Khảo sát độ tuyến tính phương p h áp 30 3.1.4 Khảo sát độ lặp lại phương p h áp 31 3.1.5 Khảo sát độ phương p h áp 34 3.1.6 Khảo sát giới hạn phát giới hạn định lượng 38 3.2 ứng dụng định lượng nevirapin sô chế phẩm 38 3.2.1 Chế phẩm đơn thành p h ần 39 3.2.2 Chế phẩm đa thành p h ần 39 3.3 Bàn luận kết q u ả 40 PHẦN 4- KẾT LUẬN .42 PHỤ LỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO CHỮ VIẾT TẮT AIDS : Acquired Immuno-Deficiency Syndrome (Hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải) DAD : Diode Array Detector (Detector chuồi diod) DNA : Deoxyribo Nucleic Acid HIV : Human Immuno-deficiency Virus (Virus gây suy giảm miễn dịch người) HPLC: High Performance Liquid Chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) MeOH: methanol |Lig/ml: microgam/millilit Ịil : microlit |im : micromet ịlMA i : micromol/lit RNA : Ribo Nucleic Acid RT Reverse Transcriptase : (Enzym chép ngược) GOT : Glutamat Oxaloacetat Transaminase GPT : Glutamat Pyruvat Transaminase ĐẬT VẤN ĐỂ HIV/AIDS- bệnh kỷ khơng cịn vấn đề quốc gia mà vấn đề tồn cầu, bệnh nguy hiểm mang tính xã hội cao Đây bệnh phát lần vào năm 1981 từ đến số lưọìig người mắc bệnh số người tử vong HIV/AIDS ngày tăng, Việt Nam phát trường hợp nhiễm HIV/AIDS vào năm 1990, tính đến 30/11/2002, số người nhiễm HIV 57.780; số bệnh nhân AIDS 8.643 số người tử vong 4.780 [1] AỈDS (Acquired ỉmmuno-Deficiency Sỵndrome) hội chứng suy giảm miễn dịch mắc phải gây HỈV (Human Ịmmuno-deficiency Virus) Cấu trúc HIV bao gồm lớp vỏ lófp nhân, lớp nhân có chứa enzym RT (Reverse Transcriptase) enzym có khả chép ngược Trong thuốc kháng HIV, nhóm thuốc quan trọng nhóm thuốc ức chế enzym RT, qua ức chế q trình chép RNA Các thuốc lamivudin, stavudin, zidovudin dẫn chất nucleosid có tác dụng ngăn chặn tăng trưởng chuỗi DNA ức chế enzym RT Nevirapin dẫn chất khơng thuộc nhóm nucleosid, tác dụng cách ức chế trực tiếp RT, có vai trị quan trọng việc điều trị HIV/AIDS Hiện việc đảm bảo chất lượng thuốc chống HIV, đặc biệt thuốc sản xuất nước có thu nhập thấp Việt Nam vấn đề cần quan tâm Trong Dược điển hành số nước [4 , , , , 10 ] chưa có chuyên luận kiểm tra chất lượng chế phẩm có chứa nevirapin Một số Dược điển [11, 20] có chuyên luận việc áp dụng vào điều kiện kiểm nghiệm Việt Nam cịn gặp phải khó khăn định Trong lĩnh vực kiểm nghiêm thuốc, với phát triển vượt bậc khoa học kỹ thuật, có nhiều thành tựu đưa vào ứng dụng mang lại cho phương pháp kiểm nghiệm nhanh, đạt độ xác cao Một phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp nghiên cứu ứng dụng để định tính định lượng có kết nhiều hoạt chất chế phẩm đơn thành phần đa thành phần Từ sở tiến hành thực đề tài: “Nghiên cứu định lượng nevirapin chế phẩm rắn phân liêu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)” với mục tiêu cụ thể sau: - Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng nevirapin kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao, đóng góp cho ngành Dược phương pháp kiểm nghiệm nevirapin có tính đặc hiệu, độ xác độ cao - Áp dụng phương pháp xây dựng để kiểm nghiệm nhanh xác số chế phẩm rắn phân liều có chứa nevirapin lưu hành thị trường Việt Nam chế phẩm NEVIRAPINE STADA LAMZITRIO Công ty STADA Việt Nam PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 TỔNG QUAN VỀ NEVIRAPIN 1.1.1 Công thức Công thức phân tử: Cj5Hi4N Khối lượng phân tử: 266,3 Tên khoa học:l l-Cyclopropyl-5,1 l-dihydro-4-methyl-6//-dipyrido[3,2Z?:2^3’-ổ][l,4]diazepin-6-on 1.1.2 Tính chất [20] Bột kết tinh màu trắng, không mùi, pKa = 2,8 Thân dầu, khó tan nước (~ 0,lm g/m l pH trung tính), tan dicloromethan, khó tan methanol, logP (octanol/nước) = 83, tan tốt môi trường acid với pH to x> Thời gian lưu (phút) Hình 13; Sắc ký đồ dung dịch thử mẫu M2 TÀI LIỆU THAM KHẢO TRONG N c Bộ môn Dược lâm sàng - Trường Đại học Dược Hà Nội (2003), Bài giảng Bệnh học (Dùng cho sinh viên Dược), Trung tâm thông tin - thư viện Đại học Dược Hà Nội, trang 219 - 225 Bộ mơn Hóa phân tích - Trường Đại học Dược Hà Nội (2002), Hóa phân tích tập 2, Trung tâm thông tin - thư viện Đại học Dược Hà Nội, trang 55 85 Bộ môn Hóa phân tích - Trường Đại học Dược Hà Nội (2004), Kiểm nghiệm thuốc, Trung tâm thông tin - thư viện Đại học Dược Hà Nội, trang 68 - 98 Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam III, Nhà xuất Y học - Hà Nội, trang - Nguyễn Thị Hồng Hạnh (2004), Tổng quan số vấn đề bệnh ỉý, chẩn đốn xu hướng điều trị nhiễm HỈV/AIDS, Khóa luận tốt nghiệp Dược sỹ đại học, Trường Đại học Dược Hà Nội Từ Văn Mặc (1995), Phân tích Hóa lý, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, trang 293 - 338 TÀI LIỆU THAM KHẢO N c NGOÀI European Pharmacopoeia 4'^ (2002), volume II Pharmacopoeia o f the People’s Republic o f China (English edition 2000), volume II The Bristish pharmacopoeia (2001), volume II, p A141 - A145, A153 A155 10 The International Pharmacopoeia (2003), volume 11 The United State Pharmacopoeia 28 (2005), volume II, p 1367, 1368, p 2386-2392 12 Triomune 40 - Application for Registration o f Foreign Drug Product (2002), Cipla Limited Company, India 13 Anthony C Moffat; M David Osselton; Brian Widdop (2004), Clarke’s Analysis o f Drug and Poisons in pharmaceuticals, body fluids and postmortem material, third edition Pharmaceutical Press, p 1329 -1330 14 Daniel C Harris (1999), Quantitative Chemical Analysis, fifth edition, W H Freeman and Company, p 720, p 723 15 Joseph W Pav; Lois S Rowland; Deborah J Korpalski (1999), “HPLC method for the quantitation of nevirapine in biological matrices following solid phase extraction”, Journal o f Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 20, p 91 - 98 16 Prof Yuri Kazakevich; Prof H.M Harold McNair (1996), Textbook on High performance liquid chromatography (HPLC), p 127, p 128, p 231 -2 17 R.M Lopez et al (2001), “Nevirapine”, J Chromatogr B Biomed Sci AppL, 751, p 371 -3 18 R.P van Heeswijk et al (1998),“Nevirapine”, J Chromatogr Biomed Sci AppL, 713 (2), p 395 - 399 19 Thomas E Beesley; Benjamin Buglio; Raymond P.W Scott (2001), Quantitative Chromatographic Analysis, Marcel Peklcer, Inc., p 245 286 20 World Health Organization (March 2005), “Nevirapine”, Final text for inclusion in the QAS/03.082/FINAL International Pharmacopoeia, Document ... định lượng nevirapin chế phẩm rắn phân liêu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) ” với mục tiêu cụ thể sau: - Nghiên cứu xây dựng phương pháp định lượng nevirapin kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao, ... 1.1.7 Các phương pháp định lượng 1.2 Tổng quan phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.2.1 Khái niệm sắc ký lỏng sắc ký lỏnghiệu c a o 1.2.2 Nguyên tắc trình sắc k ý ... pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Phương pháp nghiên cứu ứng dụng để định tính định lượng có kết nhiều hoạt chất chế phẩm đơn thành phần đa thành phần Từ sở tiến hành thực đề tài: ? ?Nghiên cứu định